总黄酮含量的测定
金银花不同花期总黄酮含量的测定
金银花不同花期总黄酮含量的测定摘要采用芦丁比色法对宁夏引种金银花不同花期(金花、银花、白蕾、绿蕾)中的总黄酮的含量进行了测定。
结果表明,银花中总黄酮含量最高,达到 3.433%,而绿蕾中含量最低,为2.539%,金花中含量为2.988%,白蕾中含量为2.621%。
关键词金银花;花期;总黄酮;含量;测定金银花(Honeysuckle)为忍冬科多年生半常绿缠绕植物忍冬的花蕾及初开的花,又名忍冬花、银花、双花等[1]。
金银花在我国栽培历史悠久,应用范围广,目前已在我国医药、工业、农业、畜牧生产和园林绿化等各个领域广泛应用[2-4]。
金银花的茎、叶、花、果、根均可入药。
金银花性寒味甘,清热解毒,对治疗上呼吸道感染、流行性感冒、扁桃体炎、急性乳腺炎、急性结膜炎、大叶性肺炎等有特效。
金银花也是外科药,其对痈疽疗疮、梅毒、丹毒及杆菌性痢疾疗效良好。
用金银花泡茶,可预防中暑、感冒及肠道传染病,同时还有降低血脂、预防冠心病的作用[5]。
金银花中黄酮类化合物种类丰富,如忍冬苷、忍冬黄素、木犀草素及木犀草素-7-葡萄糖苷、异绿原酸、绿原酸等。
有学者从金银花正丁醇萃取物中分离得到4个黄酮类化合物,分别鉴定为木犀草素-3-0-α-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-0-β-D-半乳糖苷、槲皮素-7-0-β-D-葡萄糖苷和金丝桃苷,从金银花氯仿萃取物中又分得5羟基-3′,4′,7-三甲氧基黄酮[6]。
现代医学研究表明,黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量,使冠脉、脑血管流量增加,抗心律、软化血管和降血糖、血脂等作用;同时它还是一种天然的抗氧化剂,具有清除人体中超氧离子自由基抗衰老、增加机体免疫力的生理活性作用[2]。
此外,其还具有抗溃疡、解痉、抗炎及降脂等系列的生物活性。
研究表明,黄酮类是金银花抑菌有效成分之一,可以作为综合分析该类药材的质量的指标[7]。
1材料与方法1.1供试仪器及试剂722紫外-可见分光光度计,索氏提取器,自动控温水浴箱,电子分析天平SL-202型,铁架台,烧杯,量筒,移液管,容量瓶,吸耳球,圆底烧瓶,漏斗,玻璃棒,试纸;乙醇,硝酸铝,亚硝酸钠,氢氧化钠。
藤茶中总黄酮的含量测定
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１ ２ ６
内蒙古 中 医药
藤 茶 中总黄酮 的含 量测定
袁桥 玉‘ 刘新 桥。
摘要 ： 目的 ： 对藤茶样 品 中总黄酮进行含 量测定 。方 法： 采用分光光度 法 ， 以芦丁为对照品 ， 并利用 Ｎａ ＮＯ３ 一 Ａ ｌ （ ＮＯ ３ ） ３ 一 Ｎ ａ ＯＨ显 色方法 ， 对藤 茶样 品 中总 黄酮 的含 量进 行测 定 。结果 ： 总 黄酮在 ８ ． ２ ４ — ４ ９ ． ４ ４ ｕ ｇ ／ ｍ Ｌ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ５ ） 范 围内线性 关 系良好 ， 平 均加 样 回收 率 为 ９ ８ ． ９ ８ ％， ＲＳ Ｄ ＝ ２ ． ０ ７ ％， 不 同产地 藤茶 中总黄酮含量存 在一 定差异 ， 以湖 南藤茶 中总黄酮含 量最高 。结论 ： 该 方法快速 、 简便 、 准确， 可 作为该 药材 的 质 量评价标 准 的参 考方 法。 关键词： 藤 茶； 总黄酮 ； 分光 光度 法； 舍 量测定 中图分类 号 ： Ｒ ９ １ ７ 文献标识 码 ： Ｂ 文 章编 号 ： １ ０ ０ ６ — ０ ９ ７ ９ （ ２ ０ １ ４） ３ ０ — ０ １ ２ ６ — ０ ２
柿叶中总黄酮的含量测定
柿叶中总黄酮的含量测定目的：建立柿叶中总黄酮的含量测定方法，为考察其内在质量提供依据。
方法：利用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH分光光度法测定柿叶中黄酮类物质含量，检测波长为510nm。
结果：芦丁检测浓度在0.020~0.100mg/ml 范围内与吸收度呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均回收率为99.99%(RSD=0.99%，n =5)。
柿叶中总黄酮的平均含量为5.63%。
结论：此测定方法简便快捷、精密度高、准确性好，可以作为柿叶中总黄酮的含量测定方法，以控制黄酮的质量。
标签：柿叶；总黄酮；紫外分光光度法Determination of total Flavonoids in Diospyros Leaves/LUO Yu-lan∥Department of Pharmacy, The Affiliated Hospital of Guilin MedicalCollege, Guilin 541001，ChinaAbstract:Objective：To establish a method for the determination of t otal flavonoids in leaves of diospyros and to provide basis for the study of itsinternal quality. Methods：Using NaNO2-Al(NO3)3-NaOH spectrophotometryt o determine the total flavones content in leaves of diospyros with a detection w avelength at 510nm. Results：Good linear relationship with absorbability occurr edwhen the concentration range of rutin was 0.020~0.100mg/ml(r=0.9999) and it s averagerecovery was 99.99% (RSD=0.99%, n=5). In leaves of diospyros the a verage content of total flavonoids was 5.63%. Conclusion：This technique is a co nvenient and simple method with high accuracy. The method can be used for the de termination of the total flavonoids in leaves of diospyros and for the controlli ng the quality of its.Key words:leaves of diospyros; total flavonoids; UV-spe ctrophotometry柿叶为柿科植物柿(Diospyros kaki L.)的干燥叶，其中含有丰富的维生素C、黄酮、胆碱、有机酸、胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙等对人体健康有益的营养成分，主要用于咳喘、肺气肿、各种内出血、高血压等病症［1］。
山楂中总黄酮的提取及含量测定
山楂中总黄酮的提取及含量测定（吕培银）一、实验目的1.掌握黄酮类物质的提取方法。
2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。
二、实验原理山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。
黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。
母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。
黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。
本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。
因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。
三、实验用品1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。
2、药品：山楂粉末、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。
四、实验内容1、山楂总黄酮的提取精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。
取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。
2、芦丁标准溶液的配制精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。
3、芦丁标准曲线的制定分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL 和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。
总黄酮测定
目录
1 2
仪器与试光光度仪，水浴锅，索氏提取器 槐米，芦丁对照品 甲醇，亚硝酸钠溶液，硝酸铝溶液，氢 氧化钠试液，乙醚，试剂均为分析纯
2.溶液的制备
（1）对照品溶液的制备
取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加 甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度， 摇匀。精密量取 10ml ，置100ml 量瓶中，加水至刻度， 摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)
（3）测定法
取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲 醇90ml，加热回流至提取液无色，移置100ml量瓶中，用甲 醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀。精密量取10ml，置100ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀 。精密量取 3ml ，置 25ml 量瓶中，加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml ，混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6 分钟，加氢氧化钠试液 10ml ，再加水至刻度，摇匀，放置 15分钟，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中 芦丁的重量(μ g)，计算，即得。
（2）标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 1ml 、 2ml 、 3ml 、 4ml 、 5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml， 加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml ，混匀，放置 6 分钟，加 10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化 钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟， 以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在 500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓 度为横坐标，绘制标准曲线。
采用紫外分光光度法测定槐米总黄酮的含量 , 比通过显色反应测定总黄酮含量简便 , 提高了实 验的效率。本法简便、 快速、 选择性好、 线性 范围宽、 重现性好、 能全面反映样品中槐米总 黄酮的含量, 适用于槐米的质量检测和总黄酮测 定, 尤其是生产过程的质量控制。
保健食品中总黄酮的测定
1 总黄酮的测定（来源于《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版））1.1 试剂
1.1.1 聚酰胺粉
1.1.2 芦丁标准溶液：称取5.0mg芦丁，加甲醉溶解并定容至100mL，即得
50μg/mL。
1.1.3 乙醇：分析纯。
1.1.4 甲醇：分析纯。
1.2 分析步驟
1.2.1 试样处理：称取一定量的试祥，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置.吸取上清液1.0 mL，于蒸发皿中，加lg聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。
先用20 mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。
此液于波长360nm测定吸收值。
同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。
1.2.2 芦丁标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL 比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。
求回归方程，计算试样中总黄酮含量。
1.3计算和结果表示：
A × V2 × 100
X = -------------------------
V1 × M ×1000
式中：
X---试样中总黄酮的含量，mg/100g；
A---由标准曲线算得被测液中总黄酮量，μg；
M---试样质量，g；
V1---测定用试样体枳，mL；
V2---试样定容总体枳，mL。
计算结果保留二位有效数字。
总黄酮测定
山楂中总黄酮提取工艺的研究1仪器与药品台式超声波清洗器；紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；SHZ-D循环水式真空泵；万分之一电子分析天平；抽滤瓶等。
芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂，所用试剂均为分析纯；山楂。
2 实验部分2.1对照品及供试品溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制备精确称取芦丁对照品0.005g，置于小烧杯中，用体积分数70%的乙醇溶解并定量转移至25mL容量瓶中定容，摇匀，即得浓度为0.200mg/mL的芦丁标准品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备称取干燥至恒重的山楂5.0g，置于100ml带塞锥形瓶中，按实验设计条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液。
将滤液定量转移至50ml容量瓶中，加相同浓度的乙醇定容至刻度，摇匀即得。
2.2 山楂中总黄酮含量测定方法的建立2.2.1 测定波长的选择精密量取芦丁对照品溶液1.50ml，置于10ml容量瓶中，加入体积分数70%乙醇至5ml。
加5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；加入1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00ml，加水至刻度，摇匀，放置15min。
以不加芦丁对照品溶液作为空白。
选择于紫外分光光度计在400nm-600nm波长范围内扫描。
2.2.2 线性实验精密量取芦丁对照品溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入体积分数70%乙醇至10ml。
加5%亚硝酸钠溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。
以不加芦丁对照品溶液为空白，采用分光光度法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。
总黄酮含量测定标准曲线
总黄酮含量测定标准曲线总黄酮含量是衡量植物中抗氧化活性的重要指标，也是评价植物药材质量的重要参数之一。
因此，建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线对于保证植物药材质量的稳定性和可靠性具有重要意义。
本文将介绍总黄酮含量测定标准曲线的建立方法及相关注意事项。
首先，建立总黄酮含量测定标准曲线需要准备一定浓度范围内的标准溶液。
通常可以选择相对纯净的总黄酮标准品，按照一定的比例配制成不同浓度的标准溶液。
在配制标准溶液的过程中，需要注意溶解度、稳定性等因素，以确保标准溶液的准确性和可靠性。
其次，建立总黄酮含量测定标准曲线需要选择合适的测定方法。
常用的方法包括分光光度法、高效液相色谱法等。
在选择测定方法时，需要考虑样品的特性、仪器设备的可用性、实验操作的便捷性等因素，以确保测定结果的准确性和可靠性。
在进行总黄酮含量测定标准曲线的建立过程中，需要注意以下几点：1. 标准曲线的线性范围，需要选择合适的标准溶液浓度范围，确保在该范围内标准曲线呈现良好的线性关系。
2. 标准曲线的斜率和截距，通过线性回归分析，计算标准曲线的斜率和截距，以确定总黄酮含量与测定数值之间的关系。
3. 标准曲线的相关系数，通过计算标准曲线的相关系数，评估标准曲线的拟合度，以确保标准曲线的可靠性和准确性。
4. 标准曲线的验证，建立标准曲线后，需要进行验证实验，验证标准曲线的准确性和可靠性，以确保标准曲线的适用性和稳定性。
总之，建立总黄酮含量测定标准曲线是保证植物药材质量稳定性和可靠性的重要步骤。
在建立标准曲线的过程中，需要选择合适的标准溶液、测定方法，注意标准曲线的线性范围、斜率和截距、相关系数等参数，以确保标准曲线的准确性和可靠性。
建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线，对于推动植物药材质量控制和质量评价具有重要意义。
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总黄酮成分提取
取苦菜和蒲公英地上部分，洗净烘干，粉碎成粉，过0.6 mm筛，置于棕色瓶内储藏备用。
分别称取苦菜和蒲公英粉1.000 g于三角瓶中溶解，共9份，放入超声波清洗器中（超声功率120 W，温度为50℃）提取，过滤定容至100 mL。
为快速提取苦菜和蒲公英中的总黄酮成分，采用正交试验确定提取的最佳条件。
选择乙醇浓度、料液比和提取时间3个水平进行试验(见表1) 。
表1 正交试验因素及水平
Table 1 Factors and level of orthogonal test
处理Treatment
因素Factors
A 乙醇浓度/%
Ethanol
concentration
B 料液比/g·mL-1
Solid-liquid ratio
C 提取时间/h
Extraction time
1 50 1:10 0.5
2 60 1:20 1
总黄酮含量测定
（1）芦丁标准溶液的制备：将芦丁标准品于120℃下干燥30min，称取干燥后样品20 mg，用30%乙醇溶解，定容到100 mL，配制成浓度为0.2 mg·mL-1的芦丁标准溶液。
（2）标准曲线的制作：分别吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL芦丁标准溶液，置于50 mL比色管中，加入2.0 mL 5%的NaNO2溶液，混匀后放置5 min，再加入2.0 mL 10%的Al(NO3)3溶液，摇匀后放置5 min，加入10 mL 4%的NaOH溶液，最后用30%乙醇定容至50 mL，摇匀后放置10 min，在510 nm下用紫外分光光度计测定各样品吸光值。
以吸光度A值为纵坐标( Y)，以标准样品浓度为横坐标( X) ，绘制标准曲线，计算线性回归方程。
得到的线性回归方程为: Y =0. 017X-0.0124，相关系数R2 = 0.994。
即在0~0.02 mg ·mL-1范围内，芦丁标准样品浓度与吸光度的线性关系良好。
1、总黄酮含量的测定
吸取黄酮提取液1.0 mL于50 mL比色管中，按照芦丁标准溶液吸光度的方法测定样品的吸光度，将吸光度值代入回归方程求得总黄酮得率。
总黄酮得率(%) = m/M×100；式中: m 为经换算后提取液中总黄酮质量( g) ；M 为样品质量( g)。
2、抗氧化活性测定
DPPH溶液的配制：准确称取DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）标准品0.1471 g，用95%乙醇溶解并定容至100 mL，得质量浓度为147.1 mg·mL-1的DPPH溶液，冷藏备用。
分别取适量苦菜和蒲公英样品于试管内，加入0.50 mLDPPH溶液，定容至25 mL，室温反应30 min，在517 nm波长处测定混合溶液的苦菜吸光度A1和蒲公英吸光度A2。
同时取0.50 mLDPPH溶液，定容至25 mL，室温反应30 min，用紫外分光光度计在517 nm波长处测定混合溶液的吸光度A0，重复3次，取平均值。
苦菜DPPH自由基清除率/%=(A0－A1)/A0× 100，蒲公英DPPH自由基清除率/%=(A0－A2)/A0× 100。