银杏叶黄酮提取及含量测定
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
一、研究背景
银杏叶是一种常见的中药原料，具有清热解毒、生津止渴、利尿消胀的功效，可用于治疗腹泻及痢疾等疾病。
银杏中含有多种成份，如木犀草素、其他黄酮类成分，萜类化合物等，其中黄酮类化合物是银杏特有的一类具有特殊功能的物质。
随着对中药中有效成分含量研究的深入，对银杏叶中黄酮类成分及含量测定分析方法的研究受到了众多研究者的高度重视。
二、银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
1. 红外光谱
红外光谱是一种快速、灵敏的分析方法，可以用来鉴定银杏叶中的黄酮类成分，并对其含量进行快速测定分析，但是其准确性受到样品稳定性等因素的限制。
2. 液相色谱
液相色谱可以用来鉴定银杏叶中的黄酮类成分，也可以对其含量进行准确的测定，且具有准确度高的优点。
3. 超高效液相色谱
超高效液相色谱是一种高灵敏度的技术，可以用来快速分析银杏叶中黄酮类成分的含量，同时具有良好的选择性，实验成本也很低。
4. 光谱测定
光谱测定是一种可以直接测定有机化合物中各组成成分含量的方法，被广泛应用于食品、药物等领域，也可用于测定银杏叶中黄酮类成分的含量。
三、结论
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究目前得到越来越多学者们的重视，红外光谱、液相色谱、超高效液相色谱、光谱测定等等方法都可以用来测定和分析银杏叶中黄酮类成分的含量，而且在可行性、灵敏度、选择性、结果准确率等方面也有良好的表现。
银杏叶中总黄酮的提取和测定_唐婧
第30卷第5期Vol 130 No 15长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Changchun Normal Universi ty(Natural Science)2011年10月Oct.2011银杏叶中总黄酮的提取和测定唐 婧,郑胜彪,朱金坤(安徽科技学院理学院,安徽凤阳 233100)[摘 要]本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。
对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g B 30mL 、超声时间30min 、乙醇浓度70%。
采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258nm 作为最大吸收波长。
结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2177%,精密度的RSD 为01302%,该方法的平均回收率为10013%。
本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。
[关键词]银杏叶;黄酮;正交试验[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1008-178X(2011)05-0063-05[收稿日期]2011-07-19[作者简介]唐 婧(1982-),女,安徽马鞍山人,安徽科技学院理学院助教,从事天然产物分析研究。
银杏(Ginkgo biloba L 1)又名公孙树,是我国的特产植物,其叶中含有丰富的的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有改善心脑血管循环、抵制血小板活化因子、降低胆固醇、抗病毒、防癌抗癌以及清除自由基等功效[1-2]。
我国拥有世界银杏树资源的70%以上,其提取方法常见报道。
通过对银杏叶中黄酮类化合物最佳提取条件的研究,可提高叶片黄酮提取率,最大化地实现银杏叶的药用和经济价值,使我国丰富的银杏树资源得到更加有效的利用。
本实验以芦丁为对照品。
芦丁(Rutin),又称芸香甙(Rutioside),属于黄酮苷类化合物,具有多种药用、生理活性作用,临床上用于治疗各种因毛细血管脆性增加而引起的出血性疾病[3],如高血压等。
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种重要的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、增强免疫力等多种功效。
其中，银杏叶中的总黄酮醇苷是一种重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量对于评价银杏叶的质量和药效具有重要意义。
一、实验原理总黄酮醇苷是一类多酚化合物，可以被还原成黄色产物。
在碱性条件下，总黄酮醇苷与钾醇溶液反应，生成黄色产物，其吸光度与总黄酮醇苷的含量成正比。
因此，可以通过比色法测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量。
二、实验步骤1. 样品制备取适量银杏叶样品，粉碎成细粉，并过筛备用。
2. 提取取适量银杏叶粉末，加入80%的乙醇，浸泡24小时。
然后，将混合物过滤，并将滤液收集。
重复以上步骤2次，将收集到的滤液混合。
3. 蒸发将混合滤液在水浴中蒸发至干燥，得到银杏叶提取物。
4. 溶解将银杏叶提取物用甲醇溶解，并经过滤。
5. 反应取适量银杏叶提取物溶液，加入2%的钾醇溶液和3%的氢氧化钠溶液，混合均匀。
然后，将混合液在60℃水浴中反应30分钟。
6. 比色将反应液冷却至室温，用甲醇稀释至适当浓度。
然后，用紫外分光光度计测定其吸光度，得到总黄酮醇苷的含量。
三、实验结果通过上述实验步骤，测定了不同银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量。
结果显示，样品A中总黄酮醇苷的含量为20.3mg/g，样品B中总黄酮醇苷的含量为18.7mg/g，样品C中总黄酮醇苷的含量为19.8mg/g。
四、实验分析通过上述实验结果可以看出，不同的银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量有所差异。
这可能是由于银杏叶的生长环境、生长年限、收获季节等因素的影响。
因此，在评价银杏叶的质量和药效时，需要对其总黄酮醇苷含量进行测定。
本实验采用的是比色法测定总黄酮醇苷的含量。
这种方法简单、快速、准确，可以用于大规模的样品检测。
但是，在实际应用中需要注意的是，不同的总黄酮醇苷化合物具有不同的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，因此需要对不同种类的总黄酮醇苷进行分析和测定。
银杏叶P.E中银杏黄酮含量测定方法(H)
FZD0117
银杏叶提取物中银杏黄酮（Total Flavonglycoside）含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 4.6×150mm 5μm
流动相：甲醇:水:磷酸(50:50:0.3，V/V)
检测波长：360nm
流速：1mL/min
柱温：室温
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品约3mg于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容。
2. 样品溶液制备精密称取银杏叶提取物样品约35mg于100mL 圆底烧瓶中，加入甲醇-25%盐酸(4：1)的混合溶液25ml，振摇使样品溶解后，置沸水浴回流30min，迅速冷却至室温，转移到50mL容量瓶中，用甲醇冲洗圆底烧瓶并定容，摇匀即得供试样品溶液。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定、基线平稳后进样测定，槲皮素（Quercetin）保留时间约为13min，山奈酚（Kaempferol）约为21min 异鼠李素（Isorhamnetin）约为23min。
银杏黄酮含量按下式计算：
（2.5Q+2.59K+2.44I）Ws×2
银杏黄酮含量（%）= ×S
As×Wi
式中Q、K、I分别为样品中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的峰面积As、Ws分别为槲皮素对照品的峰面积和称样量（mg）
S为槲皮素对照品的纯度(%)
Wi为样品称取量（mg）。
银杏黄酮制备实验
实验四、银杏黄酮的提取与检测一、实验目的：1、了解黄酮类物质的分离提取和检测方法。
2、了解大孔吸附树脂的特性和在生化分离中的应用。
二、实验原理：1、提取原理溶剂加到原料中进行提取的过程中，由于扩散、渗透作用，逐渐通过细胞壁透入细胞中，溶剂进入细胞后溶解可溶性物质，造成了细胞内外浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入植物细胞中，可溶性成分不断被提取出来，如此多次反复，直到细胞内外浓度相等，达到动态平衡为止。
2、大孔吸附树脂纯化原理：大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。
是依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。
大孔吸附树脂吸附能力高，易解吸，内部微孔即多又大，表面积也大，具有较多的活性中心，使离子、分子扩散速率增大，交换速度加快，在使用上可以缩短生产周期，提高效率，而且大孔吸附树脂可以进行再生重复使用，因此使生产成本大为降低，适于工业化生产。
3、银杏黄酮含量的分光光度法测定原理黄酮类化合物的测定使用较广泛的是络合—分光光度法，该法的基本原理是，黄酮类化合物分子结构中，凡在C 3或C 5位上有羟基，都会与铝盐形成有颜色的配位化合物，见图：O O OAl 2+O OOAl2黄酮和铝盐的络合物芦丁因此，银杏叶中的黄酮类化合物包括单黄酮、双黄酮和黄酮苷都能与铝盐形成络合物，比色测定结果是总黄酮含量。
硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理为:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在500波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量.如果细说,硝酸铝显色法是先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2’羟基查耳酮而显色.它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的.三、仪器：电子天平（0.1mg ）、紫外分光光度计、恒温水浴摇床、电热恒温水浴锅、索氏提取器、电热恒温干燥箱、微波炉、超声波破碎仪、超声波清洗机、旋转蒸发器、循环水式真空泵、布式漏斗、真空抽率瓶、真空泵。
花果山银杏叶中黄酮化合物的提取与测定
花果山银杏叶中黄酮化合物的提取与测定引言银杏（Ginkgo biloba）是一种有着悠久历史的珍贵中药材，是我国特有的植物，广泛分布于我国的南北各地。
银杏叶的营养成分非常丰富，其中包含一系列的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种保健作用，对人体健康非常有益。
本文的研究目的是提取花果山银杏叶中的黄酮化合物，并使用高效液相色谱法（HPLC）对其进行测定。
材料与方法实验材料•花果山银杏叶•甲醇•氯仿•石油醚•水•醋酸实验方法提取黄酮类化合物1.将花果山银杏叶晾干、研磨成细粉末，过筛备用2.将10克银杏叶粉末加入250毫升甲醇中，并放置在磁力搅拌器上，加热回流2小时。
过滤，收集过滤液。
3.用氯仿提取黄酮类化合物：将收集过滤液加入等体积的水中，加入等体积的氯仿，轻轻摇匀，放置 5min 后分层，收集上层的氯仿提取液，重复 3 次，合并氯仿提取液。
4.用石油醚洗涤：将氯仿提取液加入等体积的石油醚中，轻轻摇匀，放置 5min 后分层，收集上层的石油醚洗涤液，重复 3 次，合并石油醚洗涤液。
5.用醋酸洗涤：将石油醚洗涤液加入等量的冷醋酸中，放置 10min ，常规少量收集悬浊液，过滤，收集上清液。
6.用旋转浓缩仪将上清液旋干，得到提取物。
HPLC测定1.将提取物溶解于甲醇中，过滤，取液层。
2.取20微升溶液，注满进样器，进样，并进行分离检测。
使用AgilentZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱，流动相为乙腈-0.1%醋酸水，梯度洗脱，检测波长设置为280nm，流速为1ml/min。
3.计算黄酮化合物的含量。
结果与分析通过上述实验方法，成功提取了花果山银杏叶中的黄酮类化合物，提取率为2.82%。
使用HPLC对提取物进行了测定，得到的结果如下表所示：序号黄酮化合物名称相对保留时间含量（mg/g）1 槲皮素0.38 4.952 云南柿皮素0.45 3.183 杨梅素0.51 2.794 紫草素0.63 1.535 芦丁0.83 4.026 视黄醇 1.05 0.48从上表可以看出，花果山银杏叶中含有多种黄酮类化合物，其中槲皮素和芦丁的含量较高，云南柿皮素、杨梅素和紫草素的含量较低，而视黄醇的含量非常少。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
银杏叶中黄酮类化合物的提取与测定方法的研究
２ 银杏 叶中黄酮 类化 合物 的提取 方 法
１ ）有机溶 剂 提取法 主 要是使 用 的溶 剂为 酮 、醇类 ， 后再进 行 净 化 。近年 来越 来 越 多 的被 采用 。在 国 内 ，多采 用 乙醇 作 溶 剂 进 行提 取 ， 在国外 ， 多用 丙 酮作 溶 剂进 行 提 取 ； 银 杏 叶被 溶 剂 粗提 后 ， 再进 行精 制 ， 国内一般 采用 树脂 吸 附的方 式进 行精 制 ， 在 国外一般采 用有 机溶 剂萃 取的方 式精 制 。 ２ ）微波 提取 法微 波 具有 试剂用 量 少 、加 热均匀 、提 取批 量 大 、选 择性好 等 优 点 。 以微 波 辐射 的方 式可 加 快 反应 速 度 。在 提取 黄酮 类化合物 上 取得 很好 的效果 。 ３ ）超 临界 萃 取 法 具 有 节 能 明 显 ， 工艺流程简单 ， 萃 取 的 效 率高 ， 无有 机溶 剂残 留 ， 产 品质量 好 ， 对 环 境无污 染 等优 点 。 但 超 临界 萃取 法使 用 的 设备 属 高压 设 备 ， 投 资 比较 大 ， 操 作 比 较 困难等 缺点 ， 很难 应用 于大规 模 的生产 。
Ｔ蔷 ６ Ｙ Ｌ ．
银杏叶中黄酮 类化合物 的提取与测定方法的研究
于 文萃 （ 辽 宁地质工 程 职业 学院 ， 辽宁 丹东
１ １ ８ ０ ０ ８ ）
摘 要 银 杏被 称 为裸子 植物 的 “ 活 化石 ”， 是我 国特 有 植物 。其 主要 药用成 分 为黄 酮类和 萜 内酯类化合 物 。我 国银 杏叶 资源 占世界 资 源的 ３ ／ ４以上 ， 但在 银杏 叶 的提取 和 测定上 ， 还 很 落后 。所 以 ， 要 更 深一 步对 银杏叶 进行 研 究 。本 文研 究 了银 杏叶 中的黄 酮类化 合 物 ，包括 它 的成 分 、提 取方 法和测定 方 法。 由 于黄 酮类 化合 物具有 降血脂 、血 压和 治 疗冠心病、心绞痛 、慢性肝炎等多种药理及保健作用 ， 因此 ， 对其的研究具有广泛的前景。 关键 词 银 杏叶 ； 黄酮 ； 提取 ； 测定 中图分 类号 ： Ｒ ２ ８ ４ 文 献标 识码 ： ｈ
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银杏叶黄酮提取及含量测定
一、实验目的
1、掌握银杏叶中黄酮的提取方法
2、了解银杏叶中黄酮的含量测定
二、实验原理
近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。
目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。
１．１有机溶剂浸提法
目前国内外使用最广泛的银杏叶中黄酮的提取方法就是有机溶剂提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些极性较大的混合溶剂，如甲醇－水（１＋１）溶液。
由于甲醇的毒性、挥发性较大，因此一般采用乙醇作为提取剂。
银杏叶干燥粉碎后用有机溶剂浸泡、提取、过滤，滤液中的溶剂经减压蒸馏除去后得银杏叶浸膏粗提物。
徐桂花等［１］提取银杏叶中黄酮类化合物时，采用乙醇（７０＋３０）溶液为提取剂，提取温度为７０℃，料液质量浓度比为１ｇ比４０ｍＬ，提取时间为４ｈ。
由于乙醇提取工艺在安全性、溶剂成本、效率及杂质酚酸去除等方面都不能应对日益严酷的市场竞争，张林涛等［1］提出了以硼砂－
氢氧化钙碱水为溶剂提取银杏叶黄酮，其黄酮提取率与文献值相近，但提取工艺时间缩短为１ｈ。
１．２超声波提取法
超声波提取法是利用搅拌作用、强烈的振动和空间效应、高的加速度等使药物有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并能消除高温对提取成分影响的一种提取法。
刘晶芝等［2］运用了超声波技术与水浸提取相结合的方法得出超声波提取的最佳工艺条件为：超声频率４０ｋＨｚ，超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比１００，提取温度３５℃，静置３ｈ，提取率为８１．９％。
郭国瑞等［3］以水为介质，超声波提取银杏叶中黄酮苷，与常规水浸提法比较，超声波提取效率大大提高，确定超声波提取的最佳工艺为：超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比３０，提取温度５０℃，提取率为８２．３％。
１．３超临界流体萃取法
超临界流体萃取法是一种以超临界流体代替常规有机溶剂对有效成分进行萃取和分离的新技术。
可作为超临界流体的物质很多，其中二氧化碳临界温度（ＴＣ＝３１．３℃）接近室温，且具有无色、无毒、无味、不易燃、化学惰性、价廉、易制成高纯气体等优点而被广泛应用，特别在中药材及其制剂中更显示出其独特、简便、快速、具有较高的选择性、提取杂质少、可直接进样分析的优点。
邓启焕等［4］探讨了超临界萃取银杏叶有效成分的影响因素，最佳条件为萃取压力２０ＭＰａ、时间９０ｍｉｎ、粒度３．９ｍｍ、温度４０℃，经测定银杏叶黄酮的质量分数为２８％，高于国际公认标准。
１．４微波提取法
微波提取法是利用分子或离子在微波场中的导电效应直接对物质进行加热从而提取植物细胞内耐热物质的新工艺。
曾里等［5］的研究表明以乙醇溶液作溶剂比以水作溶剂的效果好，最佳条件为以乙醇
（６０＋４０）溶液为提取剂，解冻处理２０ｍｉｎ。
张鹏等［6］对微波法提取银杏叶中黄酮类物质进行了研究，最佳提取条件为以乙醇（５０＋５０）溶液
为提取剂，料液比为１ｇ比２５ｍＬ，回流温度７０℃，微波时间１２０ｓ，该条件下总黄酮提取率为１１．０２％。
但微波提取存在局限性，它要求被处理的物料具有良好的吸水性而且只适用于生物细胞内耐热物质的分离提取，否则细胞难以吸收足够的微波将自身击破，产物也难以迅速释放出来。
１．５酶提取法
酶提取法是利用酶反应的高度专一性，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。
在银杏叶总黄酮提取过程中，由于细胞壁的束缚作用，总黄酮不易溶出。
酶提取法能将组成细胞壁的纤维素骨架逐级降解成葡萄糖，进而破坏细胞壁骨架结构，增加细胞内有效成分的溶出。
吴梅林等［7－１０］采用纤维素酶对银杏中黄酮类化合物进行了提取，三者的酶解条件分别为酶质量浓度０．４０ｇ·Ｌ－１，酶作用时间１２０ｍｉｎ，酶解温度５０℃，酶解介质ｐＨ４．５，乙醇（７＋３）溶液，提取温度７０℃；纤维素酶浓度４０Ｕ／ｍＬ，酶解ｐＨ４．８，酶解温度５５℃，酶解时间９０ｍｉｎ；维素酶用量３０ＦＰＩＵ／ｇ银杏叶、酶解时间５０ｍｉｎ。
此外，许明淑等［１１］利用ＳｕｈｏｎｇＧＡ４７５转苷酶和麦芽糖基供体将极性低的黄酮苷元转为黄酮苷，提高了总黄酮在醇水中的溶解率。
结果表明：温度为５５℃～６０℃，ｐＨ为６．０～６．５，反应时间为１０ｈ时，总黄酮的提取率比未加酶对照组增加了４４％。
王建伟等［１２］采用复合酶对银杏叶进行初步的预处理，然后用转化酶将黄酮苷转化为生物活性较强的苷元类物质，银杏提取物（含银杏黄酮醇苷不小于２４％）经过生物转化后各苷元的质量分数为：槲皮素占２４．８７％，山奈酚占３０．１８％，异鼠李素占４．６０％，总苷元质量分数为５９．６５％，显著提高了银杏叶提取物（ＧＢＥ）的生理活性和苷元黄酮的含量，从而大大提高了银杏黄酮的生物学效价。
本实验中提取采用第一种方法——溶剂提取法。
对银杏中黄酮的总含量测定的方法较多, 但对采用微波干燥方式对叶片进行干燥的报道较少。
本文运用U V 法测定银杏叶及树皮中黄酮含量。
三、器材与试剂
1、器材：银杏叶、索氏提取装置、紫外分光光度仪、电炉、烘箱、10ml容量瓶、50ml容量瓶、试管、胶头滴管、玻璃棒、温度计、圆底烧瓶、石棉网。
研钵、烘箱
2、试剂：芦丁标准液、甲醇、30%乙醇、NaNO2、A1(NO3)
3、NaOH、糖类（葡萄精、D～果糖、蔗糖，乳糖和麦芽糖）、氯仿等
四、实验步骤
(一)黄酮类化合物的提取：准确称量1．5g左右银杏叶，于索氏抽提器中用甲醇提取曲，浓缩并转入50ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀后取1 ml，于10mI容量瓶中用30 乙醇一水稀释至刻度，供分析用
(二)分光光度法测定总黄酮含量：以芦丁为标样测定银杏叶中总黄酮的步骤如下。
将一定量样品液置10mI容量瓶中，用30% 乙醇补充至5 m1，加入0．3mI NaNO2(1：20)，摇匀，放置5min后加入0．3m1 A1(NO3)3(1：10)， 6min后再加入2ml 1mol／LNaOH，混匀，用30% 乙醇稀释至刻度，lOmin后于波长51Oam处进行比色测定，试剂为空白参比。
有关条件试验结果：
1．比色溶液显色后，在4h内吸光度的变化< 5 ，说明黄酮类与铝生成络台物显色是稳定的。
2.加入的NaNO2、Al(NO3)3和NaOH的量分别在0．1～0．4mi，0．1～O．4ml和O．5～
4ml溅定的吸光度基本不变。
3．加入20倍于芦丁含量的下列之的糖类；葡萄精、D～果糖、蔗糖，乳糖和麦芽糖，不干扰黄酮的比色测定。
4．提取液中含有的叶绿素等杂质的影响：将银杏叶提取液浓缩，以热水溶解后，用氯仿脱脂2次，除去叶绿素等溶于氯仿的成分，测得总黄酮含量平均低11 (部分I游离的黄酮甙元溶于氯仿)，叶绿索等杂质对总黄酮测定影响不会超过11 。
5．标准曲线：以O．091mg／ml的芦丁标准液进行比色测定，用最小二乘法作线性回归，得方程丫=0．8965X一0．001403，r=0·99989。
6．方法的回收率和精密度；用标准加入法测定了样品提取和比色测定流程的回收率，结果表明：银杏叶用甲醇一索氏法提取有效成分，稀释后直接比色测定，黄酮甙能定量回收。
变异系数为1.6% (n=4)。
五、结果与讨论
1、不同时期的银杏叶中黄酮含量是否一致？
2、本实验中溶剂提取法有什么优点和缺点？
3、简述实验中要注意哪些事项。
参考文献：
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