依托泊苷脂质体的抗肿瘤活性研究
2019年第14期广东化工第46卷总第400期www.gdchem.com·19·
依托泊苷脂质体的抗肿瘤活性研究
杨芸，黄颖，梁梦艺，李明娟，计燕萍，黄嬛(嘉兴学院医学院，浙江嘉兴314001)[摘要]目的：制备依托泊苷载药脂质体，并对其进行细胞药效学评价。方法：依据最佳工艺条件制备依托泊苷脂质体，并通过HPLC方法进行包封率和载药量的评价。将制备好的载药脂质体作用于小细胞肺癌H446细胞和人乳腺癌MCF-7细胞并计算IC50，比较该依托泊苷纳米脂质体对这两种肿瘤细胞的抑制作用。结果：制备得到的载药脂质体的包封率为79.77%，载药量为21.65%。细胞药效学评价实验表明，对H446细胞，游离药物和依托泊苷载药脂质体的IC50分别为2.40µg/mL和1.56µg/mL；对MCF-7细胞的IC50分别为1.28µg/mL和0.35µg/mL。结论：通过应用脂质载体对模型药物依托泊苷进行包裹，对H446和MCF-7两种肿瘤细胞的抑制作用显著增强。[关键词]依托泊苷；脂质体；抗肿瘤作用[中图分类号]TQ[文献标识码]A[文章编号]1007-1865(2019)14-0019-02
StudiesontheAnti-tumorActivityofLiposomalFormulationsofEtoposide
YangYun,HuangYing,LiangMengyi,LiMingjuan,JiYanping,HuangXuan(CollegeofMedicine,JiaxingUniversity,Jiaxing314001,China)
Abstract:Objective:ToprepareEtoposide-loadedliposomesbasedontheoptimalconditionspreviouslystudiedinourlaboratoryandtoevaluatetheirpharmacodynamics.Method:Etoposideliposomeswereprepared,theencapsulationefficiencyanddrugloadingwereevaluatedbyHPLC.ThefreeEtoposideanddrug-loadedliposomeswereappliedtosmallcelllungcancerH446cellsandhumanbreastcancerMCF-7cellsandtheIC50wascalculatedtocomparetheinhibitoryonthetwotumorcells.Results:Theentrapmentefficiencyoftheprepareddrug-loadednano-liposomeswas79.77%,andthedrugloadingefficiencywas21.65%.CellpharmacodynamicevaluationexperimentsshowedthattheIC50valuesofthefreeEtoposideanddrug-loadedliposomesagainstH446cellswere2.40μg/mLand1.56μg/mL,respectively;theIC50valuesoffreeEtoposideanddrug-loadedliposomesagainstMCF-7cellswere1.28μg/mLand0.35μg/mL,respectively.Conclusion:ByapplyingthenanostructuredlipidcarrierstothemodeldrugEtoposide,theinhibitoryofEtoposideonsmallcelllungcancerH446cellsandhumanbreastcancerMCF-7cellswassignificantlyenhanced.Keywords:Etoposide；liposome；anti-tumoractivity
依托泊苷(Etoposide)的化学名是9-(4,6-O-亚乙基-β-D-吡喃葡糖苷)-4’-去甲基表鬼臼毒素，是植物成分鬼臼毒素(Podophyllotoxin)的糖代谢产物[1]。依托泊苷是鬼臼毒素的半合成衍生物，属于细胞周期特异性抗肿瘤药物，它对于细胞周期晚S期或G2期有特异性的作用，有抑制DNA拓朴异构酶II的作用[2-5]，从而表现抗肿瘤作用。但该药物存在着比较存在严重的骨髓抑制、胃肠道反应，并损伤肝肾，属于典型的剂量限制性药物且在体内分布无选择性，高剂量治疗存在严重毒副作用。同时由于依托泊苷存在着剂型不稳定、水溶性差等问题，将其用载体包裹可以增加药物在体内的稳定性，改善安全性和稳定性。已有相关文献报道[6-8]对其进行制备得到微球制剂，可明显改善了药物在体内的配置，减少药物向体内的渗漏。本论文将通过制备依托泊苷载药脂质体，对其进行细胞药效学考察。1实验部分1.1实验试剂与实验仪器依托泊苷标准品(中国食品药品检定研究院，批号：100388-200401)；单硬脂酸甘油酯(国药集团化学试剂有限公司)；辛酸癸酸三甘油酯(GTCC，英国禾大公司)；泊洛沙姆(沈阳药科大学集绮药业有限公司)；色谱纯乙腈(FisherScientific)；胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)；RPMI1640medium(HyClone公司)；0.25%胰蛋白酶溶液(吉诺生物医药技术有限公司)；青-链霉素溶液(吉诺生物医药技术有限公司)；四甲基偶氮唑盐(MTT，Sigma公司)。H446和MCF-7细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库)。高效液相色谱法(Infinity1260，安捷伦科技有限公司)；超声波细胞粉碎机(JY92-IID，上海比郎仪器有限公司)。1.2实验方法1.2.1载药脂质体的制备依托泊苷溶解于乙腈/水混合溶液中，配成浓度为1mg/mL的溶液，留以备用。分别精密称取适量单硬脂酸甘油酯和GTCC溶于乙醚，取800μL的0.1%F68水溶液与单硬脂酸甘油酯和GTCC乙醚溶液置于西林瓶中混合，精密移取200μL依托泊苷乙腈/水溶液加入上述液体，探头超声8min(300W，工作2s，间歇2s)。置于50℃水浴中加热，挥去乙醚，加入2mL的0.1%F68水溶液后盖上瓶塞继续搅拌3min，探头超声3min(200W，工作2s，间歇2s)，即得依托泊苷脂质体。取制得的依托泊苷脂质体上清液8000r/min离心10min，使附着于脂质体表面的游离药物颗粒通过离心去除。1.2.2包封率和载药量的测定取离心后上清液0.5mL，加入相同体积甲醇0.5mL，45℃左右水浴超声破坏10min。色谱条件：EclipsePlusC18色谱柱(4.6×100mm)，柱温为35℃；流动相为乙腈(25%)-醋酸pH=4.0缓冲液(75%)，流速为1mL/min，检测波长为254nm，进样量为20μL。用HPLC法测定总药物浓度(C0)。同时取离心后上清液，将其置于超滤离心管内，12000r/min高速离心10min，滤液用HPLC法测定游离药物浓度(C)。按公式(1)，(2)分别计算药物包封率(encapsulationefficiency,EE)和载药量(drugloadingcapacity,DD)。包封率(EE,%)=(C0-C)×V/m0×100%(1)载药量(DD,%)=(C0-C)×V/[(C0-C)×V+w]×100%(2)C0为破坏后药物总浓度，单位为μg/mL；C为未包裹的游离药物浓度，单位为μg/mL；V为载药胶束体积，单位为mL；m0为投入药物总量，单位为mg；w为载体质量，单位为mg。1.3细胞药效学测定将H446和MCF-7细胞分别常规培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，其中含有青霉素100IU/mL及链霉素100IU/mL，于体积分数5%CO2、37℃二氧化碳培养箱中培养，维持细胞处于对数生长期。调整细胞悬液浓度约为30000个/mL，分别接种小细胞肺癌细胞H446和人乳腺癌细胞MCF-7于96孔板，每孔加入0.1mL细胞悬液，置于5%CO2的37℃的孵箱中孵育培养。加入浓度梯度的药物，6个浓度梯度，每孔0.1mL，设5个复孔。加药后5%CO2的37℃的孵箱中孵育24~72小时，取出培养瓶置于倒置显微镜下观察。每孔加入10µLMTT溶液，继续培养4h。每孔加入100µL二甲基亚砜，在酶联免疫检测仪490nm和630nm两个波长条件下检测各孔溶液的光密度值，其中630nm处的OD值为调零组OD值。以不同药物浓度为横坐标，以细胞存活率为纵坐标作图绘制细胞生长抑制曲线。2实验结果2.1依托泊苷脂质体的包封率和载药量通过本法制备得到的载药脂质体的平均包封率为79.77%，平均载药量为21.65%(见表1)。[收稿日期]2019-05-28[基金项目]浙江省实验动物科技计划项目(2016C37109)[作者简介]杨芸(1987-)，女，浙江人，讲师，主要研究方向为靶向制剂。广东化工2019年第14期·20·www.gdchem.com第46卷总第400期
表1依托泊苷脂质体的包封率和载药量(n=13)Tab.1TheencapsulationefficiencyanddrugloadingofEtoposideliposome(n=13)名称包封率(Mean±SEM,%)载药量(Mean±SEM,%)依托泊苷脂质体79.77±1.0421.65±0.88
2.2游离药物和依托泊苷脂质体对小细胞肺癌H446细胞作用以小细胞肺癌细胞H446为细胞模型，对依托泊苷游离药物和依托泊苷脂质体进行细胞药效学评价(见表2)。在对H446细胞用药24h后，游离药物和载药脂质体的IC50分别为38.75µg/mL和10.97µg/mL；48h后的IC50分别为12.32µg/mL和7.73µg/mL；72h后的IC50分别为2.40µg/mL和1.56µg/mL。在药物作用24h、48h、72h后，对肿瘤细胞的IC50都依次降低，说明依托泊苷随着作用时间的延长对肿瘤细胞的杀伤力依次增大，且在三个时间点载药脂质体对H446细胞的作用均明显强于游离药物。
表2游离药物与载药脂质体对H446细胞的抑制作用Tab.2TheinhibitionratesoffreeEtoposideandliposomalformulationsofEtoposideonH446cellproliferationIC50/(µg/mL)24h48h72h游离药物38.7512.322.40载药脂质体10.977.731.56
2.3游离药物和依托泊苷脂质体对乳腺癌MCF-7细胞作用
表3游离药物和载药脂质体对MCF-7细胞的抑制作用Tab.3TheinhibitionratesoffreeEtoposideandliposomalformulationsofEtoposideonMCF-7cellproliferationIC50/(µg/mL)24h48h72h游离药物57.6111.341.28载药脂质体1.311.100.35
bep方案化疗
bep方案化疗
BEP方案化疗是一种应用于睾丸癌治疗的化疗方案，它广泛用于治疗早期和晚期的睾丸癌。BEP指的是顺铂（Bleomycin）、依托泊苷（Etoposide）和卡铂（Cisplatin）三种药物的组合。本文将探讨BEP方案化疗的原理、疗效、副作用以及与其他化疗方案的比较。
首先，我们来了解一下BEP方案化疗的原理。BEP方案化疗通过同时应用三种药物，实现了对睾丸癌细胞的全面攻击。顺铂主要通过抑制DNA的复制和细胞分裂发挥杀伤作用。依托泊苷则是一种DNA解旋酶抑制剂，能使DNA双链断裂，达到抑制癌细胞增殖的目的。卡铂是一种DNA交联剂，能够通过交联DNA链断裂，抑制癌细胞DNA合成。这三种药物在联合应用时相互作用，增强了彼此的抗癌效果，从而达到更好的治疗效果。
其次，我们来看一下BEP方案化疗的疗效。研究表明，BEP方案化疗在早期和晚期睾丸癌的治疗中都有很高的成功率。对于早期睾丸癌，BEP方案化疗的治疗成功率高达90%以上。而对于晚期睾丸癌，BEP方案化疗也能够取得很好的治疗效果，可以控制癌细胞的生长和扩散，延长患者的生存时间。
然而，BEP方案化疗也会带来一些副作用。最常见的副作用包括恶心、呕吐、脱发、贫血、白细胞减少等。这些副作用虽然会给患者带来一定的不适，但在大部分情况下是可以被控制和缓解的。此外，长期使用BEP方案化疗也可能对患者的生育能力产生一定影响，因为这三种药物对生殖细胞也有一定的损害作用。因此，在选择化疗方案时，医生需要对患者的年龄、生育意愿等因素进行综合考虑。
除了BEP方案化疗，还有其他一些常用的化疗方案用于睾丸癌的治疗。例如EP方案（依托泊苷和顺铂的组合）、VIP方案（韦诺达唑联合依托泊苷和顺铂）等。这些方案都有其自身的优势和适应症。EP方案适用于早期睾丸癌的治疗，与BEP方案相比，它的毒副作用相对较轻，更加适合一些身体状况较弱的患者。而VIP方案则适用于晚期睾丸癌的治疗，它的抗癌效果与BEP方案相当，但毒副作用相对较大。因此，医生在选择化疗方案时需要综合考虑患者的具体情况和身体状况。
肿瘤的多药耐药及其逆转剂研究进展
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1 / 6 综述
肿瘤的多药耐药及其逆转剂研究进展
安徽省肿瘤医院 桂留中
化疗仍是恶性肿瘤的重要治疗手段之一，然而肿瘤细胞的耐药常使化疗最终失败。根据肿瘤细胞的耐药特点，耐药可分为原药耐药（Primary drug resistance,PDR）和多药耐药（Multidrug
resistance ,MDR）。PDR只对诱导药物产生耐药而对其他药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药类；MDR则是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药产生抗药性的同时，对其他结构和作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药性。MDR的表现十分复杂，既可有原发性（天然性）耐药，也可有诱导性（获得性）耐药；还有典型性和非典型性耐药之分。由于MDR给化疗带来了困难，近年人们对其产生的机制以及试图寻找逆转剂做了大量的工作。本文简介MDR产生的机制并着重介绍近年逆转剂的研究进展。
1. MDR产生的机制
1.1膜糖蛋白介导的机制
1.1.1 P-gp与MDR 1976年Ling等首先在抗秋水仙碱的中国仓鼠卵巢细胞株上发现了一种能调节细胞膜通透性的糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）,因其相对分子量为170kd，又称P-170。[1]。P-gp主要分布在有分泌功能的上皮细胞的细胞膜中，在人类正常组织中有不同程度的表达，其中肾上腺、肺脏、胃肠、胰腺等组织中表达较高，而在骨髓中表达较低。P-gp属于ATP结合盒家族的转运因子，其生理功能为在ATP供能下将细胞内的毒性产物泵出细胞，对组织细胞起保护作用。P-gp由mdr1基因编码产生。人类mdr1基因位于7号染色体长臂2区一带一亚带（7q21.1）。1986年，Gros将编码P-gp的mdr1cDNA直接转染敏感细胞后，转染细胞表现出完全的MDR表型，从而提供了P-gp能够导致多药耐药的有力证据。
现已证明，许多肿瘤原发性或获得性耐药均与P-gp过量表达有关。P-gp随mdr1基因扩增而增加。P-gp有多个药物结合位点，因而具有多种药物泵出功能，不过其底物多为天然性抗癌药如长春碱类、蒽环类、紫杉醇类和鬼臼毒素类等。由于P-gp能逆浓度差将药物泵出胞外，使细胞内药物浓度降低，从而减弱了药物的细胞毒作用。
bep化疗方案
bep化疗方案
化疗是一种通过使用化学药物来治疗癌症的方法。它在许多癌症治疗计划中起着重要的作用，尤其是在治疗睾丸癌方面。BEP化疗方案，即顺铂（Bleomycin）、依托泊苷（Etoposide）和卡铂（Cisplatin）的组合使用，被广泛使用于睾丸癌的治疗。
I. 背景
睾丸癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，尽管患者人数相对较少，但其发病率在逐年增加。对于睾丸癌的治疗，早期的手术切除通常可以有效地治愈患者。然而，对于具有不良病理特征和晚期疾病的患者，需要进一步的治疗。BEP化疗方案已被证实在提高睾丸癌患者的治愈率方面非常有效。
II. BEP化疗方案的组成
BEP化疗方案由三种化学药物组成：顺铂、依托泊苷和卡铂。这些药物以不同的方式对癌细胞发挥作用，从而达到最佳的治疗效果。
1. 顺铂（Bleomycin）
顺铂是一种通过抑制DNA合成来杀死癌细胞的化学药物。它可以进入癌细胞并干扰其正常的DNA复制过程，从而导致细胞死亡。顺铂一般通过静脉注射的方式给予患者。
2. 依托泊苷（Etoposide） 依托泊苷是一种通过阻止癌细胞的DNA复制和修复来杀死癌细胞的化学药物。它可以与DNA中的酶结合，从而阻止癌细胞的DNA分子链延伸。依托泊苷常常以静脉注射的方式给予患者，也可以通过口服方式使用。
3. 卡铂（Cisplatin）
卡铂是一种与DNA结合并抑制癌细胞分裂的化学药物。它可以干扰DNA的正常结构和功能，从而阻止癌细胞的增殖。卡铂通常以静脉注射的方式给予患者。
III. BEP化疗方案的疗效和副作用
BEP化疗方案在治疗睾丸癌中显示出良好的疗效。研究表明，使用BEP方案进行化疗的患者，治愈率明显提高。
然而，BEP化疗方案也存在一些副作用。常见的副作用包括恶心、呕吐、脱发、疲劳和免疫系统的抑制。这些副作用在化疗结束后多数会逐渐减轻或消失。医生通常会根据患者的具体情况对剂量进行调整，以减轻副作用。
依托泊苷脂质微球注射液对人肺癌H460细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用
・１５５４・ 武珊珊，等 依托泊苷脂质微球注射液对人肺癌Ｈ４６０细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用
依托泊苷脂质微球注射液对人肺癌Ｈ４６０细胞裸鼠移植瘤的生长抑制
作用
武珊珊 ，郑辉
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｗｉｔｈ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ４６０
ＷＵ Ｓｈａｎｓｈａｎ ．ＺＨＥＮＧ Ｈｕｉ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｙ ｏｆＣｈｅｓｔ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＭｉｌｉｔａｒｙＤｉｓｔｒｉｃｔ ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７００，Ｃｈｉｎａ； ＮａｔｉｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＲａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏ—
ｔｅｃｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｌｔｉｎｇ １０００８８，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｃａｎｃｅｒ ｇｒｏｗｕｐ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｃａｒｒｙ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ４６０ ｃｅｌｌ
ｓｔｒａｉｎ ｂｙ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅ．Ｍｅｔｈｏｔｉｓ：Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ４６０ ｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｆｒｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｕｓｅ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｎｉ－
ｍａｌ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｃａｎｃｅｒ ｇｒｏｗｕｐ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｗｉｔｈ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ４６０ ｂｙ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅ．
Ｒｕｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ４６０ ｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎ ｇｒｏｗｉｎｇ ｕｐ．Ｔｈｅ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ
R-EPOCD与R-CDOP方案对初治双表达淋巴瘤效果
R-EPOCD与R-CDOP方案对初治双表达淋巴瘤效果
作者：牛文验 肖淑欣 荆凡静 宋伟 王亚文 薛宏伟
来源：《青岛大学学报（医学版）》2021年第01期 [摘要]目的比较R-EPOCD（利妥昔单抗、依托泊苷、泼尼松、长春新碱、环磷酰胺、多柔比星脂质体）与R-CDOP方案（利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星脂质体、长春新碱、泼尼松）治疗双表达淋巴瘤（DEL）效果及不良反应。方法收集我院收治的33例DEL病人的临床资料，17例接受R-EPOCD方案化疗，16例接受R-CDOP方案化疗，比较两种方案治疗效果及不良反应。结果可评估最终疗效病人28例，R-EPOCD组（n=13）的完全缓解率（CR）较R-CDOP组（n=15）高（84.6% vs 60.0%），但差异无显著性（χ2=2.068，P>0.05）。中位随访时间13个月，两组病人的总生存率（OS）和无进展生存率（PFS）比较差异无统计学意义（P>0.05）。两组Ⅲ/Ⅳ度中性粒细胞计数降低发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论R-EPOCD治疗DEL病人CR率不低于R-CDOP，不良反应可以耐受。
[关键词]淋巴瘤，大B细胞，弥漫性;药物疗法;治疗结果;药物相关性副作用和不良反应 [中图分类号]R733.4[文献标志码]A[文章编号]2096-5532（2021）01-0064-05
[ABSTRACT]ObjectiveTo compare the effects and adverse reactions of R-EPOCD
（rituximab， etoposide， prednisone， vincristine， cyclophosphamide， and liposomal
doxorubicin） and R-CDOP （rituximab， cyclophosphamide， liposomal doxorubicin，
鬼臼毒素类脂质体抗肿瘤作用研究进展
７６ 武警医学院学报 Ａｃｔａ Ａｃａｄｅｍｉａｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ ＣＰＡＦ 第１９卷第１期２０１０年１月 ｖｏ１．１９ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．２０１０ 鬼臼毒素类脂质体抗肿瘤作用研究进展 Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｐＯｄＯｐｈｙｌ１０ｔＯｘｉｎ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ 万宗明，别、静，宋光明 （武警医学院药理学教研室，天津３００１６２） 关键词：抗肿瘤；鬼臼毒素；脂质体；进展 【文章编号】１００８—５０４１（２０１０）０１—００７６—０３ 【中图分类号】Ｒ９６１ 【文献标识码】Ｂ 鬼臼毒素具有显著的抗肿瘤活性，但因毒性 强、副作用大而使其应用受到限制。由鬼臼毒素结 构改造所得的衍生物依托泊苷（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ，ＶＰ一１６）和 替尼泊苷（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ＶＭ一２６）已成为应用于临床的抗 癌代表药物。它们对小细胞肺癌、睾丸癌、急性白 血病及恶性淋巴瘤等多种癌症均有良好的疗效。 但也存在诸如抗癌谱较窄、水溶性差，以及较严重 的骨髓抑制与胃肠道反应等缺点，限制了它们的应 用。随着纳米技术在生物学及医学领域的不断发 展，脂质体作为一种新型药物载体制剂，以其良好的 组织相容性和靶向缓释特性，成为目前肿瘤靶向治 疗的研究热点 。本文就近年来国内外对鬼臼毒素 类脂质体抗肿瘤作用的研究进展进行综述。 １ 鬼臼毒素脂质体 研究发现鬼臼毒素纳米脂质体作用于荷Ｈ２２ 肝癌的小鼠模型，能有效抑制瘤体的生长，统计学 意义显著［２１；鬼臼毒素纳米脂质体可增强其对Ｋ５６２／ ＡＤＭ细胞的增值抑制和凋亡诱导作用，部分可逆转 其耐药性 。在研究鬼臼毒素脂质体影响Ｈｅｌａ细胞 的增殖作用时也发现，鬼臼毒素脂质体具有强的增 殖抑制和诱导凋亡作用，作用７２ ｈ后，鬼臼毒素及 其脂质体半数抑制浓度（ｍｓｏ）分别为４．０ ｍｏ１／Ｌ和 ０．６５ ｍｏｌ／Ｌ，作用２４ ｈ、７２ ｈ的诱导凋亡率分别为 ６４．１％、６８．４％和９０．８％和９４．２％ 。ＴＯＰ一５３是一种 新的鬼臼毒素衍生物，用ＮＬ一１７癌瘤鼠模型研究 ＴＯＰ一５３及其脂质体的结果表明，脂质体组的副反应 有显著减少 。 ［收稿日期］２００９—０６—１ ｌ；［修回日期］２００９—１ １－０２ ［作者简介］万宗明（１９７３一），男，籍贯安徽省肥西县，硕士，实验师， 主要从事抗肿瘤药理学研究。 ［通讯作者］宋光明（１９７５一）．男．湖南永州人．博士 ２依托泊甙脂质体 纳米药物是迄今为止肿瘤靶向治疗较早且效 果显著的方法，其克服了抗肿瘤药物选择性低而导 致的严重副作用，已经应用于某些癌症的治疗；其 脂纳米粒（＜１００ ｎｍ），能有效地包封亲脂的药物，能 增加其稳定性和静脉给药，紫杉醇和ＶＰ一１６等不同 的抗癌药物均可被包封，其对癌细胞和荷瘤动物模 型已显示有效的抗癌效应 。研究认为低浓度的磁 性脂质体ｆ＜０．５ ｍｇ／ｍ１）不会影响负载的抗肿瘤药物 （ＶＰ—ｌ６、长春新碱等）的细胞毒性和血管靶向性 ； 实验证实用阳离子脂质体传递细胞毒性分子 （ＶＰ一１６、阿霉素等）到癌部位是早期癌症有效治疗方 法，且阳离子的物理化学特性是影响其作用效果的 重要因素嘲。 Ｄａｌｔｏｎ淋巴瘤荷鼠实验研究表明，ＶＰ—ｌ６甘油 三棕榈酸酯纳米粒既能控制药物在机体内的分布 又能增加瘤体对药物的摄入 。对淋巴瘤伴ＨＩＶ感 染的患者，用ＶＰ一１６脂质体联合抗病毒治疗后，能 有效地控制肿瘤生长和ＨＩＶ感染症状，并且患者副 作用也不明显 “ 。 研究显示，给药５ ｄ，阳离子ＶＰ一１６脂质体能显 著地抑制鼠的纤维肉瘤生长，并且鼠的最大耐受量 也显著提高，骨髓抑制作用明显降低［１２，１３１。Ｋｈａｎ Ａ 等ｎ 也证实ＶＰ一１６脂质体能抑制瑞士白化病鼠的纤 维肉瘤生长。 ＶＰ一１６脂质体作用于Ｂ１６Ｆ１０黑素瘤鼠表明，静 脉给药０．５ ｍｇ／ｋｇ和０．７５ ｍｇ／ｋｇ有显著的抗肿瘤转移 作用，其抗肿瘤转移作用比ＶＰ一１６明显增强，且呈 剂量依赖性 。 中枢神经系统癌瘤的研究显示，ＶＰ一１
依托泊苷脂质体的包封率研究
北方药学２０１３年第１０卷第２期 ７ 依托泊苷脂质体的包封率研究 白丛林 程 怡 刘慧姗（广东省广州中医药大学广州） 摘要：目的：建立依托泊苷脂质体包封率测定的方法。方法：选择乙醇注入法制备依托泊苷脂质体，以葡聚糖凝胶分离结合高效 液相色谱法测定含量和包封率。结果：采用生理盐水（速度０．５ｍＬ／ｍｉｎ）作为洗脱溶剂分离效果良好，柱平均回收率为１０１％，同 一批样品包封率测定结果ＲＳＤ在２％ｖＸ内。结论：葡聚糖凝胶分离结合高效液相色谱法操作简单，精密度、重复性良好，适用于 依托泊苷脂质体的包封率的测定。 关键词：依托泊苷脂质体包封率 中图分类号：ＴＱ４６４ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１ ６７２—８３５１（２０１ ３）０２—０００７－０２ 依托泊苷（ｅｔ０ｐｏｓｉｄｅ）为鬼臼毒索的糖代谢产物，属细胞周 期特异性抗肿瘤药物，主要用于治疗小细胞肺癌、急性粒细胞 白血病、恶性淋巴瘤『ｌ１等，但存在水溶性差、制剂不稳定等问 题，其注射剂中药物分布广泛，副作用大，应用受到限制，有待 改进剂型，将其设计成脂质体，以增加其在体内外稳定性，改 善其溶解性和安全性嘲。采用凝胶柱色谱分离结合ＨＰＬＱ法测 定包封率，以此来控制其脂质体质量，结果表明此方法简单， 精密度和重复性良好。 １仪器与试剂 依托泊苷对照品（批号１００３８８—２００４０１，中国药品生物制 品检定所），ＰＣ一９８Ｔ（上海艾韦特（Ａ．Ｖ．Ｔ）医药科技有限公司）， 胆固醇（中国医药公司北京采购供应站），依托泊苷（武汉远成 共创科技有限公司，批号：ＥＰ１１０１０１１），葡聚糖凝胶Ｇ一５０（瑞 典Ａｍｅｒｓｈａｍ公司），甲醇、乙腈为色谱纯，其他药品、试剂均为 国产分析纯。Ｄｉｏｎｅｘ型高效液相色谱系统（Ｐ６８０型泵，ＰＤＡ一 １００型检测器，ＡＳＩ一１００自动进样器），Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ ８色谱柱 （２５０￣ｍｘ４．６ｃｍ，迪马科技有限公司），９０—１型恒温磁力搅拌器 （上海沪西分析仪器厂）。 ２方法与结果 ２．１依托泊苷脂质体的制备：采用乙醇注入法制备依托泊苷脂 质体。精密称定卵磷脂、胆固醇，摩尔比为１０：５，并溶于热乙醇 （５５￣２）℃液中。搅拌溶解使其澄清，精密称量依托泊苷，溶解 于ｐＨ６．５磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，０．０５ｍｏＵＬ，５５￣Ｃ）中，边搅拌边将 乙醇液匀速注人ＰＢＳ水相中，注入过程不断通入Ｎ：除去乙 醇。５５℃孵化２０分钟，探头式超声每次１分钟共３次，依次过 ０．４５１ｘｍ和０，２２１￣ｍ的微孔滤膜，制备３批脂质体。同法制备空 白脂质体。 ２．２ ＨＰＬＣ色谱条件：色谱柱：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８柱（４．６ ｍｍｘ２５ｃｍ，５１ｘｍ），流动相：乙腈一醋酸盐缓冲液（ｐＨ４．０，３：７，ＶⅣ）， 流速：１．ＯｍＵｍｉｎ，检测波长：２５４ｎｍ，进样量：２０１ｘＬ，柱温３０ｏＣ。 ２．２．１方法学考察：精密称取依托泊苷对照品适量，用流动相溶 解定容制备成浓度分别为ｌＯ、２Ｏ、４０、８０、１２０、１６０、２４０ｔｚｇ／ｍＬ 的系列标准品溶液，按照上述色谱条件进样测定峰面积。以峰 面积Ａ与其浓度Ｃ进行回归，为Ａ＝０．１９０２Ｃ一０．２８６，ｒ＝０．９９９８， 结果表明依托泊苷进样量在１Ｏ一２４０ｐ￣ｇ／ｍＬ之间，呈良好线性 关系。将低、中、高三种浓度样品在一日内各进样３次，日内精 密度分别为１．０９％、２．８９％、０．０８％，连续６天进样的日间精密 度分别为１．９７％、１．９５％和１．７５％，表明样品精密度良好。三种 浓度样品加入空白脂质体测定，其加样回收率分别为９９．３４ ％、９８．５７％、９７．１６％，表明回收率符合要求。 ２ｌ３包封率测定 ２．３．１总药量测定：考察发现甲醇对测定无干扰，取脂质体样品 ０．１ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，加入甲醇溶液适量破乳，超声使其澄 清，流动相定容至刻度，注入ＨＰＬＣ分析。 ２．３．２游离药物测定 ２．３．２．１确立葡聚糖凝胶分离方法：采用葡聚糖凝胶Ｇ一５０柱 （１．０ｅｍｘ２０ｅｍ）分离依托泊苷脂质体与游离的依托泊苷。精密 量取依托泊苷脂质体０．２ｍＬ上柱，以不同洗脱液洗脱，控制流 速。收集洗脱液，每份２ｍＬ共２５份。分别在２５４ｎｍ处测定吸 光度，绘制洗脱曲线。 ２．３．２．２洗脱曲线：分别用生理盐水、ＰＢＳ７．４缓冲液以及蒸馏水 作为洗脱液，分别绘制洗脱曲线，见图１。可以看出，前２０ｍｌ洗 脱液为脂质体混悬液，２０—５０ｍｌ为游离药物，洗脱峰之间有明 显界限。蒸馏水作为洗脱液分离效果不好，ＰＢＳ７．４缓冲液和生 理盐水作为洗脱液可以将两者完全分开。ＰＢＳ７．４缓冲液没有 生理盐水方便，最终确定用生理盐水作为洗脱溶剂。洗脱速度 ｌｍｌ／ｍｉｎ和０．５ｍｌ／ｍｉｎ中，后者效果更好。 霞 １．蒸馏水（１ｍｌ／ｍｉｎ】 ３．生理盐水（１ｍｌ／ｍｌｎ） ４．生理盐水（Ｏ．５ｍｌ／ｍｉｎ） 图１ ２．３．２．３柱回收率考察：取低、中、高三种浓度的依托泊苷甲醇 溶液，分别去０．２ｍｌ上柱，按２．３．２．１项下条件洗脱，合并游离 组分，过Ｏ．２２ｔｚｍ微孔滤膜，用ＨＰＬＣ法测定，计算回收率分别 是９９．５％、１００．４％、１０１．４％。 上述样品与空白脂质体混合，取０．２ｍｌ上柱，同法测定加 样回收率分别是９９．４％、１００．７％、１０２．９％。 ２．４依托泊苷脂质体样品包封率测定 包封率公式如下：Ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ（％）＝（１－ 一）ｘｌ００ 乙ｌ 其中ｃ 为未被脂质体包封的游离依托泊苷重量（或浓 度），Ｃ 为总的依托泊苷重量（或浓度）。 ３批样品测定结果见表１。 表１ ３批样品的包封率测定结果
我院静脉配置中心抗肿瘤药物常见溶媒错误分析
我院静脉配置中心抗肿瘤药物常见溶媒错误分析
摘要】 目的：对我院静脉配置抗肿瘤药物溶媒选择不合理的医嘱进行分析，为临床安全、有效、合理用药提供参考。方法：从我院计算机信息系统中调取2015年6月至12月住院患者抗肿瘤药物溶媒选择错误发生率高的医嘱，对发生错误的原因进行分析。 结果：通过对静脉配置中心常见抗肿瘤药物溶媒选择错误的医嘱进行分析，为医生和药师在抗肿瘤药物的应用上提供依据。结论：我院静脉配置中心的抗肿瘤药物中，溶媒选择不合理还是存在一定比例，临床药师应充分发挥其专业技能，增加用药安全性。
【关键词】 抗肿瘤药物；静脉配置；不合理医嘱；溶媒选择
【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）20-0384-02
近年来，肿瘤发病率呈现上升速度快、人群年轻化的趋势，因此抗肿瘤药物的使用频率也随之提高。尤其是一些新的抗肿瘤药物的产生，虽然为临床提供了更多有效途径，但同时部分药物的不合理应用，也大大限制了药物的疗效。此外，抗肿瘤药物大都具有严重的不良反应，一旦应用不当，可能给患者造成更加严重的后果。现笔者对2015年6月到2015年12月本院静脉药物配置中心中溶媒使用不当的抗肿瘤药物医嘱进行总结。
1.资料与方法
本院自主研发的审方系统，可以将医嘱审核过程中，审方药师认为不合理的医嘱进行保留，这样不合理医嘱就不会进入下一个调配环节。通过对2015年6月到12月的抗肿瘤药物不合理医嘱分析发现，抗肿瘤药物不合理医嘱主要表现为溶媒选择不当、用法用量错误、配伍禁忌、医嘱重复等等。其中溶媒选择错误在所有不合理医嘱中所占比例最高。出现的原因主要表现在：一些主治医师在针对实际病情，进行临床用药中，往往只注意治疗药物，而忽视了对于载体的选择，以及主药和溶媒的配伍相容性、药物自身的理化性质和药物代谢动力学特征[1]。所以本文着重对错误率比较大的溶媒选择问题进行归纳分析，以期对临床有所借鉴。
中药现代剂型的研究方向及应用
中药现代剂型的研究方向及应用
高春梅 娄子恒 王明芝 张 引
(吉林人参研究院・通化・134001)
摘 要:中药新剂型的研究和发展极为迅速,随着制药工业和新药开发的不断进展,我国中药制剂水平
已从传统经验型逐步上升到科学制药水平,现代制药设备的引进和新技术的应用,使一批现代中药新剂
型显现。相同的中药方剂,由于配制剂型的不同,服后产生的药效、持续时间、作用特点都可能出现较大
的差异。如果使用途径不同,甚至还会出现相反的作用,如天花粉口服剂清热化痰,注射剂仅可用于中
期妊娠死胎引产。古人认为:“汤者荡也,去大病用之。散者散也,去急病用之。丸者缓也,不能速去
之。”充分肯定了选择剂型对发挥疗效的重要作用。即使同为丸剂,临床应用中选择水丸取其易化,蜜丸
取其缓化,糊丸取其迟化,蜡丸取其难化。因此,只有充分认识到剂型与疗效间的内在联系,才能正确选
取中药制剂,以增疗效。
关键词:中药剂型 缓释技术 控释技术 靶向技术
1 剂型的研究方向
1.1 缓释及控释技术
1.1.1 定速释放技术
要使某一种制剂以一定速率在体内释放,就需要
定速释放技术。国内外均有研制头孢类抗生素缓释
制剂的专利或报道。还有在软胶囊内填充油脂性基
质实现药物的缓释,为创造新的中药缓释剂提供了可
能[1]。
1.1.2 定位释放技术
在口腔或胃肠道适当部位长时间停留,并释放一
定量药物,以达到增加局部治疗作用或增加特殊部位
对药物的吸收。如果将锡类散或草珊瑚含片改为口
胶制剂,将会赢得很大的欢迎。治疗结肠突的中药制
剂常因直肠给药给医生和患者都带来很大的不便,如
采取定位释放技术,将增加药物在全肠道的吸收,提
高生物利用度,也会减少很多不便[2]。
1.1.3 定时释放技术
即根据生物时间节律特点释放需要量的药物。
例如针对心绞痛常在凌晨发作的特点,研究在晚间服
药而在凌晨释放的救心丸制剂。这种技术和结肠定
位释药技术结合,对于发展一天1次给药的缓释及控
释制剂很有价值[3]。
1.2 靶向释药系统
伊立替康的临床应用研究进展
伊立替康的临床应用研究进展
马钰;胡静;刘宝瑞;钱晓萍
【摘 要】伊立替康是临床上常用的化疗药物,最早用于标准化疗方案失败后的转移性结直肠癌的治疗,目前已广泛应用于结直肠癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、生殖系统肿瘤的治疗,认为其安全性和有效性均比现有临床药物更佳,近年来,国内外学者对伊立替康的临床应用做了大量的研究,在此,我们对这一领域进行综述.
【期刊名称】《肿瘤基础与临床》
【年(卷),期】2016(029)006
【总页数】5页(P541-545)
【关键词】伊立替康;恶性肿瘤;临床研究
【作 者】马钰;胡静;刘宝瑞;钱晓萍
【作者单位】南京鼓楼医院肿瘤科,江苏南京210008;南京鼓楼医院肿瘤科,江苏南京210008;南京鼓楼医院肿瘤科,江苏南京210008;南京鼓楼医院肿瘤科,江苏南京210008
【正文语种】中 文
【中图分类】R979.1;R730.53
伊立替康是一种半合成的喜树碱衍生物，主要作用是可以特异性抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ，干扰DNA复制和细胞分裂，从而产生细胞毒性[1]，于1998年获得美国FDA批准，用于标准化疗方案失败后的转移性结直肠癌的一线治疗[2]，目前，已应用于胃癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌等的治疗，现对伊立替康国内外的临床应用研究进展综述如下。
伊立替康在转移性结直肠癌的治疗中应用最为广泛，国内外学者研究发现应用包含伊立替康在内的多种联合化疗方案在转移性结直肠癌患者的治疗中疗效确切，提高了疾病控制率，延缓了疾病进展时间。
Garcia-Alfonso等[3]应用贝伐单抗联合卡培他滨+伊立替康治疗77例转移性结直肠癌的初治患者，结果9个月生存率为61%，反应率为51%，疾病控制率84%，中位无进展时间为11.9个月，总生存时间为24.8个月,因此认为贝伐单抗联合卡培他滨+伊立替康双周方案可作为转移性结直肠癌的一线治疗方案。Bazarbashi等[4]进行了1项Ⅱ期临床研究，在I期临床研究中确定了伊立替康的最大耐受剂量为150 mg·m-2，随后在Ⅱ期临床研究中，应用卡培他滨、奥沙利铂、伊立替康联合贝伐单抗治疗53例转移性结直肠癌患者，其中4%的患者完全缓解(CR)，60%的患者部分缓解(PR)，中位无病进展时间16个月，中位总生存时间28个月。Takii等[5]应用替吉奥和伊立替康二线治疗21例经5-Fu+亚叶酸钙或优福定+亚叶酸钙治疗失败的转移性结直肠癌患者，通过Ⅰ期临床剂量递增试验确定最大耐受剂量，推荐剂量为：替吉奥65 mg·m-2，d1～14；伊立替康75