无菌制剂培养基模拟灌装工艺验证
培养基模拟灌装试验
风险： 风险：结合了发生危害的可
能性和危害的严重性
评估风险的参数
可能性
严重性
风险评估
可能性 最终灭菌的 无菌制剂 非最终灭菌 的无菌制剂
可探测性
严重性
风险
较小
很差
严重
大
较大
很差
严重
很大
定义
使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无 菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试 验”. • 目的
– 证明生产线采用无菌工艺生产无菌产品的能力 – 对人员进行资格确认 – 符合GMP的要求
试验前的准备工作
• • • • • • • • • • 设备确认 通风系统（HVAC）、水系统的验证 设备的清洗和消毒CIP,SIP 灭菌工艺验证 湿热、干热灭菌工艺 除菌过滤的验证 空气过滤器的完好性检测 容器/胶塞密闭性测试 人员培训 洁净室环境达到设计要求
关键因素八:灌装的持续时间
• 通常情况，培养基灌装的时间应该足够长，能够 包括所有的必需的干扰、生产中断，包括正常的 无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、 改变设备或手动维修等，还包括更衣、暂停、换 班等，持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。 • 对于非常大的批量或较长的生产过程，通常使用 一些空白样品（空的或者灌水）以维持模拟试验 的动态环境。这些技术可以应用于持续多个工作 日的工艺验证，用于验证可以批准的最长的生产 周期。
关键因素五: 容器体积(2/2)
• 在最初的验证中，可以二次选用最大的容器（配 合一次最慢、一次最快的灌装速度），第三次选 用最小的容器（配合最快的灌装速度）。 • 在每年2次的再验证中，用其它规格尺寸的容器轮 转试验。 • 不能使用琥珀色的容器，而应该使用透明的容器， 保证可以目视检测到微生物的生长。
培养基无菌灌装工艺验证方案
目录一、目的二、范围与条件三、职责与培训四、验证项目五、偏差六、结论与建议一、目的：1.1验证目的：通过培养基无菌生产工艺验证，证实无菌生产工艺过程的可靠性。
二、验证范围和条件：2.1验证范围：本验证方案适用于冻干粉针生产线（激素）培养基无菌灌装。
2.2验证条件：培养基无菌灌装工艺验证是用与正常的实际生产工艺相同的条件和操作方法，在其他各个系统（诸如公用系统、无菌环境保持系统、设备验证等）验证工作完成的基础上进行的。
本方案必须在动力部门相关验证和冻干车间相关验证完成的条件下进行。
2.3 按照《培养基灌装SOP》，在各个系统验证完成后，开始进行培养基灌装工艺验证。
工艺流程图：2.4执行的标准操作规程：严格按照冻干车间工艺SOP、设备SOP、卫生SOP、物料SOP、基础SOP执行操作。
三、职责和培训:3.1 验证小组成员和职责：3.2 培训内容：3.2.1 培训目的：为建立并保持良好的质量保证系统，应配备足够数量并具有适当资质的人员完成各项操作，所有人员应明确理解自己的职责，熟悉与之相关的GMP原则，并接受良好的培训。
3.2.2人员培训：所有负责该验证操作的操作人员。
四、验证项目：4.1批的选择：冻干生产线的产品规格为，用7ml的西林瓶灌装2ml的培养基。
灌装大豆胰蛋白胨液体培养基（TSB）3批，批号为201406211、201406231、201406251，灌装装量为2ml。
为确保冻干机A、B每台不少于40000支，灌装数量为8万支需16.8万ml大豆胰蛋白胨液体培养基，灌装完毕后，先置23-28℃培养7天，再置30-35℃培养7天，每天观察培养基的微生物生长情况。
培养基灌装与培养基促生长试验同步进行。
4.2 抑菌作用的避免:培养基灌装使用促进微生物生长的培养基来挑战评估污染风险，因此抑菌因素应当在培养基灌装中予以考虑。
将培养基灌装的注射用水冷却至室温20-25℃配制，并在室温下保存培养基液体。
培养基模拟灌装验证方案(参考)
验证方案编码：STP-YZ-04702A A A A药业有限公司验证方案项目名称培养基模拟灌装方案日期1验证方案审批表验证进度计划3培养基模拟灌装验证方案目录验证方案审批表1. 验证目的2.适用范围3.职责4.有关背景资料5.验证项目、评价方法及结果6．漏项与偏差7．审阅本验证方案，并确认验证结果8．验证总结9.SOP的修订10.再验证时间11 证明1.验证目的培养基模拟灌装试验是用与实际生产工艺相同的条件与操作方法，包括生产环境，向安瓿内灌装经除菌过滤的液体培养基，然后将此模拟制品在适当条件下培养，以确认无菌工艺过程的可靠性。
证明在本公司小容量注射剂车间生产线中灌装过程中所采用的各种方法和各种规程，防止微生物污染的水平达到可接受的合格标准的能力，或提供保证所生产产品的无菌性的可信限度达到可接受的合格标准的证据。
充分验证无菌生产工艺的可靠性。
同时评价生产操作人员的行为规范性。
我公司小容量注射剂车间于2011年3月5-6日进行过三批培养基无菌灌装验证，验证结果符合要求。
由于小容量注射剂车间的纯化水系统、注射用水系统、空调净化系统于2011年8-10进行了改造和验证，关键生产设备如超声波洗瓶机、隧道干燥杀菌机、安瓿拉丝灌封机也于2011年9月进行了改造和验证，为充分验证无菌生产工艺的可靠性，故拟再次进行三批培养基模拟灌装验证。
2.验证范围本验证方案适用于本公司小容量注射剂车间培养基模拟灌装生产验证，当上述条件改变时，应重新验证。
3.职责3.1验证领导小组3.1.1负责验证方案会审3.1.2负责验证方案的批准3.1.3负责对验证方案修改稿的批准3.1.4负责验证报告审核、批准3.2 验证小组3.2.1 负责验证方案的起草和审核。
3.2.2负责按验证方案对有关人员进行培训。
3.2.3负责组织、协调本验证方案的实施。
3.2.4负责收集、整理和审核验证数据，起草验证报告（如方案执行有偏差，要完成OOS调查报告）。
培养基模拟灌装试验验证方案
培养基模拟灌装试验验证方案培养基模拟灌装试验验证方案(10ml)2011年08月培养基模拟灌装试验验证方案(10ml)验证方案的起草与审批验证小组成员方案起草验证委员会审阅会签方案批准目录1概述 (3)2.验证目的 (4)3风险评估 (4)4验证参考标准 (5)5.验证范围 (5)6.验证职责 (5)7验证前提条件 (6)8 验证批次和时间 (7)9 验证步骤 (8)10培养基的培养和检查 (14)11试验结果评价 (14)12试验结果分析 (15)13风险的评估与接受 (15)14验证结果评审和结论 (15)15方案修改记录 (15)16再验证周期 (15)17附件 (15)1概述本次培养基模拟灌装试验验证是以灭菌的乳糖粉末分装到10ml西林瓶中，整个过程模拟正常的粉针剂品种的分装状态，在盖塞前将胰蛋白胨大豆肉汤培养基灌入瓶内，压塞轧盖后进行培养，确认无菌分装工艺的无菌可靠性。
2.验证目的在各种干扰和最差条件下，评估灭菌工艺、人员更衣、行为习惯、A/B级气流模式、无菌环境的建立、消毒维持方法和物料的传递控制等整个流程的无菌保证水平。
3风险评估经验证小组人员共同对培养基模拟灌装试验验证进行风险评估，对存在的质量风险提出了预防和纠正措施建议，具体见下表：评估人年月日4.验证参考标准4.1 药品生产质量管理规范（2010年版）4.2 药品生产质量管理规范（2010年版）指南4.3 中国药典2010年版（二部）4.4 药品生产验证指南（2003年版）5.验证范围本方案适用粉针车间生产的全过程。
包括：人员更衣、各房间的清洁消毒、物料传递、容器工具的处理、内包材的处理、中控取样、动态下环境监测、无菌分装、轧盖过程，并在分装过程中模拟正常与非正常干扰活动。
方案中还规定瓶子、胶塞和铝盖灭菌后存放有效期的验证。
6.验证职责6.1验证委员会6.1.1负责验证方案的审批，质量副总进行批准。
6.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。
培养基模拟灌装验证的若干问题_顿昕
正常生产溶液ｐＨ 正常生产溶液ｐＨ值偏高 ｐＨ值偏高 或偏低 配制好的溶液在低温下保 存
酸性或碱性环境不利于 微生物生长 低温会抑制微生物生长
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---灌装
风险点 解释 大多数需氧微生物， 大多数需氧微生物，惰 性气体有一定的抑菌 作用 西林瓶内壁不能被完全 接触， 接触，微生物不能生 长 控制方法
Warning Letter
Gases used during process simulation should be evaluated for their inhibitory effect on microorganisms. Your response states that the nitrogen used in the process simulation is removed by the test membrane during filtration. 没有评估模拟过程中使用的气体（氮气）对微生物影响。
班次轮换， 班次轮换，清场消毒
消毒剂会杀灭微生 物
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---冻干
风险点 解释 控制方法 灌装好的西林瓶放入冻干机， 灌装好的西林瓶放入冻干机， 放置十小时以上模拟冻干过程 。但不进行抽真空的模拟操作 ，保持冻干机内正常气压
抽真空
过低真空度有抑菌作用 。过低真空度还会导 致培养基失水。 致培养基失水。
Warning Letter
The process simulations (media fill) do not represent actual production operations for your sterile API. The process simulation performed by your firm in July 2009 failed to include simulation of the routine interventions performed in a typical campaign of 13 batches. 培养基灌装验证没有反应实际无菌API的生产过程。培养基灌 装验证未能包括连续生产13个批次时的日常干预的模拟。
培养基模拟灌装试验(0777).
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 生产出现如下情况
长期停产后复产 新生产线投产前 染菌事故复产
培养基模拟灌装试验（MFT）
六. 培养基灌装试验（MFT）样品的培养 和结果分析
样品的培养
置于30～35℃的温度下至少培养7天，然后 转入20～25℃至少培养7天。 在第三天和第七天至少观察培养基样品微 生物的生长情况一次，并且在检测期间的 最后一天至少再观察一次。
培养基模拟试验是无菌生产工艺的验证手段，是任何 非最终无菌药品生产必须进行的一项验证。
培养基模拟灌装试验（MFT）
二、培养基灌装试验的要求
模拟试验应尽可能模拟常规的无菌生产工艺。 每次灌装数量应大于 5000 瓶。
对于小批量产品，培养基灌装数量至少应等于产品 数量。 5000 瓶的染菌数应为0。 再验证周期 单一规格品种：2次/年。 多规格品种：每一规格品种 1次/年。 生产工艺、生产环境、主要设备变更时，连续试验3 批。 每位无菌操作者每年至少参加1 次成功的MFT 。
培养基模拟灌装试验（MFT）
环境验证
（1）HVAC系统的微生物、尘粒验证 （2）洁净区压差验证 （3）洁净区风速验证 （4）B级背景下A级单向层流验证
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌生产设备的灭菌验证
（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行） （1）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿
热灭菌柜灭菌效果验证 （2）直接接触无菌药品的设备、容器、管道
灭菌效果验证 （3）除菌过滤器除菌效果验证
培养基模拟灌装试验（MFT）
物料、用品及用具的灭菌
（1）无菌培养基的准备 （2）分装模拟替代物的灭菌 （3）中间体无菌验证。（如果需要的话） （4）直接接触无菌药品的内包材灭菌
无菌培养基灌装验证方案
验证方案1、目的：对生产部制剂车间的灌装机进行培养基无菌灌装试验,通过灌装后的产品污染程度检测灌装工艺能否保证产品的无菌。
2、范围：生产部制剂车间的灌装生产线。
3、责任：3.1验证小组3.1.1设计、组织和协调验证试验。
3.1.2准备、检查和批准验证方案。
3.1.3准备验证报告并且流转批准。
3.1.4评估所有的测试结果。
3.1.5完成此文件规定的验证报告。
3.1.6验证小组成员名单3.2生产部3.2.1对灌装车间进行清扫、消毒，保证环境清洁。
3.2.2操作灌装机。
3.2.3按照规定的程序进行培养基灌装。
3.2.4进行日常清洗、维护。
3.3QA3.3.1取样。
3.3.2进行目检。
3.3.3进行环境监测。
3.3.4检查和批准验证方案和报告。
4、描述制剂车间使用x公司的灌装流水线，包括：洗瓶机、隧道烘箱、灌装机、轧盖机，y公司的冻干机进行冻干。
5、程序5.1使用的设备及材料5.1.1洗瓶机5.1.2隧道烘箱5.1.3灌装机5.1.4冻干机5.1.5灌装材料5.1.5.1瓶子5.1.5.2胶塞5.1.5.3铝盖5.1.6培养基5.1.7菌种5.1.7.1枯草杆菌(Bacillus Subtilis) ATCC 6633 5.1.7.2白色念珠菌(Candida alblcans) ATCC 10231 5.1.7.3厂房环境分离菌5.2培养基准备5.2.1在10L血清瓶中加入2L的热注射用水，再加入240g胰蛋白胨大豆肉汤充分搅拌，等溶解后再加入6L的热注射用水，整个培养基量为8L。
5.2.2将配制好的培养基放到高压蒸汽灭菌柜中121℃灭菌30分钟，灭菌后取出血清瓶，从瓶中取4瓶（50ml/瓶）作为阴性对照，其中2瓶于32±2℃培养14天，另外2瓶于23±2℃培养14天。
观察有无微生物污染。
5.3培养基无菌灌装5.3.1准备无菌的灌装器具(针、硅管、等等)，联接到灌装机上。
硅管一头放入灭菌培养基中。
粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验
内容摘要：【摘要】目的为确保粉针无菌分装生产过程对产品不产生污染，保证粉针生产药品质量。
方法先注入液体培养基，再以无菌甘露醇干燥粉为替代物，模拟分装于注射剂瓶，盖胶塞，轧铝盖。
分装样品先后在30～35℃与20～25℃下培养7d，并作阴性、阳性对照。
结果无菌灌装环境及操作人员表面微生物检查合格, 阴性、阳性对照成立, 试验样品微生物未检出。
结论无菌粉针灌装过程中，经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以确保无菌。
【关键词】粉针剂无菌工艺验证培养基灌装试验无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素。
无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法和规程进行。
产品的无菌或其它质量特性绝不能依赖于任何形式的最终处理或成品检验。
培养基模拟灌装试验——使用培养基作为药品的替代品（placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。
培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易。
能全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。
而且也是各国药品法规要求的基本内容。
1验证准备工作1.1所有的相关设备及其工艺均应事先通过确认或验证,如洁净生产区环境须通过静态验证(空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的规定)，操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训,生产主要设备(如分装机等)以及与生产相关的其它辅助工艺(如淋洗、湿热灭菌、干热灭菌去热原、除菌过滤等)，均须通过确认或验证。
1.2甘露醇粉末无菌的处理[1]事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kgy），并进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试。
在甘露醇粉末的抑菌性试验中，每天观察微生物生长情况，全部样品对照品试管中均有明显的微生物生长，说明甘露醇对枯草杆菌和白色念珠菌均无抑制作用。
培养基模拟灌装验证培训
培养基模拟灌装验证培训
停滞实验： ●目的：表明用于培养的培养基是作用的。 ●操作：从每批培养结束没有染菌的培养 基中随机抽取60瓶做以下试验，每10瓶分别接 种<100cfu/0.1ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单 胞菌、生梭胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、枯 草芽孢杆菌，接种后盖塞，封口。金黄色葡萄 球菌、铜绿假单胞菌置、枯草芽孢杆菌 30~35℃培养7天，黑曲霉、白色念珠菌置 20~25℃培养7天，7天内所有接种的培养基均 出现明显的微生物生长。如果停滞试验检查结 果不合格，该验证无效，应重新验证。
培养基模拟灌装验证培训
微生物侵入试验（续）： 3、轧盖密封性试验的样品各取10瓶，不经处理，作为阴 性对照，置30~35℃培养14天，应无菌生长。 4、培养基培养结束后营养试验：将培养结束的没有微生物 生长的轧盖密封性试验的样品10瓶，接种试验菌（大肠埃希菌） 10~100cfu/m1，置30~35℃中培养3天，应有明显的细菌生长。 ●接受标准：只有前述各项均符合要求，且经菌液浸泡的 样品不得长菌，挑战试验才有效。如果挑战试验中有微生物生 长的现象，需要记录长菌的样品数，如果样品中出现长菌现象， 需要进一步调查长菌原因，检查瓶口或胶塞是否有缺损，造成 微生物侵入。如果任何挑战试验中长菌的样品，不是由于瓶口 或胶塞明显的物理性缺损所致，则挑战试验失败。
培养基模拟灌装验证培训
法规要求
培养基模拟灌装验证培训
培养基模拟灌装的先决条件 ☻洁净室/设备的验证状态确认 ☻经过重大维修或变更后进行了生产线的 运行确认或性能确认 ☻参与培养基灌装的人员接受了培训
无菌操作 洁净室行为 培养基灌装方案
☻明文规定的工艺过程及最差条件
培养基模拟灌装验证培训
最差条件： 在制药工艺验证时使用“最差条件” 是很有用的技术。使用“最差条件”是为 了挑战工艺可能出现在日常操作边缘的状 况。如果在最差条件，结果是可以接受的， 那么表明在正常日常条件下，系统就有更 高的可靠性。最差条件并不是说要人为地 创造一个可能导致环境超出允许操作条件 的或可能导致系统失效的情况。
培养基模拟灌装试验方案
培养基模拟灌装试验方案（无菌粉末分装粉针剂）目录1.目的 (3)2.范围 (3)3.验证组织及职责 (3)4.方案说明 (4)5.工艺概述 (4)6.验证前检查 (5)7.验证内容 (6)8.验证周期 (13)9.验证总结、评价与建议 (14)10.验证报告的审核批准 (14)11.验证合格证 (14)1.目的对于无菌生产来说，即使所有与产品无菌性有关的设备部件、容器以及原料都经过有效地灭菌处理，但当这些生产要素在实际工艺条件下组合在一起时，仍有可能因各种原因导致产品被污染。
对于非最终灭菌的无菌生产工艺必须进行培养基灌装来验证。
培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程，用于表明如果严格按照工艺要求生产，产品的无菌性有可靠保证。
2.范围本验证方案适用于无菌粉末分装粉针剂生产线的培养基模拟灌装试验。
3.验证组织及职责3.1验证职责3.2验证方案的培训验证实施前，QA部门对验证相关人员培训，填写《员工培训记录表》。
4.方案说明4.1验证过程中偏差处理的要求执行《偏差管理规程》4.2验证过程中变更的要求执行《变更管理规程》4.3验证过程中记录填写的要求执行《记录管理规程》4.4其他要求5.工艺概述5.1产品：5.1.1性状：白色结晶或结晶性粉末。
5.1.2规格：0.25g/瓶。
5.1.3包装：10ml西林瓶。
5.1.4批量：24000瓶。
5.2胶塞处理：纯化水清洗、硅化、注射用水清洗、灭菌。
（121℃，20分钟）5.3西林瓶处理：纯化水清洗、注射用水清洗、压缩空气吹干、隧道烘箱灭菌。
（灭菌段温度320℃≥5分钟，冷却温度﹤40℃）5.4铝盖干热灭菌。
（180℃，120分钟）5.5无菌药粉通过分装机充填到西林瓶中，盖胶塞、轧铝盖、灯检、贴签、包装。
5.6工艺流程图如下：6.验证前检查6.1人员的确认确认参与验证人员均接受过微生物知识、更无菌衣、无菌操作、培养基模拟灌装试验方案的培训，同时确认参与验证人员的健康体检情况，详见附件1《员工体检和培训确认表》。
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培养基模拟灌装验证文件编码VPZ17001 颁发部门制定部门：____________ 制定人：_________ 日期：_________ _________ 日期：_____________ 审核部门：审核人：日期：日期：批准人：日期：生效日期：年月日验证小组人员名单培养基模拟灌装验证方案文件编码 颁发部门 制定部门： 制定人： 日期： 日期： 审核部门：审核人：日期：日期：批准人： ________________ 日期： _____________ 生效日期： ____________ 年 _____ 月 ____ 日 分发部门质量管理中心 [V]质量保证部 [] 质量控制部 [V] 设备工程部 [] 采 购 部[] 财务部[]研发 部 []销售 售部[]综合无菌 []制剂车间2验证目的 3适用范围培训部门：___________培训岗位： ___________________________________验证领导小组会签 项目负责人： 验证协调员：QC 负责人：质量部负责人： 生产部负责人： 工程部负责人： 变更历史 版本号修订原因与内容目录日期： ______________ 日期： ________________ 日期： _______________ 日期： _______________ 日期： ________________ 日期： _______________修订后版本号 生效日期4相关部门职责5验证条件6验证引用的文件-7严并甘7培养基8培养基模拟灌装试验条件9培养基模拟灌装试验的频率10培养基模拟灌装量和灌装数量的确定11培养基模拟灌装最差条件的设计12培养基配制和无菌灌装操作过程13取样计划14试验样品的培养15试验结果评价16环境监控和微生物限度控制17清场与清洁18培养基灌装过程监控记录19偏差调差20纠偏措施21异常情况处理程序22变更23拟定再验证周期24验证结果评定与结论附录附录1:人员培训附录2:系统验证及设备验证确认附录3:纯化水检验报告单附录4:注射用水检验报告单附录5:环境监测报告单附录6:胰酪胨大豆肉汤培养基适应性实验结果附录7:胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查结果附录8培养基及内包材确认附录9:最差条件确认附录10:内包材检验结果附录11:未参加培养灌装瓶原因说明附录12: 培养基的培养观察记录附录13: 培养基的培养阳性结果和培养基灌装失败情况说明附录14：培养基灌装过程中监控统计表附录15:灌装生产结束清洁记录附录16:质控过程监控产品基本信息:1概述培养基模拟灌装主要用的是胰酪胨大豆肉汤培养基，适用于黑龙江天龙药业江北新厂滴眼剂车间生产线。
依据批准的滴眼剂车间培养基模拟灌装验证方案，实施培养基模拟灌装试验；评价无菌生产工艺的可信限度达到可接受的合格标准，确认滴眼剂车间生产过程的可靠性，有效性。
本方案规定了滴眼剂车间培养基模拟灌装的验证方法和标准。
2验证目的通过对滴眼剂灌装过程中采用与正常生产工艺相同的条件和操作方法（包括生产环境等），向8ml滴眼瓶内灌装经过除菌过滤的无菌培养基，在适当条件下培养，并对培养品观察、结果判定的验证，来确定滴眼剂车间生产无菌灌装工艺的无菌保证水平，判定无菌生产要素是否能够达到可接受的合格标准的能力，以确认无菌生产工艺过程的可靠性。
3适用范围本验证方案适用于本公司江北分厂滴眼剂车间滴眼液生产线4 相关部门职责5验证条件5.1所有相关设备及其工艺均要事先通过确认或验证，并符合规定。
如洁净生产区内环境须通过静态、动态验证（A级区域的风速、空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均要符合相应规定），操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训，参加人员的更衣、行为规范、微生物知识、标准操作规程等经过培训，生产主要设备（如洗瓶机、洗塞盖机、配液系统、灌装加塞机旋盖等）以及与生产相关的其它辅助工艺（如湿热灭菌、干热灭菌、除菌过滤等），均须通过确认或验证。
确认或验证合格后方可进行培养基模拟灌装验证，本实验要模拟整个无菌操作过程，包括从工器具的灭菌直至完成灌装和容器密封的整个过程，降低实际生产的无菌风险。
本实验要在滴眼剂车间生产中选择最差合理条件进行评估，为实际生产提供依据。
5.2人员培训对所有参加培养基模拟灌装人员进行培训。
5.2.1更衣、更鞋程序培训培训主要内容：根据《进入洁净区更衣更鞋标准操作规程》对进入洁净区的工作人员进行培训。
合格标准：培训人员掌握正确的洗手程序，确保手部的清洁；正确的洁净服穿戴程序，防止对洁净服的污染及将污染物带入洁净区。
5.2.2行为规范培训内容：对进入洁净区的工作人员进行正确的行为规范培训。
合格标准：充分的认识到在洁净区内正确的行为的重要性。
5.2.3微生物、清洁、消毒、灭菌知识的培训内容：对微生物的相关知识、清洁及消毒标准操作规程和灭菌知识进行培训。
合格标准：了解微生物的种类及生存条件，认识到微生物在药品生产过程中的危害；明确清洁、消毒、灭菌在药品的整个生产过程中的重要性。
5.2.4岗位标准操作规程培训内容：根据各岗位的标准操作规程进行培训合格标准：各岗位操作人员能够掌握相关的岗位知识，熟练的进行岗位操作。
525培养基模拟灌装实验内容的培训内容：详细讲解培养基模拟灌装实验内容及各岗位的相关操作内容。
合格标准：掌握培养基模拟灌装整个过程，包括培养基的配制、灌装过程中所用管线器具的灭菌、管线的安装、洗瓶、洗塞盖、灌装的操作。
526无菌检查人员对模拟灌装产品的判定培训内容：讲解培养基和微生物生长繁殖的相关知识。
合格标准：能准确的判断培养基中是否有微生物的繁殖及受污染的原因。
培训人员名单6 验证引用的文件6.1 相关生产标准规程6.2 相关生产标准操作规程6.3 相关的设备标准操作规程6.4 相关验证文件7.1培养基的选择为了尽可能地检出无菌生产工艺系统中可能会给实际产品造成污染的微生物， 所选用的培养基要尽可能适应广谱微生物的生长，包括细菌、 霉菌和酵母菌等。
验证试验前，要鉴别验证培养基的 可行性。
首先严格按照培养基生产商的要求进行配制和灭菌，然后将无菌培养基灌装至8ml 滴眼剂 瓶内。
同时制备好三种微生物（枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌）的悬浮液，菌液浓 度控制为100〜1000个菌/ml 。
将上述准备无菌培养基分成三等份，且每份至少两瓶，分别加入上 述菌悬液各0.1ml 。
将接枯草芽抱杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基于 30〜35C 下培养，接有白色念珠菌的培养基于20〜25°C 下培养。
如果在7天内，每种微生物培养基均至少有 50%长菌，则认为 该培养基可用于无菌工艺验证试验。
根据《无菌制剂GMP 实施指南》提供胰酪胨大豆肉汤培养基做 上述试验，适用于培养基模拟灌装试验。
7.2胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查本次试验均采用同批号的培养基，根据培养基的正确配制方法进行配制，按照《中国药典》2010 年版二部附录中无菌检查法中的培养基灵敏度检查。
7.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过 5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌 种为第0种），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌〔:CMMCCB ) 26003〕 铜绿假单胞菌 〔CMMCCB ) 10104〕 枯草芽抱杆菌 〔CMCC( B ) 63501〕生抱梭菌〔CMCC( B ) 64941〕 白色念珠菌 〔CMCC( F ) 98001〕黑曲霉菌〔CMCC( F ) 98003〕 本地菌（沉降菌）7.2.2菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、本地菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35°C 培养18〜247培 养基小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23〜28 C培养24〜48小时，接种本地菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23〜28C培养24〜48小时，上述培养物用0.9 %无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100CFU的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23〜28C培养5〜7天，加入3〜5ml0.9 %无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。
然后，吸出抱子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9 %无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数小于100CFU勺抱子悬液。
7.2.3培养基接种：取每管装量为12ml的胰酪胨大豆肉汤培养基11支，分别接种1ml小于100 CFU 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、生抱梭菌、本地菌（沉降菌）各2支、另1 支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪胨大豆肉汤培养基5支，分别接种1ml小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结果。
7.2.4结果判断：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
7.3培养基微生物生长性试验每一批的培养基在使用前都要做微生物的生长性试验，以确认用于实验的培养基的性能。
7.3.1操作方法：按标准操作规程制备胰酪胨大豆肉汤培养基并灭菌，将灭菌后的培养基分装于20支无菌试管中，在10支试管中接种枯草杆菌，接种量小于100CFU在另10支试管中接种白色念珠菌，接种量小于100CFU接种后盖塞、封口并分别在30-35 C和20-25 C培养7天。
7.3.2合格标准：7天内至少50%以上接种的各试管的胰酪胨大豆肉汤培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长。
7.4培养基无菌性试验每一批除菌后的培养基均要做无菌性试验，以确定培养基的无菌性，防止出现假阳性的结果。
培养基模拟灌装试验的结果受培养基无菌性的影响很大，若不能保证培养基在模拟灌装试验前的无菌性，则不能保证试验结果的可信性。
证明培养基的无菌性之后进行模拟灌装的方法，以排除培养基无菌性对此项试验的影响，从而确认模拟灌装试验中污染来源于灌装过程。
7.4.1操作方法：将除菌过滤后用于模拟灌装的培养基灌装于50ml无菌试管中，盖塞、封口后在相应温度下培养7天。
742合格标准：7天内各试管胰酪胨大豆肉汤培养基中应无任何微生物生长。
若发现有污染，应明确记录编号、数量，同时检查试管。
7.5 影响培养基生长对试样结果不利的风险分析培养基灌装实验，要求培养基在最适合的条件下进行，要防止由于操作条件等原因抑制微生物生长，从而降低实验的可信度，对培养基微生物抑制风险评估如下：抑菌影响分析一一物料准备、储存过程抑菌影响分析 -- 中间过程8培养基模拟灌装试验条件培养基模拟灌装试验的条件是完全与实际的生产条件相同。