微生物限度检测环境要求
微生物限度室空调中效压力标准
微⽣物限度室空调中效压⼒标准⼀、概述微⽣物限度室是药品⽣产过程中质量控制的重要环节，其环境条件的稳定性和可靠性对于保证产品质量具有重要意义。
空调系统作为微⽣物限度室的重要组成部分，其压⼒控制对于维持室内正压、防⽌外界污染侵⼊以及保障实验结果的准确性具有⾄关重要的作⽤。
本⽂主要探讨微⽣物限度室空调中效压⼒标准的相关问题。
⼆、微⽣物限度室环境要求微⽣物限度室的环境要求主要包括温度、湿度、压⼒和洁净度等⽅⾯。
其中，压⼒控制是保持室内正压、防⽌外界污染侵⼊的关键因素之⼀。
在微⽣物限度室的空调系统中，中效过滤器通常被安装在空调箱体内部，⽤于过滤和净化空⽓，确保室内空⽓质量。
为了维持微⽣物限度室的压⼒稳定，需要合理设置中效过滤器的压⼒标准。
三、空调中效压⼒标准的重要性在微⽣物限度室的空调系统中，中效过滤器的压⼒标准对于维持室内正压具有重要意义。
如果中效过滤器的压⼒标准设置不当，可能会导致室内正压的波动，进⽽影响室内空⽓洁净度，增加外界污染侵⼊的⻛险。
同时，压⼒标准的设置还直接关系到过滤器的更换频率和空调系统的能耗。
因此，合理设置空调中效过滤器的压⼒标准，有助于提⾼微⽣物限度室环境控制的稳定性和可靠性，保证实验结果的准确性，并降低运⾏成本。
四、空调中效压⼒标准的选择与设定选择和设定合理的空调中效压⼒标准是实现微⽣物限度室环境控制的关键环节。
在选择压⼒标准时，应充分考虑微⽣物限度室的各项环境指标要求、过滤器性能参数以及空调系统的能耗等因素。
通常来说，空调中效过滤器的初阻⼒应在60Pa以下，终阻⼒可设置为150Pa左右。
在保证过滤效果和室内正压的前提下，尽量选择较低的阻⼒值，有助于降低能耗和提⾼过滤器寿命。
此外，应根据微⽣物限度室的运⾏状况和环境条件变化，适时调整中效过滤器的压⼒标准，以确保系统运⾏的稳定性和节能性。
五、实施与监测在实施空调中效压⼒标准时，应严格按照相关规定进⾏操作和维护。
安装过程中要确保过滤器的安装位置正确，密封性好；使⽤过程中要定期检查过滤器的阻⼒和完整性，发现异常应及时处理。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
研究：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
研究：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……提醒：后文增加了关于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因留意结合此处的请求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……研究：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
研究：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。
……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
……研究：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。
微生物限度检测
微生物限度检查法录入时间:2006-7-6 15:25:25 来源：其它微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
检查的全过程,均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位。
培养基及其制备方法除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。
1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录ⅪH）。
2.玫瑰红钠琼脂培养基胨5g 玫瑰红钠0.0133g 葡萄糖10g琼脂15～20g 磷酸二氢钾1g 水1000ml硫酸镁0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10g 琼脂15～20g 酵母浸出粉5g水1000ml 葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。
4.胆盐乳糖培养基(BL)胨20g 磷酸二氢钾 1.3g 乳糖5g牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g）2g氯化钠5g磷酸氢二钾 4.0g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。
5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基100ml曙红钠指示液2ml20％乳糖溶液5ml亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。
6.麦康凯琼脂培养基(MacC)胨20g 1%中性红指示液3ml乳糖10g 琼脂15～20g牛胆盐5g 水1000ml氯化钠5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。
微生物限度检查法汇总
微生物限度检查法1范围本标准适用于非规定灭菌制剂及其原料、辅料检查项目包括细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌检查及活螨的检查。
2依据标准《中华人民共和国药典》《药品微生物学检验手册》YBB00132002药品包装用复合膜、袋通则3人员资质及培训3.1从事药品微生物检验工作的负责人应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。
3.2检验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认可以承担某一试验前，不能独立从事该项微生物试验。
应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划。
3.3检验人员必须熟悉相关检验方法、程序、检测目的和结果评价。
3.4实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评价检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。
当使用一种非经常使用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人员的操作技能。
4培养基4.1培养基的制备4.1.1培养基可按处方配制。
也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。
4.1.2在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或单独配方组分进行配制。
脱水培养基应附有处方和使用说明，配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。
4.1.3脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮藏，如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛放脱水培养基的容器。
商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外，还应注明有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途。
4.1.4为保证培养基质量的稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应准确称量，并要求有一定的精确度。
配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下，可能需要去离子水和蒸馏水。
应记录各称量物的重量和水的使用量。
4.1.5配制培养基所用容器和配套器具应洁净，可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质的残留。
微生物限度检查法标准操作规程完整
范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
责任微生物限度检验人员内容本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。
微生物计数法一、计数方法1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验。
菌液制备按规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
培养基适用性检查按照表规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
9202 非无菌药品微生物限度检查指导原则
9202 非无菌药品微生物限度检查指导原则为更好应用非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则 1105）、 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则 1106）及非无菌药品微 生物限度标准 (通则 1101)，特制定本指导原则。
非无菌药品中污染的某些微生物可能导致药物活性降低， 甚至使药品丧失疗 效，从而对患者健康造成潜在的危害。
因此，在药品生产、贮藏和流通各个环节 中，药品生产企业应严格遵循 GMP 的指导原则，以降低产品受微生物污染程度。
非无菌产品微生物计数法、 控制菌检查法及药品微生物限度标准可用于判断非规 定无菌制剂及原料、辅料是否符合药典的规定，也可用于指导制剂、原料、辅料 微生物质量标准的制定，及指导生产过程中间产品微生物质量的监控。
本指导原 则将对微生物限度标准和方法中的特定内容及标准的应用做进一步的说明。
1.非无菌药品微生物限度检查中，受控的洁净环境是指不低于 GMP 现行版要 求的 D 级洁净环境。
2. 非无菌药品微生物限度检查过程中，如使用表面活性剂、灭活剂及中和 剂，在确定其能否适用于所检样品及其用量时，除应证明该试剂对所检样品的处 理有效外,还须确认该试剂不影响样品中可能污染的微生物的检出(即无毒性)， 因 此无毒性确认试验的菌株不能仅局限于验证试验菌株， 而应当包括产品中可能污 染的微生物。
3.供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数 计数方法应尽量选择微生物计数方法中操作简便、快速的方法,同时,所选用的方 法应避免损伤供试品中污染的微生物。
对于抑菌作用较强的供试品,在供试品溶 液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。
4.对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基 适用性检查，以保证药品微生物检验用培养基的质量。
对照培养基由中国食品药 品检定研究院研制及分发。
5.进行微生物计数方法适用性试验时,若因没有适宜的方法消除供试品中的 抑菌作用而导致微生物回收的失败， 应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液 进行方法适用性试验。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法
……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……
提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……
学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查
微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品。
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
微生物限度检查法标准操作规程
1. 目的：建立微生物限度检查法标准操作规程2. 范围：适用于原辅料及成品的微生物限度检查。
3. 责任人：QC负责实施，QC主管负责监督。
4. 程序：4.1 检验依据《中华人民共和国药典》2005年版一部附录P704.2 检验规程4.2.1 微生物限度检查法总则4.2.1.1微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌的检查。
4.2.1.2微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
4.2.1.3供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。
4.2.1.4除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃，控制菌培养温度为35～37℃。
4.2.1.5检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。
4.2.2 供试品的检验量：检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。
除另有规定外，一般供试品检验量为10g 或10ml ；中药膜剂为50cm2,贵重药品、微量包装药品检验量可以酌减。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。
检验时，应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4 丸，膜剂还不得少于4片。
一般应随机抽取不少于检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
4.2.3供试液的制备按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
4.2.3.1液体供试品取供试品10ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加适量无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
消毒剂微生物限度检测标准
消毒剂微生物限度的检测标准通常遵循相关的国家标准或行业标准。
在中国，消毒剂的微生物限度检测通常遵循《消毒技术规范》（2002年版）或《消毒产品卫生安全评价技术要求》（WS/T 668-2016）等标准。
这些标准规定了消毒剂在特定条件下，如一定时间内、一定浓度下，对微生物（如细菌、真菌、病毒等）的杀灭效果或抑制作用。
检测方法通常包括微生物培养法、荧光法、酶联免疫法等，以确定消毒剂的微生物限度。
具体的检测方法、标准限量、合格判定等要求会根据消毒剂的种类、使用范围和标准的不同而有所差异。
因此，在进行消毒剂微生物限度检测时，需要严格按照相应的标准和方法进行操作，并由具备相应资质和能力的检测机构出具检测报告。
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微生物限度检测环境要求
1.实验室环境：
2.无菌操作间：
3.材料和试剂：
微生物限度检测需要使用无菌的培养基、培养器具和其他相关试剂。
这些材料和试剂必须符合相关标准和要求，并经过正确的保存和使用，以
防止污染或降解。
在采购这些材料和试剂时，应选择可靠的供应商，并检
查和确认其质量和适用性。
4.设备和仪器：
5.检测员培训：
微生物限度检测是一项专业的技术活动，要求检测员具备相关的知识
和技能。
因此，需要对检测员进行相关的培训和教育，使其熟悉微生物检
测的原理、方法和操作流程。
培训内容涵盖无菌操作技巧、样品采集方法、质量控制等方面的知识。
6.质量控制：
微生物限度检测需要进行严格的质量控制，以确保检测结果的准确性
和可靠性。
质量控制包括标准菌株的使用、质量控制样品的制备和使用、
质量控制记录的保留等方面。
同时，还需要定期进行质量评价和验证，以
确保检测方法的准确性和可行性。
7.实验记录和数据管理：
总之，微生物限度检测环境要求严格，包括实验室环境、无菌操作间、材料和试剂、设备和仪器、检测员培训、质量控制、实验记录和数据管理
等方面。
只有在合适的环境下进行检测，才能得到准确、可靠的检测结果，从而保证产品的微生物质量。