2014.6.12生物化学实验思考题

生物化学实验思考题

1.可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在？

间苯二酚反应，在酸的作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。

2.α—萘酚的反应原理是什么？

糖在浓的无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及其糠醛的衍生物，后者能与α—萘酚生成紫红色物质。

3.菲林试剂和本尼迪凯特氏法检验糖的原理是什么？

它们都是含有Cu2+的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身还原成红色或者黄色的Cu2O沉淀。

4.何谓纸层析法？

用滤纸作为惰性支持物的的分层层析法。

5.何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？

纸层析法形成的纸层析图谱上，原点到层析点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值；影响Rf值的因素有：物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

6.怎样制备扩展剂？

扩展剂是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20ml正丁醇和5ml冰醋酸放入分液漏斗中，与15ml水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，漏斗中的则为扩展剂。

7.层析缸中的平衡剂的作用是什么？

平衡剂起到使纸层析上吸附的溶剂达到饱和。使物质在展开剂和纸层析上吸附的溶剂中溶解度不同而进行分离。

8.通过蛋白质及氨基酸的呈色反应实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法？他们的原理是什么？

四种：双缩脲反应；茚三酮反应；黄色反应；考马斯亮蓝反应。

（1）双缩脲在碱性环境中能与Cu2+ 生成紫红色化合物，蛋白质中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。（2）除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应产生蓝紫色物质。（3）含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙色的硝醌酸钠。（4）考马斯亮蓝G250有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其以游离态存在呈现棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。

9.什么是酶的最适温度及其应用的意义？

酶活性最高时的温度称为酶的最适温度。可以利用这一原理指导工农业生产，提高生产效益。

10.什么是酶反应的最适PH?对酶的活性有什么影响？

酶催化活性最高时反应体系的 pH 称为酶促反应的最适 PH。PH过高、过低都会使酶促反应的速率下降。

11.什么是酶的活化剂？

指能够与酶分子活性中心上的一些基团结合，使酶活力提高的物质。

12.什么是酶的抑制剂？与变性剂有何区别？本实验结果如何证明酶的专一性？

指与酶分子活性中心上的一些基团结合，使酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物质。区别：酶的抑制剂不会使酶发生变性，而酶的变性剂会使酶的结构和性质发生改变。酶的专一性证明：实验结果表明通过在淀粉和蔗糖中分别加入有活性的淀粉酶和蔗糖酶后，两者均产生了还原性的糖，与本尼迪凯特试剂反应产生了砖红色沉淀，而其他的条件下均没有还原性糖的的产生，进而说明了酶的专一性。（答题时可以详尽的描述）13.何谓碘值？有何意义？

指100g脂肪在一定条件下吸收碘的克数。意义：碘值是鉴别脂肪的一个重要参数，可以用来判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。

空白溶液：在各种分析方法中，为消除干扰，除不加待测样品外与测定试样时完全一致的条件进行测定的溶液。空白实验：是在不加样品的情况下，用测定样品相同的方法、步骤进行定量分析，把所得结果作为空白值，从样品的分析结果中扣除。这样可以消除由于试剂不纯或试剂干扰等所造成的系统误差。其是分析化学实验中常用的一种方法，它可以减小实验误差。

15.何谓蛋白质的等电点和沉淀反应？有何实用的意义？

蛋白质等电点：当溶液的PH达到一定的数值时，蛋白质颗粒上的正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的PH称为此种蛋白质的等电点。沉淀反应：蛋白质在某种理化条件下，蛋白胶体溶液的水化层或者电荷层破坏，蛋白胶体相互聚集的现象。实用意义：分离纯化以及提纯蛋白质等生化相关领域。

16.如何正确测定酶促反应的速度？

（1）底物必须要保证有足够的底物，能使酶完全发挥其功能；（2）时间的控制根据酶促反应曲线可以看出，最开始斜率比较大，然后趋于平缓（这种原因可能是生成的产物促进你反应或酶失活），因此，如果测定的时间选择不当，测定的速度也不是初速度，所以在测定的时间必须掌握在斜率比较大的那段时间内。当然，除此之外，还需給酶提供最适温度，最适pH，保证没有抑制剂存在等。胰蛋白酶可以催化蛋白质中的碱性氨基酸（L-精氨酸和L-赖氨酸）的羧基所形成的肽键发生水解，水解时形成自由的氨基，可以用甲醛滴定氨基，产生的H+，用标准溶液NaOH的消耗量对时间作图，斜率即是酶促反应的速度。

17.用实验所得的反应速度的数据，对相应的底物浓度作图。由所得的曲线看出底物浓度对酶促反应的影响有

何特殊规律？

当底物浓度较低时（一级反应），底物浓度与酶促反应的速率成正比；随着底物浓度的增加（混合级反应），酶促反应的速率随底物浓度的增加非线性缓慢增加；当底物浓度达到一定的限度后，酶促反应的速率保持不变。18.试述本实验介绍的2,6—二氯酚靛酚滴定法的优缺点。

优点：简便易行，快速。缺点：（1）准确性差，滴定终点难以把握；（2）生物组织的提取液中VC还能以脱氢

和结合的形式存在，这两种情形的VC都具有还原型VC的生物活性，却不能将2,6—二氯酚靛酚还原脱色；（3）生物组织液中的提取液中常含有天然色素，干扰滴定终点的颜色观察。