生化实验思考题参考答案[1].
生物化学实验思考题
生物化学实验思考题 Document number：BGCG-0857-BTDO-0089-2022生物化学实验思考题1.可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在？间苯二酚反应，在酸的作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
2.α—萘酚的反应原理是什么？糖在浓的无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及其糠醛的衍生物，后者能与α—萘酚生成紫红色物质。
3.菲林试剂和本尼迪凯特氏法检验糖的原理是什么？O沉淀。
它们都是含有Cu2+的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身还原成红色或者黄色的Cu24.何谓纸层析法？用滤纸作为惰性支持物的的分层层析法。
5.何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？纸层析法形成的纸层析图谱上，原点到层析点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值；影响Rf值的因素有：物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
6.怎样制备扩展剂？扩展剂是4份水饱和的和1份醋酸的混合物。
将20ml和5ml冰醋酸放入中，与15ml水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，漏斗中的则为扩展剂。
7.层析缸中的平衡剂的作用是什么？平衡剂起到使纸上吸附的溶剂达到饱和。
使物质在展开剂和纸层析上吸附的溶剂中溶解度不同而进行分离。
8.通过蛋白质及氨基酸的呈色反应实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法？他们的原理是什么？四种：双缩脲反应；茚三酮反应；黄色反应；考马斯亮蓝反应。
（1）双缩脲在碱性环境中能与Cu2+ 生成紫红色化合物，蛋白质中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
（2）除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应产生蓝紫色物质。
（3）含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙色的硝醌酸钠。
（4）考马斯亮蓝G250有红色和蓝色两种色调。
在酸性溶液中，其以游离态存在呈现棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
生化各章思考题及答案
各章思考题及答案一糖类化学糖蛋白中的寡糖链有些什么功能？糖蛋白的种类繁多，功能也十分广泛。
一般来说，糖蛋白的寡糖链可保护其蛋白部分免遭蛋白酶的水解，而延长其生物半衰期。
此外寡糖链还影响蛋白质构象、聚合和溶解性等。
在某些糖蛋白中寡糖链参与蛋白质在细胞内的分拣和运输。
一些属于糖蛋白的酶，其寡糖链结构可影响酶的活性。
许多激素为糖蛋白，其寡糖链的结构与激素的生物活性密切相关。
存在于细胞表面的糖蛋白，其寡糖链还参与蛋白质分子之间的相互识别和结合作用。
二脂类化学试述生物膜的两侧不对称性。
生物膜的不对称性表现在：a) 磷脂成分在膜的两侧分布是不对称的。
b) 膜上的糖基（糖蛋白或糖脂）在膜上分布不对称，在哺乳动物质膜都位于膜的外表面。
c) 膜蛋白在膜上有明确的拓扑学排列。
d) 酶分布的不对称性。
e) 受体分布的不对称性。
膜的两侧不对称性保证了膜的方向性功能。
三蛋白质化学1 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6?氨基酸在固体状态时以两性离子形式存在。
某氨基酸溶于pH7的水中，pH从7下降到6，说明该氨基酸溶解于水的过程中放出了质子，为了使该氨基酸达到等电点，只有加些酸，因此氨基酸的等电点小于6。
2 一系列球状的单体蛋白质，相对分子质量从10 000到100 000，随着相对分子质量的增加，亲水残基与疏水残基的比率将会发生什么变化?随着蛋白质相对分子质量的增加，表面积与体积的比率也就是亲水残基与疏水残基的比率必定减少。
假设这些蛋白质是半径为r的球状蛋白质，由于蛋白质相对分子质量的增加，表面积随r2的增加而增加，体积随r3的增加而增加，体积的增加比表面积的增加更快，所以表面积与体积的比率减少，因此亲水残基与疏水残基的比率也就减少。
3 从热力学上考虑，一个多肽的片段在什么情况下容易形成α-螺旋，是完全暴露在水的环境中还是完全埋藏在蛋白质的非极性内部?为什么?当多肽片断完全埋藏在蛋白质的非极性内部时，容易形成氢键，因为在水的环境中，肽键的C＝O和N－H基团能和水形成氢键，亦能彼此之间形成氢键，这两种情况在自由能上没有差别。
分析化学实验思考题答案
分析化学实验思量题答案实验思量题：分析化学实验思量题答案1. 问题描述：在分析化学实验中，我们遇到了以下思量题，请给出详细的答案。
2. 实验背景：我们进行了一系列的分析化学实验，包括溶液的定性分析、定量分析以及仪器分析等。
在实验过程中，我们遇到了一些思量题，需要进行分析和解答。
3. 实验思量题及答案：3.1 思量题一：为什么在溶液的定性分析中，我们需要进行酸碱中和反应？回答：在溶液的定性分析中，酸碱中和反应是非常重要的步骤。
这是因为酸碱中和反应可以将酸性或者碱性物质转化为中性物质，使得溶液中的其他离子更容易被检测和分析。
酸碱中和反应可以消除酸性或者碱性物质对实验结果的干扰，使得我们能够更准确地判断溶液中存在的离子。
3.2 思量题二：为什么在定量分析中，我们需要进行标准曲线的绘制？回答：在定量分析中，标准曲线的绘制是非常重要的步骤。
标准曲线是通过测量一系列已知浓度的标准溶液并绘制出的曲线。
通过该曲线，我们可以根据待测溶液的吸光度或者其他测量值，确定其浓度。
标准曲线的绘制可以匡助我们建立待测溶液中物质浓度与测量值之间的定量关系。
通过测量标准溶液的吸光度并绘制出曲线，我们可以确定待测溶液的浓度，从而进行定量分析。
3.3 思量题三：为什么在仪器分析中，我们需要进行标定和校准？回答：在仪器分析中，标定和校准是确保仪器准确性和可靠性的重要步骤。
标定是通过使用已知浓度的标准溶液或者标准物质对仪器进行调整和校准，以确保仪器能够准确地测量待测样品。
通过与已知浓度的标准溶液进行比较，我们可以确定仪器的响应与物质浓度之间的关系，从而校准仪器。
校准是通过使用已知浓度的标准物质对仪器进行验证，以确保仪器的准确性和可靠性。
在校准过程中，我们使用已知浓度的标准物质进行测量，并与标准值进行比较，以确定仪器的误差和偏差，并进行相应的调整和修正。
通过标定和校准，我们可以保证仪器分析结果的准确性和可靠性，从而提高实验的可重复性和精确度。
中国农大生化试验淀粉酶预习思考题参考答案要点
1、酶活力测定实验的总体设计思路是什麽？实验设计的关键你认为是什麽？酶活力的测定其总体思路就是在最适条件下测定酶促反应的初速度（底物消耗小于5%）。
据此具体实验设计是底物过量的情况（一般[S]≧10K M），于酶的最适pH、温度等条件下测定某种酶作用产物的生成速度以表征酶的催化能力。
所以本实验在保证以上要求下，以麦芽糖的生成量来表征淀粉酶的活力，并严格定义了酶活单位。
在这个总体思路的指导下，我们首先必须关注的是：材料自身、原本就存在的被测定产物的含量！具体到本实验即是麦芽中自身已经存在的麦芽糖。
这部分酶作用产物是必须要精确刨除的，否则我们实验的最终定量便无法准确。
而这就是“对照管”要完成的任务。
所以，所有的酶活力测定实验中都有所谓“对照管”的设计，其作用就是刨除所有非指定酶促反应测定时间段内的待测产物！以保证最终结果的可信准确。
这是酶活力测定中最关键的设计。
2、实验最易产生误差的操作是哪个步骤？如何尽量减少误差？酶促反应的启动和终止是操作中最需要精确控制的，以保证酶促反应时间的准确和平行管的相关性。
即：本实验中测定管中加入淀粉和NaOH；同步加入或计算好时间差。
同步加入是最完美的操作，所以由此类实验需求，进一步改进发明了“排枪”。
3、α-淀粉酶活性测定时70℃水浴为何要严格保温15分钟？保温后为何要立即于冰浴中骤冷？α-淀粉酶的耐热也是有限度的，15分钟即保证了β-淀粉酶最大程度的钝化，又保证了α-淀粉酶活性的不受损伤。
而立即冰浴冷却是为阻止β-淀粉酶的复性。
4、pH5.6柠檬酸缓冲液的作用？各管于40℃水浴准确保温15分钟的作用？pH5.6是本实验条件下酶的最适反应pH环境，酶促反应前保温15分钟是保证达到反应的最适温度，但酶促反应的最适温度并非酶的最适保存温度，所以时间过长则酶又会有失活的危险。
5．众多测定淀粉酶活力的实验设计中一般均采取钝化β-淀粉酶的活力而测α-淀粉酶和测总酶活力的策略，为何不采取钝化α-淀粉酶活力去测β-淀粉酶活力呢？这种设计思路说明什麽？对于实验设计而言，非常重要的一点就是：理论上的可行性必须通过实际中的可操作性来实现。
生化实验思考题总结
生化实验思考题总结1.蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。
答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。
b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。
c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。
显色剂为考蓝。
d.双缩脲法。
也是利用显色反应。
e.Folin酚法。
2.如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的情况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？答：现在假设有三种蛋白质a b c，分子质量a>b>c。
那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。
b c同理。
由不同的OD峰值，对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。
如果想要b，那么在第二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液进行选取。
就会得到想要的蛋白质。
3.如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？答：如果没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。
原因在于溶液离子强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳动。
4.对电泳所得的结果如何进行定量分析？答：将电泳完毕的样品（凝胶），按条带宽度的分布剪下，分别把每个小块样品用NaOH溶液漂洗，再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。
5.使SDS-PAGE具有高分辨率的三个因素是什么？答：浓缩效应。
电荷效应。
分子筛效应。
6.实验所得的各点数据中，哪些易出现较大的误差？答：有两个点。
第一个，在三十秒的点，反应速度太快，时间如果掌握不准，容易出现误差。
另一个，在3min的点，反应速度很慢，斜率小，则倒数大，所以时间掌握不好，也容易出现大误差。
7.假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍，实验方案该如何修改？答：把底物和酶的浓度都降低。
8.请举出三种提取质粒的方法，并简要说明其中一种方法的原理。
答：碱裂解（要求原理，书上有）；一步法（见书上46，47页有关TELT试剂的内容）；SDS法；煮沸法。
2022生化思考题详细答案(医学本科生适用)
生物化学思考题1、叙述L-α氨基酸结构特征，比较各种结构异同并分析结构与性质的关系。
结构特点：α-氨基酸是羧酸分子的α-氢原子被氨基取代直接形成的有机化合物，即当氨基酸的氨基与羧基连载同一个碳原子上，就成为α-氨基酸。
氨基酸中与羧基直接相连的碳原子上有个氨基，这个碳原子上连的集团或原子都不一样，称手性碳原子，当一束偏振光通过它们时，光的偏振方向将被旋转，根据旋转的方向分为左旋和右旋即D系和L系，L-α-氨基酸再被骗争光照射时，光的偏正方向为左旋。
R为侧链，连接-COOH 的碳为α-碳原子为不对称碳原子（除了甘氨酸）不同的氨基酸其R基团结构各异。
根据测链结构可分为：①含烃链的为非极性脂肪族氨基酸，如丙氨酸；②含极性不带电荷的为极性中性氨基酸，如半胱氨酸；③含芳香基的为芳香族氨基酸，如酪氨酸；④含负性解离基团的为酸性氨基酸，如谷氨酸；⑤含正性解离基团的为碱性氨基酸，如精氨酸。
2、简述蛋白质一级结构、二级结构、三级结构、四级结构基本概念及各结构层次间的内在关系。
蛋白质的一级结构就是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序，也是蛋白质最基本的结构。
主要化学键是肽键，二硫键也是一级结构的范畴。
蛋白质的二级结构是指多肽链中主链原子的局部空间排布即构象，不涉及侧链部分的构象。
主要化学键为氢键。
蛋白质的多肽链在各种二级结构的基础上再进一步盘曲或折迭形成具有一定规律的三维空间结构，称为蛋白质的三级结构，蛋白质三级结构的稳定主要靠次级键，包括氢键、疏水键、盐键以及范德华力等。
具有二条或二条以上独立三级结构的多肽链组成的蛋白质，其多肽链间通过次级键相互组合而形成的空间结构称为蛋白质的四级结构，其中，每个具有独立三级结构的多肽链单位称为亚基。
层次之间的关系：一级结构是空间构象的基础，决定高级结构；氨基酸的残基影响二级结构的形成，二级结构以一级结构为基础；在二级结构的基础上，肽链还按照一定的空间结构进一步形成更复杂的三级结构；具有三级结构的多肽链按一定空间排列方式结合在一起形成的聚集体结构称为蛋白质的四级结构。
生化考试的实验思考题
X9 肌糖原的酵解A）人体和动植物体中糖的存储形式是什么？实验时，为什么可以用淀粉代替糖原？人体中糖的储存形式为肌糖原与肝糖原，植物体中为淀粉。
因肌肉糜中含有可以酵解淀粉与糖原的酶类，最终在无氧条件下分解生成乳酸，参与显色反应。
B）试述糖酵解作用的生理意义？糖酵解是生物界普遍存在的供能途径，但其释放的能量不多，而且在一般生理情况下，大多数组织有足够的氧以供有氧氧化之需，很少进行糖酵解，因此这一代谢途径供能意义不大，但少数组织，如视网膜、睾丸、肾髓质和红细胞等组织细胞，即使在有氧条件下，仍需从糖酵解获得能量。
在某些情况下，糖酵解有特殊的生理意义。
例如剧烈运动时，能量需求增加，糖分解加速，此时即使呼吸和循环加快以增加氧的供应量，仍不能满足体内糖完全氧化所需要的能量，这时肌肉处于相对缺氧状态，必须通过糖酵解过程，以补充所需的能量。
在剧烈运动后，可见血中乳酸浓度成倍地升高，这是糖酵解加强的结果。
又如人们从平原地区进入高原的初期，由于缺氧，组织细胞也往往通过增强糖酵解获得能量。
在某些病理情况下，如严重贫血、大量失血、呼吸障碍、肿瘤组织等，组织细胞也需通过糖酵解来获取能量。
倘若糖酵解过度，可因乳酸产生过多，而导致酸中毒。
X10 脂肪酸的β-氧化A）为什么说做好本实验的关键是制备新鲜的肝糜？新鲜的肝糜中酶的活性高，所以生成丙酮的量才高如果不新鲜，酶的活性太低了，丙酮的量太低甚至没有，那实验就会失败B）什么叫做酮体？为什么正常代谢的产生的酮体量很少？在什么情况下血中的酮体含量增高，而尿中也能出现酮体？答：1、乙酰乙酸、β-羟基丁酸及丙酮，三者统称为酮体；2、因为代谢正常的情况下，血糖能够供给人体足够的能量，满足机体的需要。
这时就不需要脂肪大量分解来提供能量。
酮体的生成就是来自于肝内脂肪酸的分解。
脂肪不大量分解，自然没有大量脂肪酸分解成酮体。
3、但若人体血糖量不足，为了维持血糖稳定，就会促进脂肪的分解，生成一定的能量供给人体正常需要。
生化课后思考题参考答案要点
聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小麦幼苗过氧化物酶同工酶实验的思考题要点：1、关于电极缓冲液能否回收再用的问题：从电极缓冲液的作用及电泳后其变化去分析。
电极缓冲液作用主要有两点：“导体”及在浓缩效应中提供慢离子。
据此：不能混合回收使用。
因为电泳之后，前后槽的缓冲液的成分和pH值都发生了变化，尤其正极槽一侧掺入了Cl-，混合后的电极缓冲液中就有了Cl-，这将会破坏浓缩效应。
而在实际中：由于电极缓冲液使用量大，从经济效益和实验效果均衡考虑，一次电泳之后，负极槽一侧损失少量甘氨酸、pH值略有上升，但变化不大，若单独回收还用于负极，则应该可以保证浓缩效应所要求的慢离子的特点。
而正极一侧虽然掺入了Cl-，但若也单独回收还用于正极一侧，Cl-就不会影响浓缩效应。
这样，分槽回收分槽使用，再使用一两次应该是可以的。
或混合回收只用于正极槽，而负极槽使用新鲜配制的缓冲液，也是可以的。
当然，随着使用次数的增加变化大了效果当然就不能保证了，所以一般就是再使用一到两次。
2、40%蔗糖的作用由电泳槽回路的形成我们知道，负极的电极缓冲液与浓缩胶必须相连，这样样品槽完全浸没在缓冲液中，如何上样？？而蔗糖的加入增加了样品的密度，方便上样，使样品不会对流扩散。
同时所形成的高渗透势环境对蛋白质的结构具有保护维持的作用。
所以电泳的样品缓冲液里都含有终浓度一般为20%的蔗糖或者甘油。
当然这两种物质的选择加入也不是随意的哦，这也是电泳发明过程中科研人员所曾经面临的一个难题，大家利用假期可以去寻古探幽，一定会得到很多极具启发性的发现的。
3、利用电泳技术获得好的实验结果的关键环节：凝胶浓度和交联度、缓冲体系、样品制备、电泳状态、检测手段。
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生化实验讲义思考题参考答案
实验一淀粉的提取和水解
1、实验材料的选择依据是什么？
答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些？
答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；
(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；
(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？
答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。
实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法
（1）本实验制备得到的是粗脂肪，若要制备单一组分的脂类成分，可用什么方法进一步处理？
答：硅胶柱层析，高效液相色谱，气相色谱等。
（2）本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?
答：防止脂质被氧化。
实验六蛋白质等电点测定
1、在等电点时蛋白质溶解度为什么最低？
请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。
蛋白质是两性电解质，在等电点时分子所带净电荷为零，分子间因碰撞而聚沉倾向增加，溶液的粘度、渗透压减到最低，溶解度最低。
结果中pH约为4.9时，溶液最浑浊，达到等电点。
答：
2、在分离蛋白质的时候，等电点有何实际应用价值？
答: 在等电点时，蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加，所以处于等电点的蛋白质最容易沉淀。
在分离蛋白质的时候，可以根据待分离的蛋白质的等电点，有目的地调节溶液的pH使该蛋白质沉淀下来，从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。
实验七氨基酸的分离鉴定－纸层析法
1、如何用纸层析对氨基酸进行定性和定量的测定？
答: 将标准的已知氨基酸与待测的未知氨基酸在同一张层析纸上进行纸层析，显色后根据斑点的Rf值，就可以对氨基酸进行初步的定性，因为同一个物质在同一条件下有相同的Rf 值；将点样的未知氨基酸溶液和标准氨基酸溶液的体积恒定，根据显色后的氨基酸斑点的面积与点样的氨基酸质量成正比的原理，通过计算斑点的面积可以对氨基酸溶液进行定量测定。
3、纸层析、柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点？
答:
实验八蛋白质含量的测定
(1) 简述紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理及优点。
答：原理：由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280 nm波长处。
在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（OD280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
优点：迅速、简便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。
实验十影响酶活性的因素
（1）本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的？
答：在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下：淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。
麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
因此反应后颜色如为蓝色说明酶活力低，淡黄色则说明酶活力高。
（2）如何通过加入班氏试剂后生成沉淀多少来反映酶促反应快慢的？
答：淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对本尼迪克特试剂呈阴性反应。
麦芽糖、葡萄糖是还原糖，与本尼迪克特试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。
因此，产生红棕色氧化亚铜的沉淀越多说明酶活力越高。
（3）通过本实验，结合理论课的学习，小结出哪些因素影响唾液淀粉酶活性？是如何影响的？
答：温度、pH、激活剂、抑制剂等。
高于或低于最适温度或pH，酶活力都会降低；激活剂和抑制剂不是绝对的，只是相对而言，随着浓度的变化而变化。
实验十二碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定
(1) 试说明用硫酸铵分级分离酶的方法及应注意的事件。
答：用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。
由于硫酸铵在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且对许多酶没有很大的影响，因此它是最常用的盐。
例如：某酶（或蛋白质）发生盐析的范围为35-65%饱和硫酸铵的浓度，因此可先选择30%饱和硫酸铵浓度，去沉淀杂蛋白，然后选择70%饱和硫浓度酸铵，留沉淀（含所要的酶）。
注意事项：在用硫酸铵沉淀酶蛋白时，要注意缓冲液的pH值和温度，盐的溶解度随温度不同而有较大的变化，同时酶的溶解度亦随温度的改变而改变。
在加硫酸铵时，需事先将硫酸铵粉末研细。
加入过程需缓慢并及时搅拌溶解。
搅拌要缓慢，尽量防止泡沫的形成，以免酶
蛋白在溶液中表面变性。
(2) 用正丁醇处理匀浆液可以有效地使碱性磷酸酶酶蛋白释放，使酶的产量大大提高，这是
为什么？
答：因为碱性磷酸酶酶是一种膜蛋白，正丁醇处理后可使结合在膜上的蛋白质更多地释放出来。
(3) 酶活力测定时，为什么必需先将酶液对缓冲液透析后才测定？
答：去除盐离子的影响。
实验十三凝胶过滤层析纯化碱性磷酸酶
1.在本实验中要注意哪些重要环节？
答：
1）注意区分柱子的上下端。
2）各接头不能漏气，连接用的小乳胶管不要有破损，否则造成漏气、漏液。
3）装柱要均匀，既不过松，也不过紧，最好在要求的操作压下装柱，流速不宜过快，避免因此凝胶。
4）始终保持柱内液面高于凝胶表面，否则水分蒸发，凝胶变干。
也要防止液体流干，使凝胶混入大量气泡，影响液体在柱内的流动。
5）核酸蛋白检测仪，记录仪，部分收集器要正确连接。
6）要控制一定流速。
7）收集得到的液体要进行酶活力的检测。
实验十四底物浓度对酶活力的影响（米氏常数的测定）
1.在测定酶催化反应的米氏常数K m和最大反应速度V m时，应如何选择底物浓度范围？答：底物浓度选择范围[S] 0.2-5.0 Km为宜。
底物浓度选取还应该注意其倒数能均匀分布。
1/v 1/v
0 1/[S] 0 1/[S]
底物浓度太大底物浓度太小
2.试说明米氏常数K m的物理意义和生物学意义。
答：(1) Km是酶的一个极重要的动力学特征常数，Km物理含义：ES络合物消失速度常数与形成速度常数之比；其数值相当于酶活性部位的一半被底物占据时所需的底物浓度。
(2) 可根据Km估计底物浓度的水平。
(3) Km可作为同工酶的判断依据。
(4) 鉴别最适底物。
(5) 有助于在酶学研究中对底物浓度的选择。
选用[S]>10Km浓度进行活力测定
3.为什么说米氏常数K m是酶的一个特征常数而V m则不是？
答：某种酶的K m在给定的体系中不随酶浓度改变而改变，也与酶的纯度无关，因此是酶的一个特征常数。
但V m随酶浓度改变而改变。
实验十七SDS-PAGE电泳
(1) 简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量的原理;
答：1）SDS能使蛋白质的氢键、疏水键打开，并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质–SDS 复合物。
2）SDS带有大量负电荷，当它与蛋白质结合时，消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异，使SDS与蛋白质的复合物都带上相同密度的负电荷。
3）SDS-蛋白质复合物在水溶液中的形状一样，都是近似于雪茄烟形的长椭圆棒。
4）不同的SDS-蛋白质复合物都带有相同密度的负电荷，并具有相同形状；因此在一定浓度的凝胶中，由于分子筛效应，则电泳迁移率就成为蛋白质分子量的函数。
(2) 是否所有的蛋白质用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定得到的分子量都完全可靠？答：不是。
如电荷异常或构象异常的蛋白质，带有较大辅基的蛋白质（如某些糖蛋白）以及一些结构蛋白如胶原蛋白等。
例如组蛋白F1，它本身带有大量正电荷，因此，尽管结合了正常比例的SDS，仍不能完全掩盖其原有正电荷的影响，它的分子量是21,000，但SDS-凝胶电泳测定的结果却是
35,000。
实验十八维生素C的定量测定
（1）简述本法测定V C的利与弊。
答：碘量法测定V C相比其它方法传统的碘滴定法迅速、简捷，但易受到待测物颜色干扰而不易判断滴定终点；只能测定待测溶液还原型的Vc含量，如果溶液中还含有其他还原型较强的物质会影响测定结果；而且待测的还原型Vc易被空气氧化影响滴定结果。
（2）为何以显蓝色在30s内不褪色为滴定终点？
答：因为本方法是根据氧化还原反应测定的，待测的的溶液中可能含有其他比Vc还原性低的物质，也能使碘分子被还原，使蓝色褪去，如果把这部分还原物质所消耗的碘液计算进去，会照成误差，因此以显蓝色在30s内不褪色为滴定终点。