96孔板酶标仪使用方法
酶标仪作业指导书
酶标仪作业指导书一、概述酶标仪是一种常用的实验仪器，广泛应用于生物医学研究、生物工程、药物研发等领域。
本作业指导书旨在详细介绍酶标仪的使用方法和操作步骤，以帮助用户正确、高效地完成相关实验。
二、仪器准备1. 将酶标仪放置在平稳的工作台上，并连接电源线。
2. 打开仪器电源开关，待仪器启动完成后，进入待机状态。
3. 检查仪器内部是否有试剂或废液，如有需要清理干净。
三、样品处理1. 准备待测样品，确保样品质量符合实验要求。
2. 根据实验要求，将待测样品进行稀释或预处理，以获得合适的浓度。
3. 将样品分装至酶标板中，每个孔位加入适量的样品，注意避免交叉污染。
4. 将酶标板盖好，轻轻摇晃使样品均匀分布。
四、酶标板设置1. 打开酶标仪软件，选择相应的实验模式。
2. 将酶标板放置在酶标仪的读取台上，确保每个孔位对准相应的探测器。
3. 根据实验要求，选择合适的波长和测量模式。
4. 点击开始读取按钮，启动酶标仪进行测量。
五、数据分析1. 实验完成后，酶标仪会自动将测量结果保存在电脑中。
2. 打开数据分析软件，导入酶标仪保存的数据文件。
3. 根据实验要求，选择合适的数据处理方法，如计算样品浓度、绘制标准曲线等。
4. 分析结果应包括样品浓度、标准差、相关系数等指标。
5. 将数据分析结果整理成报告或图表，以便后续研究和讨论。
六、仪器维护1. 实验结束后，关闭酶标仪电源开关。
2. 清洁酶标仪外壳和读取台，避免灰尘和污染物附着。
3. 定期检查仪器光源和滤光片的工作状态，如有损坏应及时更换。
4. 保持酶标仪的通风良好，避免过热或过冷。
5. 定期进行仪器校准和维修，确保仪器的准确性和稳定性。
七、安全注意事项1. 使用酶标仪时应佩戴实验手套和防护眼镜，避免直接接触样品和试剂。
2. 注意避免酶标仪的电源线和水平线交叉，以免发生意外。
3. 操作过程中注意仪器的稳定性，避免碰撞或摔落。
4. 实验结束后，将废液和废弃物妥善处理，避免对环境造成污染。
[说明]酶标仪工作原理及使用方法
![[说明]酶标仪工作原理及使用方法](https://img.taocdn.com/s3/m/3629892011661ed9ad51f01dc281e53a5802514c.png)
酶标仪简介：0酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。
测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
0酶标仪原理：0酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单.0微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.光是电磁波，波长100nm~400nm称为紫外光，400nm~780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。
人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。
绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收，反射出来，所以植物呈现为绿色。
酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。
酶标仪操作步骤
酶标仪操作步骤：一.打开酶标仪开关，仪器开始自检，多孔板托架自动弹出，预热15 min以上；二.打开电脑，点击桌面上的KCjunior软件，出现带This product is licensed to huashida gene三.界面有5个选项－Read Plate, Open Results, New Protocol, Open Protocol, Modify Protocol；5270201字幕的对话框，单击OK,进入软件界面；四.如果初次检测，单击New Protocol建立方法；如果有建好的方法，单击Modify Protocol；五.建立方法1.单击New Protocol后进入Protocol Definition对话框，在General Information菜单下输入Protocol Name, Protocol Description中输入对此方法的描述，不需要此项可空；2.在Read Method菜单下设置读板方法(有End Point, Multiwavelength, Dynamtic等)；3.在Primary Wavelength中输入主波长，如有参比波长(Reference Wavelenth)也输入；4.在Template菜单下的Well Type Selection中，根据多孔板的位置选择所设定的Blank和待测的Sample；5.在Shake Mode处，还可以选择震动模式和强度；建好方法后，点击确定。
六.读取数据将多孔板放入酶标仪，其缺角与托架上的对应；单击Read Plate，在Result ID中随便输入信息或缺省，在Plate Number中输入板号后，多孔板进入仪器开始读取数据。
七.数据输出待酶标仪读取完数据后，多孔板托架自动弹出，选择Results菜单下的Exoport Date,即将所测数据导入至Excel表格；保存所测数据，关闭KCjunior软件，此时也可将建立的方法进行保存。
酶标仪标准操作规范(酶标仪SOP)
酶标仪标准操作规程(SOP)第一步接上电源，打开机器后面开关，机器开启后，自检后，根据机器上地提示，输入00000后按输入键即可进入机器地操作界面第二步如果试验地程序已编好，则可直接调出在储存检索菜单里的程序，直接读板。
如果试验的程序需要重新编辑，则按编辑菜单里面的程序设置，进行新的试验程序…第一步接上电源，打开机器后面开关，机器开启后，自检后，根据机器上地提示，输入00000后按输入键即可进入机器地操作界面第二步如果试验地程序已编好，则可直接调出在储存检索菜单里的程序，直接读板。
如果试验的程序需要重新编辑，则按编辑菜单里面的程序设置，进行新的试验程序的编辑。
第三步编辑新程序：按编辑菜单，首先进入程序设置，里面需要进行编辑的有以下几个分菜单：阈值设置，报告种类设置，标准品设置，试验模式设置，酶标板布局设置。
定性试验一般要求对阈值进行设置，定量一般则不做要求；定性试验一般不需要对标准品进行设置，而定量则需要对标准品进行设置。
第四步阈值设置：阈值设置里有以下几个小分项：不使用，常数，质控，公式，比值等。
公式阈值：将光标移到公式阈值处，，机器里面存有五个公式可供选择，根据试剂盒上的说明选择相应的公式，然后连续按输入键进入公式里面修改里面的K值参数和灰区值（K值参数和灰区值的修改，根据试剂盒说明所给的数据），修改完后按输入键。
质控：此设置只需在单阈值内输入灰区值按输入即可。
以上两项是试验最常见到需修改的地方如定量试验则直接选择不使用，跳过此项设置。
第五步报告种类设置选择此选项，里面有以下几个分项：原始数据，吸光度，限值，矩阵值，阈值，曲线，浓度，差异。
定性试验一般选择原始数据报告，吸光度报告，阈值报告；而定量试验一般选择，原始数据报告，吸光度报告，浓度报告，曲线报告。
选择方法：将光标移到所要选择的报告上，按下选择键即选定了所要选择的报告种类，再按下选择键，则解除刚才所选择的报告种类。
曲线报告只能在内置打印机或和电脑联合使用时，方可打印此报告。
酶标仪iMark操作快速指南
iMark 酶标仪 仪器快速操作指南1.1仪器硬件安装：1、 酶标仪安装；2、 安装打印纸；3、随机软件安装（选配）。
一、操作面板说明： 1、开/关【功能：打开/关闭舱门。
】 2、开始/停止【功能：按此键开始用当前设置进行读板；可中途停止读板。
】 3、主菜单【功能：按此键直接回到主界面。
】 4、上箭头 【功能：向上移动光标，并在按下“转换”键后，可从A..Z 输入字母或符号。
】 5、左箭头【功能：回到上一界面，向左移动光标。
】 6、输入【功能：确认完成输入或者某一设置。
】 7、下箭头【功能：向下移动光标，并在按下“转换”键后，可从Z..A 输入字母或符号。
】 8、右箭头【功能：改变或者选择某一值或者类型，向右移动光标】 9、转换【功能：输入小数点，改变输入模式。
】10、数字键 【功能：输入数字或者酶标板布局的情况。
】 0/EMP ：空孔 5/QC ：质控品孔 1/SMP ：样品孔 6/CAL ：校准品孔 2/BLK ：空白孔 7/CP ：阳性对照孔 3/STD ：标准品孔 8/CN ：阴性对照孔 4/CO ：阀值对照孔 9/CW ：弱阳性对照孔 11、进纸 【功能：安装打印纸/走纸。
】12、打印 【功能：打印酶标板实验结果和当前仪器实验程序设置信息。
】 13、编辑【功能：进入编辑菜单，进行程序设置。
】 14、储存检索【功能：调用实验程序或者酶标板结果。
】二、仪器简单使用1、开机：仪器接好电源后，按一下屏幕上绿色按钮打开仪器。
（开机不需长按）2、开机后，屏幕上会显示硬件版本号，3秒后仪器自动进行自检，自检结束后，会显示登陆屏幕，需要输入安全密码（最初的密码为：00000）。
在进行读板前，仪器自动预热3分钟以达到热平衡。
具体操作如下： 在系统注册栏中，仪器系统将要求操作者输入密码。
按左/右箭头键选择普通使用者或是 仪器自检 iMark 酶标仪仪器初始化 进入到登陆屏幕系统注册使用者：普通使用者 密码：*****按Enter 键系统管理员。
CCK8操作说明与检测步骤 (1)
DOJINDO操作说明细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100 ml /孔)。
将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5% CO2的条件下)。
2.向每孔加入10 ml的CCK- 8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖-毒性检测1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。
2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。
4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在 24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。
当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
制作标准曲线1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。
酶标仪作业指导书
酶标仪作业指导书引言概述：酶标仪是一种常用于生物学研究和临床实验室中的仪器设备，用于检测和测定样品中特定物质的含量。
本文将详细介绍酶标仪的操作流程和注意事项，以帮助用户正确使用该仪器并获得准确的实验结果。
一、仪器准备1.1 清洁仪器表面：使用干净的纸巾或棉布轻轻擦拭仪器表面，确保无灰尘和污渍。
1.2 检查仪器连接：检查仪器的电源、通气管道和数据线等连接是否牢固，确保仪器正常工作。
1.3 校准仪器：根据仪器说明书，进行仪器的校准操作，确保仪器的准确性和稳定性。
二、试剂准备2.1 根据实验需求，准备所需试剂：根据实验方案，准备好所需的底物、酶标记物、抗体等试剂，并按照要求进行稀释和保存。
2.2 样品处理：根据实验要求，对样品进行处理，如离心、稀释或加入特定试剂等。
2.3 质控品准备：准备好质控品，用于验证实验的准确性和可重复性。
三、操作步骤3.1 打开仪器电源：按照仪器说明书的要求，打开酶标仪的电源，待仪器启动完成后进入下一步操作。
3.2 设置实验参数：根据实验要求，在仪器的操作界面上设置所需的参数，如波长、温度、反应时间等。
3.3 加入试剂和样品：按照实验方案的要求，将所需试剂和样品分别加入酶标板的相应孔中，注意避免交叉污染。
四、数据采集与分析4.1 启动仪器测量：根据实验要求，启动酶标仪进行测量，确保每个孔位的数据都能被准确采集。
4.2 数据处理：根据实验方案，对采集到的数据进行处理，如计算吸光度、生成标准曲线等。
4.3 结果分析：根据实验目的，对实验结果进行分析和解读，得出相应的结论，并与已有数据进行比较。
五、仪器维护与存储5.1 关闭仪器：实验结束后，按照仪器说明书的要求，正确关闭酶标仪的电源。
5.2 清洁仪器：使用干净的纸巾或棉布擦拭仪器表面，确保无灰尘和污渍。
5.3 仪器存储：根据仪器说明书的要求，将仪器存放在干燥、通风的地方，并避免阳光直射。
总结：酶标仪作为一种重要的实验仪器，在生物学研究和临床实验室中具有广泛的应用。
96孔板固定蛋白的方法
96孔板固定蛋白的方法主要有两种：
方法一：
在96孔板中配置100μL的密度为2×104个/ml的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
按一定浓度梯度和时间点，加药物处理。
将培养板在培养箱孵育一段时间（0-7天共8个时间点）。
向每孔加入10μL CCK8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
将培养板在培养箱内孵育1小时。
用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
方法二：吸附固定法，这是一种通过特定换能器界面（如金、银等金属）对蛋白质的直接物理吸附作用，将生物分子固定于电极表面的方法。
通常采用涂覆或浸泡方式得以实现。
以上方法仅供参考，建议咨询专业人士获取准确信息。
酶标仪使用方法
酶标仪使用方法酶标仪的使用方法作为微孔板比色计的酶标仪，其基本功能不外乎一个比色测定，所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面的差异，当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。
在临床实验室实际工作中，实验人员在使用酶标仪进行测定操作时，有时难免会对酶标仪的一些性能指标产生迷惑，甚至对酶标仪的应用产生错误的理解。
如诸如使用酶标仪较用肉眼观察测定的阳性率明显增加这样的问题。
一、测定波长目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP)，底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD)，其在过氧化氢溶液的存在下，经HRP作用，分别氧化为2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。
当pH值为5.0左右时，DAB在450nm波长处有最大吸收，当pH值降为 0时，最大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大，显色加深，因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。
TMB 的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，如果HRP量少，H:O:和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。
降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min.因此，450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定最常用的。
各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件，可以同时安装6~8片滤光片，所配备的滤光片均应包括一般酶标仪的测定波长上述两个波长，有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm 滤光片，影响不大 .在400~750nm或800nm之间，完全可以满足ELISA的显色测定。
除了这两个基本滤光片外，考虑到双波长比色的需要，还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其他滤光片可根据自己的需要选择。
有时，有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定，故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能，此时需要一个340nm波长滤光片。
CFX96仪器操作流程及注意事项
CFX96/Miniopticon仪器操作流程及注意事项
开始运行仪器
z打开电脑
z打开定量PCR仪底座开关
z启动CFX Manager软件
放置样品
z将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。
注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。
将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。
设置程序，运行实验
定量PCR软件操作基本步骤为：a. 设置热循环程序文件（Protocol Tab）b.设置反应板文件（Plate Tab）。
C.点击“Start Run”键,运行程序
z热循环程序文件（Protocol Tab）设置指南：点击Edit（编辑）或 Create New （创建新程序）。
z反应板设置文件（Plate Tab）设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），点击“Dilution Series”键可设置其原始靶核酸数量及稀释倍数。
z点击“Start Run”键。
保存文件即可。
结果分析
z PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。
z如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能。
z点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单
关闭运行仪器
z实验结束后顺序关闭CFX Manager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑，取出反应管。
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规范酶标仪的操作程序，正确使用酶标仪，保证酶标仪检测工作顺利进行和酶标仪日常维护。
2 适用范围
可用来进行标准光密度测定和凝集反应检测。
3 职责
酶标仪操作人员按照本规程操作酶标仪，并作使用记录。
酶标仪管理人员负责监督酶标仪操作人员是否按本规程操作，对酶标仪进行定期保养。
科室负责人负责酶标仪综合管理。
4 注意事项
4.1 环境要求：注意防电、防震，远离强磁场，避免日光直接照射；不要在过湿或温差过大的环境下工作。
应在机器两边留出足够的空间以保证空气流通。
4.2 技术特性：主件电源200-240V，50/60H2，工作范围：180-260V。
电源0.7A(200-240V)。
保险丝2×3.5A。
使用温度范围：+10℃—+40℃。
预热速度L需1分钟自检。
酶标板，建议使用平底酶标板。
光谱范围：400-750nm。
测量范围：0-2.000吸收单位。
准确度：±2%或±0.007吸收单位。
4.3 日常维护
4.3.1 保养
4.3.1.1 为保证本酶标仪持续的稳定性和准确性，应避免干扰光学系统的任何部
件。
4.3.1.2 保持光学系统的清洁，以确保正常功能和结果的准确，避免任何液体流入
仪器内部。
应防尘、防止其它外源性物质，不用手指触摸透镜表面、滤光片、光电检测器。
4.3.2 仪器日常清洁
4.3.2.1 关掉仪器开关应拉掉电源插头。
4.3.2.2 使用一次性手套，用一次性擦布沾水或温和去污剂，清洁仪器外部、导轨
和板架。
4.3.3 严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上退出检测状态，立即向保管人员或科室负责人报告，查明原因，及时处理，不得擅自“修理“，并做好使用和故障情况登记及实验记录。
5 操作
5.1 将酶标仪后部的电源开关打开，仪器将显示自检。
等候1分钟预热。
5.2 将打印机开关打开，打印机自检，放置打印纸。
5.3 检测
5.3.1 选择程序模式时，先按转换键，确定程序模式后，再按输入键，进入自检并
完成。
5.3.2 选择测量模式：通过测量模式键来选择，可通过↑↓键查看测量模式目录，
确定测量模式按输入键确认。
5.3.3 选择测量参数：通过测量参数键或输入键来选择，也可通过↑↓键和数字键
输入新参数。
5.3.4 选择计算模式：用计算模式键设定。
可用↑↓键查看计算模式。
5.3.5 选择计算参数：用计算参数或输入键设定计算参数。
5.3.6 储存程序：用可贮存键进行。
5.3.7 按开始键。
5.4 检测完毕，关闭打印机电源开关及酶标仪电源开关，并记录酶标仪使用记录。