线粒体染色 实验报告 詹纳斯绿B
实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
小麦种子或黄豆幼根根尖。
2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。
（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法,其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理,化学变化以致引起细胞的死亡.活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理,病理状态.通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类.体外活体染色又称超活染色,它是由活的动,植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色.活体染料之所以能固定,堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是靠染料的"电化学"特性.碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用.但并非任何染料均可用于活体染色,理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,且使用时需要配成稀淡的溶液.一般说来,最为适用的是碱性染料,这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂,胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收.詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性.实验目的1,观察动,植物活细胞内线粒体,液泡系的形态,数量与分布;2,学习一些细胞器的超活染色技术.实验原理线粒体是细胞内一种重要细胞器,是细胞进行呼吸作用的场所.细胞的各项活动所需要的能量,主要是通过线粒体呼吸作用来提供的.活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法.詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂.线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关.实验用品1,器材显微镜,恒温水浴锅,解剖盘,剪刀,镊子,双面刀片,解剖盘.载玻片,凹面载玻片,盖玻片,表面皿,吸管,牙签,吸水纸.2,试剂(1)Ringer溶液:氯化钠 0.85g (变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml(2)10%,1/3000中性红溶液:称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液,稍加热 (30~40?)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力.临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀,装入棕色瓶备用.(3) 1%,1/5000詹纳斯绿B溶液称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中,稍加微热(30~40?),使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液.取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液,即成1/5000工作液装入瓶中备用.最好现用现配,以保持它的充分氧化能力.实验材料人口腔上皮细胞,小麦种子或黄豆幼根根尖.实验方法1,人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察?清洁载玻片放在37?恒温水浴锅的金属板上?滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液?用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞?刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中?染色10~l5min(注意不可使染液干燥,必要时可再加滴染液) ?盖上盖玻片,显微镜下观察2,植物细胞液泡系的超活染色与观察取豆芽的根尖?用刀片纵切根尖?放入中性红染液滴中,染色5~10min. ?吸去染液,滴一滴Ringer液?盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片,使根尖压扁,利于观察)实验结果在高倍镜下,先观察根尖部分的生长点的细胞,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡.然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化长大的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少.在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处.实验报告(1). 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布(2). 绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布线粒体的最新知识线粒体为线状、长杆状、卵圆形或圆形小体，外被双层界膜。
实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
小麦种子或黄豆幼根根尖。
2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。
（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
线粒体的活体染色
实验四线粒体的活体染色实验目的：1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。
2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。
3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
实验原理：线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。
一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。
脊的横切面呈囊状或管状。
脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。
实验用品：一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。
三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。
实验内容和方法：一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）方法1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。
2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。
3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml注射器、吸管。
三、试剂l／300 詹纳斯绿B 染液、Ringer 氏液(哺乳类用)。
【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B 是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer 氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer 氏液，在平皿内加1／300 詹纳斯绿B 染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30 分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Rin ger 氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B 染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
高中生物 线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一 ...
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。
三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。
【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
实验3 线粒体和液泡系的超活染色与观察
【实验原理】
高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用 高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多 糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与 Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类 的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色 络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存 在。
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实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
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一、实验目的
１、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态数量与分布； ２、学习一些细胞器的超活染色技术。
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↓ 盖上盖玻片，显微镜下观察
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口腔颊部上皮细胞示线粒体
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２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察
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五、实 验 步骤
• 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
↓
刮下的粘液状物放到载玻片的染液滴中 ↓
染色10~l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液）
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小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告
细胞生物学实验报告题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班一、【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
液泡系和线粒体的活体染色
液泡系和线粒体的活体染色
实验目的 掌握动、植物细胞活体染色的原理 和相关的技术。
液泡系和线粒体的活体染色
1.仪器、用具 2.材料 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎、牛蛙、黄豆根 尖 3.试剂 Ringer溶液、1%和1/3000中性红溶液、 1%和1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液
液泡系和线粒体的活体染色
液泡系和线粒体的活体染色
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十 分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂， 只将液泡染成红色。在细胞处于生活状态时， 细胞质和细胞核不被中性红染色。 线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细 胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿Ｂ对线粒体 具有专一性的染色，是毒性最小的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ染色是由于线粒体中的细胞色素氧 化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈 现蓝绿色，而周围的细胞质被还原成无色的色 基。
液泡系和线粒体的活体染色
洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮。 1/3000中性红溶液染色5-10mm。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，镜检。
液泡系和线粒体的活体染色
作业
实验报告，观察
牛蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染 色观察 解剖牛蛙，剪取胸骨剑突软骨最薄的 部分。 取材料一小块，放入载玻片中央，用 1/3000中性红染液中，染色5-10mm。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，油镜下观察。
液泡系和线粒体的活体染色
黄豆根尖细胞液泡系的活体染色 将黄豆根尖切一薄的纵切面。 1/3000中性红溶液染色5-10mm。 吸去染液， 加Ringer液。 盖片，并用镊子轻轻地下压盖玻片， 使根尖压扁。 高倍镜下镜检。
詹纳斯绿b染色是由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用使染料始终保持氧化状态呈现蓝绿色而周围的细胞质被还原成无色的色实验目的掌握动植物细胞活体染色的原理和相关的技术
线粒体的活体染色
2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察 、 1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔， 取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管 吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 Ringer 2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝 组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没 注意不可将组织块完全淹没，要使组织 注意不可将组织块完全淹没 块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充 分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成 (一般需染20～30min)。
3) 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪将组织块着色部 分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出 的细胞悬液，滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可 见具有l～2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的 线粒体，注意其形态和分布状况。
五、作业： 作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。Biblioteka 口腔上皮细胞 的线粒体分布
洋葱内表皮细胞的线粒体分布
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜 下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。 线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体 多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线 粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的 脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能 的强度有很大关系。
（二）、线粒体的活体染色与观察 ）、线粒体的活体染色与观察 1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两 滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再 加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的 染液，置显微镜下观察。 3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进 行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布 着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是 线粒体。
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细胞生物学实验报告
小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2.实验用品：
（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片
（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液
（3）实验材料：小鼠
3.实验原理：
（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化
学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料
被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内
某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离
子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论
上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一
般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、
胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别
具有专一性。
（3）选择活体染料的原则：
①性质：有电化学特性
②低毒、无毒
③低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液
④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色
⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。
4.实验步骤：
（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。
以组织边缘被染成蓝绿色为准。
（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。
滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充
分剪碎组织制成悬液。
（4）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5.实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝
绿色，就是线粒体。
视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。
10*40显微镜下观察：
6.分析与讨论
（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色
（2）注意事项
①取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比
较明显；在染色时，须留出一部分肝组织暴露在空气中，以保持细胞呼吸，从
而使细胞存活。
因此，厚度差比较明显的组织是比较好的实验材料。
②洗肝组织：肝组织一定要用Ringer液洗干净，否则观察时会看到很多血细胞，
影响效果。
③在用染色：染色过程为30mins，在这一过程中，染料中的水分很有可能蒸发，
因此，应不时滴加染料。
④剪肝组织：剪肝组织之前，应滴加约0.5mL的Ringer液，Ringer液不可过多，
否则很难剪到肝组织。
剪碎后，应补充Ringer液至1mL，再静置滴片。
7．作业：液泡染色原理：
（1）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色：在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。
软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。
（2）植物细胞的活体染色：活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间(由红变黄)。
在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应。
因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。
因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。
相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
（3）口腔上皮细胞的线粒体分布
植物根尖液泡的中性红染色。