恶性肿瘤干细胞标记物CD34在鼻咽癌组织中的表达和临床意义

・２４１４・　陈海霞，等　恶性肿瘤干细胞标记物ＣＤ３４在鼻咽癌组织中的表达和临床意义　［１２］Ｃａｓｅｓ　ＪＡ，Ｓｕｒｋｓ　ＭＩ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅ—　ｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆｔｈｙｒｏｉｄ　ｎｏｄｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ　Ｎｕｅｌ　Ｍｅｄ，２０００，３０（２）：　８１—８７．　［１３］梁英平，贾再利，陈武科，等．甲状腺乳头状微小癌的诊断及外　科治疗［Ｊ］．现代肿瘤医学，２００９，１７（６）：１０５３—１０５５．　

［１４］　Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ　ＪＭ　Ｍｏｒｅｎｏ　Ａ，Ｐａｒｒｉｌｌａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｐａｐｉｌｌａｒｙ　ｔｈｙｒｏｉｄ　ｍｉ－　ｃｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｓｕｒｙ，　１９９７，１６３（４）：２５３—２５９．　［１５］贾宗良，林子晶．甲状腺微癌４７例Ｉ临床分析［Ｊ］．现代肿瘤医　学，２０１０，１８（９）：１７１７—１７１９．　（编校：何妹）　

恶性肿瘤干细胞标记物ＣＤ３４在鼻咽癌组织中的表达和临床意义　陈海霞，金风，宝莹娜，吴伟莉，龙金华，李媛媛，龚修云　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｍａｒｋｅｒ　ＣＤ３４　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａ＿　ｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　

ＣＨＥＮ　Ｈａｉｘｉａ，ＪＩＮ　Ｆｅｎｇ，ＢＡＯ　Ｙｉｎｇｎａ，ＷＵ　Ｗｅｉｌｉ，ＬＯＮＧ　Ｊｉｎｈｕａ，ＬＩ　Ｙｕａｎｙｕａｎ，ＧＯＵＮＧ　Ｘｉｕｙｕｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４，Ｃｈｉｎａ．　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｍａｒｋｅｒｓ　ＣＤ３４　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ｉｎ　３０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　１０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｖｏｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｐｏｌｙｐ，ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣＤ３４　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａＸ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｖｏｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｐｏｌｙｐ　ｔｉｓｓｕｅ；ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｏｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｐｏｌｙｐ　Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅ　ｗａｓ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｔｙｐｅ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｔｙｐｅ，Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ａｎｄ　Ｎ　ｐｈａｓｅｓ　ｗａｓ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ，尸＜０．０５；ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅ—　ｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔａｇｅ　ａｎｄ　Ｔ　ｓｔａｇｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｐ＞０．０５．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｐｏｌｙｐ　ｏｆ　ｖｏｃａｌ　ｃｏｒｄ；ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏ—　ｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎ—ｋｅｒａｔｉｎｉｚｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｔｙｐｅ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｎｏｎ—ｋｅｒａｔｉｎｉｚｅｄ　ｕｎｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｔｙｐｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ｗａｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｎ　ｓｔａｇｅ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ３４　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｗａｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｈｏｒｔ—ｔｅｒｍ　ｅｆｆｉｃａｃｙ；ＣＤ３４　ｍａｙ　ｂｅ　ａ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｉｌｓ　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＣＤ３４；ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　２０１１，１９（１２）：２４１４—２４１６　

【摘要】　目的：研究不同恶性肿瘤干细胞标记物ＣＤ３４在鼻咽癌的表达和临床意义。方法：通过纤维鼻咽镜　取３０例鼻咽癌组织和ｌＯ例声带息肉，免疫组织化学方法检测各组织中ＣＤ３４的表达结果。结果：在鼻咽癌　组织和声带息肉组织中均表达ＣＤ３４；而且鼻咽癌组织中ＣＤ３４的表达高于声带息肉组织（Ｐ＜０．０５）。对鼻咽　癌组织的ＣＤ３４和病理类型、性别以及年龄之间的关系进行分析，发现ＣＤ３４表达与病理分型有统计学意义，　在非角化性分化型和未分化型之间具有差异，分化型表达高于未分化型，Ｐ＜０．０５；而其余关系则无统计学意　义。ＣＤ３４与Ｎ分期的关系有统计学意义；ＣＤ３４与临床分期、Ｔ分期之间无联系，Ｐ＞０．０５。结论：鼻咽癌肿　瘤组织中ＣＤ３４的表达高于声带息肉组织；ＣＤ３４表达与鼻咽癌的病理分型相关，非角化分化型的表达高于非　角化未分化型。ＣＤ３４与Ｎ分期相关；不同恶性肿瘤干细胞标记物ＣＤ３４可能与鼻咽癌肿瘤干细胞有关。　【关键词】鼻咽癌；ＣＤ３４；实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ）　【中图分类号】Ｒ７３９．６３　【文献标识码】Ａ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４９９２．２０１１．１２．１６　【文章编号】１６７２—４９９２一（２０１１）１２—２４１４—０３　

【收稿日期】　【修回日期】　【基金项目】　【作者单位】　【作者简介】　【通讯作者】　

２Ｏ１１—０８—２３　２０１ｌ—Ｏ９—０７　贵州省科技攻关联合基金项目［编号：黔科合（２０１０）３１６４］　贵阳医学院附属医院肿瘤科（贵州省肿瘤医院头颈肿瘤科），贵州　贵阳５５０００４　陈海霞（１９７５一），女，浙江萧山人，主治医师，主要从事肿瘤Ｉ临床工作，侧重头颈肿瘤临床研究。Ｅ—ｍａｉｌ：７７２８０５９１６＠ｑｑ．ｃｏｎｌ　金风（１９６３一），女，贵州贵阳人，主任医师，主要从事肿瘤临床－ｒｆｌｚ，侧重头颈肿瘤临床研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉｎｆ８８６５＠ｙａｈｏｏ・ｃｏｎ・ｃｎ　现代肿瘤医学２０１１年１２月第１９卷第１２期　ＭＯＤＥＲＮ　ＯＮＣＯＬＯＧＹ．Ｄｅｃ．２０１１。ＶＯＩ．１９．ＮＯ．１２　．２４１５．　多研究表明，人类ＣＤ３４基因对血管内皮细胞有很高的　特异性，可促进新生血管生成，且肿瘤的生长与血管生成密　切相关。本研究ＣＤ３４在鼻咽癌组织和声带息肉中的表达，　是否与鼻咽癌肿瘤干细胞有一定关系，ＣＤ３４在鼻咽癌组织　病理类型、性别以及年龄之间的关系进行分析。现报告如　下。　１材料与方法　１．１临床资料　贵州省肿瘤医院头颈肿瘤科２００８年４月到２００９年１　月，纤维鼻咽镜取鼻咽癌活检组织３０例，其中男１８例，女１２　例，均经病理证实为鼻咽癌，并都于治疗之前取组织。贵阳　医学院附属医院耳鼻喉科纤维鼻咽镜取声带息肉１０例，其　中男２例，女８例。　１．２实验材料　ＲＮＡ保护液（Ｇｅｎｅｒａｙ公司）；蛋白酶Ｋ；ＤＥＰＣ；ＴＲＩｚｏｌ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；Ｏｌｉｇｏ　ｄＴ（上海生工公司）；ＤＥＰＣ　（华美公司）；ＲＮＡ酶抑制剂（ＡＢＩ公司）；ＡＭＶ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎ．　ｓｃｒｉｐｔａｓｅ逆转录试剂盒（Ｐｍｍｅ￣公司）；ＳＹＢＲ　Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　ＴａｑＴＭⅡ试剂盒和ｐ—ａｃｔｉｎ内参照试剂盒（Ｔａｋａｒａ公司）；　ＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ１３３引物（Ｔａｋａｒａ公司）；实时荧光ＰＣＲ仪　（中山达安基因公司）。　１．３方法　１．３．１取组织和保存用纤维鼻咽镜分别取鼻咽癌组织和　声带息肉置于ｌｍｌ　ＲＮＡ保护液中后，冻存于一２０％冰箱以备　用。　１．３．２组织的消化取１．５ｍｌ的ＥＰ管，加入ＴＥ　２０００３和蛋　白酶Ｋ　４０　（１Ｏｍｇ／ｍ１），将活检所取组织放入ＥＰ管内，并剪　碎，放人５６￣Ｃ恒温水浴箱，１５　ｍｉｎ摇匀一次，直至整个组织全　部被消化掉。　１．３．３组织总ＲＮＡ的提取采用ＴＲＩｚｏｌ法提取，在超净台　中进行，将消化好组织的ＥＰ管内加入１ｍｌ的ＴＲＩｚｏｌ，颠倒混　匀１０下室温放置５ｍｉｎ，加入氯仿２０００３，剧烈振摇１５ｓ，室温　静置５ｍｉｎ，待其分层，于４￣Ｃ低温离心机以１２０００ｒ／ｍｉｎ离心　１５ｍｉｎ，收集上层水相５０００３，置于另一新的１．５ｍｌ　ＥＰ管，加　入５０００３异丙醇，用力摇匀，室温放置１０ｍｉｎ，于４℃低温离　心机以１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清，用滤纸吸干，加冰预　冷的７５％乙醇ｌｍｌ，于４℃低温离心机７５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，　弃上清，用滤纸吸干，空气干燥后，加入１００３　ＤＥＰＣ水，于　３７℃水浴箱放置１０ｍｉｎ，将提取的ＲＮＡ全部溶解于ＤＥＰＣ　水。　１．３．４逆转录过程　于超净台中，按照逆转录反应体系加　样，总体系为２００３，在提取的含有ＲＮＡ１００３的ＥＰ管中，加入　ＤＥＰＣ水０．５０３，加入Ｏｌｉｇｏ　ＤＴ１８（５０ｐｍｏｌ／０３）１０３，短暂离心　混匀，放置７０￣Ｃ水浴反应５ｒａｉｎ，取出后，放置冰上５ｍｉｎ后，加　入ＡＭＶ　５　Ｘ　ｂｕｆｆｅｒ　４０３，ＡＭＶ　ＲＴ（１０Ｕ／０３）２０３（２Ｕ），ＲＮＡ酶　抑制剂０．５０３，ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ　ｅａｃｈ）２０３后，短暂离心　混匀，放置４２￣Ｃ水浴持续１ｈ后，取出置于一４￣Ｃ冰箱保存，以　备用。　１．３．５实时荧光定量ＰＣＲ反应按照ＳＹＢＲ试剂盒反应　体系进行加样，ＳＹＢＲ１０　，ＰＣＲ上游引物（１０１ｘｍｏｌ／Ｌ）０．８０３　和下游引物（１０Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）０．８０３，ＲＯＸ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　Ｄｙｅ　０．４０３．　ｃＤＮＡ　２．００３，双蒸水６．００３，总反应体系是２Ｏ　，将加好的样　品，按照达安７６００型实时荧光定量ＰＣＲ仪进行上机反应。