银杏叶提取物对活化血小板刺激人冠状动脉内皮细胞产生ROS表达LOX-1和磷酸化p38MAPK的影响
银杏叶提取物的作用
银杏叶提取物的作用银杏在地球上已经生存了一亿五千万年多年的历史，它的寿命居其他植物之首。
自从发现银杏有不错的保健功效以后，银杏的身价开始倍增，银杏也被提取成了银杏叶提取物相关类保健品，目前银杏提取物的功效与作用已经获得大部分人的认可。
一、消除手脚麻木不管任何麻木，都因血液循环不良引起，在国外各大医院中，常常利用银杏叶提取物制剂来治疗，因为它能扩张血管，使血液循环恢复到正常从而能改善中年以后的手脚麻木现象，它之所以容易被人接受的另一个原因是没有任何副作用。
二、改善尿频症不论是何原因所引起泌尿系统功能不良，都可以服用银杏叶提取物制剂来治疗，因为它可以促使毛细血管正常化，血液流通顺畅，改善肾与膀胱之功能。
三、缓解糖尿病病情在好多医院中，给予糖尿病患者服用银杏叶提取物制剂后，发现症状可获得显著的改善，血液中之血糖质也显著降低，同时可以减少胰岛素注射量，且对毛细血管之扩张又有功效，显著的改善糖尿病患者的症状。
银杏叶提取物虽然是保健品，但是它的综合功能非常好，并且服用起来没有副作用，非常适合需要长期保健的人群。
可能大家平时缺乏对于银杏提取物的认知。
四、可消除因紧张所引起的头晕银杏叶提取物制剂可使大动脉，大静脉，毛细血管恢复畅通，血液粘度降低，促进脑循环功能，从而消除由于过度紧张而引起的不适经常服用，可使你精力旺盛，工作效率大大提高银杏叶提取物已成为现代激烈竞争中不可或缺的宝贝。
五、可以消除宿醉的痛苦实践证明，如果经常服用银杏叶提取物制剂，可促使动脉与末梢血管的功能正常化，使肝动脉或门脉之血液畅通，可使肝机能充分发挥，增强肝脏对酒精的代谢能力，可减少宿醉的程度甚至预防宿醉。
六、消除腰酸背痛一般性肩膀酸痛，大都是因疲劳而引起的，这时发生乳酸堆积在肌肉中，形成淤血状态，它的症状是在肩膀附近的肌肉细胞相互绷紧，呈现出坚硬状态，而产生疼痛，要想消除肩膀痛，就是将乳酸从组织中排出，所以我们必须改善血液循环不良，使血流活泼有朝气，银杏叶提取物可消除腰酸背疼，就是因为它能使血液循环良好，及时排除乳酸，提高肌肉供氧。
银杏叶提取物说明书
银杏叶提取物说明书一、药品名称通用名称：银杏叶提取物汉语拼音：Yinxingye Tiquwu二、成分银杏叶提取物主要含有黄酮醇苷和萜类内酯。
黄酮醇苷包括槲皮素、山柰酚和异鼠李素等；萜类内酯包括银杏内酯 A、B、C 和白果内酯。
三、性状本品为浅棕黄色至棕褐色的粉末或结晶；有特殊香气，味苦。
四、功能主治活血化瘀通络。
用于瘀血阻络引起的胸痹心痛、中风偏瘫、半身不遂、舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。
五、规格常见规格有多种，具体规格以您所购买的药品包装为准。
六、用法用量口服。
一次 1-2 片，一日 3 次；或遵医嘱。
七、不良反应1、胃肠道不适：可能会出现恶心、呕吐、腹胀、腹痛、腹泻等症状。
2、过敏反应：少数患者可能会出现皮疹、瘙痒、荨麻疹等过敏症状。
3、头痛、头晕：部分患者用药后可能会感到头部不适。
如果出现以上不良反应，应及时停药并就医。
八、禁忌1、对本品过敏者禁用。
2、孕妇及哺乳期妇女禁用。
九、注意事项1、过敏体质者慎用。
2、用药期间应注意监测血压、血糖等指标。
3、药品性状发生改变时禁止使用。
4、请将本品放在儿童不能接触的地方。
十、药物相互作用1、本品与抗凝药、抗血小板药合用时，可能会增加出血风险，应在医生指导下使用。
2、与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。
十一、药理作用1、扩张血管：银杏叶提取物可以扩张冠状动脉和脑血管，增加血流量，改善心肌和脑组织的缺血缺氧状态。
2、抗血小板聚集：能够抑制血小板的聚集，预防血栓形成。
3、抗氧化：清除自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤。
4、改善微循环：增加毛细血管的通透性和柔韧性，改善微循环。
十二、贮藏密封，遮光，置阴凉干燥处保存。
十三、包装药品包装通常采用药用铝箔和药用 PVC 硬片包装，具体包装形式以您所购买的药品为准。
十四、有效期具体有效期时长十五、执行标准具体执行标准编号十六、批准文号具体批准文号以上是银杏叶提取物的说明书，用药前请仔细阅读，如有疑问，请咨询医生或药师。
银杏叶的功能主治与功效禁忌症
银杏叶的功能主治与功效禁忌症功能主治•改善心血管功能：银杏叶是一种优秀的心血管保护剂，它可以促进血液循环，降低胆固醇，预防心脑血管疾病。
•抗衰老：银杏叶富含抗氧化物质，可以中和自由基，延缓细胞衰老，保持机体年轻状态。
•改善记忆力：银杏叶提取物对于改善记忆力和认知功能有一定的作用，对老年人的认知衰退具有良好的疗效。
•抗炎和抗癌：银杏叶提取物具有抗炎抗癌的作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，降低癌症的发病率。
•改善睡眠质量：银杏叶提取物对于改善睡眠质量有一定的作用，能够提高睡眠效果，减少夜间醒来次数。
主要功效1.促进血液循环：银杏叶提取物可以增加血管弹性，扩张周边血管，改善血液循环，防止血栓形成。
2.降低胆固醇：银杏叶提取物中的有效成分可以降低血液中的低密度脂蛋白胆固醇，减少动脉粥样硬化的风险。
3.抗氧化作用：银杏叶提取物富含黄酮类和儿茶酚类物质，具有很强的抗氧化作用，可以中和自由基，减少细胞损伤。
4.提高记忆力：银杏叶提取物可以增加脑内神经递质的含量，改善记忆力和学习能力。
5.改善认知功能：银杏叶提取物可以增加脑内的乙酰胆碱含量，改善老年人的认知功能，减少记忆力衰退。
6.抗炎作用：银杏叶提取物具有抗炎作用，可以抑制炎症的发生和发展，缓解炎症反应。
7.抗癌作用：银杏叶提取物具有抗癌作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，减少癌症的发生。
禁忌症•孕妇及哺乳期妇女禁用：银杏叶对于孕妇及哺乳期妇女来说，可能会产生一些副作用，因此应禁止使用。
•糖尿病患者慎用：银杏叶提取物可能会对血糖水平产生影响，糖尿病患者在使用之前应咨询医生意见。
•出血性疾病患者禁用：银杏叶提取物具有一定的抗凝血作用，容易导致出血，因此出血性疾病患者应禁止使用。
•直肠或者胃溃疡患者禁用：银杏叶提取物可能会刺激胃肠道，对胃溃疡患者不利，因此应禁止使用。
•抗凝血药物患者慎用：银杏叶提取物具有一定的抗凝血作用，与抗凝血药物同时使用可能会导致出血，因此应谨慎使用。
药典标准银杏叶提取物_概述及解释说明
药典标准银杏叶提取物概述及解释说明1. 引言1.1 概述银杏叶提取物是一种药用植物提取物，由银杏（Ginkgo biloba）的叶子经过一系列制备工艺而得到。
银杏树原产于中国，在现代医药领域中被广泛应用。
银杏叶提取物含有丰富的活性化合物，被认为具有许多药理活性和临床应用价值。
1.2 文章结构本文旨在介绍药典标准银杏叶提取物的定义、特征、制备方法以及其在药理作用和临床应用方面的研究进展。
文章将分为五个部分进行详细讨论。
引言部分主要对本文的内容、目的和结构进行简要说明。
接下来，将介绍药典标准银杏叶提取物的定义与特征，包括其在传统医学中的历史背景和现代医学中的重要性。
然后，我们将详细探讨银杏叶提取物的制备方法与工艺流程，涵盖传统制备方法和现代高效制备技术，并解析关键环节。
随后，我们将阐述已有的药理作用和临床应用研究进展，包括对银杏叶提取物药理活性的探索以及其在不同领域中的临床应用。
最后，我们将总结文章的要点并提出未来进一步研究的建议和展望。
1.3 目的本文的目的是全面介绍药典标准银杏叶提取物，并系统阐述其定义与特征、制备方法与工艺流程以及药理作用与临床应用研究进展。
通过对相关研究成果的分析比较，本文旨在为读者提供一个深入了解银杏叶提取物的综合指南，并为未来相关研究和应用方向提供建议和展望。
2. 药典标准银杏叶提取物的定义与特征2.1 药典标准概述药典是一种规范化且权威的药品质量标准，为确保药品的安全性、有效性和可靠性提供了指导。
药典标准旨在为银杏叶提取物的生产和使用提供依据，并确保其符合药学要求。
2.2 银杏叶提取物的定义银杏叶提取物是指从银杏(Ginkgo biloba)树叶中提取出来的植物化学物质混合物。
它通常通过浸泡、浓缩、溶剂挥发等工艺步骤得到。
2.3 银杏叶提取物的特征与组成成分银杏叶提取物具有以下特征和组成成分：1) 含有丰富的活性成分：银杏叶中包含众多活性成分，如黄酮类化合物（主要为酮基型黄酮类和糖苷型黄酮类）、倍半萜内酯、三萜内酯等。
银杏叶提取物的药理作用与临床应用
银杏叶提取物的药理作用与临床应用付庆林,张志远,张新中(新乡医学院第一附属医院博士后工作站,河南新乡453100) 关键词:银杏叶提取物;药理作用;临床应用 中图分类号:R961 文献标志码:A 文章编号:10022266X(2009)4120115202 银杏叶提取物(EGb)是从银杏叶中提取的具有独特药理活性的混合物,药理研究结果显示,EGb中含有黄酮类、萜类内酯、聚异戊烯醇类、有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物、氨基酸和微量元素在内的100多种化学成分[1]。
EGb 是一种作用广泛、不良反应较少的天然药物,目前在临床中的应用越来越广泛。
现就其药理作用及临床应用情况综述如下。
1 药理作用1.1 抗氧化、清除自由基 缺氧、老化、动脉粥样硬化、神经退行性疾病甚至肿瘤的发生发展均与氧自由基毒性有关。
黄酮类化合物是天然抗氧化剂家族的重要成员之一,EGb中的黄酮类化合物能清除超氧阴离子、羟自由基、一氧化氮、脂质过氧化自由基等[2],从而抑制氧由基反应和脂质过氧化反应,抑制丙二醛等毒性物质的生成;还可参与调节自由基反应酶的活性,减缓氧自由基和脂质过氧化损伤。
1.2 拮抗血小板活化因子(P AF)、改善血液流变性、扩张血管 P AF是由血小板和多种炎症组织分泌产生的内源性磷脂,是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂。
P AF的生物效应是通过P AF作用于细胞膜上的P AF受体而产生的,银杏内酯作为P AF受体的特异性拮抗剂具有广泛的药理作用。
EGb能拮抗P AF引起的血小板异常聚集和血栓形成,从而降低血浆黏度和全血黏度[3,4];银杏内酯是花生四烯酸诱导的血小板聚集和血栓素A2形成的弱抑制剂,可预防P AF诱导的血小板聚集和血栓素增加。
1.3 保护心脑血管 缺血再灌注过程中会产生大量游离脂肪酸和自由基,使细胞膜包括血管内皮细胞膜产生脂质过氧化作用。
在不同反应系统中加入不同浓度EGb可使羟自由基转化为非自由基产物[5],这可能是它保护心脏、对抗缺血再灌注性损伤的部分机制。
银杏叶提取物药理作用的研究进展
银杏叶提取物药理作用的研究进展银杏叶提取物是一种取自银杏叶的天然药物，已被广泛用于多种疾病的防治。
它主要含有银杏叶中的活性成分酮酸、内酯等，具有抗炎、抗氧化、抗凝血、增强记忆和保护心血管等多种药理作用。
以下将对银杏叶提取物的药理作用进行综述。
首先，银杏叶提取物具有抗炎作用。
炎症是一种非特异性免疫反应，可导致组织受损和疾病发展。
研究表明，银杏叶提取物中的活性成分可抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应，如细胞因子的产生和炎症细胞的浸润。
此外，银杏叶提取物还能抑制炎症信号通路的激活，例如核因子-κB（NF-κB）和线粒体异染色质蛋白C2（HMGB1），从而发挥抗炎作用。
其次，银杏叶提取物具有抗氧化作用。
氧自由基是人体产生氧化应激的重要原因，可引发氧化反应和细胞损伤，并参与多种疾病的发生发展。
银杏叶提取物中的活性成分可清除自由基，减轻氧化应激，增强细胞内抗氧化能力。
此外，银杏叶提取物还可促进SOD（超氧化物歧化酶）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，提高细胞抗氧化能力。
此外，银杏叶提取物还具有抗凝血作用。
血液凝固是机体在受损组织部位形成血栓以修复损伤的重要过程，但过度的血液凝固会导致血栓形成和循环障碍。
研究表明，银杏叶提取物中的黄酮类化合物能够抑制血小板聚集和血栓形成，减少血栓的形成和生长，并改善血液流动性，保护心血管系统。
此外，银杏叶提取物还表现出增强记忆和改善认知功能的作用。
老年性认知障碍是一种常见的老年疾病，其特点是记忆力逐渐减退和认知功能下降。
研究发现，银杏叶提取物中的酮酸类化合物可以改善认知功能和记忆力，促进脑细胞的再生和突触连接的形成，从而提高学习能力和记忆力。
银杏叶提取物片说明书
银杏叶提取物片说明书【药品名称】通用名称：银杏叶提取物片商品名称：＿____英文名称：Extract of Ginkgo Biloba Leaves Tablets汉语拼音：Yinxingye Tiquwu Pian【成份】每片含银杏叶提取物 40mg，其中银杏黄酮苷 96mg，萜类内酯24mg。
【性状】本品为浅黄色薄膜衣片，除去包衣后显浅棕黄色至棕褐色。
【适应症】主要用于脑部、周边等血液循环障碍。
1、急慢性脑机能不全及其后遗症：中风、注意力不集中、记忆力衰退、痴呆。
2、耳部血流及神经障碍：耳鸣、眩晕、听力减退、耳迷路综合征。
3、眼部血流及神经障碍：糖尿病引起的视网膜病变及神经障碍、老年黄斑变性、视力模糊、慢性青光眼。
4、周围循环障碍：各种动脉闭塞症、间歇性跛行症、手脚麻痹冰冷、四肢酸痛。
【规格】每片含银杏叶提取物 40mg。
【用法用量】口服，一次 1-2 片，一日 3 次；或遵医嘱。
【不良反应】1、罕见胃肠道不适，如恶心、呕吐、腹胀、腹痛、腹泻等。
2、过敏反应，如皮疹、瘙痒等。
如果出现上述不良反应，应立即停药并就医。
【禁忌】对本品过敏者禁用。
【注意事项】1、孕妇及哺乳期妇女用药：孕妇及哺乳期妇女慎用，如需使用，应在医生指导下进行。
2、儿童用药：儿童应在医生指导下使用。
3、老年用药：一般无需调整剂量，但应在医生指导下使用。
4、药物相互作用：本品应避免与抗凝血药、抗血小板药同时使用，以免增加出血风险。
与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。
【药理作用】1、自由基的清除作用：银杏叶提取物中的黄酮类化合物具有抗氧化作用，能够清除体内自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤。
2、改善血液循环：通过调节血管张力，扩张血管，增加血流量，改善组织的血液供应。
3、神经保护作用：对神经细胞具有保护作用，可减轻神经损伤，改善神经功能。
【贮藏】干燥处保存。
【包装】铝塑包装，每板_____片，每盒_____板。
银杏叶药理作用与功效
副作用表现及原因分析
神经系统反应：头痛、眩晕、失眠等 其他反应：心悸、胸闷、口干等பைடு நூலகம்
原因分析
副作用表现及原因分析
银杏叶中的某些化学 成分可能引起过敏反 应
个体差异也是导致不 良反应的原因之一
长期或过量使用可能 导致不良反应累积
不良反应处理方法
轻度不良反应
减量使用或停药后可自 行缓解
中度不良反应
需要适当的治疗措施， 如药物治疗、对症治疗
药用部位
银杏叶是银杏树的叶子，被用作中药 材，具有多种药理作用和功效。
采集方法
采集时间
银杏叶的采集时间通常在秋季，此时叶子逐渐变黄，药效最佳。
采集方法
采集银杏叶时，可以选择在树下或使用工具将树枝上的叶子摘下。 采集的叶子应保持干燥，避免阳光直射。
储存方法
储存银杏叶时，应将其置于阴凉干燥处，避免受潮和发霉。
银杏叶药理作用与功效
汇报人： 2023-12-13
目录
• 银杏叶的药理作用 • 银杏叶的功效与作用 • 银杏叶的适应症与用法用量 • 银杏叶的来源与采集方法 • 银杏叶的制剂与剂型选择 • 银杏叶的副作用与不良反应处
理方法
01
银杏叶的药理作用
抗氧化作用
01
02
03
清除自由基
银杏叶中的黄酮类化合物 可以清除体内的自由基， 保护细胞免受氧化损伤。
保护心肌
银杏叶中的一些成分可以保护心肌免受氧化损伤 ，预防心肌缺血的发生。
降低血脂和血糖水平
降低胆固醇
银杏叶中的黄酮类物质可以降低 胆固醇水平，预防动脉粥样硬化 的发生。
降低血糖
银杏叶中的一些成分可以促进胰 岛素分泌，提高胰岛素敏感性， 降低血糖水平。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
银杏叶提取物对活化血小板刺激人冠状动脉内皮细胞产生ROS 以及表达LOX-1和磷酸化p38MAPK 的影响朱贤关李忠东1王建昌2孟如松3（安徽医科大学研究生学院，安徽合肥230000）〔摘要〕目的研究银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract ，EGb ）对活化血小板刺激人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells ，HCAECs ）产生ROS 和表达LOX-1、磷酸化p38MAPK 的影响。
方法将HCAECs 随机分为空白组，活化血小板组和活化血小板+银杏叶提取物低、中、高剂量组（分别为4、40、400μg /ml ），应用H 2DCF-DA 探针、Western 印迹分别检测ROS 的产生以及LOX-1和磷酸化p38MAPK 的表达。
结果活化血小板可以介导HCAECs 表达ROS 、LOX-1和磷酸化p38MAPK （P ＜0.05）；EGb 能明显抑制ROS 的产生以及LOX-1和磷酸化p38MAPK 的表达（P ＜0.05），随着EGb 浓度增高，ROS 和LOX-1抑制效果越明显，磷酸化p38MAPK 现象不明显。
结论EGb 对HCAECs 的保护机制可能与抑制ROS 、LOX-1和磷酸化p38MAPK 的表达有关。
〔关键词〕银杏叶提取物；活化血小板；ROS ；LOX-1；磷酸化p38MAPK 〔中图分类号〕R28〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）03-0546-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.03.047基金项目：首都医学发展科研基金（No.SF-2007-II-06）1空军总医院药学部2空军总医院空军老年医学研究所3空军总医院中心实验室皮肤科通讯作者：王建昌（1960-），男，教授，博士生导师，主要从事老年心血管病研究。
第一作者：朱贤关（1985-），男，在读硕士，主要从事老年心血管病研究。
动脉粥样硬化（atherosclerosis ，AS ）的发病机制有多种学说，如损伤反应学说、AS 氧化学说（oxidative hypothesis ）等，实验证明，他汀类、阿司匹林、维生素E 和C 等和某些中药通过抗氧化作用，阻断AS 的发展。
银杏叶提取物（EGb ）是天然中草药银杏叶的提取物，主要成分有黄酮类、萜类、原花色素类以及其他未知成分〔1〕。
研究证明，该药治疗心脑血管疾病作用机制主要是抑制体内自由基〔2〕和血小板活化因子（platelet activating factor ，PAF ）的产生〔3〕。
本文观察活化血小板与内皮细胞上的脂氧合酶同工酶（LOX-1）受体结合后对自由基产生的影响，并分析丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK ）磷酸化通路产生炎症因子的影响。
1材料与方法1.1材料1.1.1细胞人冠状动脉内皮细胞（human coronary endotheli-al cells ，HCAECs ）。
购自ScienCell TM 实验室（ScienCell TM Re-search Laboratories ）；血小板，健康成年志愿者，抽血前2w 内未吸烟，未服用任何抗血小板药物。
1.1.2药物、试剂及仪器EGb （中国药品生物制品检定所）；二氯二氢荧光素二乙酯（2'，7'-dichlorodihydrofluorescein diace-tate ，H 2DCF-DA ）探针（Invitrogen 公司），小鼠抗人LOX-1单抗（R＆D systems 公司），小鼠抗人p-p38MAPK 单抗（Santa Cruz 公司），小鼠抗人β-肌动蛋白（β-actin ）抗体，辣根过氧化物酶（HRP ）标记山羊抗小鼠抗体（中杉金桥）。
离心机，荧光显微镜，温箱。
1.2方法1.2.1活化血小板制备健康成年志愿者，抽血前2w 内未吸烟，未服用任何抗血小板药物。
未扎止血带抽取新鲜静脉血20ml ，注入含有3.8%枸橼酸钠（1ʒ9）抗凝溶液的聚丙乙烯试管内，上下颠倒轻摇充分混匀；立即室温下1200r /min 离心5min ，收集富集血小板血浆（platelet-rich plasma ，PRP ）；PRP 室温下3000r /min 离心15min ，沉淀血小板用台式缓冲液洗涤2次，并复悬于台式缓冲液，调整血小板计数为2ˑ108/ml 〔1〕。
加入终浓度为5μmol /L 的ADP ，轻摇充分混匀20min ，即为活化血小板，备用。
1.2.2分组HCAECs 培养参照以前实验〔4〕，将第5 7代HCAECs 随机分为空白组、活化血小板组、活化血小板+EGb 低剂量组（4μg /ml ）、活化血小板+EGb 中剂量组（40μg /ml ）、活化血小板+EGb 高剂量组（400μg /ml ）。
活化血小板（2ˑ108/ml ）与内皮细胞在37ħ温箱孵育12h 后，加入药物EGb ，再孵育12h 。
1.2.3H 2DCF-DA 探针检测活性氧（ROS ）的表达加入药物再孵育12h 后，每组加入终浓度为2μmol /L 的H 2DCF-DA 探针，继续孵育30min ，快速在荧光显微镜下观察并采集图像。
用CMIAS 医学图像分析系统（北京航空航天大学研发）分析采集图像，以平均光密度（视觉平均颜色的深度）表示荧光强度。
1.2.4Western 印迹检测LOX-1和磷酸化p38MAPK 的表达取孵育完成的内皮细胞，除去培养基并用磷酸盐缓冲液（PBS ）洗涤3次，胰酶消化收集细胞，加复苏促进因子结合蛋白A （RIPA ）裂解液，在冰上裂解，提取蛋白质后二喹啉甲酸（BCA ）法进行蛋白浓度测定。
加上样缓冲液，100ħ变性10min ，10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳分离蛋白，再通过转膜将蛋白转到0.45μm 聚偏氟乙烯（PVDF ）膜上，用Tris 盐酸盐缓冲液（TBST ）配制的5%脱脂奶粉封闭1h ，分别加入一抗（LOX-1，1ʒ200；p-p38MAPK ，1ʒ300；β-actin ，1ʒ2000），4ħ过夜，TBST 洗膜，5min 3次，加HRP 标记二抗（1ʒ10000），室温孵育1h ，TBST 洗膜，5min 3次，加ECL 显影液，曝光。
Quantity One 软件分析处理扫描图像。
1.3统计学方法应用SPSS13.0统计软件，数据资料以x ʃs表示，采用单因素方差分析，多样本间均数比较采用完全随机方差分析SNK-q 检验。
2结果2.1活化血小板诱导ROS 、LOX-1和磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK ）表达活化血小板与HCAECs 孵育之后，可显著诱导ROS 产生，显著诱导LOX-1和p-p38MAPK 表达（P ＜0.05）。
见图1。
2.2EGb 抑制ROS 产生低、中、高剂量组平均光密度分别为0.89ʃ0.27，0.53ʃ0.07，0.42ʃ0.16；空白组、活化血小板组平均光密度分别为0.29ʃ0.04、0.97ʃ0.24。
可见不同浓度的EGb 对ROS 的产生均有明显的抑制作用（P ＜0.05），且具有剂量依赖性。
图1。
图1荧光显微镜下各组ROS 表达水平2.3EGb 抑制LOX-1表达不同浓度的EGb 对LOX-1的表达均有明显的抑制作用（P ＜0.05），且具有剂量依赖性。
见表1，图2。
2.4EGb 抑制p-p38MAPK 表达EGb 对p-p38MAPK 有显著抑制作用（P ＜0.05），但EGb 不同浓度对p-p38MAPK 的表达抑制作用无显著性差异。
见表1，图2。
1：空白组；2：活化血小板组；3：活化血小板+EGb 低剂量组；4：活化血小板+EGb 中剂量组；5：活化血小板+EGb 高剂量组图2LOX-1和p-p38MAPK Western 印迹结果表1各组LOX-1和p-p38MAPK 表达比较（n =3）组别LOX-1/β-actin p-p38MAPK /β-actin 空白组0.132ʃ0.0190.600ʃ0.004活化血小板组0.344ʃ0.0481）0.851ʃ0.0141）活化血小板+EGb 低剂量组0.159ʃ0.0142）0.586ʃ0.0231）2）活化血小板+EGb 中剂量组0.094ʃ0.0222）3）0.580ʃ0.0271）2）活化血小板+EGb 高剂量组0.046ʃ0.0031）2）3）4）0.571ʃ0.0271）2）与空白组比较：1）P ＜0.05；与活化血小板组比较：2）P ＜0.05；与活化血小板+EGb 低剂量组比较：3）P ＜0.05；与活化血小板+EGb 中剂量组比较：4）P ＜0.053讨论目前证实，活化血小板主要与内皮细胞LOX-1结合，通过一定通路介导内皮细胞表达大量ROS〔3，4〕，导致内皮细胞功能障碍，进而导致AS 。
本实验证实，活化血小板与内皮细胞结合12h 后，再加入EGb 作用12h ，可使内皮细胞产生的ROS 明显下降，且具有剂量依赖性，提示EGb 可能阻断活化血小板与内皮细胞LOX-1结合后的信号转导通路。
内皮细胞上LOX-1有多种配体，如ox-LDL 、同型半胱氨酸、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和活化血小板等，这些配体与LOX-1结合后，可通过相同或不同的信号通道如p38MAPK 、p44/42-MAPK 、蛋白激酶C （PKC ）、蛋白激酶B （PKB ）、酪氨酸激酶（PTK ）等激活还原型辅酶Ⅱ（NADPH ）氧化酶〔5〕等氧化酶产生大量ROS 和核转录因子（NF-κB ）〔6〕表达，以及导致内皮细胞功能失调〔7〕。
何艳〔8〕等报道，银杏黄酮苷元对ox-LDL 诱导的人脐静脉内皮细胞LOX-1表达具有抑制作用；梁燕玲〔9〕等研究证实，银杏叶提取物对同型半胱氨酸诱导LOX-1mRNA 的表达具有抑制作用；徐西振〔10〕等发现EGb 抑制TNF-α诱导的牛主动脉内皮细胞LOX-1的表达。
本实验发现，活化血小板与内皮细胞结合12h 后，加入EGb 作用12h ，也可使内皮细胞上LOX-1表达量下降，且具有剂量依赖性，提示EGb 可以阻断不同配体与LOX-1结合后的信号通路。
在上述信号通道中，MAPK 介导的信号转导通路是生物信号引起核反应的重要通路，在细胞生长、增殖、分化及凋亡的调节中起到至关重要的作用。
MAPK 家族主要有细胞外信号调节激酶（EKR1/ERK2）、应激活化蛋白激酶（JNK /SAPK ）和p38MAPK ，其中p38MAPK 通路是参与内皮细胞炎症反应的细胞内的重要通路，在致炎因子与LOX-1结合后，p38MAPK 由非磷酸化转化为磷酸化状态，促进下游底物的磷酸化，启动核因子，促进炎性介质分泌，介导炎症反应，参与AS 形成〔11〕。