制备色谱应用-s1名师编辑PPT课件

第一章 样品的制备与纯化
样品的制备对于复杂的分离与纯化非常重要。恰当的样品预处理可免去 后续操作过程中的许多麻烦，使分离纯化变得更为容易。无论样品是来源于 混有蛋白质的生物体、生产中混有残存催化剂的工业制品，或混有干扰杂质 的植物体，通过简单的预处理就可以除去其中大部分不需要的物质。 样品的预处理特别适用于需要使用昂贵的制备型高压液相色谱柱时。尽 管制备样品的目的不尽相同，但其中许多操作与分析型高压液相色谱中所采 用的一样。当处理生物样品时问题可能更加复杂，因为样品不仅可能含有复 杂的大分子，而且还可能混有前面纯化过程中残留的缓冲液、盐及洗涤剂。 因此，必须在预处理中去除上述污染物以免污染高压液相色谱柱。 在设计纯化方案时，通常先使用高效与低分辨率的预处理方法，其中包 括一些经典的方法，如选择性溶剂提取、过滤、沉淀、透析、离心及简单的 常压柱色谱分离等。而一些较新的方法，如超临界流体萃取、固相萃取等则 更具有快速、高效的优点。 生物分子(尤其是生物聚合体)与常见的次生代谢产物性质明显不同，需 要使用特殊的预处理方法。除常用的离心、沉淀(如用硫酸铵沉淀蛋白质)、 离子交换及凝胶过滤等方法(Wehr，1990)外，可用透析、超滤等专用方法。
系统预试流程图
中药粉末（6g干品或12g鲜品） 甲醇60ml，温浸过夜，滤过 中药残渣 滤液
回收甲醇 2%醋酸，15ml温浸20-3-min， 滤过 提取物 中药残渣 酸液 合并加醋酸调pH5-6，用乙醚：氯仿（1：1）提取3次
酸水液 氢氧化铵碱化氯仿提 碱性水液 盐酸中和浓缩 部分丁 氯仿溶液 脱水回收溶剂 部分丙 水液
1．中药化学成分概述 成分分类 生物碱 有机胺类 吡咯类 吡啶类 莨菪烷类 喹啉类 异喹啉类 菲啶类 丫啶酮类 吲哚类 咪唑类 喹唑酮类 嘌呤类 甾体类 帖类 大环类 其他类 苷类 黄酮苷 蒽醌苷 皂苷 强心苷 香豆精苷 挥发油 有机酸 蛋白质 氨基酸 树脂 糖类 鞣质
中药化学成分预试
圆形滤纸层析预试法 一、样品的制备 取通过20目筛的中草药粉末 5 克，加入 50 毫升 95 ％乙醇，在 水浴上回流加热 10分钟。过滤， 滤液浓缩至 1/2 量，得“乙醇提 取液”备用，此提取液浓度为每 5毫升相当于1克生药。 二、操作方法 取直径12．5厘米的普通圆 形滤纸(新华牌或其他牌号，要 求质地较细)一张，滤纸中心处 打一小孔、备插入滤纸芯之用， 将O．1毫升乙醇提取液仔细滴加 在距纸中心约1厘米处(如图1所 示)。
三、展开溶剂 以甲醇或 95 ％乙醇为展开溶剂。可采用重蒸馏的 工业规格的溶剂。
四、显色剂 优点是节省原料、试剂和时间，还可以防止试管 反应中由中药颜色造成的假阳性。
二．试管预试法 1．样品制备 （1）酸性乙醇提取液 称取通过20目的中药粉末10g，加70ml0.5% 的盐酸乙醇溶液，在水浴上回流加热10min，趁热滤过，得酸性乙醇提 取液。此滤液用以检查酚性成分、有机酸和生物碱。 （2）水提取液 称取通过20目的中药粉末10g，加水100ml，在室温 浸泡过夜，滤取10ml滤液，供检查氨基酸、多肽和蛋白质等。剩余的 药渣及浸液在60℃水浴中加热10min，立即过滤，此滤液供检查糖、多 糖、皂苷、苷类和鞣质等。 （3）甲醇提取液 称取通过20目的中药粉末10g，加入70ml甲醇， 在水浴上回流加热10min，趁热滤过，滤液供检查黄酮及其苷类、蒽醌 及其苷类、强心苷、香豆精及其苷类、内酯、挥发油、植物甾醇和油 脂类等。 （试管反应因中药颜色深，容易造成假阳性） 中药化学成分系统预试法 1．单项预试即直接寻找生物碱、苷、、、。 2．系统预试法 常用递增极性溶剂法
一张圆滤纸可同时点上 8 ～ 10 个样 品。样品滴好后，将一小条滤纸芯插入 滤纸的中心小孔。移到盛有展开溶剂的 直径为12厘米的培养皿中，滤纸芯浸在 溶剂中，滤纸上再盖以同样直径的培养 皿，以进行层析 ( 如图 2 所示 ) 。溶剂的 前沿达到滤纸边缘后，取出滤纸，待溶 剂挥发后，根据情况，喷上显色剂。 如果要测定不同样品中同类成分的 分布情况，则可在一张圆形滤纸上分别 滴加各种中药(最多可滴加10种)的乙醇 提取液，用溶剂展开后喷同一种显色剂 。当欲观察一种样品中几种成分的分布 情况，则可滴加10个同一种中药的乙醇 提取液，经溶剂展开后，将滤纸剪为10 份，分别喷以不同显色剂。
人们只有将新的天然产物纯化之后才能进一步 利用谱学技术鉴定其化学结构，测定其理化性质和 生物活性，同时提供其作为制药原料、标准品或供 做合成工作的起始原料。从一个粗提物中获得纯的 化合物通常需经过许多纯化步骤，这些步骤烦琐、 耗时。且花费较大。有时，所需化合物得率很低或 性质不稳，因而,需要有尽可能多的分离方法以供选 择。尽管有时也可能犯这样或那样的错误，但今天 人们已有可能通过对各种方法进行审慎地选择来设 计一条恰当的快速分离路线。
乙醚：氯仿液 2%碳酸钠溶液提取 乙醚氯仿液
盐酸酸化 乙醚提取 3/4量 1/4量 乙醚液 水蒸气蒸馏 部分甲 水溶性成分（糖、蛋白 碱性成分（生物碱 脱水、回收 不挥发部分 馏出液 （中性成分） 质、皂苷、鞣质及其他 和其他胺类成分 部分乙 乙醚提取 乙醚提取 水、溶性高分子化合物、 酸性成分 部分甲b 部分甲a 各种亲水性苷、水溶性 （有机酸及其他酸性成分）（中性非挥发性成分 中性挥发性成分 生物碱） 油脂、蜡、 树脂、甾萜、 酚类、 植物色素等）
参考文献
Joumal of Chromatography Joumal of Liquid Technologies Analytical Chemistry Chromatography and Related
Baidu Nhomakorabea
Natural Product Reports
Phytoehemical Analysis LC-GC Magazine及其他各种专业杂志上 徐任生、陈仲良主编的 《中草药有效成分提取与分 离》，第二版，上海科学技术出版社， 1983 年， 1989 年第二次印刷) 植物成分分析，谭仁祥主编，