瓦里安系列10瓦里安制备色谱系统概述
瓦里安系列4-瓦里安LCMS八大特点
Pressure Gauge
完美的真空锁定装置 Plug Ion Volume Tool
Vacuum Inlet Solenoid
完美的真空锁定系统
➢ PC监控下巧妙实现真空锁定；
➢ 保证在不切断真空的前提下实现EI源、正/负CI源或 ➢ ESI源、APCI源之间快速容易的切换； ➢ 大大缩短了离子源的切换时间，同时保证了真空系统的长寿命使用。
❖
6°倾角设计排除了毛细管引入的溶剂分子，有效降低背景干扰，提高
信噪比；
1200L LC/MS的八大特点 （二）
（二）专利涡流设计的高效、省气的APCI源
剖面图
专利涡流设计的高效、省气的APCI源
雾化针
热的辅助气的扰动流使雾化粒子 束在石英管内快速蒸发
专利涡流设计的高效、省气的APCI源
剖面图 气体 流动相 气体
APCI 加速去离子簇效应的快速完成 防止大颗粒液滴直接进入取样毛细管 在适当的操作下，对于APCI源应该不存在大颗粒液滴
宽孔径、金属毛细管
N2 气体加热器
离子 颗粒
毛细管
宽内径（0.4 mm）使离子 传输最大化
1 L/min
不锈钢毛细管减少电荷集结的可能， 更有利于离子的通过
1200L LC/MS的八大特点 （三）
❖ 186mm长程设计确保较宽的 CID能量范围，可有效的将稳定的 离子二次解离；
❖ 外加74mm的超长前、后预杆设 计，能最大限度稳定维持CID区域 内的碰撞气压，实现二极质谱高 的分析重复性；
❖ 弯曲设计最大限度缩小真空空间， 最大程度延长分子涡轮泵的使用 寿命。
❖ 检测器与离子源不在同一水平 面上，防止检测器被沾污，去 除中性物质，极大降低化学噪 声，
安捷伦毛细管色谱柱常用规格及价格(一)
安捷伦agilent毛细管色谱柱包括哪些系列2000 年，发明熔融石英GC 毛细管柱的公司——安捷伦agilent科技公司与第一个用交联硅氧烷聚合物制造GC 固定相的公司——J&W Scientific 合并。
2010 年，安捷伦并购了瓦里安，在现有超高惰性（UltraInert）、高效（High Efficiency）、LTM、PAH、UltiMetal 和用户定制GC 色谱柱的基础上，增加了PLOT、Select、VF、CP-Sil 和填充柱品种。
优质聚硅氧烷色谱柱——稳定、耐用、通用性强，且有各种各样的固定相类型。
1）HP-1--------二甲基聚硅氧烷柱说明：这是最常用的非极性键合固定相，具有极好的热稳定性并且在高温下流失很小，具有低的检测限相似的固定相：DB-1,Rtx-1,SPB-1,CP-Sil 5CB,MDN-1,DB-1h.t.,AT-1，007-1恒温/程序升温温度范围：-60至325/350℃,-60至300/320℃0.53内径，-60至260/280℃>2.0mm液膜应用：胺类、烃类、农药、多氯联苯、酚类、含硫化合物2）HP-35--------二苯基-65%-二甲基硅氧烷共聚物说明：HP-35柱是用苯基取代甲基的聚硅氧烷固定相柱。
EPA（美国环保暑）方法8081和UPS（美国药典）G-42中已经指定用此固定相。
HP-35的中极性使其成为分析杀虫剂、除草剂、药物和胺的良好选择。
相似的固定相：DB-35,Rtx-35,SPB-35,AT-35,Sup-herb等温/程序升温温度范围：-40至300/320℃，40至280/300℃应用：芳氯物(Aroclors)、胺类、杀虫剂、药品3）HP-5(5%)-------二苯基聚硅氧烷共聚物色谱柱说明：一根HP-5(5%苯基聚硅氧烷)柱常常是分析未知样品的优选色谱柱，和HP-1一样这种非极性固定相，具有非常好的惰性和热稳定性，因而其检测器的检测限低，柱流失非常低。
我国气相发展史
1、我国气相色谱仪的发展脉络我国从上世纪50年代中期许多单位就开始了气相色谱法的研究和气相色谱仪的制造。
在上世纪50年代国家科委组成专题攻关组,采取专家与生产厂家相结合的方式，主要在中国科学院大连石油研究所(后称中科院大连化学物理研究所)以及石油部石油科学研究院、化工部北京化工研究院等研究机构展开研究。
上世纪60年代初,北京分析仪器厂和北京化工研究院共同研制出我国首批商品化气相色谱仪——SP-02气相色谱仪，之后上海分析仪器厂也有商品化气相色谱仪问世。
上世纪70年代初,北京分析仪器厂生产的SP-2305和上海分析仪器厂生产的100型气相色谱仪已逾千台,在国内达到普及应用的程度。
上世纪80年代，北京分析仪器厂引进美国Varian公司(瓦里安，现气相产品线被布鲁克收购)的3700和3400系列气相色谱仪技术组装产品, 之后逐步提高国产化的程度, 先后推出3410、3420、3460等型号气相色谱仪。
上海分析仪器厂则生产1001系列气相色谱仪,并组装HP公司(现安捷伦)的HP-5890-II系列气相色谱仪。
1997年，北京分析仪器厂和北京瑞利分析仪器有限公司合并组建成北京北分瑞利分析仪器(集团)有限责任公司，现在气相色谱仪产品有：SP2020、SP3400、SP3420A、SP2100A、SP2100等。
上海分析仪器厂和上海第三分析仪器厂重组整合为上海精密科学仪器有限公司，现上海仪电科学仪器股份有限公司。
现在气相色谱仪产品有：GC122、GC112A、GC102M、GC102NJ/AF/AT、GC126、GC128等。
山东鲁南化工仪器厂始建于1969年，设计生产了SP-501、SP-502型气相色谱仪，有不少用户。
它经多次更名，现在叫山东鲁南瑞虹化工仪器有限公司，1998年以后，研制了SP-2000B、SP-6800A6、SP-6890型、SP-9890、SP-7890型气相色谱仪。
四川仪表九厂是1965年建立的，现为重庆川仪自动化股份有限公司，过去有SC 1001系列气相色谱仪，现有SC-2000、SC-6000气相色谱仪。
色谱柱使用手册
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者：LAI | 评论：0 | 阅读：146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
高效液相制备色谱分离抗氧剂1010加成反应副产物
（ ｎｌ ｉ ｌ ｔ ， ｉｎ ｎ ｉ ｒｔ， ｉ ｊ ， ００２ Ａ ａ ｔａ Ｃｎ ｒ Ｔａｊ Ｕ ｖ ｓｙ Ｔａ ｉ ３０７） ｙｃ ｅｅ ｉ ｎｅｉ ｎｎ Ｓｐｒｔ ｎ ｐ ｒｉ ｔｎ ｔｅ ｐｏｕｔｉ ａｄ ｉ ｒａｔ ｎ ａｔｘ ｅｔ ０ ｒ ｐｒ ｒ ｅ ｂ ｅａａｏ ａｄ ｉｃ ｉ ｏ ｈ ｂ － ｄ ｃ ｎ ｉ ｎ ｃｏ ｏ ｎｉ ｉ ｎ １１ ｗ ｅ ｆ ｍ ｄ ｉ ｎ ｕ ｆａ ｏ ｆ ｙ ｒ ｓ ｄ ｔ ｅ ｉ ｆ ｏ ｄ ｏ ０ ｅ ｅｏ ｙ ｈ ｈ ｆｒ ａｃ ｐｅａａｖ ｌｕ ｃｒｍ ｔ ｒｐｙＴ ｅ ｍｃｌ ｃｕｅ ｏ ｔｅ ｐｏ ｕｔ ｗ ｒ ｄｔ － ｉ ｐｒ ｍ ｎｅ ｐｒｔ ｅ ｉ ｈｏ ａ ｇａｈ ． ｈ ｃｅ ｉ ｓ ｕｔ ｓ ｈ ｂ－ｒｄｃ ｅｅ ｅ ｇ ｅｏ ｒ ｉ ｉ ｄ ｑ ｏ ｈ ａ ｔ ｒ ｒ ｆ ｙ ｓ ｅｒ ｍｎｄ Ｉ ｓｅ ｒｍ ｄ ｅ ｑａｔ ｉ ｍ ｔ ｄ． ｉ ｂ Ｒ ｃ ｕ ａ ｏ ｒ ｌａｖ ｅｈ ｓ ｅ ｙ ｐ ｔ ｎ ｔ ｈ ｕ ｉ ｔ ｅ ｏ Ｋ ｙ ｒｓ ｉ ｐｒ ｒ ａｃ ｌｕ ｃｒｍ ｔｇａｈ ， ｒｐｒｔ ｅ ｏ ａ ｇａｈ ，ｒａｏ １１ ｅ ｗ ｄ ｈ ｈ ｆ ｍ ｎｅ ｉ ｈｏ ａ ｒｐ ｙ ｐｅａａｖ ｃｒｍ ｔ ｒｐｙ ｉ ｎ ｘ ０ ｏ ｇ ｅｏ ｉ ｄ ｑ ｏ ｉ ｈ ｏ ｇ ０
在加成反应 液中 ， 副产物的存在会影 响 ３ 以上 ， ５ 酯与 季戊 四醇 的反应 ， １１ 产率 下降 ， 使 ００ 杂质 增 多， 致使 １１ 晶形变坏 。 ００ 为研 究副产物对 １１ 的影 ００ 响， 以提供分析 用纯化合物 ， 本文采用了高效液相制 备色谱法分 离 、 了部分副产物 。 提纯
瓦里安ICP讲义2-仪器介绍
正常分析区 火球
狭缝高度
工作线圈
垂直观测方式的优点
优秀的检测浓度范围：
• 从百分含量-PPb • 例如: 油中磨损金属测定,电镀液中有害重金属测定.
PC调节观测高度 • 优化灵敏度 • 优化精度 • 降低干扰 对于十分复杂基件的样品更能适应 • 固体物含量可高达 30% • 炬管寿命更长
垂直炬管等离子体观察高度优化
半可拆式炬管
可拆式炬管 (A=Varian 710/720-ES炬管； B=Varian 715/725-ES 炬管) 1. 炬管外体 2. 氧化铝注射管 3. 注射管座套
全拆卸式炬管
炬管的选择
正确选择炬管
考虑以下因素： 对含有较高未溶固体的溶液，可采用大注射口径的可拆卸式炬管， (1.8 mm ) 可减少注射管出口处盐分沉积。对一些基体效应，如含较 高磷酸盐样品，也可消除之。 Varian 710/720-ES 仪器一般用于分析较为清洁以及低含量样品。 对于含有氢氟酸和熔融样品的溶液，推荐采用可拆卸式氧化铝注射 管炬管。因该类型样品对石英注射管有腐蚀性。
观测深度
中心通道
火球
观测区
水平观测等离子炬的优势
1、发射强度随中心通道的观测深度增大而增大； 2、S/N比更好；
3、改善了检测限,低至PPb级。
ICP-OES垂直与水平观察方式检测限比较
Element Al Mo
Wavelength Radial Axial
(nm) (ug/L) (ug/L)
Element As Pb
数据处理系统： ICP ExpertTM II 操作软件
高智能化的操作软件
Win2000/XP/NT操作系统，界面友好；可在测定过程中，进行数据处理、 方法编制和结果分析等，是真正的多任务工作软件: 1、 计算机全自动控制，如气体流量、观测高度、X-Y方向的炬管位置， 点火、RF功率等，可进行分析条件的最佳化； 2、 安全联锁功能； 3、 多种背景校正技术可供选择，可获得最佳的背景扣除点以消除干扰； 4、 专利的快速自动谱线拟合技术（FACT）进一步提高光谱分辨率，是 强有力的谱线分离技术。
瓦里安系列10-瓦里安制备色谱系统概述
泵耐压范围（Prostar 218)
最高达8700 psi 200 mL/min 泵头 3500 psi 100 mL/min 泵头 4000 psi
ProStar 210/218制备系统配置
Prostar 210/218泵系统（泵头5-200ml/min可选） Prostar 325 紫外可见检测器 多功能阀箱（分析/制备切换阀） 7725i和3725手动进样器 701组分收集器 Star 工作站 预装柱或小型装柱机
制备色谱中的重要问题
产品的纯度 处理量
(每单位时间所纯化的样品量) 回收率 生产时间 方法开发与放大
纯化成本
制备色谱分离参数之间的关系
上样量 色谱柱规格 填料性质 样品性质
分离度
速度
上样量
制备色谱方法开发
分析HPLC
传统的开发方法
传统制备色谱
颗粒 长度 柱直径 流速 操作时间 消耗溶剂
制备色谱技术
制备色谱的目的是收集更多的 被纯化的产品，而不是用于分 析化合物的组分含量，产量从 几毫克到几公斤
制备色谱技术是得到高纯物的 最好的分离方法之一
制备色谱规模划分
mg-g级
小量制备， 色谱柱直径10-50mm
g-100g级 中试规模制备 色谱柱直径41-150mm
生产规模制备 色谱柱直径100-600mm
色谱柱柱效是影响分离效果相当关键的因素
粒径 (um)
孔径 (A)
填料粒径越小，柱效越高 系统反压将随填料粒径的降低而增加 使用小颗粒填料及更高压力操作是制备发展的趋势
填料粒径与柱效
小粒径 vs 大粒径填料
41mm制备柱、理论塔板数10000、等度分离，进样 20次
SC-TP-017-02-生长抑素生产工艺规程
文件名称生长抑素工艺规程编制者审核者批准者编制日期审核日期批准日期编制依据《中华人民共和国药典》2005年版《药品生产质量管理规范》1998年修订《药品注册批件》2006S05219颁发部门质量管理部制作备份分发部门质量管理部、生产技术部实施日期一、目的：本工艺规程是经过验证并对生长抑素的设计、生产、包装、标准及质量控制进行全面描述的基准性技术文件，是制定岗位SOP、批生产记录和批生产指令的重要依据。
二、范围：本规程适用于生长抑素的生产和质量管理，以及相关物料的供应。
三、职责：生产技术部和质量管理部对本规程实施负责。
四、依据：《中华人民共和国药典》2005年版《药品生产质量管理规范》1998修订《药品注册批件》2006S05219五、目录1. 产品概述……………………………………………………………………………2. 制备方法……………………………………………………………………………3. 工艺流程……………………………………………………………………………4. 操作过程及工艺条件………………………………………………………………5. 原料质量标准………………………………………………………………………6. 辅料质量标准………………………………………………………………………7. 中间产品质量标准…………………………………………………………………8. 成品质量标准………………………………………………………………………9. 质量监控……………………………………………………………………………10. 物料消耗定额………………………………………………………………………11. 设备………………………………………………………………………………12. 技术安全及劳动保护…………………………………………………………… 13. 卫生……………………………………………………………………………… 14. 劳动组织与岗位定员、生产周期……………………………………………… 15. 技术经济指标的计算…………………………………………………………… 六、内容 1．产品概述1.1通 用 名：生长抑素1.2英文名/拉丁名：Somatostatin结 构 式：分子式：C 76H 104N 18O 19S 2 分子量：16381.3性 状：本品为白色粉末 1.4有 效 期：24个月1.5贮 藏：遮光，密封，2-8℃保存 1.6包 装：PVC 瓶1.7制 剂：注射用生长抑素 1.8 批准文号：国药准字号H200668742.制备方法生长抑素的制备是采用多肽固相合成技术，在树脂上按生长抑素的一级结构依次连接氨基酸，形成多肽，然后用三氟醋酸（TFA ）将多肽从树脂上分离下来，得到二氢生长抑素，使用空气氧化法氧化得到生长抑素粗品，再采用高效液相色谱技术对进行分离纯化，最终得到纯度为98%以上的生长抑素。
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分析柱: 5 um 250*4.6mm 流速: 1 ml/min
线性放大 系数: 21.6
制备柱: 5 um 250*21.4mm 流速: 21.6 ml/min
线性放大结果....
结论：制备分离结果与分析完全一致，极大简化了 制备放大的过程，制备结果更准确
线性放大结果....
4.6 mm x 25 cm 0.65 ml/min 20 µl injected
分析色谱柱和制备色谱柱截面积之比
线性放大因子： (41.4 mm/2)2 / (4.6 mm/2)2 = 81
–π π r2prep / r2analytical = r2prep / r2analytical
4.6 mm
41.4 mm
线形放大过程中的可变与不可变参数
可变参数
•流速 •样品进样体积 •样品管尺寸 •样品收集体积 •检测器流动池尺寸 •管路内径 •死体积 •溶剂消耗 •样品处理量
➢线性放大是制备色谱最快速高效的方法开发过程
合理简单的放大方法
➢线性放大的3个步骤
பைடு நூலகம்
Step 1
在小直径的分析柱上，进行方法优化，寻找最佳 分离条件
线性增加系统中所有可放大的参数，但不要改变 Step 2 任何“不可变”参数
Step 3 进行制备分离
从分析到制备放大应用实例
➢ 仪器设备
VARIAN SD-1溶剂传输系统（二元梯度） 200 ML/MIN 泵头 ProStar 320 UV/VIS 检测器
4.6 mm
x
线性放大模式
➢范例：poly-L-lysine 分析和制备分离结果
1. 分析液相分离 (4 x250 mm 色谱柱) 2. 制备液相分离 (50 x250 mm 色谱柱)
•方法可预测性 •产率可预测性 •时间可预测性 •成本可预测性
线性放大－－样品复杂，对产量要求不高
线性放大因子（linear scale-up factor）即为
需要方法开发
10 µ 25 cm 4.6 mm 1 ml / min 20 min 20 ml
40 - 150 µ 65 cm
25 mm 20 ml / min
210 min 4200 ml
高通量放大－样品相对简单，对产量要求高
41.4 mm
x
overloaded
4.6 mm
x
overloaded
100g-kg级
制备液相色谱技术应用领域
有机合成实验室 ( Prep LC/HPLC)
恒容系统/硅胶 (正相色谱)
肽类纯化
梯度系统（HPG or LPG） – TFA/ACN/C18
制药工业
梯度系统（HPG or LPG）– C18/IEX
天然产物纯化
梯度系统（HPG or LPG） –BUFFER/ACN/C18
应用范围:
中试规模制备 生产规模制备
制备液相色谱系统
•输液泵系统 •检测器系统 •进样系统 •组分收集系统
同时满足分析与制备的系统 线性放大方式1（流量变化的解决方案）
不可变参数
填料种类 样品浓度 梯度方式 温度 柱长度 柱背压 操作时间 回收率 收集样品的纯度
为什么要进行线性放大？
只需开发一次方法（分析柱上的分离方法）
该方法可直接线性放大到任何尺寸直径的制备柱上
➢
大大减少方法开发过程的时间和成本
减少样品的损失（有时制备时的样品是非常珍贵的）
➢
获得最多的被纯化样品
线性放大系 数: 1000
147 mm x 25 cm 675 ml/min 20 ml injected
结论：即使放大1000倍，制备分离效果与分析柱分 离效果完全一致，既保证了高效分离制备同时又简 化制备过程方法开发，极大地降低成本。
Varian 制备色谱放大方式
线性放大
主要特征:
大规模的 “分析型”分离, * 较小的价格敏感性 – 设备和产品成本 * 对分辨率要求高, * 以数据分析和处理为出发点 * 快速、直接的放大，基本不需要在制备
制备色谱技术
❖ 制备色谱的目的是收集更多的 被纯化的产品，而不是用于分 析化合物的组分含量，产量从 几毫克到几公斤
❖ 制备色谱技术是得到高纯物的 最好的分离方法之一
制备色谱规模划分
mg-g级
小量制备， 色谱柱直径10-50mm
g-100g级 中试规模制备 色谱柱直径41-150mm
生产规模制备 色谱柱直径100-600mm
水平进行方法开发, * 简单的数学放大，有预见性
应用范围:
R&D 小量制备
高通量放大
主要特征:
“ 样品过载型” 分离, * 较大的价格敏感性 – 产品成本 * 较少强调分离效率，更强调选择性 * 主要以过程控制和文件证据的提供
为 出发点 * 需要方法开发和放大实验 * 重点在于填料的大小和色谱柱的
过载量
➢ 一、经验型放大 ➢ 二、完全线性放大
从分析到制备放大应用实例 —经验型放大
分析柱 5um 4.6mm*100mm 流速：1.0 ml/min
制备柱 12um 50mm*200mm 流速：80ml/min
结论：根据经验进行制备放大, 制备结果无法预测,
耗费时间、溶剂，增加成本，使制备过程复杂化
从分析到制备放大应用实例 — 线性放大
美国瓦里安公司
制 备 色 谱 系 统 概 述
制备液相的重要作用
临床前/临床试验 g
化学合成/结构鉴定/ 活性测试mg
产品量Kg
瓦里安液相色谱系统
具有30年生产从分析、少量制备到生产规模制备液相经验的 专业公司，在全球范围内已安装400多套大型制备色谱系统
分析液相色谱
工业规模制备色谱
半制备液相色谱 中试规模制备色谱
分析柱
产品名 填料
柱尺寸 Part No. 流动相:
Varian Dynamax Microsorb 100-5 C18 5um 250*4.6mm(柱长*内径) R0080200C5 甲醇/水=70/30
制备柱
Varian Dynamax Microsorb 100-5 C18 5um 250*21.4mm(柱长*内径) R0080220C5 甲醇/水=70/30
制备色谱中的重要问题
产品的纯度 处理量
(每单位时间所纯化的样品量) 回收率 生产时间 方法开发与放大
纯化成本
制备色谱分离参数之间的关系
上样量 ▪色谱柱规格 ▪填料性质 ▪样品性质
分离度
速度
上样量
制备色谱方法开发
分析HPLC
传统的开发方法
传统制备色谱
颗粒 长度 柱直径 流速 操作时间 消耗溶剂