灵芝多糖对小鼠T细胞蛋白激酶A和蛋激酶C活性的影响
灵芝多糖222
1.1 灵芝多糖的结构
灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides, GLP) 由肽多糖、葡萄糖、杂多糖等多糖均一体组成的混
合物 ,是灵芝中的主要有效成分 .从构成来看 ,灵芝多糖大 多为杂多糖 ,即除葡萄糖基外 ,还含有少量 D - 阿拉伯糖、 文本内容 D - 木糖、D - 半乳糖、D -甘露糖、L -岩藻糖、L -鼠李 糖、L -阿拉伯糖等单糖 .
端粒酶论是最近几年由上海药物研究所实验研究后提出的 一种新的灵芝抗癌机理。灵芝提取物能造成癌细胞端粒酶失 去活性 促使癌细胞在分裂后自然凋亡 。许多国外学者进行 大量的动物实验表明 ,灵芝的提取物对癌症的疗效能达到 50 %的转化率。
2.3
抗衰老作用
灵芝多糖具有多方面免疫功能 不论是非特异,免疫功 能 ,还是特异免疫功能 ,细胞免疫还是体液免疫 ,正常 小鼠还是老年小鼠,均能有效地维持集体的免疫功能 达 到抗衰老的目的,灵芝多糖的抗衰老作, 用与抗自由基 氧化的功能是密切相关的,它能阻止自由基损伤 ,终止 脂质过氧化 ,保护细胞、延缓衰老. 灵芝多糖还能促进 DNA合成 ,延长体外传代细胞的分裂代数的能力 ,推迟 衰老的作用.
2.4
抗辐射作用
辐射对机体造成损害的机制之一是产生大量自由 基 ,引发一系列脂质过氧化反应 ,引起细胞中核酸、蛋 白质分子结构的破坏 ,最终对各组织和器官造成严重的 损害 ,同时 ,辐射引发免疫功能降低 ,造成死亡.资料 显示 GLP合剂对辐照小鼠外周血白细胞及超氧化物歧化 酶 (SOD)活性的影响。发现受试组白细胞数量及 SOD 活性较模型组显著提高。
灵芝多糖存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体 中 ,是灵芝的主要有效成分之一。目前已分离到的有 200多种，其中大部分为β –葡聚糖，少数为α – 葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立 体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间
灵芝的化学成分及灵芝多糖药理作用研究进展
灵芝的化学成分及灵芝多糖药理作用研究进展摘要：灵芝在现代药品开发和应用上备受瞩目。
本文对灵芝的化学成分及灵芝多糖药理作用进行了综述，旨在为研究开发灵芝类制剂提供思路和方法。
关键词：灵芝；化学成分；灵芝多糖；药理作用灵芝是担子菌属灵芝属的药用真菌，又称“仙草”、“穗草”、“长生草”、“灵草”和“还魂草”[1]。
目前，世界上已发现约250种灵芝，其中约180种在中国分布，且灵芝在中国的分布范围比较广范。
华东、四川、云南、贵州、吉林、河北、广东、广西等地都是天然灵芝的主产区，其他地区也有人工种植。
由于灵芝的药用价值，灵芝的栽培、活性成分的提取、分离纯化及其生物活性的研究引起了医药界的广泛关注。
1. 化学成分灵芝具有多种化学成分，其生物活性呈现多样性。
经过大量的研究发现灵芝中有数百种化学成分，包括多糖、三萜类化合物、蛋白质、甾醇类、矿物质等。
其中，对灵芝多糖的化学组成和结构研究最为广泛。
1.1 多糖类多糖是由超过10个以上的单糖脱水聚合，通过糖苷键结合生成的糖链，是具有复杂结构的天然高分子化合物。
其分子式可表示为(C6H12O6)n，它是构成生物体的四种基本物质之一[2]。
灵芝多糖是灵芝中重要的活性成分之一，也是灵芝中研究最广泛，研究最深的化合物之一。
到目前为止，已发现有上百种灵芝多糖[3]。
1.2 三萜类灵芝三萜是灵芝中另外一种研究较多的有效成分，灵芝三萜类化合物种类较多，到目前为止已经发现灵芝中约有220种三萜类化合物，如灵芝孢子内酯、灵芝酮、灵芝醇等。
灵芝三萜的药理活性较为广泛，例如抗炎、抗肿瘤、镇静、抗衰老、降低胆固醇等作用[4]。
1.3 蛋白质多肽类灵芝中大约含有约8%至12%的蛋白质，蛋白质是组成细胞质和细胞器的主要物质。
灵芝蛋白质中的活性物质以不同的形式存在，它主要包括免疫调节蛋白、凝集素、糖蛋白和酶，它们具有抗氧化、抗肿瘤、凝血和免疫活性等作用。
除上述调节类型蛋白外，还发现灵芝中有石硫氨酸β合成酶样蛋白、盒型解旋酶样蛋白、帕西林样蛋白α/β水解酶样蛋白，这四种蛋白可以抑制血管紧张素转化酶的活性，使体内血压降低。
灵芝的化学成分和药理作用
灵芝的化学成分和药理作用张晓云杨春清( 中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所北京100094)摘要灵芝含有多糖、三萜类、核苷、甾醇、生物碱、氨基酸、微量元素等多种化学成分, 具有抗肿瘤、保肝、调节免疫、抗衰老等生物活性。
综述了近年来对灵芝的化学成分、药理作用等的研究进展。
关键词灵芝灵芝属灵芝多糖灵芝酸抗肿瘤调节免疫灵芝Ganoderma lucidum ( Leyss. ex Fr. )Karst. ( 英文名为Reishi mushroom) 又称瑞草、灵芝草, 日本人称为万年茸, 是灵芝属药、食两用真菌,世界各地均有分布, 以热带和亚热带地区为多。
在我国, 灵芝药用已有2 000 年的历史, 其子实体、孢子粉、菌丝体均可入药。
在《神农本草经》中, 记载着赤芝、黑芝、白芝、黄芝、紫芝等几种灵芝的功效。
大量药理研究表明, 灵芝具有调节免疫、保肝、抗瘤、抗衰老、提高机体耐缺氧能力等活性。
1化学成分灵芝的化学成分复杂, 从该属真菌中已分离得到灵芝多糖、三萜类化合物、核苷、氨基酸、甾醇、生物碱等多种成分。
1. 1灵芝多糖灵芝中的多糖主要有BN3B1、BN3B3、BN3B4、NB3B5[ 1] 、BN3C1、BN3C3、GLA2、GLA4、GLA6、GLA8、GLB2、GLB3、GLB4、GLB6、GLB7、GLB9、GLB10、GLC2 [ 2] 、T GLB1、T GLB8、TGLB10 [ 3] 、GLSP1、GLSP2、GLSP3、TGLP-2、T GLP-3、T GLP-6、TGLP-7 [ 4] 。
灵芝多糖一般由D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-木糖、L-岩藻糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖等单糖组成[ 5]。
1983 年, Usui 等从树舌灵芝G.applanatum 中分离出 2 种异质半乳糖, 一种由A-( 1→6) -D-吡喃半乳糖基组成的主链, 其中约50%糖残基在O-2 位置上被A-L-岩藻糖取代为侧链; 另一种约50% 糖残基被3-O-A-D-吡喃甘露糖基-L-吡喃岩藻糖基或A-L-岩藻糖基取代为侧链, 而且部分被乙酰化。
灵芝多糖的药理及保健作用及应用前景
食用菌学报 2004.11(4):57～62 Acta Edulis Fungi文章编号:1005-9873(2004)04-0057-06 灵芝多糖的药理和保健作用及应用前景郝瑞芳,李荣春3(云南农业大学食用菌研究所,云南昆明650201)摘 要:灵芝多糖是灵芝中的主要有效成分之一。
它作为一种重要的生物免疫调节剂,具有广泛而显著的药理活性,能提高机体免疫力、抑制肿瘤,是目前最有开发前途的药用资源和保健食品添加物。
关键词:灵芝多糖;药理作用;应用中图分类号:R151.3;S567.31 文献标识码:A灵芝[Ganoderm a l uci dum(Fr.)Karst.]是我国医药宝库中的一种珍贵药用菌,含有丰富的活性成分,灵芝多糖(Ganoderm a l uci dum polysaccharides,简称G L P)是灵芝“扶正固本”的有效成分[1]。
灵芝多糖是由肽多糖、葡聚糖、杂多糖等组成的混合物[2]。
葡聚糖中大部分为β2葡聚糖,少数为α2葡聚糖,而β2葡聚糖是其发挥活性的主要成分。
研究表明,灵芝多糖具有广泛的药理活性,具有提高机体免疫力、抑制肿瘤、增强机体耐缺氧能力、消除自由基、抗衰老等作用。
本文综述了灵芝多糖的药理和保健作用及其应用前景。
1 灵芝多糖的药理和保健作用1.1 灵芝多糖的免疫调节作用人体免疫系统是人体保持健康、避免发生各种疾病的防御系统。
人体免疫系统由胸腺、骨髓、脾脏、淋巴结等免疫器官和T细胞、B细胞、自然杀伤细胞(N K)、K细胞、巨噬细胞(Mψ)等免疫细胞以及亿万个免疫细胞因子(白介素、干扰素、各类刺激因子等)组成。
灵芝多糖作为生物免疫调节剂,主要通过以下几个途径作用于人体免疫系统:①激活巨噬细胞,促进T淋巴细胞(T H细胞)转变为活性T C细胞,提高B淋巴细胞和N K细胞的数量与活性;②激活网状内皮系统和补体系统;诱生多种免疫因子,如IFN(干扰素)、TN F(肿瘤坏死因子)等;③影响神经2内分泌2免疫系统网络;④促进细胞中核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)和蛋白质的合成,提高细胞内环核苷酸(c GMP、cAMP)的含量[3～5]。
灵芝多糖对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和CO-Ⅳ表达的影响
灵芝多糖对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和CO-Ⅳ表达的影响简介糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病，是由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引起的高血糖、多种代谢紊乱和多系统损伤。
糖尿病肾病是糖尿病的一种常见并发症，其病理变化包括肾小球毛细血管扩张、基底膜增厚、系膜区增宽等。
灵芝是一种具有多种生物活性成分的中药材，其中灵芝多糖是一种重要的药理活性成分，具有抗炎、抗氧化等生物活性，被广泛应用于治疗多种疾病。
本文通过实验证明了灵芝多糖具有改善肾组织损伤的作用。
研究方法选用10只6周龄的雄性SD大鼠，随机分为两组，每组5只。
其中一组为糖尿病模型组（T2DM），另一组为糖尿病模型灵芝多糖治疗组（T2DM+LZ）。
采用高脂饮食联合低剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法建立糖尿病大鼠模型，注射剂量为40mg/kg。
每周给予模型灵芝多糖治疗组200mg/kg的灵芝多糖，持续8周。
最后在实验结束时，对所有大鼠进行肾组织病理学检查、免疫组化检测及RT-PCR检测。
研究结果病理学检查在糖尿病模型组的大鼠肾脏组织中，出现较为明显的肾小球基底膜增厚和系膜区增宽，与正常大鼠组相比较明显；糖尿病模型灵芝多糖治疗组肾脏组织中，明显减轻了基底膜增厚和系膜区增宽的病理变化。
免疫组化检测TGF-β1是糖尿病肾病中最为重要的细胞因子之一，充分证明TGF-β1是糖尿病肾病的重要因素。
我们在糖尿病模型组大鼠肾脏组织中检测到TGF-β1表达量升高，与正常大鼠组相比较明显；糖尿病模型灵芝多糖治疗组肾脏组织中，TGF-β1表达量显著下降。
CO-Ⅳ是血管膜、基底膜及心脏肌细胞中的一种特异性黏附蛋白，主要存在于肾小球系膜区中。
我们在糖尿病模型组大鼠肾脏组织中检测到基底膜CO-Ⅳ表达量明显增加，与正常大鼠组相比较明显；糖尿病模型灵芝多糖治疗组肾脏组织中，CO-Ⅳ表达量显著降低。
RT-PCR检测使用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达情况，结果显示，与正常大鼠组相比，T2DM组的TGF-β1 mRNA表达显著升高，而T2DM+LZ组的TGF-β1 mRNA表达量明显降低。
多糖与动物免疫的研究现状
抗辐射 、 抗凝血 、 抗癌 、 抗炎 、 抗病毒 、 生虫 、 １２ 对 Ｔ 巴细胞功能的影响 抗寄 降 ． 淋 低血脂 ， 改善动物生产性 能等一系列多种生物功 枸杞多糖 、 女贞子多糖 、 黄芪多糖 是以增强 Ｔ
能。此外 ， 多糖具有高效 、 低毒 、 无残 留的特点 ， 符 合绿色饲料发展的发展要求 ， 因而受到人们的普遍 关注和研究 。 １ 多糖营养对免疫细胞 的影响
成反应作用 明显减弱 ， 明 Ａ Ｓ的免疫增强作用 表 Ｐ
Ｔ Ｒ释放法检测 Ｎ ｄ Ｋ细胞活性 ， 发现商陆多糖能 增强 Ｎ Ｋ细胞 活性 ， 促进 Ｎ Ｋ细胞毒 因子 （ Ｋ Ｆ ＮＣ ） 是通 过 增 强 Ｔ细 胞 功 能 而 发 挥 的。枸 杞 多糖 ｉｅｚ ｒ 葡 Ｋ细 （Ｂ ） Ｌ Ｐ 对小 鼠 Ｔ淋 巴细胞呈双向调 节作用。低浓 的产生。Ｄ ｎｏ等报道 ， 萄糖可通 过与 Ｎ Ｒ 受体结合 激活 Ｎ Ｋ细胞 ， 使其 杀伤 能力 增 度 ５ ｇｋ． ｍ ／ ｇ ｄ和 １ｍ ／ ｇｄ 注射 ７ ， 明显提 高 胞 Ｃ ３ ０ ｇ ｋ． ， ｄ可
键。结构单位可以连成直链 ， 以形成支链 ， 细胞信号转录过程 的影响进行了深入研究 ， 也可 直 证实灵 链一般 以 Ｏ一 ， 一苷键 （ ｔ １４ 如淀粉） Ｂ一１４一 和 ， 苷 芝多糖能增强小鼠巨噬细胞 的吞噬功能 ， 引起小 鼠 键（ 如纤维素 ） 连成 ； 支链 中链 与链 的连接点常是 巨噬细胞 ［ ａ 和［ Ｈ 升高 ， Ｃ ］ ｐ］ 增加 巨噬细胞 内
单糖组成的多糖称为杂多糖 ， 如阿拉伯胶是由戊糖 黄芪多糖不仅可以增强小 鼠腹腔巨噬细胞 的吞噬 和半乳糖等组成 。活性 多糖专指具有某种特殊生 功能和数量 ； 当归多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬
灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究
灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究卢玉振;李祥;周磊【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2016(022)002【摘要】目的:探究分析灵芝多糖的抑制作用及其对小鼠免疫系统的影响. 方法:随机选取95只小鼠并采用瘤细胞建立免疫抑制动物模型,将所选小鼠随机分为48例实验组和47例对照组,实验组小鼠采用灵芝多糖口服液灌注,对照组小鼠给予生理盐水灌注,观察并分析灵芝多糖对小鼠的存活期、抑瘤作用及免疫系统的影响作用. 结果:实验组肿瘤小鼠的生存期明显高于对照组肿瘤小鼠(P<0.05) ,并且实验组小鼠血清中TNF-α、IL-2水平显著提高,其肿瘤细胞NK活性及淋巴细胞增生率也显著高于对照组( P<0.05). 结论:灵芝多糖对小鼠肿瘤无直接抑制作用,其抗肿瘤功效主要是通过机体的免疫系统介导,并且灵芝多糖能够有效延长机体生存期.%Objective:To explore the inhibition of ganoderma polysaccharides and its effects on the im-mune system of mice. Method:95 mice were randomly selected and established the animal model of immu-nosuppression by tumor cell, then randomly divided into experimental group ( 48 cases) and control group ( 47 cases) . The mice in the experimental group were given ganoderma lucidum polysaccharide by oral liquid infusion, while the mice in the control group were given saline infusion, then the inluemce of ganoderma lu-cidum polysaccharides on mice survival time, tumor suppression effect and the immune system were observed and analyzed. Result:The survival period of the experimental mice in the experimentalgroup was obviously higher than that of the control group ( P <0.05) , and serum TNF alpha, IL-2 levels of mice in the experi-mental group increased significantly, the tumor cells, NK activity and lymphocyte proliferation rate was also significantly higher than that of control group ( P < 0.05) . Conclusion:Ganoderma lucidum polysaccharide has no direct inhibitory effect on tumor in mice and its anti-tumor effect is mainly mediated by the immune system, and ganoderma lucidum polysaccharides can effectively prolong thesurvival. time.【总页数】3页(P190-192)【作者】卢玉振;李祥;周磊【作者单位】江苏省淮安市第二人民医院检验科,江苏淮安 223002;江苏省淮安市第二人民医院检验科,江苏淮安 223002;江苏省淮安市第二人民医院检验科,江苏淮安 223002【正文语种】中文【相关文献】1.消瘿散结胶囊对S180肉瘤的抑瘤作用及小鼠耳肿胀影响的实验研究 [J], 张会平;刘宇;郭小培;张群;赵月2.白金消积胶囊对Lewis肺癌小鼠抑瘤作用及生存期影响的实验研究 [J], 贾英丽;吴心力;宋彩红;段玉敏3.灵芝多糖对荷瘤小鼠肿瘤免疫系统的影响 [J], 宁安红;曹婧;黄敏;张伟4.灵芝多糖和DCN合用对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究 [J], 杨琬芳;王桂琴;郝芳5.蛤蚧对S_(180)荷肉瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫系统的影响 [J], 尤琪;韩世愈;黄明莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多糖综述_论文-医学论文
多糖生物活性的研究进展摘要：多糖具有多种生物活性, 在生物体内起着重要作用, 随着生物学、化学等学科的飞速发展, 多糖的研究受到越来越广泛的重视。
本文就多糖的一些显著的生物活性及在此方面的研究进展作以下阐述。
关键词：多糖；生物活性；研究进展多糖(polysaccharides)广泛存在于动物、植物和微生物中，是构成生命的四大基本物质之一，它广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节,如免疫细胞间信息的传递与感受,细胞的转化、分裂及再生等活动。
多糖具有多种生物活性属非细胞毒物质, 同维持生物机能密切相关。
随着生物学、化学等学科的飞速发展,多糖的研究在医药领域受到越来越广泛的重视，并且逐渐成为当今新药开发的重要方向之一。
目前对多糖的免疫药理及构效关系研究已进入了分子和受体水平,但总体上对多糖的结构及其生物活性的作用机理研究尚不十分清楚。
据文献报道多糖具有抗氧化、调节免疫、降血糖、抗衰老、抗肿瘤等重要的生物活性。
本文着重介绍了以上几种生物活性，并对其近几年来的研究进展概述如下。
1多糖的生物活性1.1抗氧化自由基是人体内的正常代谢产物，具有调节细胞间的信号传递和细胞生长、抑制病毒和细菌的作用，一般情况下人体内的自由基处于动态平衡中,但是一旦该平衡被打破,就会造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病，如炎症、肿瘤、衰老和辐射损伤等。
以上疾病的发生和发展与体内的自由基有密切的关系,而许多果蔬可以清除这些自由基并且能够预防上述疾病的发生和发展。
沈建林等[1]发现香蕉多糖在抑制羟基自由基诱导红细胞溶血和小鼠肝脏脂质过氧化方面均具有明显的抗氧化活性，对心血管疾病有一定的疗效，并且有一定延缓衰老的作用。
李雪华等[2]发现大枣多糖在全血生理环境下对全血中活性氧的清除能力最强；中华猕猴桃多糖[3]、油柑多糖[4]在体外对OH-和O2-有较强的清除作用（P＜0.01）；陈留勇等[5]发现黄桃多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用；吴华慧等[6]利用AP-TEMED法，对荔枝、龙眼果肉对活性氧自由基O2-的清除作用以及对龙眼、荔枝多糖的抗脂质过氧化物的作用进行了测定，发现两种水果果肉对活性氧具有较强的清除能力，在防止老年性的退行性变、预防和延缓衰老方面均有显著疗效。
灵芝多糖对小鼠T细胞IL-2 IL-3 mRNA表达的影响
灵芝多糖对小鼠T细胞IL-2 IL-3 mRNA表达的影响李明春;梁东升;许自明;袁锦华;王慧力;雷林生【期刊名称】《解放军药学学报》【年(卷),期】2001(17)3【摘要】目的研究灵芝多糖GLB7对小鼠T细胞IL-2,IL-3 mRNA表达的影响,进一步探讨灵芝多糖免疫调节作用的机制.方法培养开始时加入不同浓度的GLB7(5、10、20、40mg*L-1),培养一定时间后,以RT-PCR和凝胶图像吸收度分析系统检测灵芝多糖(GLB7)与小鼠脾脏T细胞IL-2,IL-3 mRNA表达之间的量效关系.结果GLB7能剂量依赖性增强静息T细胞中IL-2和IL-3 mRNA的表达,分别于11h和20h达到高峰,而对活化的T细胞则不产生影响,此时培养上清中IL-2和IL-3活性与对照组比较亦有明显升高,并具有一定的剂量依赖关系.结论灵芝多糖免疫增强和抗肿瘤作用的基础与其在转录水平促进T细胞中IL-2和IL-3 mRNA的表达有关.【总页数】4页(P125-128)【作者】李明春;梁东升;许自明;袁锦华;王慧力;雷林生【作者单位】中国人民解放军第401医院,药剂科;中国人民解放军第401医院,药剂科;中国人民解放军第401医院,药剂科;中国人民解放军第401医院,药剂科;中国人民解放军第401医院,药剂科;中国人民解放军第一军医大学,药理教研室【正文语种】中文【中图分类】R979.5【相关文献】1.灵芝多糖体外对小鼠脾细胞IL-2,IL-3 mRNA表达的影响 [J], 王庆彪2.虎眼万年青多糖对小鼠T细胞及其细胞因子IL-2 mRNA表达的影响 [J], 石磊;段秀梅;胡梦林;刘文祥;谭岩;刘志强;刘淑莹3.灵芝多糖对前列腺素E2抑制小鼠脾细胞增殖及IL-1α,IL-2 mRNA表达的拮抗作用 [J], 张群;雷林生;余传林;吴曙光4.薄芝糖肽对小鼠T细胞IL-2、IL-3 mRNA表达的影响 [J], 王光;史晓丹;吴益民;刘昕昕5.齿密螺旋体对小鼠T细胞IL-2 mRNA表达水平及活性的影响 [J], 乔伟民;乔治因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灵芝的化学成分和药理作用
灵芝的化学成分和药理作用灵芝又称瑞草、灵芝草，日本人称为万年茸，是灵芝属药、食两用真菌，世界各地均有分布，以热带和亚热带地区为多。
在我国，灵芝药用已有2 000多年的历史，其子实体、孢子粉、菌丝体均可入药。
在《神农本草经》中，记载着赤芝、黑芝、白芝、黄芝、紫芝等几种灵芝的功效。
大量药理研究表明，灵芝具有调节免疫、保肝、抗肿瘤、抗衰老、提高机体耐缺氧能力等活性。
化学成分灵芝的化学成分复杂，从该属真菌中已分离得到灵芝多糖、三萜类化合物、核苷、氨基酸、甾醇、生物碱等多种成分。
药理作用2．1 调节免疫灵芝多糖具有广泛的免疫调节活性，能提高机体免疫活性。
实验证明，大多数具有生理活性的灵芝多糖是β-D-葡聚糖。
灵芝多糖提取物能提高癌症晚期病人的免疫功能。
肺癌病人、乳腺癌病人、肝癌病人、前列腺癌患者、膀胱癌患者和脑癌患者，用灵芝多糖治疗两周后，发现原生质中IL-2、IL-6和IFN-7的浓度有显著提高，NK细胞活性增强，而IL-1和TNF-α的水平明显下降。
2．2抗肿瘤Jiang等在灵芝子实体实验中发现通过修饰Akt／NF-KB信号，灵芝能抑制乳腺癌细胞MDA-MD-231的生长，通过抑制NF—KB；来抑制乳腺癌的浸润，抑制癌细胞增殖，Akt／NF-KB信号的负调节作用抑制Akt分子中第473位上丝氨酸磷酸化，对Akt表达负调节，通过NF-κB对细胞周期蛋白D1的负调节作用，使肿瘤细胞停滞在Go／G1期。
2．3抗病毒活性实验表明，灵芝中的蛋白多糖有抗病毒与酸结合的灵芝多糖(APBP)有抗疱疹病毒(HSV)-1和HSV-2的活性[283；灵芝三萜类化合物还能抗HIV，在MF-4细胞中，灵芝醇F和灵芝萜酮三醇抑制HIV-1的致病作用，gan01ucidic acid-A、灵芝萜酮二醇、灵芝萜酮三醇、1ucidimol-B和灵芝酸p明显抑制HIV-1蛋白水解酶的活性，使HIV-1增殖受阻。
2．4抗衰老、抗氧化用甲醇萃取灵芝可以得到酚类化合物，其具有抗氧化作用，能抑制脂类的过氧化，在休眠的孢子萌发时，该活性大大增强。
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・78・China Pharmac y 2001Vol.12No.2中国药房2001年第12卷第2期・实验研究・灵芝多糖对小鼠T 细胞蛋白激酶A 和蛋激酶C 活性的影响*李明春1,雷林生2,王庆彪2,梁东升1,许自明1,杨淑琴2,孙莉莎2(11解放军第401医院药剂科,青岛市266071;21第一军医大学药理教研室,广州市510515)中图分类号:R 967;R 97915文献标识码:B文章编号:1001-0408(2001)02-0078-02摘要:目的:观察灵芝多糖体外对小鼠T 细胞蛋白激酶A (P KA )和蛋白激酶C (P KC )活性是否有影响。
方法:采用反相离子对高效液相色谱法测定P KA 和P KC 活力。
结果:灵芝多糖GLB 7能引起T 细胞中P KA 和P KC 活性明显增强并具有剂量依赖性,达峰时间分别为5min 和20min ,于20min 及1h 分别恢复到基础水平;GLB 7还可引起T 细胞中P KC 发生质膜转位,并拮抗Stau 2ros p orine 对T 细胞中P KC 的抑制作用。
结果:灵芝多糖的免疫增强和抗肿瘤作用与其增强P KA 和P KC 活性有关。
关键词:灵芝;多糖;T 细胞;蛋白激酶A ;蛋白激酶C*基金项目:国家自然科学基金资助项目(39400165)Effects of G anoderma Pol y sacchrides on P KC and P KA Activities in Murine T CellsL I Min g chun ,L IAN G Don g shen g ,XU Zimin g (De p t.of Pharmac y ,No 401Hos p ital of PL A ,Qin g dao 266071)L EI Linshen g ,WAN G Qin g biao ,YAN G Shu q in ,SUN Lisha (De p t.of Pharmacolo gy ,First Militar y Medical U niversit y ,Guan g zhou 510515)ABSTRACT :A IM :To investi g ated t he effect s of Ganoderma p ol y sacct hride (GLB 7)on p rotein kinase A (P KA )and p rotein ki 2nase C (P KC )activitives in murine T cells.M E THODS :A new ion -p air reversed -p hase hi g h li q uid chromato g ra p h y met hod was used to determinate t he activities of P KA and P KC in T cells.R ESUL TS :GLB 7could markedl y increase t he activities of P KA and P KC in murine T cells in a dose -de p endent manner.The p eak time was at 5min and 20min and t he activities of P KA and P KC ret urned to basic level at 20min and 1.5h res p ectivel y .GLB 7could induce t ranslocation of P KC and anta g onizet he inhibition effect of stauros p orine (10μmol ・L -1)on P KC in T cells.CONCL U SION :The immuno p otentiatin g and antit u 2mour effect s of Ganoderma p ol y sacchride ma y be associated wit h it s activation on P KA and P KC in murine T cells.KEY WO RDS :Ganoderma L ucidum ;p ol y saccharide ;T cell ;p rotein kinase A ;p rotein kinase C灵芝多糖(Ganoderma L ucidum p ol y sacchrides )系灵芝[Ganoderma L ucidum (Le y ss.ex Fr.)Karst ]的主要有效成分,具有免疫增强和抗肿瘤作用。
以往我们发现[1～7],巨噬细胞是灵芝多糖作用的靶细胞,灵芝多糖能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能,引起小鼠巨噬细胞[Ca 2+]i 和[p H ]i 升高,增加巨噬细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油以及环磷酸酰苷、环磷酸鸟苷的生成,在转录水平促进小鼠巨噬细胞分泌细胞因子并影响其蛋白激酶活性等,但灵芝多糖是否对T 细胞产生影响尚不清楚。
本文利用反相离子对高效液相色谱测定技术,观察灵芝多糖对小鼠T 细胞中蛋白激酶A (P KA )和蛋白激酶C (P KC )活性的影响,以探讨灵芝多糖的免疫调节作用机制。
1材料和方法111药品与试剂灵芝多糖GLB 7,按文献方法提取[8,9],分子量9000;RPM-I-1640培养基,为Gibco 产品;胎牛血清(FCS )(杭州四季青生物工程材料研究所产品);Sucrose 、Triton -X 100、D T T 、PS 、D G 、Leu p etin 、Histone (Ⅲ-s )、Stauros p orine 、PMSF 、A TP 、AD P 、AM P 、cAM P 、ED TA 均为Si g ma 产品;甲醇、Pi 2CA ,皆为国产色谱纯;余为国内产品。
112动物BALB/c 纯系小鼠,♀♂不限,8wk 龄,体重(1918±114)g ,由第一军医大学实验动物中心提供。
113细胞制备与处理11311静息T 淋巴细胞:无菌取小鼠脾脏,制备脾单细胞悬液,经淋巴细胞分层液分层后,再经过尼龙毛柱处理后分离获取T 淋巴细胞,流式细胞仪(美国Becton Dikinson ,Mountain View ,C.A.)检测T 淋巴细胞数>90%,苔盼蓝染色细胞活率95%以上。
调整细胞浓度为5×106/ml ,置含5%CO 2、95%空气孵箱中,37℃孵育。
11312活化T 淋巴细胞:静息T 淋巴细胞加入Con A (终浓度3μg /ml ),调整细胞浓度为5×106/ml ,接种于多孔培养板中,置含5%CO 2、95%空气孵箱中,37℃孵育72h 。
114P KA 和P KC 活性测定11411P KA 和胞浆及膜性P KC 的制备:参考文献方法[10],于4℃以下进行操作。
11412P KA 和P KC 活性测定:按文献方法采用反相离子对高效液相色谱法测定[10]。
11413蛋白含量测定:按Lowr y 法测定。
11414蛋白激酶活力定义:一个酶活力单位相当于每分钟使组蛋白Histone (Ⅲ-s )磷酸化而消耗1nmol A TP 所需的酶量。
115数据处理结果以x ±s 表示,所有结果的显著性差异均采用t 检验。
2结果211G L B 7对小鼠T 细胞中P KA 活性的影响以40m g /L GLB 7与T 细胞一起孵育不同时间后,测定P KA 总活力。
结果显示,GLB 7可明显增强小鼠T 细胞中P KA 总活力,5min 达到峰值,至20min 恢复到基础水平。
在5min 时,GLB 7与P KA 的量效关系具有浓度依赖性(r =0.8838),详见表1。
实验测得P KA 的基础总活力为(71156±6152)nmol/(min ・m g )。
表1不同浓度灵芝多糖对小鼠T 细胞P KA 活性的影响(n =3,x ±s )GLB7(m g /L )P KA 总活性(nmol/(min ・m g ))实验组对照组10222118±12141*71132±614520309120±11128*68104±514740380146±19133*74163±814180430136±16128*70133±9125160480148±17156*72128±10137与对照组比较:*P <0.01212G L B7对T细胞中P KC总活力的影响以40m g/L GLB7与T细胞一起孵育不同时间后,测定P KC 总活力。
结果显示,GLB7可明显促进小鼠T细胞中P KC总活力的升高,20min达到峰值,至115h恢复到基础水平(详见表2)。
20min时GLB7与P KC的量效关系具有一定浓度依赖性(r= 0.9237)。
实验测得P KC的基础总活力为(182182±10104) nmol/(min・m g)。
表2G L B7不同时间作用下对小鼠T细胞P KC活性的影响(x±s,n=3)时间(min)P KC总活性(nmol/(min・m g)) GLB7(40m g/L)对照组5367173±16134**185118±1017810554172±18156**179166±910315688144±20164**178158±1211420754171±14161**181156±813625693147±19.22**182153±1213660264.58±12.33*183.69±10.2590186.78±9.24180.36±8.64与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01213G L B7对小鼠T细胞中胞浆和胞膜P KC活性的影响GLB7(40m g/L)与T细胞一起孵育不同时间后,分别测定T细胞中胞浆和膜性组分P KC活力,发现20min时,膜性P KC活性达峰值,而胞浆P KC活性达谷值,至115h皆恢复至基础水平。
说明GLB7在活化P KC过程中发生膜浆转位(见表3)。
胞浆和胞膜基础水平分别为(103164±7151)nmol/(min・m g)和(53135±6133)nmol/(min・m g)。