国产和进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果研究

[论著] X国产和进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果研究
耿艺介,汪武新,谢远辉,高世同,吴双,黄达娜,张仁利
摘要:目的评价目前我国常用的国产狂犬疫苗和进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果,为临床选择经济有效的狂犬疫苗提供依据。

方法用酶联免疫吸附法(E LISA)检测分别经长春、辽宁和法国维尔博三种狂犬疫苗全程免疫接种的300名暴露后接种者的血清狂犬病毒中和抗体,分析比较其抗体阳转率、实际抗体水平及接种副反应。

结果排除年龄、免疫-检测时间间隔等干扰因素的影响后,三种人用纯化Vero狂犬疫苗不仅抗体阳转率(分别为9310%,9312%,8617%)和抗体浓度(分别为16121?5127,15193?4135,15189?6117IU/ml)没有统计学差异,在接种副反应方面的差别也没有显著性。

结论国产与进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果具有较好的可比性,因其价格低可以在临床推广使用。

关键词:狂犬疫苗;免疫效果;副反应
中图分类号:R45712文献标识码:A文章编号:1009-9727(2005)06-1168-03
Study on the im mune effect of homebred rabies vaccines and import rabies v accines1GENG Yi-jie,WANG Wu-xin, XIE Yuan-hui,et al1(Shenzhen Municipal Center for Disease Con trol and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P1R1Ch-i na)
Abstract:Objective To evalvate the immune effect of homebred rabies vaccines and import rabies vaccines and provide scien-tific basis for cli nic selection of qualified vaccine1Methods IgG antibody against rabies was detected from300exposed subjects immunized with three kinds of homebred and import rabies vaccines by using ELISA1The an tibody and sideseffects were observed and compared among the three kinds of rabies vaccines1Results Exclusion of the in fluence of age,i mmunization time no significient differences on i mmune effect among ChangChun rabies vaccines,LiaoNing rabies vaccines and France rabies vaccines.The antibody positive conversion rates are9310%,9312%and8617%and the antibody concentrations are16121?5127,15193?4135,15189?
6117IU/ml,respecti vely1Conclusion The effecti veness of homebred vccine is comparable to the imported one and can be popu-larized for clinical application as it i s cheaper1
Key w ords:Rabies vaccine;Immunization results;Side effects
狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患疾病,其分布广泛。

我国是狂犬病高发国家之一,尤其在近几年,由于放松了对犬等动物的管理或由于外来病畜及野生动物的侵入使我国的狂犬病疫情更加严重。

在卫生部2004年关于27种法定重大传染病的疫情公告中,位居死亡数和病死率榜首的就是狂犬病[1]。

由于狂犬病的动物传染源广泛存在,控制难度很大,而且狂犬病一旦病发,临床上尚无特效疗法,死亡率几乎100%,所以预防接种安全可靠的狂犬疫苗以及进行疫苗的效果评定对于控制狂犬病的发生和传播具有重要的意义。

由于传统浓缩型疫苗存在有效性和安全性方面弊端,目前我国已经基本采用纯化型的狂犬疫苗,其中由法国安万特巴斯德公司生产的维尔博人用Vero 细胞狂犬病疫苗因其良好的稳定性受到国际认可。

但由于维尔博疫苗相对昂贵的价格使其在我国的临床应用受到了较大的限制。

国产Vero细胞狂犬病疫苗是上世纪九十年代开始研制生产,目前已有多个厂家获得了生产许可并投入了医疗市场。

但关于国产和进口疫苗的质量优劣却颇有争议。

虽然有资料显示国产的狂犬疫苗与法国维尔博疫苗在抗体滴度和阳转率方面无明显差别[2],但也有学者因近年来出现的接种了Vero细胞狂犬病疫苗却免疫失败的病例而遭受质疑[3]。

另外,我国以往的浓缩型狂犬疫苗副反应发生率较高,程度严重,和进口疫苗的安全性相比有较大的差距[4],而关于国产Vero细胞疫苗与进口同类疫苗在接种副反应方面的差别却鲜有报道。

因此,为比较国产和进口疫苗的接种有效性和接种副反应,本研究对深圳市疾病预防控制中心2005年3月至7月接诊的300名暴露后分别接种了两种国产疫苗和法
1168CHINA TR OPICAL MEDICINE Vol15No16September2005中国热带医学2005年第5卷第6期
X基金项目:国家教委留学回国人员启动基金(2001,243)
作者单位:深圳市疾病预防控制中心,广东深圳5180201
作者简介:耿艺介(1970~),女,医学硕士,主治医师,主要从事热带病及分子生物学研究1
通讯作者:张仁利(1963~),男,医学博士,主任医师,主要从事热带病及分子生物学研究1
国维尔博Vero细胞狂犬病疫苗的患者进行了效果评价,旨在为临床狂犬疫苗的合理选择提供实验依据。

1材料和方法
111观察对象选择300名于2005年3~7月间被温血动物咬伤或抓伤且以往未曾接种过狂犬疫苗的受种者为观察对象,由受种者自愿选择疫苗种类,分别接种长春长生生物科技股份有限公司生产的人用狂犬纯化疫苗(Vero细胞)(1ml/支,\215I U/ml)、辽宁生物技术公司生产的冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero 细胞)(015ml/支,\5I U/ml)和法国安万特巴斯德公司生产的维尔博人用Vero细胞狂犬病疫苗(015ml/支, \5I U/ml)。

112免疫接种及接种后副反应观察疫苗保存于2 ~8e,均在有效期内注射受种者的上臂三角肌内。

于第0、3、7、14、28d,共5针。

记录接种后0h、24h和第7d注射部位的局部反应及全身反应。

113血样采集于免疫程序完成2~4周后开始采集受种者的静脉血,分离血清用于抗体测定。

待检血清保存于2~8e,于采样后5d内检定血清抗体。

114抗体检测ELISA试剂由中国生物制品集团武汉生物制品研究所提供,在有效期内使用。

阳性对照经小鼠血清中和实验测定,确定其中狂犬病毒抗体为015I U/ml的人特异性免疫球蛋白。

采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗狂犬病毒抗体IgG,用自动酶标仪读取光密度值(OD450)。

2结果与分析
211接种对象年龄均衡性由于免疫者年龄对于免疫效果的影响不能忽视,有研究表明年龄与狂犬疫苗的阳转率呈负相关[4],所以本研究对三组被试的年龄组成进行了均衡性检验。

经检验,V2=01352,P= 01986>0105(见表1),可认为不同疫苗接种组具有相同的免疫年龄分布。

表1三组疫苗免疫年龄均衡性检验
Table1Equili bri um test of i mmune age of the three group patients
疫苗分组Vaccine group
年龄组(年龄)
[20岁21~45岁\46岁
合计
Total
长春Chang chun315132114
辽宁Liaoning26392388
法国France27422998
合计Total8413284300
V2=01352,P=01986。

212接种对象免疫-检测间隔时间均衡性有研究表明,狂犬疫苗在注射后的7~14d机体开始产生中和抗体,30~60d时效价最高,达有效阈值的3~4倍以上,60d后逐步下降[5]。

为排除免疫者完成全程接种与采血检测抗体之间的时间间隔对于抗体水平的影响,本研究对三组被试的免疫-检测间隔组成进行了均衡性检验。

经检验,V2=31394,P=01494>0105 (见表2),所以本研究的实验结果可基本排除免疫时间方面的影响。

表2三组疫苗免疫检测间隔时间均衡性检验Table2Equilibrium tes t of i mmune interval of the three group patients
疫苗分组
Vaccine group
2~3周3~4周>4周后
合计
Total
长春Chang chun205836114
辽宁Liaoning18462488
法国France26423098
合计Total6414690300 213定性实验分析疫苗接种阳性率由于试剂盒阳性对照系经小鼠血清中和实验确定其中狂犬病毒人特异性免疫球蛋白含量为015IU/ml,因此样品吸光值大于阳性对照吸光值者,表示该样品中的狂犬病毒抗体达到015IU/ml,判为阳性;样品吸光值小于阳性对照吸光值者,表示该样品中的狂犬病毒抗体未达到015I U/ml,判为阴性。

三种疫苗免疫的阳性率结果经统计学检验,V2=31235,P=01198>0105,可认为没有统计学差异(见表3)。

表3ELISA检测狂犬抗体阳性率结果比较
Table3Results of Antibody positive rate of the three group patients 疫苗分组
Vaccine group
样本数
Negative cases
阳性样本数
Positive cases
阳转率(%)
Positi ve rate(%)长春Chang chun1141069310
辽宁Liaoning88829312
法国France98858617
合计Total3002739110
214定量实验分析血清抗体效价将阳性对照用稀释液作系列稀释,并参照以上定性试验结果稀释被检血清样品,使样品的吸光度落入系列稀释的阳性对照范围内。

将稀释后的血清样品和阳性对照进行同步检测,对酶联免疫反应后阳性对照抗体含量(Y)与其OD值(X)进行直线回归分析。

由直线回归方程推算稀释后样品的抗体含量,再根据相应的稀释倍数得出被检血清内的实际抗体含量。

将三组被检血清内的实际抗体含量进行统计学分析和比较,F值=01110, P=01896>0105,组间无统计学差异,说明三组疫苗接种后的血清抗体含量方面也没有显著性差别(结果见表4)。

215接种副反应分析为便于对副反应的观察与分析,将副反应分为五级:0级指没有任何与接种相关的副反应;1级指仅注射局部有持续24h以内的红、肿、热、痛、皮疹、硬结;2级指局部反应持续24h以上或伴有轻微全身症状(体温不高于38e),可于3~5d内自愈;3级指出现明显的头痛、眩晕、寒战、高热(体温高
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中国热带医学2005年第5卷第6期CHIN A TROPICA L MED ICINE Vol15No16Septe mber2005
于38e)、肌肉关节痛、胃肠功能紊乱等全身反应,经医学干预方可缓解;4级:出现急性荨麻疹、支气管哮喘、过敏性休克等严重变态反应。

三种疫苗接种者按此进行副反应评估后的结果经统计学检验(表5),V2 =21123,P=01346>0105,说明三组疫苗在接种副反应方面也没有统计学差异。

表4ELISA检测狂犬抗体含量结果比较Table4Resul ts of Antibody concentration of the three group patients
疫苗分组Vaccine group 样本量
No1case
抗体含量(IU/ml)
Anti body concentration
长春Chang chun11416121?5127辽宁Liaoning8815193?4135法国France9815189?6117
表5狂犬疫苗接种副反应比较
Table5Results of side effects of the three group patients
疫苗分组Vaccine group
副反应级别Level of side effects
0级1级2级3级4级
合计
Total
长春Chang chun1028310114辽宁Liaoning80620088
法国France93401098
合计Total27518520300
3讨论
注射狂犬疫苗是至今为止预防狂犬病发作致死的唯一公认的有效途径,疫苗接种不仅可用于高危人群的暴露前免疫,而且还可用于接触了狂犬病或可疑狂犬病动物的人群的暴露后免疫。

自1885年法国科学家巴斯德发明第一支狂犬疫苗以来,人们对狂犬疫苗的制备和接种方法进行了不断的改进,尤其是上世纪六十年代随着细胞培养技术的发展而出现的Vero 传代细胞细胞系疫苗无论在有效性还是安全性方面都具有很大的优势。

Vero细胞为非洲绿猴(Cercop-ithecus aethiops monkey)肾细胞的传代细胞系,是经W HO批准用做人类疫苗的生产基质[6]。

本研究中涉及的三种疫苗都是Vero细胞精制狂犬疫苗,其中法国维尔博疫苗为当前国际预防医学界公认的高效疫苗,两种国产疫苗都是获得我国卫生部批准文号的产品,为国家二类新药。

狂犬疫苗的免疫效果不应仅仅反映在抗体阳转率、抗体水平等指标上,还要考虑接种后副反应的发生率和发生程度,只有兼具有效性和安全性的疫苗才能使疫苗的免疫效果得到保证。

本研究结果显示,长春产、辽宁产和法国产狂犬疫苗在排除了免疫年龄和免疫时隔等重要干扰因素的影响后,其免疫效果在抗体阳转率、血清抗体水平以及接种后副反应等方面均无统计学差异,说明国产疫苗在主要质量指标上与国外同类产品无明显差异,国内正规厂家的疫苗质量也基本一致。

该结论对于狂犬病疫苗的推广应用具有重要的实际意义。

我国Vero细胞精制狂犬疫苗的生产和使用时间不长,目前尚未得到患者和医生主观上的普遍认可,有条件的病人都会选择接种进口疫苗。

然而,狂犬病在低收入阶层中的危害却不容忽视,他们因其居住、工作场所的复杂性,被患狂犬病动物伤害的机会相对更大,在无法承受进口疫苗昂贵价格又不信任国产疫苗的情况下,不可避免地造成免疫空白,这一点也是近年来我国狂犬病死亡率一直居高不下的主要原因之一。

因此在证实了进口疫苗与国产疫苗的预防效果没有明显差异的情况下,推广使用价格相对较低的国产狂犬疫苗,有利于提高各类犬伤病人的抗体保护性,最大限度地消除发生狂犬病的隐患。

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2001:1871
收稿日期:2005-06-28
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0~9岁发病率最高占42117%,散居儿童、学生和幼托儿童的发病占总病例的51156%,农村丘陵地区发病占28104%,因此重点人群应放在婴幼儿上,应抓好上述人群的防治,采取防止/病从口入0的有效措施,落实健康教育、切断传播途径的综合预防控制措施,在夏秋季节对重点人群开展口服菌痢疫苗的接种,从而降低细菌性痢疾的发生和流行。

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收稿日期:2005-05-17
1170CHINA TR OPICAL MEDICINE Vol15No16September2005中国热带医学2005年第5卷第6期。