植物表达载体 Pcambia1302 序列图谱
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
载体序列
LOCUS AF234298 10549 bp DNA circular SYN 24-APR-2000 DEFINITION Binary vector pCAMBIA-1302, complete sequence.
ACCESSION AF234298
VERSION AF234298.1 GI:7638073
KEYWORDS .
SOURCE Binary vector pCAMBIA-1302
ORGANISM Binary vector pCAMBIA-1302
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1 (sites)
AUTHORS Hajdukiewicz,P., Svab,Z. and Maliga,P.
TITLE The small, versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation
JOURNAL Plant Mol. Biol. 25 (6), 989-994 (1994)
PUBMED 7919218
REFERENCE 2 (bases 1 to 10549)
AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W.,
Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L.,
Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A.
TITLE A comprehensive set of modular vectors for advanced manipulations and efficient transformation of plants
JOURNAL Unpublished
REMARK Full description of constructs
REFERENCE 3 (bases 1 to 10549)
AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W.,
Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L.,
Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (15-FEB-2000) CAMBIA, Clunies Ross St, Black Mountain / GPO Box 3200, Canberra, ACT 2601, Australia
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10549
/organism="Binary vector pCAMBIA-1302"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:118390"
CDS 2..757
/note="mgfp5* His6"
/codon_start=1
/product="mGFP5*, hexaHis tagged"
/protein_id="AAF65344.1"
/db_xref="GI:7638075"
/translation="MVDLTSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYG KLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTFSYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTI FFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADK QKNGIKANFKTRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEK RDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYKASHHHHHHV"
misc_feature 786..1038
/note="nos (nopaline synthase) 3'UTR (polyA signal)"
misc_feature 1076..1101
/note="right border T-DNA repeat"
misc_feature complement(2142..3142)
/note="STA region from pVS1 plasmid"
rep_origin complement(3735..4735)
/note="pVS1-REP; replication origin from pVS1"
misc_feature complement(5145..5405)
/note="bom site from pBR322"
rep_origin complement(5545..5825)
/note="pBR322 origin of replication"
CDS complement(6116..6910)
/note="aadA (kanamycin resistance) gene amplified from
pIG121Hm"
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/protein_id="AAF65345.1"
/db_xref="GI:7638076"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLK MTDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEY EDEQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWE EDTPFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKW YDIAFCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
misc_feature 7335..7360
/note="left border repeat from C58 T-DNA"
misc_feature 7427..7635
/note="CaMV 3'UTR (polyA signal)"
CDS complement(7651..8676)
/note="hptII (hygromycin resistance) gene"
/codon_start=1
/product="hygromycin phosphotransferase"
/protein_id="AAF65346.1"
/db_xref="GI:7638077"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS TRPRAKK"
promoter complement(8712..9492)
/note="CaMV35S2; CaMV 35S promoter, duplicated"
promoter 9640..9694
/note="PlacZ; lacZ promoter"
CDS 9722..9955
/codon_start=1
/product="LacZ alpha fragment"
/protein_id="AAF65343.1"
/db_xref="GI:7638074"
/translation="MTMITNSSSVPGDPLESTCRHASLALAVVLQRRDWENPGVTQLN RLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEC"
misc_feature 9736..9792
/note="pUC18 MCS; polylinker"
promoter 10006..10543
/note="CaMV35S; 35S promoter from CaMV"
ORIGIN
1 catggtagat ctgactagta aaggagaaga acttttcact ggagttgtcc caattcttgt 61 tgaattagat ggtgatgtta atgggcacaa attttctgtc agtggagagg gtgaaggtga 121 tgcaacatac ggaaaactta cccttaaatt tatttgcact actggaaaac tacctgttcc 181 gtggccaaca cttgtcacta ctttctctta tggtgttcaa tgcttttcaa gatacccaga 241 tcatatgaag cggcacgact tcttcaagag cgccatgcct gagggatacg tgcaggagag 301 gaccatcttc ttcaaggacg acgggaacta caagacacgt gctgaagtca agtttgaggg 361 agacaccctc gtcaacagga tcgagcttaa gggaatcgat ttcaaggagg acggaaacat 421 cctcggccac aagttggaat acaactacaa ctcccacaac gtatacatca tggccgacaa 481 gcaaaagaac ggcatcaaag ccaacttcaa gacccgccac aacatcgaag acggcggcgt 541 gcaactcgct gatcattatc aacaaaatac tccaattggc gatggccctg tccttttacc 601 agacaaccat tacctgtcca cacaatctgc cctttcgaaa gatcccaacg aaaagagaga 661 ccacatggtc cttcttgagt ttgtaacagc tgctgggatt acacatggca tggatgaact 721 atacaaagct agccaccacc accaccacca cgtgtgaatt ggtgaccagc tcgaatttcc 781 ccgatcgttc aaacatttgg caataaagtt tcttaagatt gaatcctgtt gccggtcttg 841 cgatgattat catataattt ctgttgaatt acgttaagca tgtaataatt aacatgtaat 901 gcatgacgtt atttatgaga tgggttttta tgattagagt cccgcaatta tacatttaat 961 acgcgataga aaacaaaata tagcgcgcaa actaggataa attatcgcgc gcggtgtcat 1021 ctatgttact agatcgggaa ttaaactatc agtgtttgac aggatatatt ggcgggtaaa 1081 cctaagagaa aagagcgttt attagaataa cggatattta aaagggcgtg aaaaggttta 1141 tccgttcgtc catttgtatg tgcatgccaa ccacagggtt cccctcggga tcaaagtact 1201 ttgatccaac ccctccgctg ctatagtgca gtcggcttct gacgttcagt gcagccgtct 1261 tctgaaaacg acatgtcgca caagtcctaa gttacgcgac aggctgccgc cctgcccttt 1321 tcctggcgtt ttcttgtcgc gtgttttagt cgcataaagt agaatacttg cgactagaac 1381 cggagacatt acgccatgaa caagagcgcc gccgctggcc tgctgggcta tgcccgcgtc 1441 agcaccgacg accaggactt gaccaaccaa cgggccgaac tgcacgcggc cggctgcacc
1501 aagctgtttt ccgagaagat caccggcacc aggcgcgacc gcccggagct ggccaggatg 1561 cttgaccacc tacgccctgg cgacgttgtg acagtgacca ggctagaccg cctggcccgc 1621 agcacccgcg acctactgga cattgccgag cgcatccagg aggccggcgc gggcctgcgt 1681 agcctggcag agccgtgggc cgacaccacc acgccggccg gccgcatggt gttgaccgtg 1741 ttcgccggca ttgccgagtt cgagcgttcc ctaatcatcg accgcacccg gagcgggcgc 1801 gaggccgcca aggcccgagg cgtgaagttt ggcccccgcc ctaccctcac cccggcacag 1861 atcgcgcacg cccgcgagct gatcgaccag gaaggccgca ccgtgaaaga ggcggctgca 1921 ctgcttggcg tgcatcgctc gaccctgtac cgcgcacttg agcgcagcga ggaagtgacg 1981 cccaccgagg ccaggcggcg cggtgccttc cgtgaggacg cattgaccga ggccgacgcc 2041 ctggcggccg ccgagaatga acgccaagag gaacaagcat gaaaccgcac caggacggcc 2101 aggacgaacc gtttttcatt accgaagaga tcgaggcgga gatgatcgcg gccgggtacg 2161 tgttcgagcc gcccgcgcac gtctcaaccg tgcggctgca tgaaatcctg gccggtttgt 2221 ctgatgccaa gctggcggcc tggccggcca gcttggccgc tgaagaaacc gagcgccgcc 2281 gtctaaaaag gtgatgtgta tttgagtaaa acagcttgcg tcatgcggtc gctgcgtata 2341 tgatgcgatg agtaaataaa caaatacgca aggggaacgc atgaaggtta tcgctgtact 2401 taaccagaaa ggcgggtcag gcaagacgac catcgcaacc catctagccc gcgccctgca 2461 actcgccggg gccgatgttc tgttagtcga ttccgatccc cagggcagtg cccgcgattg 2521 ggcggccgtg cgggaagatc aaccgctaac cgttgtcggc atcgaccgcc cgacgattga 2581 ccgcgacgtg aaggccatcg gccggcgcga cttcgtagtg atcgacggag cgccccaggc 2641 ggcggacttg gctgtgtccg cgatcaaggc agccgacttc gtgctgattc cggtgcagcc 2701 aagcccttac gacatatggg ccaccgccga cctggtggag ctggttaagc agcgcattga 2761 ggtcacggat ggaaggctac aagcggcctt tgtcgtgtcg cgggcgatca aaggcacgcg 2821 catcggcggt gaggttgccg aggcgctggc cgggtacgag ctgcccattc ttgagtcccg 2881 tatcacgcag cgcgtgagct acccaggcac tgccgccgcc ggcacaaccg ttcttgaatc 2941 agaacccgag ggcgacgctg cccgcgaggt ccaggcgctg gccgctgaaa ttaaatcaaa
3001 actcatttga gttaatgagg taaagagaaa atgagcaaaa gcacaaacac gctaagtgcc 3061 ggccgtccga gcgcacgcag cagcaaggct gcaacgttgg ccagcctggc agacacgcca 3121 gccatgaagc gggtcaactt tcagttgccg gcggaggatc acaccaagct gaagatgtac 3181 gcggtacgcc aaggcaagac cattaccgag ctgctatctg aatacatcgc gcagctacca 3241 gagtaaatga gcaaatgaat aaatgagtag atgaatttta gcggctaaag gaggcggcat 3301 ggaaaatcaa gaacaaccag gcaccgacgc cgtggaatgc cccatgtgtg gaggaacggg 3361 cggttggcca ggcgtaagcg gctgggttgt ctgccggccc tgcaatggca ctggaacccc 3421 caagcccgag gaatcggcgt gacggtcgca aaccatccgg cccggtacaa atcggcgcgg 3481 cgctgggtga tgacctggtg gagaagttga aggccgcgca ggccgcccag cggcaacgca 3541 tcgaggcaga agcacgcccc ggtgaatcgt ggcaagcggc cgctgatcga atccgcaaag 3601 aatcccggca accgccggca gccggtgcgc cgtcgattag gaagccgccc aagggcgacg 3661 agcaaccaga ttttttcgtt ccgatgctct atgacgtggg cacccgcgat agtcgcagca 3721 tcatggacgt ggccgttttc cgtctgtcga agcgtgaccg acgagctggc gaggtgatcc 3781 gctacgagct tccagacggg cacgtagagg tttccgcagg gccggccggc atggccagtg 3841 tgtgggatta cgacctggta ctgatggcgg tttcccatct aaccgaatcc atgaaccgat 3901 accgggaagg gaagggagac aagcccggcc gcgtgttccg tccacacgtt gcggacgtac 3961 tcaagttctg ccggcgagcc gatggcggaa agcagaaaga cgacctggta gaaacctgca 4021 ttcggttaaa caccacgcac gttgccatgc agcgtacgaa gaaggccaag aacggccgcc 4081 tggtgacggt atccgagggt gaagccttga ttagccgcta caagatcgta aagagcgaaa 4141 ccgggcggcc ggagtacatc gagatcgagc tagctgattg gatgtaccgc gagatcacag 4201 aaggcaagaa cccggacgtg ctgacggttc accccgatta ctttttgatc gatcccggca 4261 tcggccgttt tctctaccgc ctggcacgcc gcgccgcagg caaggcagaa gccagatggt 4321 tgttcaagac gatctacgaa cgcagtggca gcgccggaga gttcaagaag ttctgtttca 4381 ccgtgcgcaa gctgatcggg tcaaatgacc tgccggagta cgatttgaag gaggaggcgg 4441 ggcaggctgg cccgatccta gtcatgcgct accgcaacct gatcgagggc gaagcatccg
4501 ccggttccta atgtacggag cagatgctag ggcaaattgc cctagcaggg gaaaaaggtc 4561 gaaaaggtct ctttcctgtg gatagcacgt acattgggaa cccaaagccg tacattggga 4621 accggaaccc gtacattggg aacccaaagc cgtacattgg gaaccggtca cacatgtaag 4681 tgactgatat aaaagagaaa aaaggcgatt tttccgccta aaactcttta aaacttatta 4741 aaactcttaa aacccgcctg gcctgtgcat aactgtctgg ccagcgcaca gccgaagagc 4801 tgcaaaaagc gcctaccctt cggtcgctgc gctccctacg ccccgccgct tcgcgtcggc 4861 ctatcgcggc cgctggccgc tcaaaaatgg ctggcctacg gccaggcaat ctaccagggc 4921 gcggacaagc cgcgccgtcg ccactcgacc gccggcgccc acatcaaggc accctgcctc 4981 gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga gacggtcaca 5041 gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt 5101 ggcgggtgtc ggggcgcagc catgacccag tcacgtagcg atagcggagt gtatactggc 5161 ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac 5221 cgcacagatg cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg 5281 actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa 5341 tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc 5401 aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc 5461 ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 5521 aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 5581 cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 5641 cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 5701 aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 5761 cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 5821 ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 5881 ggacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta 5941 gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc
6001 agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg 6061 acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgcattct aggtactaaa 6121 acaattcatc cagtaaaata taatatttta ttttctccca atcaggcttg atccccagta 6181 agtcaaaaaa tagctcgaca tactgttctt ccccgatatc ctccctgatc gaccggacgc 6241 agaaggcaat gtcataccac ttgtccgccc tgccgcttct cccaagatca ataaagccac 6301 ttactttgcc atctttcaca aagatgttgc tgtctcccag gtcgccgtgg gaaaagacaa 6361 gttcctcttc gggcttttcc gtctttaaaa aatcatacag ctcgcgcgga tctttaaatg 6421 gagtgtcttc ttcccagttt tcgcaatcca catcggccag atcgttattc agtaagtaat 6481 ccaattcggc taagcggctg tctaagctat tcgtataggg acaatccgat atgtcgatgg 6541 agtgaaagag cctgatgcac tccgcataca gctcgataat cttttcaggg ctttgttcat 6601 cttcatactc ttccgagcaa aggacgccat cggcctcact catgagcaga ttgctccagc 6661 catcatgccg ttcaaagtgc aggacctttg gaacaggcag ctttccttcc agccatagca 6721 tcatgtcctt ttcccgttcc acatcatagg tggtcccttt ataccggctg tccgtcattt 6781 ttaaatatag gttttcattt tctcccacca gcttatatac cttagcagga gacattcctt 6841 ccgtatcttt tacgcagcgg tatttttcga tcagtttttt caattccggt gatattctca 6901 ttttagccat ttattatttc cttcctcttt tctacagtat ttaaagatac cccaagaagc 6961 taattataac aagacgaact ccaattcact gttccttgca ttctaaaacc ttaaatacca 7021 gaaaacagct ttttcaaagt tgttttcaaa gttggcgtat aacatagtat cgacggagcc 7081 gattttgaaa ccgcggtgat cacaggcagc aacgctctgt catcgttaca atcaacatgc 7141 taccctccgc gagatcatcc gtgtttcaaa cccggcagct tagttgccgt tcttccgaat 7201 agcatcggta acatgagcaa agtctgccgc cttacaacgg ctctcccgct gacgccgtcc 7261 cggactgatg ggctgcctgt atcgagtggt gattttgtgc cgagctgccg gtcggggagc 7321 tgttggctgg ctggtggcag gatatattgt ggtgtaaaca aattgacgct tagacaactt 7381 aataacacat tgcggacgtt tttaatgtac tgaattaacg ccgaattaat tcgggggatc 7441 tggattttag tactggattt tggttttagg aattagaaat tttattgata gaagtatttt
7501 acaaatacaa atacatacta agggtttctt atatgctcaa cacatgagcg aaaccctata 7561 ggaaccctaa ttcccttatc tgggaactac tcacacatta ttatggagaa actcgagctt 7621 gtcgatcgac agatccggtc ggcatctact ctatttcttt gccctcggac gagtgctggg 7681 gcgtcggttt ccactatcgg cgagtacttc tacacagcca tcggtccaga cggccgcgct 7741 tctgcgggcg atttgtgtac gcccgacagt cccggctccg gatcggacga ttgcgtcgca 7801 tcgaccctgc gcccaagctg catcatcgaa attgccgtca accaagctct gatagagttg 7861 gtcaagacca atgcggagca tatacgcccg gagtcgtggc gatcctgcaa gctccggatg 7921 cctccgctcg aagtagcgcg tctgctgctc catacaagcc aaccacggcc tccagaagaa 7981 gatgttggcg acctcgtatt gggaatcccc gaacatcgcc tcgctccagt caatgaccgc 8041 tgttatgcgg ccattgtccg tcaggacatt gttggagccg aaatccgcgt gcacgaggtg 8101 ccggacttcg gggcagtcct cggcccaaag catcagctca tcgagagcct gcgcgacgga 8161 cgcactgacg gtgtcgtcca tcacagtttg ccagtgatac acatggggat cagcaatcgc 8221 gcatatgaaa tcacgccatg tagtgtattg accgattcct tgcggtccga atgggccgaa 8281 cccgctcgtc tggctaagat cggccgcagc gatcgcatcc atagcctccg cgaccggttg 8341 tagaacagcg ggcagttcgg tttcaggcag gtcttgcaac gtgacaccct gtgcacggcg 8401 ggagatgcaa taggtcaggc tctcgctaaa ctccccaatg tcaagcactt ccggaatcgg 8461 gagcgcggcc gatgcaaagt gccgataaac ataacgatct ttgtagaaac catcggcgca 8521 gctatttacc cgcaggacat atccacgccc tcctacatcg aagctgaaag cacgagattc 8581 ttcgccctcc gagagctgca tcaggtcgga gacgctgtcg aacttttcga tcagaaactt 8641 ctcgacagac gtcgcggtga gttcaggctt tttcatatct cattgccccc cgggatctgc 8701 gaaagctcga gagagataga tttgtagaga gagactggtg atttcagcgt gtcctctcca 8761 aatgaaatga acttccttat atagaggaag gtcttgcgaa ggatagtggg attgtgcgtc 8821 atcccttacg tcagtggaga tatcacatca atccacttgc tttgaagacg tggttggaac 8881 gtcttctttt tccacgatgc tcctcgtggg tgggggtcca tctttgggac cactgtcggc 8941 agaggcatct tgaacgatag cctttccttt atcgcaatga tggcatttgt aggtgccacc
9001 ttccttttct actgtccttt tgatgaagtg acagatagct gggcaatgga atccgaggag 9061 gtttcccgat attacccttt gttgaaaagt ctcaatagcc ctttggtctt ctgagactgt 9121 atctttgata ttcttggagt agacgagagt gtcgtgctcc accatgttat cacatcaatc 9181 cacttgcttt gaagacgtgg ttggaacgtc ttctttttcc acgatgctcc tcgtgggtgg 9241 gggtccatct ttgggaccac tgtcggcaga ggcatcttga acgatagcct ttcctttatc 9301 gcaatgatgg catttgtagg tgccaccttc cttttctact gtccttttga tgaagtgaca 9361 gatagctggg caatggaatc cgaggaggtt tcccgatatt accctttgtt gaaaagtctc 9421 aatagccctt tggtcttctg agactgtatc tttgatattc ttggagtaga cgagagtgtc 9481 gtgctccacc atgttggcaa gctgctctag ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt 9541 tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag 9601 cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac cccaggcttt acactttatg 9661 cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac aggaaacagc 9721 tatgaccatg attacgaatt cgagctcggt acccggggat cctctagagt cgacctgcag 9781 gcatgcaagc ttggcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt 9841 tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga 9901 ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat gctagagcag 9961 cttgagcttg gatcagattg tcgtttcccg ccttcagttt agcttcatgg agtcaaagat 10021 tcaaatagag gacctaacag aactcgccgt aaagactggc gaacagttca tacagagtct 10081 cttacgactc aatgacaaga agaaaatctt cgtcaacatg gtggagcacg acacacttgt 10141 ctactccaaa aatatcaaag atacagtctc agaagaccaa agggcaattg agacttttca 10201 acaaagggta atatccggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcactttat 10261 tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa 10321 ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag 10381 gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga 10441 tatctccact gacgtaaggg atgacgcaca atcccactat ccttcgcaag acccttcctc
10501 tatataagga agttcatttc atttggagag aacacggggg actcttgac //
pCambia1391Z 植物表达载体
北京华越洋?生物?首页关于我们新闻中?心产品展?示在线留?言加?入我们 联系我们 pCambia1391Z pCambia1391Z 产品编号载体名称北京华越洋?生物VECT0010 pCambia1391Z pCambia 1391Z 载体基本信息 出品公司:Cambia 载体名称: pCambia1391Z, pCambia 1391Z 质粒类型: 植物表达载体?高拷贝/低拷贝:低拷贝启动?子:CAMV 35S 克隆?方法 :多克隆位点，限制性内切酶 载体?大?小: 11227 bp 5' 测序引物及序列:M13-F: TGTAAAACGACGGCCAGT 3' 测序引物及序列 : M13-R: CAGGAAACAGCTATGAC 载体标签: GusA 载体抗性: 卡那和潮霉素筛选标记: HPTII 详情产品分类 ?生化试剂 精细化学品 中间体/标准品 病理实验试剂 其他关键词： 热线电话：400-818-1148150 1148 1284
备注:-- 产品?目录号:1391Z 稳定性:稳定表达 组成型:?非组成型 病毒/?非病毒:?非病毒 pCambia 1391Z载体质粒图谱和多克隆位点信息 pCambia 1391Z载体序列 LOCUS pCAMBIA1391Z 11227 bp ds-DNA circular SYN DEFINITION Agrobacterium binary vector for plant transformation, with hygromycin- and kanamycin-resistance and LacZ-GUS genes plus the pUC9 MCS. ACCESSION AF234312 VERSION . KEYWORDS pCAMBIA1391Z SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 11227) AUTHORS Cambia TITLE Direct Submission JOURNAL Exported from SnapGene Viewer COMMENT The GenBank record was corrected by inserting a G at position 4743. FEATURES Location/Qualifiers
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱 基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 4、P/E：启动子/增强子 5、Terms：终止信号 6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 示例阅读载体： pENTER载体 1）human ORF + pENTER载体 2） CMV启动子，T7启动子 3） ORF的C端融合了Flag和His tag 4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 日期：2012-04-18来源：未知作者：xilu点击：次 如何阅读分析质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly(A)信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr可以阻止四环素进入细胞。 3. camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活 5. hygr使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
几种新型植物基因表达载体的构建方法
几种新型植物基因表达载体的构建方法 摘要:利用基因工程技术手段研究基因功能过程中，构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位，采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway 技术、三段T-DNA 法、一步克隆法等，还有近年来出现的几种新型的载体构建方法：基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体；Micro RNA 前体PCR 置换法适用于构建小分子RNA 表达载体；重组融合PCR 法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；利用In-Fusion 试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域；构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(Sequence and ligation-independent cloning, SLIC) 法；Gibson 等温拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上，分析这6种新方法的特点，期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。 关键词: Micro RNA 前体PCR 置换法，In-Fusion 试剂盒法，重组融合PCR 法，Gibson 等温拼接法，Golden Gate 拼接法 基因克隆、载体构建是植物功能基因组研究中的常规步骤[ 1 ]。而载体构建是基因工程和分子生物学研究中常用的基础技术。随着植物基因工程技术的发展，适合于不同研究目的各种载体系统应运而生，其中在转基因植物中最常用的是质粒载体。传统的载体构建方法在进行构建多片段拼接的复杂载体时，需要精心选择酶切位点[ 2 ]，有时还需要构建多个中间载体，操作比较麻烦，费时费力，因此寻找简单、高效、快捷的载体构建方法具有重要的现实意义。从1969 年Arber 等发现了限制性内切酶，载体的构建方法逐步发展，从传统构建方法到
植物表达载体 Pcambia1302 序列图谱
载体质粒图谱和多克隆位点信息 载体简介 载体序列 LOCUS AF234298 10549 bp DNA circular SYN 24-APR-2000 DEFINITION Binary vector pCAMBIA-1302, complete sequence. ACCESSION AF234298 VERSION AF234298.1 GI:7638073
KEYWORDS . SOURCE Binary vector pCAMBIA-1302 ORGANISM Binary vector pCAMBIA-1302 other sequences; artificial sequences; vectors. REFERENCE 1 (sites) AUTHORS Hajdukiewicz,P., Svab,Z. and Maliga,P. TITLE The small, versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation JOURNAL Plant Mol. Biol. 25 (6), 989-994 (1994) PUBMED 7919218 REFERENCE 2 (bases 1 to 10549) AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W., Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L., Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A. TITLE A comprehensive set of modular vectors for advanced manipulations and efficient transformation of plants JOURNAL Unpublished REMARK Full description of constructs REFERENCE 3 (bases 1 to 10549) AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W., Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L., Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A. TITLE Direct Submission
叶绿体表达载体--如何构建载体
如何构建载体 1 启动子的选用和改造 外源基因表达量不足往往是得不到理想的转基因植物的重要原因。由于启动子在决定基因表达方面起关键作用，因此，选择合适的植物启动子和改进其活性是增强外源基因表达首先要考虑的问题。 目前在植物表达载体中广泛应用的启动子是组成型启动子，例如，绝大多数双子叶转基因植物均使用CaMV35S启动子，单子叶转基因植物主要使用来自玉米的Ubiquitin启动子和来自水稻的Actinl启动子。在这些组成型表达启动子的控制下，外源基因在转基因植物的所有部位和所有的发育阶段都会表达。然而，外源基因在受体植物内持续、高效的表达不但造成浪费，往往还会引起植物的形态发生改变，影响植物的生长发育。为了使外源基因在植物体内有效发挥作用，同时又可减少对植物的不利影响，目前人们对特异表达启动子的研究和应用越来越重视。已发现的特异性启动子主要包括器官特异性启动子和诱导特异性启动子。例如，种子特异性启动子、果实特异性启动子、叶肉细胞特异性启动子、根特异性启动子、损伤诱导特异性启动子、化学诱导特异性启动子、光诱导特异性启动子、热激诱导特异性启动子等。这些特异性启动子的克隆和应用为在植物中特异性地表达外源基因奠定了基础。例如，瑞士CIBA-GEIGY公司使用PR-IA启动子控制转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达，由于该启动子可受水杨酸及其衍生物诱导，通过喷酒廉价、无公害的化学物质，诱导抗虫基因在虫害重发生季节表达，显然是一个十分有效的途径。 在植物转基因研究中，使用天然的启动子往往不能取得令人满意的结果，尤其是在进行特异表达和诱导表达时，表达水平大多不够理想。对现有启动子进行改造，构建复合式启动子将是十分重要的途径。例如，Ni等人将章鱼碱合成酶基因启动子的转录激活区与甘露碱合成酶基因启动子构成了复合启动子，GUS表达结果表示：改造后的启动子活性比35S启动子明显提高。吴瑞等人将操作诱导型的PI-II基因启动子与水稻Actinl基因内含子1进行组合，新型启动子的表达活性提高了近10倍（专利）。在植物基因工程研究中，这些人工组建的启动子发挥了重要作用。 2 增强翻译效率 为了增强外源基因的翻译效率，构建载体时一般要对基因进行修饰，主要考虑三方面内容： 2.1添加5｀-3｀-非翻译序列 许多实验已经发现，真核基因的5｀-3｀-非翻译序列（UTR）对基因的正常表达是非常必要的，该区段的缺失常会导致mRNA的稳定性和翻译水平显著下降。例如，在烟草花叶病毒（TMV）的126kDa 蛋白基因翻译起始位点上游，有一个由68bp核苷酸组成的Ω元件，这一元件为核糖体提供了新的结合位点，能使Gus基因的翻译活性提高数十倍。目前已有许多载体中外源基因的5｀-端添加了Ω翻译增强序列。Ingelbrecht等曾对多种基因的 3｀-端序列进行过研究，发现章鱼碱合成酶基因的3｀-端序列能使NPTII基因的瞬间表达提高20倍以上。另外，不同基因的3｀-端序列增进基因表达的效率有所不同，例如，rbcS3｀-端序列对基因表达的促进作用比查尔酮合酶基因的3｀-端序列高60倍。 2.2 优化起始密码周边序列 虽然起始密码子在生物界是通用的，然而，从不同生物来源的基因各有其特殊的起始密码周边序列。例如，植物起始密码子周边序列的典型特征是AACCAUGC,动物起始密码子周边序列为CACCAUG，原核生物的则与二者差别较大。Kozak详细研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子周边序列为ACCATGG时转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。例如，有一个细菌的几丁质酶基因，原来的起始密码周边序列为UUUAUGG，当被修饰为ACCAUGG，其在烟草中的表达水平提高了8倍。因此，利用非植物来源的基因构建表达载体时，应根据植物起始密码子周边序列的特征加以修饰改造。 2.3对基因编码区加以改造
如何阅读质粒图谱(更新版本)
如何阅读质粒图谱 最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于 大家分享。 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 #复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+ ＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l ＃P/E 启动子/增强子l ＃Termsl 终止信号 ＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 ＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 ＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 ＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l ＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
pCambia35s-ECFP植物表达载体
pCambia35s--‐ECFP 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT1010 pCambia35s--‐ECFP pCambia35s--‐ECFP载体基本信息 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pcambia35s--‐ECFP 质粒类型: 植物双元表达载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: --‐--‐ 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: ECFP 载体抗性: --‐--‐ 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301 pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen
质粒图谱的阅读方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 质粒图谱的阅读方法 质粒图谱的阅读方法载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 a. 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。 原核生物 DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物 DNA分子有多个复制起始位点。 b. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ c. 多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 d. P/E 启动子/增强子 e. Terms 终止信号 f. 加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用二、如何阅读质粒图谱第一步： 首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。 第二步： 再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1） Ampr 水解－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2） tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3） camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4） neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使 G418（长那霉素衍生物）失活（5） hygr 使潮霉素失活。 第三步： 1 / 6
看多克隆位点（MCS）。 它具有多个限制酶的单一切点。 便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。 决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步： 再看外源 DNA 插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。 一般来说，外源DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步： 是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。 选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a. 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 b. 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）
pCambia1291Z植物表达载体
pCambia1291Z VECT0110 pCambia1291Z pCambia 1291Z : Cambia : pCambia1291Z, p Cambia 1291Z : /: : CAMV 35S : : 11379 b p 5' : M13-F: T GTAAAACGACGGCCAGT 3' : M13-R: C AGGAAACAGCTATGAC : GusA : : HPTII : -- : 1291Z : : /: pCambia 1291Z
pCambia 1291Z LOCUS pCAMBIA1291Z 11379 b p d s-DNA circular S YN DEFINITION Agrobacterium b inary v ector f or p lant t ransformation, w ith hygromycin- a nd c hloramphenicol-resistance a nd L acZ-GUS g enes plus the p UC9 M CS. ACCESSION AF234295 VERSION . KEYWORDS pCAMBIA1291Z SOURCE synthetic D NA c onstruct ORGANISM synthetic D NA c onstruct COMMENT This f ile i s c reated b y V ector N TI COMMENT The G enBank r ecord w as c orrected b y i nserting a G a t p osition 4743. FEATURES Location/Qualifiers source 1..11379 /organism="synthetic D NA c onstruct" /lab_host="Plant C ells" /mol_type="other D NA" CDS join(2..16,207..2024)
几种新型植物基因表达载体的构建方法
几种新型植物基因表达载体的构建方法 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
几种新型植物基因表达载体的构建方法 摘要:利用基因工程技术手段研究基因功能过程中，构建基因表达载 体处于转基因植物的主导地位，采用合适的构建方法会使实验效果事半 功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway 技术、 三段T-DNA 法、一步克隆法等，还有近年来出现的几种新型的载体构建 方法：基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体；Micro RNA 前体 PCR 置换法适用于构建小分子 RNA 表达载体；重组融合 PCR 法特 别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；利用 In-Fusion 试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域；构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连 接的克隆方法 (Sequence and ligation-independent cloning, SLIC) 法；Gibson 等温拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础 上，分析这 6种新方法的特点，期望通过这几种新的方法给植物基因工 程表达载体的构建提供新的思路。 关键词: Micro RNA 前体 PCR 置换法，In-Fusion 试剂盒法，重组融合PCR 法，Gibson 等温拼接法，Golden Gate 拼接法 基因克隆、载体构建是植物功能基因组研究中的常规步骤[ 1 ]。而载 体构建是基因工程和分子生物学研究中常用的基础技术。随着植物基因 工程技术的发展，适合于不同研究目的各种载体系统应运而生，其中在 转基因植物中最常用的是质粒载体。传统的载体构建方法在进行构建多 片段拼接的复杂载体时，需要精心选择酶切位点[ 2 ]，有时还需要构建多 个中间载体，操作比较麻烦，费时费力，因此寻找简单、高效、快捷的
pFGC5941植物表达载体
pFGC5941 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT0360 pFGC5941 pFGC5941载体基本信息 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pFGC5941 质粒类型: 植物表达载体；植物干扰载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 11405 b p 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: --‐--‐ 载体抗性: 羧苄西林 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 载体质粒图谱和多克隆位点信息
其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301
pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen pCambia1300GFP pGreen 0029 pCambia1301 pGreen0029 pCambia1302 pGreen029 pCambia1303 pGreenII pCambia1304 pGreenII 0049 pCambia1305.1 pGreenII 0179 pCambia1305.2 pGreenII 0229 pCambia1380 pGreenII 0579 pCambia1381 pHANNIBAL pCambia1381Xa pHELLSGATE pCambia1381Xb pHELLSGATE 12 pCambia1381Xc pHELLSGATE 4 pCambia1381Z pHELLSGATE 8 pCambia1390 pKANNIBAL pCambia1391 pPZP100 pCambia1391Xa pPZP101 pCambia1391Xb pPZP102 pCambia1391Xc pPZP111 pCambia1391Z pPZP112 pCambia2200 pPZP121 pCambia2201 pPZP122 pCambia2300 pPZP200 pCambia2301 pPZP201 pCambia2301--‐101 pPZP202 pCambia3200 pPZP211 pCambia3201 pPZP212 pCambia3300 pPZP221 pCambia3301 pPZP222 pCambia35s--‐ECFP pPZp--‐RCS2--‐Bar pCambia35s--‐EGFP pRI 101--‐AN pCambia35s--‐EYFP pRI 101--‐ON pCambia5105 pRI 201--‐AN pSB1 pRI 201--‐ON pSB11 pRI 909 pSoup pRI 910 pSPYCE(MR) pRI101 pTCK303 pSAT1--‐cCFP--‐C Super1300 pSAT1--‐cCFP--‐N
单子叶植物表达载体pUN3300的构建
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/1916108829.html, 单子叶植物表达载体pUN3300的构建 作者：孙萍等 来源：《山东农业科学》2013年第01期 摘要：植物双元表达载体在植物基因工程研究中具有重要作用，表达载体所包含的结构元件，如启动子、多克隆位点、筛选标记等，对植物遗传转化效率、外源基因表达强度及遗传稳定性等具有重要影响。本研究中，为提高目的基因对单子叶植物的遗传转化效率，对植物表达载体pCAMBIA3300进行改造，在原有以bar基因作为选择标记的基础上，采用不完全酶切的方法添加了Ubiquitin启动子，经酶切、测序表明，植物双元表达载体pUN3300构建成功。该载体对于研究外源基因功能、植物性状改良及新品种的培育，具有重要的价值。 关键词：单子叶植物；表达载体；pUN3300；Ubiquitin启动子；bar基因 中图分类号：Q781文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）01-0034-04 植物双元表达载体是植物基因工程研究的重要组成部分。通过植物表达载体，外源目的基因可进入宿主细胞并高效表达，为阐明基因功能、利用基因资源改良作物种质奠定了基础[1～3]。获得稳定、高效的植物双元表达载体是进行遗传转化研究的重要内容之一。目前，虽已有pBR121、pCAMBIA等系列的商业化表达载体出售，但并不能完全满足实验需求，因此，必须根据实际需要对表达载体进行改造。表达载体上携带的抗性标记基因是筛选转化体的有效手段，但同时也带来了生态环境及食品安全方面的潜在隐患，影响了大众对转基因植物的接受。而以除草剂抗性bar 基因作为筛选标记，具有一定的生物安全性，客观上可消除人们的顾虑[4]。因此本研究中，选取以bar 基因为筛选标记的商业化表达载体pCAMBIA3300为基础，通过不完全酶切等方法添加了单子叶植物高效、专一性启动子Ubiquitin，构建并获得了适于单子叶植物遗传转化的表达载体pUN3300，为外源目的基因对单子叶植物的遗传转化提供了有力 的分子生物学工具。 1材料与方法 11试验材料 植物表达载体pCAMBIA3300、含有Ubiquitin启动子的植物表达载体pUN1301由本实验室保存。大肠杆菌DH5α感受态细胞购自北京全式金公司，各种限制性内切酶、琼脂糖凝胶回收试剂盒、质粒小量提取试剂盒、T4 DNA连接酶购自大连宝生物工程有限公司，其他各种试剂均为国产分析纯产品。PCR引物由上海生物工程有限公司合成。 12试验方法
植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建
2018年第5期 吉林畜牧兽医·实验研究· ShiYan YanJiu 植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建 王 雪，尚晓敏，李桂玲,刘 琼* 吉林工程技术师范学院食品工程学院，吉林长春 130052 摘 要：乳酸菌宿主对表达载体的启动子具有高度的选择性，本研究利用PCR技术扩增嗜酸乳杆菌表面蛋白SlpA 基因启动子，以诱导型表达载体pSIP409为基本框架删除其诱导型启动子，采用能快速连接的无缝克隆技术将SlpA 基因启动子连接到gusA基因上游，获得重组质粒409SlpA电转化至植物乳杆菌NC8中，Western Blot定性测定的gusA表达情况，同时利用MRS-X-gluC培养基特异性显色反应来鉴定阳性重组子表达gusA的活性，为利用该启动 子表达外源蛋白研制新型基因工程微生态制剂奠定基础。 关键词：嗜酸乳杆菌；启动子；组成型表达载体； Construction of constitutive Expression Vector Base on SlpA Gene Promoter and the Function Analysis Wang Xue, Shang Xiao-min，Li Gui-ling，Liu Qiong* College of Food Engineering Jilin Engineering Normal University, Changchun, Jilin, 130052 Abstract: Lactobacillus hosts have a high selectivity for the promoter of the expression vector. In this study, the promoter of the SlpA gene from Lactobacillus acidophilus was amplified by PCR, and the expression vector pSIP409 was used as the base frame to remove its inducible promoter. The promoter of the SlpA gene was ligated upstream of thegusAgene by Seamless Assembly Cloning technology and the recombinant plasmid 409SlpA was transformed into Lactobacillus plantarumNC8 by electrotransformation. The positive colony was screened by MRS-X-gluC medium and the specific colony was screened, and the complex steps of detecting the activity of expressed proteins were avoided. This study lays the foundation for further application of SlpA gene constitutive promoter. Keywords: Lactobacillus acidophilus; promoter; constitutive expression vector 乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一群革兰氏阳性、能够发酵碳水化合物、以乳酸为主要代谢产物的各类细菌统称，是人与大多数动物肠道内常见优势菌群。由于乳酸菌在医药、食品、饲料生产等相关领域具有较高的应用价值，被公认为安全级微生物(generally recognized as safe，GRAS)[1]。构建乳酸菌工程菌株最重要的是高效稳定表达，而启动子是决定外源基因表达效率的关键遗传组件[2]，且乳酸菌属的启动子对宿主有着高度的选择[3]。因此，在LAB表达系统中很少使用外源启动子。目前可用于构建LAB表达载体的启动子主要有lac A、lac R、lacS、nisA/nisZ、nisF和usp等[4]，启动子数量偏少，并且大多数属于诱导型启动子[5]。组成型乳酸菌表达载体在不添加诱导物情况下可以不断地表达目的蛋白，在饲料生产、食品 基金项目：吉林省教育厅科技研究项目（2016120）； 吉林工程技术师范学院（2016）校科研发展基金项目。 作者简介：王 雪（1995-），女，本科，生物工程专业， 河北省阜城，E-mail:7107172322@https://www.360docs.net/doc/1916108829.html,. *通讯作者：刘 琼（1980-）,女,实验师，研究方向为 动物微生态与黏膜免疫学。 E-mail:liuqiong@https://www.360docs.net/doc/1916108829.html,. 6
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 （4）P/E 启动子/增强子 （5）Terms 终止信号 （6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点： 【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型： （1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选
质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。 综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求： （1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载 体）； （2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
pGreen 0029植物表达载体
pGreen 0029 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT0340 pGreen 0029 pGreen 0029载体基本信息 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pGreen 0029 质粒类型: 植物表达载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: --‐--‐ 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: --‐--‐ 载体抗性: --‐--‐ 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体序列 AGCCTGGCGAACAGTTCGGCTGGCGCGAGCCCCTGATGCTCTTCGTCCAGATCATCCT GATCGACAAGACCGGCTTCCAT CCGAGTACGTCCTCGCTCGATGCGATGTTTCGCTTGGTGGTCGAATGGGCAGGTAGCC GGATCAAGCGTATGCAGCCGCC GCATTGCATCAGCCATGATGGATACTTTCTCGGCAGGAGCAAGGTGAGATGACAGGA GATCCTGCCCCGGCACTTCGCCC AATAGCAGCCAGTCCCTTCCCGCTTCAGTGACAACGTCGAGCACAGCTGCGCAAGGAA CGCCCGTCGTGGCCAGCCACGA TAGCCGCGCTGCCTCGTCTTGGAGTTCATTCAGGGCACCGGACAGGTCGGTCTTGACA AAAAGAACCGGGCGCCCCTGCG CTGACAGCCGGAACACGGCGGCATCAGAGCAGCCGATTGTCTGTTGTGCCCAGTCATA GCCGAATAGCCTCTCCACCCAA GCGGCCGGAGAACCTGCGTGCAATCCATCTTGTTCAATCATGCCTCGATCGAGTTGAG AGTGAATATGAGACTCTAATTG GATACCGAGGGGAATTTATGGAACGTCAGTGGAGCATTTTTGACAAGAAATATTTGC TAGCTGATAGTGACCTTAGGCGA CTTTTGAACGCGCAATAATGGTTTCTGACGTATGTGCTTAGCTCATTAAACTCCAGA AACCCGCGGCTGAGTGGCTCCTT CAACGTTGCGGTTCTGTCAGTTCCAAACGTAAAACGGCTTGTCCCGCGTCATCGGCGG