一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法
(10)授权公告号 (45)授权公告日 2014.11.12
C N 103114082
B (21)申请号 201310069093.9
(22)申请日 2013.03.04
C12N 9/36(2006.01)
(73)专利权人浙江工业大学
地址310014 浙江省杭州市下城区潮王路
18号
(72)发明人张健 金志敏 夏春年 姚小武
张岩
(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公
司 33201
代理人黄美娟 王兵
CN 1108381 C,2003.05.14,
陈若飞.从蛋壳中提取溶菌酶的研究..《沈
阳化工学院院报》.2008,
卢庆祥.用聚丙烯酸凝聚提取溶菌酶..《化
学教学》.1995,
M. Sternberg 和D. Hershberger.Separation of proteins with polyacrylic acids..《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure 》.1974,(54)发明名称
一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法
(57)摘要
本发明公开了一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的
方法：用水将鸡蛋清溶解，调节pH 至4.0～5.0
并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获
得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与
滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物
在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解
离，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使
其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶；本发明使用的原
材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、
生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工
业化生产。(51)Int.Cl.(56)对比文件
审查员 孙彦珂
权利要求书1页 说明书5页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利权利要求书1页 说明书5页(10)授权公告号CN 103114082 B
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1.一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于所述方法按以下步骤进行：
（1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH 值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min ，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h ，过滤，获得滤液a ；
（2）将步骤（1）获得的滤液a 调pH 值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na 2CO 3水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b ；所述木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a 的体积比为0.4～1.2：1；
（3）向步骤（2）获得的滤液b 中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置，过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。
2.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（1）用质量浓度5%的盐酸来调节pH 值。
3.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中将步骤
（1）获得的滤液a 用质量浓度5%的NaOH 水溶液调pH 值。
4.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中的木质素磺酸钠的相对分子量为4000～10000。
5.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中Na 2CO 3水溶液的质量浓度为3～10%。
6.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%。
7.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃。
8.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量为300万～800万。
9.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（3）所述加入无水乙醇的温度为15～40℃。权 利 要 求 书CN 103114082 B
一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法（一）技术领域
[0001] 本发明涉及一种溶菌酶的制备方法，特别涉及一种鸡蛋清中分离溶菌酶的方法。
（二）背景技术
[0002] 溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶在临床上是有效的消炎剂，在食品防腐和基因工程等方面也有广泛的应用。溶菌酶来源很广，在人、动物、植物和微生物中均有发现，其中鸡蛋清中含量最高，因此，工业生产溶菌酶常以鸡蛋为原料。
[0003] 从鸡蛋中溶菌酶的提取方法报道很多，有直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、沉淀法、双水相萃取、超滤法等。各种方法优缺点不一，产品的质量和生产成本也有所不同。目前，沉淀法是一种工业上应用比较成熟的提取方法，其在技术要求和生产成本上都比较好。
[0004] 其中，生吉萍等【中国食品学报，2003年增刊，10～14】用等电点沉淀法，即先将获取的蛋清液用NaCl 溶液稀释，再用1mol/L 的NaOH 溶液将蛋清pH 值调到9.5～11.0，使其接近溶菌酶的等电点，并4℃下静置，从而使溶菌酶沉淀下来。这种方法操作简单，在工业生产中可以使产品的成本大大降低。但是其生产周期较长，产率相对偏低，纯度不高，高纯度产品获取过程复杂，需要增加较多步骤。
[0005] 康旭、邓川等采用盐析沉淀法【畜牧与饲料科学，2010，31(5)，91～92】，即用pH 值为6.5的磷酸盐缓冲液(PBS)将蛋清稀释5倍，在搅拌和除去杂蛋白后，用硫酸铵对上清液分级沉淀，取40％～80％饱和度部分的沉淀，得溶菌酶。得到的溶菌酶纯度达到电泳纯，其中用80％左右饱和度硫酸铵时收率最好。此法得到的溶菌酶纯度和产率都比较高，但是依旧存在沉淀速度慢及不完全的问题，因而使得溶菌酶的活性降低了很多。
[0006] 陈若飞用聚丙烯酸沉淀法从蛋壳中提取溶菌酶【沈阳化工学院学报，2008年9月第22卷第3期222～225】，在除去杂蛋白后，加入NaOH 溶液调pH 至6.0，加入聚丙烯酸，产生乳白色胶状物。将聚合物用Na 2CO 3将其溶解，并pH 调至9.5，加入质量分数为5％的CaCl 2液将溶菌酶聚丙烯酸解离，接着过滤得到澄清溶液。最后加入NaOH 溶液调pH 为10.5左右，使溶菌酶结晶析出。此法选择性好，得到的溶菌酶纯度很高，但是聚丙烯酸价格较贵，而且水溶液的黏性较大，不方便大规模生产。
[0007] 文章军和钱生球在其专利【一种分离溶菌酶的方法】中描述，以蛋清为原料，加水稀释后，搅拌均匀，用酸调pH 至4.0～5.0，静置，除去沉淀，再将溶液升温至75～80℃，冷却静置，过滤得上清液，然后用碱调pH 至7.5～8.0，加入乙醇至产生沉淀，静置6～10小时后过滤，干燥沉淀溶菌酶。其工艺步骤简单、生产周期短、除杂蛋白效果较好、收率也比较高，但是最后所得酶的活性不是特别高。
[0008]
国外，研究者用N-异聚丙烯酰胺与丙烯酸单体的共聚物从蛋清中，【Journal of Biotechnology ，87(2001)，95～107】，虽然得到的产品纯度高、收率高、活性也比较好，但是生产的成本高，而且操作十分复杂。
[0009] 溶菌酶为白色或微白色冻干粉，可溶于水，不溶于乙醚和丙酮。相对分子量在14000左右，pI在10.5～11.0，最适存在和反应的pH值为6.5。酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃或pH值为3条件下，15min后活力保持87%。而蛋清中的其他蛋白的pI在4.0～5.0，在80℃以上的高温下易失活，所以，可以用等电点沉淀法除杂蛋白。由于溶菌酶的pI太高，此时采用等电点沉淀产生一定量的失活，但溶菌酶在弱碱性条件下，会在乙醇作用下结晶，所以可以用乙醇使其结晶而分离。
[0010] 此外，木质素磺酸钠可以溶解在碱性的水溶液中，而且在实验研究中发现，木质素磺酸钠可以在弱酸条件下与溶菌酶生成聚合物沉淀。所以本发明就是利用这种聚合沉淀的方法提取分离蛋清中溶菌酶。
[0011] 而聚丙烯酰胺作为水溶性高分子聚合物，具有良好的絮凝性，本身无毒副作用，且聚丙烯酰胺易与木质素磺酸盐生产凝聚物。蒋成新在研究中，有利用聚丙烯酰胺和木质素磺酸钠复合【石油钻采工艺，1988年专辑（22）2,193～202】，生成复合铬冻胶堵水剂。而本发明则是利用聚丙烯酰胺水溶液与木质素磺酸钠结合，生成沉淀，而使木质素磺酸钠和溶菌酶的聚合沉淀解离，达到得到分离。
[0012] 所以本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
（三）发明内容
[0013] 本发明目的是提供一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
[0014] 本发明采用的技术方案是：
[0015] 一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，所述方法按以下步骤进行：
[0016] （1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h，过滤，获得滤液a；[0017] （2）将步骤（1）获得的滤液a调pH值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸
钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na
2CO
3
水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚
丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b；
[0018] （3）向步骤（2）获得的滤液b中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置（15～40℃下静置3～5h），过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。
[0019] 进一步，步骤（2）中将步骤（1）获得的滤液a用质量浓度5%的NaOH水溶液调pH 值，优选调pH值至5.5～5.8。
[0020] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠相对分子量为4000～10000。
[0021] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a的体积比为0.4～1.2：1，优选0.8:1。[0022] 进一步，步骤（2）中Na2CO3水溶液的质量浓度为3～10%，优选5%。
[0023] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%，优选10～15%。[0024] 进一步，步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，优选25℃；所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃，优选25℃。
[0025] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量300万～800万。
[0026] 进一步，步骤（3）所述加入无水乙醇的温度为15～40℃，优选25℃。
[0027] 本发明用造纸行业的废物木质素磺酸钠作为沉淀剂，从鸡蛋清中分离溶菌酶。首先，用水将鸡蛋清溶解，调节pH 至4.0～5.0并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解离，并与木质素磺酸盐生成沉淀，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶。
[0028] 接下来进行称量和酶活力的测定，其中，酶活力的测定采用分光光度计法(即F.I.P 法)。其原理是溶菌酶破坏细菌的细胞壁，从而降低细胞悬浮液的浊度，可用分光光度计法来测定这种反应。一个F.I.P 溶菌酶单位相当于在规定条件下于450nm 处每分钟将吸光度降低0.001所需的酶量。用以下公式（1）计算酶的活性：
[0029]
公式（1）[0030] 公式（1）中，ΔE 450为450nm 处每分钟吸光度的变化(El-E2)；E m 为每10μL 所用酶溶液中含有酶的质量，mg ；0.001为一个单位每分钟内使吸光度下降0.001。
[0031] 与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
（四）具体实施方式
[0032] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
[0033] 本发明所述百分浓度除特别声明外，均为质量浓度。
[0034] 实施例1
[0035] 所用鸡蛋清来自浙江省临安市昌化镇，溶菌酶含量约为3.40%，木质素磺酸钠的相对分子量约为5000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为800万。
[0036] 取鲜鸡蛋清1.8千克，加入2.7千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入质量浓度5%的盐酸将pH 调至4.0，并立即加热至80℃，并保温15min ，水浴冷却至20℃、20℃下静置7小时，过滤，得滤液a ；将滤液a 用质量浓度5%的NaOH 水溶液调pH 至4.7，搅拌下，逐渐加入质量浓度15%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液的加入量与滤液a 体积比为0.4：1，在25℃静置4小时，过滤，得凝聚物沉淀（即沉淀），取沉淀用质量浓度3%的Na 2CO 3水溶液将其完全溶解，逐渐加入质量浓度10%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，20℃静置6h 、过滤，获得滤液b ；20℃下，向滤液b 中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，20℃静置3h 、过滤，滤饼在-30℃下真空冷冻干燥5h ，即得产品溶菌酶27.1g ，以蛋清原料中溶菌酶含量计，测得所得溶菌酶收率为44.3%，活性为13509U/mg 。
[0037] 实施例2
[0038] 所用鸡蛋清浙江省绍兴市，溶菌酶含量约为3.50wt%，木质素磺酸钠的相对分子量约为6000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为600万。
[0039] 取鲜鸡蛋清1.5千克，加入2.3千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%
的盐酸将pH调至4.0，并立即加热至82℃，并保温12min，水浴冷却至30℃、静置8小时，过滤得滤液a；将滤液a用5wt%的NaOH水溶液调pH至5.0，搅拌下，逐渐加入15wt%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液与滤液a体积比为0.6：1，在25℃下静置
5小时，过滤，得凝聚物沉淀；取凝聚物沉淀用4wt%的Na
2CO
3
水溶液将其完全溶解，再逐渐
加入10wt%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，25℃静置4h、过滤，获得滤液b；25℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，25℃静置3h、过滤、滤饼在-30℃真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶28.3g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，所得溶菌酶收率为53.9%，活性为15364U/mg。
[0040] 实施例3
[0041] 所用鸡蛋清来自浙江省湖州市德清县，溶菌酶含量约为3.45%，木质素磺酸钠的相对分子量约为7000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为500万。
[0042] 取鲜鸡蛋清1.2千克，加入1.8千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%的盐酸将pH调至约4.2，并立即加热至85℃，并保温12min，水浴冷却至25℃、25℃静置9小时，过滤得滤液a；用5wt%的NaOH水溶液调pH至5.5，搅拌下逐渐加入15wt%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液与滤液a体积比为0.8：1，在25℃下静置
6小时；过滤，得凝聚物沉淀，将凝聚物沉淀用5wt%的Na
2CO
3
水溶液将其完全溶解，再逐渐
加入10wt%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，25℃静置8h、过滤，获得滤液b；25℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，25℃静置4h、过滤、滤饼在-30℃真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶31.6g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，所得溶菌酶收率为76.3%，活性为18868U/mg。
[0043] 实施例4
[0044] 所用鸡蛋清浙江省杭州市萧山区楼塔镇，溶菌酶含量3.45%，木质素磺酸钠的相对分子量约为8000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为700万。
[0045] 取鲜鸡蛋清1.2千克，加入1.8千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%的盐酸将pH调至约4.3，并立即加热至85℃，并保温10min，水浴冷却至30℃、30℃静置8小时，过滤，得滤液a；将滤液a用6wt%的NaOH水溶液调pH至5.8，再搅拌下逐渐加入15wt%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液与滤液a体积比为0.9：1，在25℃
下静置7小时，过滤，得凝聚物沉淀；取凝聚物沉淀用5wt%的Na
2CO
3
水溶液将其完全溶解，
再逐渐加入10wt%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，25℃静置7h、过滤，获得滤液b；25℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，25℃静置4h、过滤、滤饼在-30℃真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶31.1g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，所得溶菌酶收率为75.1%，活性为18685U/mg。
[0046] 实施例5
[0047] 所用鸡蛋清浙江工业大学朝晖校区北门集市，溶菌酶含量3.40%，木质素磺酸钠的相对分子量约为8500，聚丙烯酰胺的相对分子量约为300万。
[0048] 取鲜鸡蛋清1.1千克，加入1.7千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%的盐酸将pH调至约4.5，并立即加热至83℃，并保温15min，水浴冷却至25℃、25℃静置8小时，过滤得滤液a；将滤液a用5wt%的NaOH溶液调pH至6.0，搅拌下逐渐加入15wt%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液与滤液a体积比为1.0，在30℃下静置8
小时；过滤得凝聚物沉淀；凝聚物沉淀用7wt%的Na
2CO
3
溶液将其完全溶解，逐渐加入10wt%
聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，30℃静置5h、过滤，获得滤液b；30℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，30℃静置4h、过滤、滤饼在-30℃真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶22.1g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，所得溶菌酶收率为59.1%，活性为15745U/ mg。
[0049] 实施例6
[0050] 所用鸡蛋清安徽省广德县，溶菌酶含量3.50%，木质素磺酸钠的相对分子量约为9000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为400万。
[0051] 取鲜鸡蛋清1.0千克，加入1.5千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%的盐酸将pH调至约4.5，并立即加热至85℃，并保温13min，水浴冷却至20℃、20℃静置6小时，过滤得滤液a；将滤液a用5wt%的NaOH溶液调pH至6.4，搅拌下逐渐加入15wt%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液与滤液a体积比为1.2：1，在25℃
下静置9小时，过滤得凝聚物沉淀；取凝聚物沉淀用10wt%的Na
2CO
3
溶液将其完全溶解，再
逐渐加入10wt%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，25℃静置8h、过滤，获得滤液b；25℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，25℃静置5h、过滤、在-30℃真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶17.0g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，所得溶菌酶收率为48.6%，活性为13447U/mg。
溶菌酶提取
方法对比讲稿用 2.1 结晶法 溶菌酶具有耐热、耐酸的特性，并且易溶解在盐溶液，稳定性好，通过改变盐溶液的条件，可使溶菌酶以晶体形式析出而得以分离，结晶法也因此成为制备溶菌酶晶体最为传统的方法之一。该方法的主要过程可简述如下，向富含溶菌酶的蛋清中加入(NH4)2SO4等中性盐，依据溶菌酶的等电点区，用氢氧化钠调节蛋清溶液的 pH，再加入溶菌酶晶体进行诱导，4℃放置大概 2 周，即可析出大部分的溶菌酶晶体，而与其它杂蛋白质得以分离。如要得到到更高纯度的溶菌酶，可将析出的溶菌酶晶体过滤，重新溶解，再利用上述同样的方法进行重结晶即可。结晶法操作简单、成本低，是目前从蛋清中提取分离溶菌酶的首选方法，但它要求溶菌酶的含量要相对高，因此不适宜溶液中微量溶菌酶的分离。此外，晶体的形成，蛋白质结晶既受到自身分子结构的影响，又受到结晶条件的影响，结晶过程中只要有细微的差别，晶体的产量和质量都将受到很大影响（结晶过程不好控制），所以蛋白质结晶是一个宏观看似简单而实际微观极为复杂的物理化学过程。为进一步完善结晶法分离纯化溶菌酶，研发人员越来越重视膜结晶法的研究与应用。相比于常规结晶方法，膜结晶法对蛋白质初始浓度要求低、结晶诱导时间较短、尤其是结晶过程可控，因而具有明显优势。 2.2 离子交换法 离子交换法是借助溶液中各种蛋白质等粒子的带电差异，而与离子交换剂之间具有强弱不一的结合力，达到分离纯化物质的操作技术。依据原料及分离纯化的不同要求，可分别选择羧甲基琼脂糖、羧酸纤维素和羧甲基纤维素等离子交换剂。离子交换法操作简单，成本较低，可实现自动化连续操作，适用于大规模生产，是目前溶菌酶生产的常用方法。 （联用层析法因分离速度快、处理量大等优势而受到研发人员的广泛关注，包括膜亲和层析法、离子交换层析法等。尤其是离子交换层析法 20 世纪 80 年代便开始广泛应用于溶菌酶地分离纯化。此方法操作简便、成本低、高效、可实现自动化操作，是溶菌酶生产中的常用方法之一。） 2.3 色谱法 以亲和力为基础，将不溶性的载体与可逆结合的配体相偶联，制备成具有特异亲和性的分离介质，选择性地吸附生物活性物质，依据待分离物质的特性再利用相应组成的溶液洗脱而达到分离提取需要物质的目的，这就是 20 世纪 80 年代末发展起来的亲和色谱技术。亲和色谱技术是诸多色谱法的一种，选择性高、快速、高效，适合蛋清溶菌酶高效分离与纯化的需要。随着生产对技术要求的提高，研发人员以传统的膜处理为基础，利用固定离子亲和色谱和膜分离相结合，制备固定金属亲和膜，因其具有良好的分离性能，可用于蛋白质的分离纯化。多方研究结果表明固定金属亲和膜对溶菌酶的选择吸附性能良好。如若将间歇式吸附与连续式脱附耦合亲和层析法相结合，用于溶菌酶分离纯化，蛋白质回收率和吸附剂利 用率都会有明显提高。 2.4 亲和分离法 亲和力为基础，借助物质间的特异性结合力，使目的物质或者杂质与相应的配基结合而达到分离纯化目的物的目的，即亲和分离法，包括亲和沉淀法、亲和膜分离法、亲和过滤法、亲和层析法等。尤以亲和层析法和亲和沉淀法的应用广泛。亲和层析法是利用蛋白质和酶的生物学特异性，即蛋白质或酶与其配体之间所具
高效液相色谱方法的验证
高效液相色谱方法的验证 ?方法验证的目的 ?方法验证的内容 ?方法验证的项目及测定方法
方法验证的目的 目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。 方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。
方法验证的内容 ?准确度 ?精密度 ?专属性 ?检测限 ?定量限 ?线性和范围 ?耐用性
准确度 定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。一般用回收率%表示。 1. 主成分含量测定 原料药：对照品或方法比对 2. 制剂、中药：标准加样回收 杂质定量 测定：加样回收（n 3 9） 杂质对照品 方法比对 回收率 C-A %=′ B 100% 杂质与主成分的相对含量 A:试验供试品中被测成分的量 （通常为含量测定量的50%） B: 试验供试品中加入的对照品的量 （通常为±20%） C:试验测定值
精密度 定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差 1. 重复性（n 9） 3 2. 中间精密度 3. 重复性 测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度， 分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。 同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。
专属性 定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。 1. 鉴别反应 2. 含量测定 杂质测定 测定： 限量检查 空白制剂，模拟复方 加速破坏试样测试 DAD峰纯度检查
鸡蛋清中提取溶菌酶方法的研究
第7卷第3期大连民族学院学报V ol.7 No.3 2005年5月 JOURNAL OF DALIAN NATIONALITIES UNIVERSITY May 2005 鸡蛋清中提取溶菌酶方法的研究 大连民族学院生命科学学院2001级高威孙纯义 溶菌酶是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-β-N-溶菌酶. 因其对人体细胞没有毒性作用，故在医学、食品科学等领域广泛应用. 蛋清中溶菌酶的含量约2‰，但杂蛋白的含量很高，使得在制取高纯度溶菌酶时操作比较复杂，成本较高. 本文介绍的方法操作简便，成本低，收率高. 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 实验原料：新鲜的鸡蛋清. 试剂：冰醋酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、考马斯亮蓝G-250、磷酸、95%乙醇（以上试剂均为国产分析纯级），CM Sepharose FF（Parmacia公司生产）. 仪器：TDL—50B低速台式大容量离心机、752紫外可见分光光度计、TA2104H电子天平、恒温水浴锅等. 1.2 实验方法[1] 取100mL纯净水，用醋酸调pH值为3.5，水浴加热到85℃. 加入50mL新鲜蛋清，搅拌加热5min.将所得液体3000r/min离心10min，收集上清液. 将上清液加入处理好的CM Sepharose FF层析柱中，控制流速在200mL/h 左右. 吸附完毕用纯净水冲洗吸附柱，以除去杂蛋白. 用100mL 0.1mol/L的氯化钠溶液洗脱溶菌酶，流速200mL/h. 收集洗脱液，检测酶活力. 1.3 检测方法[2] 溶菌酶活力测定：将处理好的黄色小球菌用生理盐水稀释，使其在波长450nm处，吸光度在0.3~0.8之间. 用生理盐水做空白相，在比色皿中加入20μL洗脱液，然后加入3mL稀释好的菌液，于波长在λ450处，测量1min 内的吸光度下降值. 酶活力单位定义：每分钟引起ΔOD450下降0.001为一个酶活力单位. 溶菌酶活力=ΔOD450/0.001×W（W为加入溶菌酶质量）. 蛋白浓度的测定：采用考马斯亮蓝染色法. 以溶菌酶标准品为标准蛋白. 2 结果与分析 2.1 溶菌酶的提取及初步纯化 溶菌酶属于碱性蛋白酶，化学性质非常稳定，pH在3.0~7.0时其结构几乎不变，仍保持原酶活性. 在中性介质的条件下，溶菌酶能与鸡蛋清中其他蛋白质形成络合物，大大提高了其稳定性. 在这种情况下，溶菌酶的析出被抑制，但如果在该体系加入酸，降低体系pH值，就可破坏上述络合物的形成，使得溶菌酶与酸作用生成相应的盐，这样溶菌酶就可很好地被水提取. 同时，由于大多数的蛋白质分子的等电点都处在酸性或弱酸性范围内，所以也可去除部分杂蛋白，达到初步纯化的目的. 溶菌酶具有较好的热稳定性，当温度不是很高时，短时间的热处理，酶活力不会有明显的变化，而一般的杂蛋白分子会在较低的温度下变性沉淀. 将体系温度升高到85℃时，鸡蛋清中大量的其他蛋白质凝聚，而溶菌酶由于其耐热性较高则不会凝聚，仍在上清液中，这样也可以促进溶菌酶与其他蛋白质分开. 这样通过调节体系的pH值及温度，可达到从蛋清中较好地提取溶菌酶的目的. 2.2 用CM Sepharose FF高度纯化 CM Sepharose FF是弱酸性阳离子交换树脂，对溶菌酶有较高的吸附能力，与传统离子交换剂相比具有吸附速度快,能够快速洗脱的特点. 可使溶菌酶比活力由吸附前874U/mg上升到18 830U/mg，蛋白活力提高了22倍，且收率较高. 3 结论 查溶菌酶标准曲线可得洗脱液中溶菌酶的含量为1.05mg/mL，总得率为0.19%. 以黄色小球菌测定，酶活力为18 830U/mg. 所得酶活力与传统提取工艺相比纯度有较大的提高，同时具有操作简便、成本较低、收率较高、生产周期短等优点. 参考文献： [1] 张文会，王艳辉. 离子交换法提取鸡蛋清溶菌酶[J]. 食品工业科 技，2003（6）24：57-59. [2] 林亲录，马美湖. 鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化[J]. 食品科学， 2002（2）23：43-46.
溶菌酶
溶菌酶 2010级基地班马冬珂10104109 一：溶菌酶的性质： １９０７年，Ｎｉｃｏｌｌｅ最早发表了枯草杆菌溶菌因子的报告，两年后，Ｌａｓｃｈｔｓｃｈｅｎｋｏ指出，鸡蛋也有较强溶菌活性，并把它命名为溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＥＣ３．２．１．１７）。紧接着Ｆｌｅｍｉｎｇ和Ｍｅｙｅｒ等证实植物中也含有溶菌酶，以后人们对溶菌酶的特性有了更深入的认识。（1） 溶菌酶是一种广泛存在于各种动植物有机物中的糖苷水解酶，作用于Ｎ一乙酰氨基葡萄糖和Ｎ一乙酰胞壁之间的８—１，４键，能使某些细菌细胞壁中的粘多糖成分分解。是由１２９个氨基酸残基组成的碱性球蛋白，等电点在ｐＨ值１０．８左右，分子量为１４０００，化学性质非常稳定。当ｐＨ值在１．２—１１．３的范围剧烈变化时，其结构几乎不变。在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强；ｐＨ值低于４时，溶菌酶可以长期在室温下存放。其纯品为白色或微黄、黄色的结晶体或无定型粉末，无异味，，微甜，易溶于水，遇碱易被破坏，不溶于乙醚. 280nm的消光系数为13.0。酶活性可被该酶活性可被一些金属离子Cu2+，Fe2+，Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+,Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。 二：提取原材料和提取方法: 溶菌酶广泛存在于家禽的蛋清、哺乳动物组织的分泌液中，一些植物（如卷心菜、木瓜等）的汁液中也有强力的溶菌酶活性。目前一般从蛋清和蛋壳中提取溶菌酶。 提取原料：鸡蛋（含量约为2%到4%）。鸡蛋清按水分和固形物所占比重，则含水分87%，固形物13%；固形物中大约90%是蛋白质， (2) 提取方法： １.蛋清中溶茵酶的提取：蛋清中的溶菌酶可用吸附法提取，过程如下：蛋清过滤（９０目１００目），加入７２４型树脂吸附（每公斤蛋清加１５ｇ）一倾去蛋清一冲洗并控干树脂。用质量分数１０％硫酸铵洗脱一洗胶液中加入晶体硫酸铵（３０ｇ／１００ｍＬ）沉淀溶菌酶，沉淀晾干即得到溶菌酶粗制品。蛋清中的溶菌酶也可用直接结晶法制取，即在蛋清中加入食盐（ＮａＣＩ）。使其质量分数达到５％，并调节溶液ｐＨ值至１０．０左右，加入少许溶菌酶晶体为晶种，于-４摄氏度冰箱冷却静置７ｄ一１４ｄ即可获得溶菌酶的结晶品。这种工艺方法可获得较高纯度的溶菌酶，收率也比较高。可广泛用于从蛋清提取溶菌酶的工业化生产。 ２.蛋壳中溶茵酶的提取：蛋壳中（实际上是蛋壳膜）溶菌酶含量虽然较低，但从变废为宝的角度考虑，仍是提取溶菌酶的重要原料。具体工艺流程如下：蛋壳一质量分数１％ＮａＣＩ抽提滤液加热去除杂蛋白，加聚丙酸凝聚（富集），溶解凝聚物，加氯化钙沉淀上清液结晶。 三：制备（重点）： 1..酸性条件下热处理法提纯溶菌酶：在酸性条件下溶菌酶具有热稳定性，不易变性失活，且溶菌酶和卵蛋白的等电点分别为11.0和4.5，由于溶菌酶和卵蛋白的性质著异，因而在实验中采用热变性和调pH值使卵蛋白沉淀的方法来探讨去除卵蛋白的较好方法。研究发现溶菌酶和卵蛋白之间存在静电作用力，在加热
蒸鸡蛋羹的八种作法
一、 蒸鸡蛋羹是食用鸡蛋的一种好方法，味美好吃，营养受损少，老少皆宜。但做蒸鸡蛋羹切忌以下四点： (1)忌加生水和热开水。加生水因自来水中有空气，水被烧沸后，空气排出，蛋羹会出现小蜂窝，影响蛋羹质量，缺乏嫩感，营养成分也会受损。也不宜用热开水，否则开水先将蛋液烫热，再去蒸，营养受损，甚至蒸不出蛋羹。最好是用凉开水蒸鸡蛋羹，会使营养免遭损失，也会使蛋羹表面光滑、软嫩如脑，口感鲜美。 (2)忌猛搅蛋液。在蒸制前猛搅或长时间搅动蛋液会使蛋液起泡，搅氵解后蒸时蛋液不会溶为一体。最好是打好蛋液，加入凉开水后再轻微打散搅和即可。 (3)忌蒸前加入调味品。蛋羹若在蒸制前加入调味品，会使蛋白质变性，营养受损，蒸出的蛋羹也不鲜嫩。调味的方法应是，蒸熟后用刀将蛋羹划几刀，加入少许熟酱油或盐水以及葱花、香油等。这样蛋羹味美，质嫩，营养不受损。 (4)蒸制时间忌过长，蒸气不宜太大。由于蛋液含蛋白质丰富，加热到85℃左右，就会逐渐凝固成块，蒸制时间过长，就会使蛋羹变硬，蛋白质受损。蒸气太大就会使蛋羹出现蜂窝，鲜味降低。 蒸鸡蛋羹最好用放气法为好，即蒸蛋羹时锅盖不要盖严，留一点空隙，边蒸边跑气。蒸蛋时间以熟而嫩时出锅为宜。
巧蒸鸡蛋羹: 在所用的容器上盖一个小盘子,再蒸,不论时间长短,不论是稠稀，做出来依然又滑又嫩. 蒸鸡蛋羹：鸡蛋羹是否能蒸得好，除放适量的水之外，主要决定于蛋液是否搅拌得好。搅拌时，应使空气均匀混入，且时间不能过长。气温对于搅好蛋液也有直接关系，如气温在20℃以下时，搅蛋的时间应长一点（约5分钟），这样蒸后有肉眼看不见的大小不等的孔眼；气温在20℃以上时，时间要适当短一些。不要在搅蛋的最初放入油盐，这样易使蛋胶质受到破坏，蒸出来的鸡蛋羹粗硬；若搅匀蛋液后再加入油盐，略搅几下就入蒸锅，出锅时的鸡蛋羹将会很松软。 蒸鸡蛋羹新技术 当你蒸的鸡蛋羹成蜂窝状，水和鸡蛋分离时不妨使用如下方法试一试： 1、加水量：一个鸡蛋可加入与该鸡蛋重量相同的1-3份水，加1份水鸡蛋羹硬一些，加3份水鸡蛋羹软一些。根据你的需要适当选择； 2、加水类别、温度：加水时要加30度左右的温开水（不要用自来水）； 3、其他辅料：适合你口感的适量食盐，葱花； 4、充分搅拌均匀：一只手用筷子或打蛋器搅拌鸡蛋和水，一只手旋转容器，直至打到蛋液上出现1公分高的气泡为止； 5、在蒸锅里放足够的水，把打好的鸡蛋液放在蒸锅里开火蒸，蒸锅水开后记时间，开锅后再蒸10分钟即可； 6、从蒸锅里取出鸡蛋羹，根据你需要的口味加入醋、香油、酱油、鸡精等调料，即可食用。 注意几点，定会蒸出好吃的蛋羹： 1.蛋和水的比例约为1：2； 2.要加温水并与蛋液充分搅匀； 3.加入香油、盐、鸡精、葱花等调味品稍搅一下； 4.等蒸锅水烧开后再放入装蛋液的碗，小火蒸至蛋液凝固即关火。 一碗香喷喷的鸡蛋羹就此诞生。 二、 我做的鲜虾鸡蛋羹又香又嫩哟！（放海鲜的最好吃了） 原料：鸡蛋两个、鲜虾仁50g 辅料：葱、花生油、盐 作法：
鸡蛋溶菌酶提取
鸡蛋溶菌酶提取 溶菌酶（又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶） 是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。 性质： 白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适 pH值6.5。稳定性：酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃， pH值为3条件下，15min后活力保持87%。抑制剂有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性剂(十二烷基硫酸钠、醇类和碳链不少于12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm 处的吸光系数为26.4。通过水解细菌细胞壁的肽聚糖来溶菌 作用： 溶菌酶的用途极为广泛，在医药上，可与血液中的病毒结合，阻止流感、腺病毒等的繁殖；能分解粘多糖，有利于脓汁、痰液的排出；能清除坏死组织、增进抗生素的药效以及促进肠道有益细菌如乳酸菌的繁殖等作用；另外，它与抗生素联合应用还可治疗支气管炎、肺炎、白喉、小儿急性肾炎等多种疾病。在食品上，卵清溶菌酶是无毒的蛋白质，能选择性地使目标微生物细胞壁溶解，而对其他物质无反应，人们利用它来代替有害健康的化学防腐剂（如苯甲酸及其钠盐），以达到保存食物的目的，是一种天然防腐剂；溶菌酶添加于牛乳，可使牛乳人乳化，提高了牛乳的营养价值。 提取工艺： （一）鸡蛋清中提取溶菌酶 方法一——食盐盐析 一．材料： 原料：鸡蛋、NaOH、NaCl、丙酮、（市售溶菌酶粉剂） 仪器与设备：搅拌器（200-300r/min）,离心机（4000r/min），抽滤机 二．工艺流程： 原料→ 清洗→ 去蛋壳→ 分离蛋清→ 搅拌→ 过滤→ 加盐→ 调节pH 值→ 结晶→ 干燥→ 成品→ 包装
溶菌酶实验 实验报告 第七组
溶菌酶的提取和系列性质测定实验报告 学院：生物科学与工程学院 班级： 姓名： 学号： 组别：第七组 组员：
一、实验内容： 溶菌酶的提取和系列性质测定 在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种方法交替应用，才能得到较为满意的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离提纯效果。 溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶、球蛋白G，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。溶菌酶相对分子质量约为1.44×104，是一种强碱性蛋白质，等电点在10.0以上，并对温度和酸不敏感。在自然界中，普遍存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿液、淋巴液等细胞中，植物卷心菜、萝卜、木瓜等，以蛋清含量最丰富，约为0.3%。 本实验用鸡蛋为原理，通过阳离子交换层析，硫酸铵沉淀，分子筛层析等步骤提取溶菌酶。 二、实验原理： 1蛋白质提取分离技术 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代
生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止酸、硷、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况：（1）得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等；（2）利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理。另外，对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存，对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。 2.柱层析技术 柱层析技术也称柱色谱技术。一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将蛋白质混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据蛋白质混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同蛋白组分逐一分离。 根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离蛋白质的经典层析技术。
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证作者：张建芝冯顺 来源：《维吾尔医药》2013年第07期 摘要：目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。方法：以Diamonsil CLC-ODS（150mm x 6mm，10 lm）为色谱柱，水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254 nm，外标法定量。结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg / ml，相关系数r= 0.9991，方法重复性试验 RSD为 1.42%。结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。 关键词：头孢氨苄高效液相色谱法 头孢氨芐（Cefalexin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。其含量测定在旧版的中国药典（ 1995年版）采用碘量法○1。但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结果○2。现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。 1.仪器与试药 分析天平（precisa instrument ltd switzer land xs 225a precisa ），高效液相色谱柱（diamonsic C18 250 * 46mm），检测器（UVD 170v），泵（P680 HPLC pump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102） 2. 色谱条件 用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液 - 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。 3. 实验试剂制备 3.1 对照品储备液的制备：对照品储备液的制备：取头孢氨苄对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，为对照品储备液。 3.2 供试品溶液的制备：去装量差异项下的内容物，混合均匀，精密量取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置于 100ml 容量瓶里，加流动相适量，充分振摇使溶解，再加流动相稀释至
一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法
(10)授权公告号 (45)授权公告日 2014.11.12 C N 103114082 B (21)申请号 201310069093.9 (22)申请日 2013.03.04 C12N 9/36(2006.01) (73)专利权人浙江工业大学 地址310014 浙江省杭州市下城区潮王路 18号 (72)发明人张健 金志敏 夏春年 姚小武 张岩 (74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公 司 33201 代理人黄美娟 王兵 CN 1108381 C,2003.05.14, 陈若飞.从蛋壳中提取溶菌酶的研究..《沈 阳化工学院院报》.2008, 卢庆祥.用聚丙烯酸凝聚提取溶菌酶..《化 学教学》.1995, M. Sternberg 和D. Hershberger.Separation of proteins with polyacrylic acids..《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure 》.1974,(54)发明名称 一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法 (57)摘要 本发明公开了一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的 方法：用水将鸡蛋清溶解，调节pH 至4.0～5.0 并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获 得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与 滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物 在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解 离，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使 其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶；本发明使用的原 材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、 生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工 业化生产。(51)Int.Cl.(56)对比文件 审查员 孙彦珂 权利要求书1页 说明书5页 (19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利权利要求书1页 说明书5页(10)授权公告号CN 103114082 B
鸡蛋的做法大全
鸡蛋的做法大全 一、腊肠鸡蛋?a href='//' target='_blank'>滤镜淖龇?/strong> 材料 吐司三片，腊肠，鸡蛋，芝士丝，橄榄油适量。 做法 1、腊肠洗好，切小丁，芝士切丝备用。 2、电饼铛放入一丁点油，预热，把腊肠倒入。 3、腊肠翻炒一会儿，打入鸡蛋，一起煎。 4、在两片吐司上各撒一点芝士丝，把腊肠煎蛋放在吐司上，一起烤。 5、烤热后，把三片吐司叠加，从中间切开即可。 二、鸡蛋羹的做法 材料 鸡蛋2个，水 做法 1、准备鸡蛋两个、水大概鸡蛋的两倍少一点左右 2、鸡蛋打散，建议不放盐。 3、水不能是自来水，最好是凉开水或者30°左右的温开水，倒入鸡蛋液中。 4、轻轻顺着一个方向搅拌，不要弄出很多泡沫。 5、用筛子过滤蛋液，滤除蛋筋。 6、水开后在上锅蒸，先大火1-2分钟。 7、然后转小火，盖子不能盖严，要留小缝隙。 8、10-15多分钟就好了。如果不确定好没好，轻轻碰一下碗，如果还有水波纹就是没熟，如果出现蜂窝就是煮过了。 小诀窍
最简单的吃法：加生抽、香油。还有可以在7-8成熟的时候加入鲜虾，也可以再蒸之前，加入嫩豆腐一起蒸。这三种我都做过，效果都很赞! 三、香葱鸡蛋千层饼的做法 材料 香葱，鸡蛋3个，盐，胡椒粉 做法 1、准备鸡蛋和香葱。 2、鸡蛋打入碗中。 3、香葱切细末。 4、调入适量的盐和胡椒粉，把香葱末倒入蛋液里，搅拌均匀。 5、电饼铛或者平底锅抹一层薄油，倒入一层薄薄的香葱蛋液，开小火煎我不喜欢油腻，所以没抹油 6、待蛋饼底部煎熟，表面刚刚熟的时候，卷起来，靠旁边放。 7、接着再倒入一层薄薄的蛋液。 8、同样煎至表面刚熟的时候继续卷起，移至旁边。 9、要是觉得大小满意了，就可以了我一共卷了4层为一组 小诀窍 1、每一次煎的时候蛋液都不要倒多了，越薄越好。 2、香葱的量随意放，但要切得细一点，更便于煎制。 3、煎的时候中小火就好。 4、吃的时候表面抹点番茄酱或者辣椒酱也很好吃。 5、如果不熟练煎饼的话，可以在每一次煎好一块饼以后，卷起，然后关火，再继续倒入一层蛋液，流动均匀后，再开火煎，免得火开着，加上动作不够熟练，一下去蛋液就熟了。 四、焦糖牛奶鸡蛋布丁的做法
第一节 溶菌酶的提取
第一节溶菌酶的提取 一、简介 1.Lz的结构及组成 溶菌酶(Lysozyme,EC 3.2.1.17)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶,又称细胞壁溶解酶（Muramidase），是由英国细菌学家弗莱明(Fleming)在1 92 2年在人的眼泪、唾液中发现的。溶菌酶广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁、其它体液（如淋液）中及白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，而且部分植物、微生物中也含有此酶。其中人溶菌酶的活性是最高的，大约为鸡蛋清溶菌酶酶活力的3倍。但是蛋清中溶菌酶含量最丰富，约为0.3%-0.4%左右，而且蛋清来源广泛，因此多数商品溶菌酶是从蛋清中提取的。人们根据溶菌酶的溶菌特性，将其应用于医疗、食品防腐及生物工程中，特 别是在食品防腐方面，以代替化学合成的食品防腐剂，具有一定的潜在应用价值。 鸡蛋清溶菌酶是动植物中溶菌酶的典型代表，也是目前了解最清楚的溶菌酶之一。此酶为白色、无臭结晶粉末,味甜，易溶于水，遇碱易破坏，不溶于丙酮、乙醚中。其分子是由129个氨基酸残基排列构成的单一肽链（见图6-1），有四 图5-1 溶菌酶的分子结构 对二硫键，分子量为14300。结晶形状随结晶条件而异，有菱形八面体、正方形六面体及棒状结晶等。 2.Lz的基本性质 Lz是一种碱性球蛋白，广泛存在于鸟和家禽的蛋清中。其酶蛋白性质稳定，热稳定性很高。 （1）Lz的热稳定性 Lz在酸性pH下是稳定的，此时100℃的加热对Lz仅有较小的活力损失。在pH4.5（100℃，3min）、pH5.29（100℃，3min）下加热，Lz是稳定的。一般认为Lz在酸性条件
下稳定，在碱性条件下不稳定。 糖和烯烃类能增加Lz的热稳定性，NaCL对Lz也有抗热变性作用，而且盐溶液的存在对Lz的活力是十分必要的。在低盐浓度时，Lz的活化和离子强度密切相关，在高盐浓度时对Lz的活力受到抑制，阳离子的价态愈高则抑制作用愈强。具有—COOH和—SH3OH基的多糖对Lz活力有抑制作用。 （2）加工过程中的化学变化 蛋白质和过氧化的脂类作用对食品的储藏有着重要的影响，自由基使不饱和脂肪酸过氧化产生H2O2,导致产品的破坏，这类反应的一个特征是产品的溶解性下降。溶菌酶和过氧化甲基亚油酸盐一起培养，导致蛋白质溶解度的下降和增加了溶解部分的分子质量，这是由于在Lz中产生了游离基，而导致其和过氧化的甲基亚油酸作用，研究表明Lz中游离基浓度随水分活度的上升而下降。 在150℃~300℃焙烤对溶菌酶和酪蛋白的作用中，溶菌酶被作为一个纯蛋白质样品在250℃几乎所有溶菌酶的氨基酸被分解，色氨酸，含硫氨基酸、碱性氨基酸和β-OH氨基酸，较酸性氨基酸、脯氨酸、芳香族氨基酸(除色氨酸外）、有烷侧链的氨基酸容易分解这在氨基酸和还原糖间形成风味和有色物质的美拉德反应中是很重要的。 （3）络合作用 溶菌酶和许多物质形成络合物导致其失活。人们发现等量蛋清和蛋黄的混合物其溶菌酶无活力；脱水全蛋中仅保留部分溶菌酶的活力；蛋黄污染的蛋清仅有两个离子交换色谱峰，而不是无污染的三个峰；对全蛋的色谱分离无溶菌酶。据此，研究者认为抑制机理是在溶菌酶和蛋黄化合物间形成静电相互作用的络合物所致。 3.Lz的用途 溶菌酶作为一种活性物质可应用在各个领域，我国的食品工业、酶工程、发酵工业、医学和科学研究对溶菌酶有较大的需求。 由于溶菌酶对多种微生物有抑制作用，因此可以用于食品保鲜。目前主要应用于海产品、水产品、乳制品和干酪的保鲜，低度酒、糕点及饮料的防腐，以及水产熟制品及肉类熟制品的防腐保鲜的方面。 此外在发酵工业领域，酵母膏是发酵工业中用量最多的一类培养基成分。它的制备目前大多是采用酵母自溶法或酵解酵母的办法制成的。如果改用溶菌酶制备酵母膏，则不仅可以提高浸膏量的收率，还可以大大缩短酵母膏的制备时间。另外溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程中必不可少的工具酶。由此可见溶菌酶的用途极其广泛。 4.Lz的来源及分布 1937年由Abraham与Robinson从卵蛋白中最先分离出晶体溶菌酶此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在，根据来源不同，将溶菌酶分为以下三类： （1）动物源溶菌酶 动物源溶菌酶包括鸡蛋清溶菌酶及人和哺乳动物溶菌酶。鸡蛋清溶菌酶是目前研究和应
4种美味的鸡蛋汤做法
4种美味的鸡蛋汤做法 鸡蛋汤的做法【1】 材料 番茄3个，鸡蛋2枚，盐，葱花 做法 1.番茄入滚水烫1分钟，捞起放入凉水中，番茄剥皮去籽，切块备用。鸡蛋打散，加少许盐备用。 2.锅热油至7分熟，倒入切好的番茄，翻炒片刻，然后倒入适量清水烧开，加入少许盐。 3.汤汁烧开熄火，把蛋液缓缓地倒入汤中，(此时不要搅动汤)，待鸡蛋成蛋花状后再轻轻搅匀，食用时撒上葱花即可。 鸡蛋汤的做法【2】 材料 主料：鸡蛋50克，番茄100克， 辅料：菠菜200克， 调料：植物油50克，大葱5克，盐3克，味精1克 做法 1.鸡蛋磕入碗中放入精盐，打散入热油锅中煎至两面发泡; 2.用锅铲切成几块，倒入高汤煮开; 3.把用开水烫过的番茄去皮、籽、蒂，切片; 4.菠菜切段与番茄放入蛋汤内略煮起锅。
小诀窍 食物相克： 鸡蛋：与鹅肉同食损伤脾胃;与兔肉、柿子同食导致腹泻;同时不宜与甲鱼、鲤鱼、豆浆、茶同食。 番茄：西红柿忌与石榴同食。 鸡蛋汤的做法【3】 材料 蕃茄，鸡蛋 做法 1.把蕃茄用开水烫一下，去皮(这是妈妈教我的方法)，切片; 2.鸡蛋打散，备用; 3.锅烧热，放点油;油热的时候放进蕃茄，炒出颜色来; 4.再放适量清水煮开，然后调小火，把鸡蛋液慢慢倒入锅里，关火，加盖闷一下，蛋液就熟了，加盐ok! 鸡蛋汤的做法【4】 材料 西红柿、鸡蛋、葱花、盐、糖 做法 1、西红柿洗净打十字刀，入开水滚烫1分钟，入凉水冷却使外皮骤冷收紧脱落。 2、上锅烧开水。西红柿分两份，一份切丁先入锅煮汤，一份切大块后入锅保留西红柿口感。 3、稍煮片刻汤汁变红香气涌出后，冷水调淀粉，边搅边缓缓倒入，锅里气泡腾起变慢，汤汁微微粘稠，薄芡勾好。
鸡蛋清溶菌酶提取实验具体步骤
从鸡蛋中提取溶菌酶的步骤 1.鸡蛋清样品制备及粗分离 将4～5 个（为一个小组，同时两个小组共同进行试验）新鲜鸡蛋打入烧杯然后用矿泉水瓶子吸出蛋黄，分离得鸡蛋清（鸡蛋清pH 值不得小于8.0），量其体积（量筒50ml），加入两倍蛋清体积的（可用双蒸水替代）去离子水，边加边缓慢搅拌，拌匀后用两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，然后用1 mol ／L 的HCl 溶液调pH 值至7.0 左右，再用脱脂棉过滤收集滤液。 2. 724 弱酸性阳离子交换树脂的再生及层析 1.吸附： 将处理好的蛋清约200 mL，加入32 g再生的724 树脂中，缓慢搅拌吸附6 h。 2.洗涤、洗脱： 待分层后，将蛋清液倒去，用去离子水反复冲洗，以去除杂蛋白，滤干树脂，用等体积的0.15mol ／L pH 值为6．5 的磷酸缓冲液洗涤，加入等量的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，使溶菌酶从树脂上洗脱下来，收集洗脱液，4℃冰箱静置过夜。 第二天，有白色沉淀析出，离心（15 min，10 000r ／min）收集沉淀，沉淀物为溶菌酶粗产品 浓缩 1·透析除盐、去碱性蛋白： 4℃条件下，用去离子水透析24 h 左右（1天）直到透析完全（用BaCl2与透析液发生反应直到没有浑浊产生为止）。离心去除透析袋中沉淀，向透析清液中慢慢加入1 mol ／L 氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH 值上升至8．0～9．0，如有白色沉淀，即离心去除；（碱性蛋白在此pH条件下会到等电点然后就会沉淀） 2·聚乙二醇浓缩： 盐析物用1 倍去离子水溶解成稀糊状，装入透析袋，在装有聚乙二醇的试管中吸水浓缩，收集浓缩液； 3·冷冻干燥： 用3 mol ／L 盐酸调pH值至5．0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶。 溶菌酶纯度检测 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ①凝胶板的制备： 用30％分离胶贮液、pH 值为8.9 分离胶缓冲液、10％浓缩胶贮液、pH 值为6.7浓缩胶缓冲液、10％SDS、1％TEMED、重蒸馏水、10％APS 溶液配制而成； ②溶菌酶的处理： 用磷酸缓冲液制成50 μg ／mL 的溶液，取10~80 μL 点样于凝胶板上 ③电泳： 电流为10 mA，时间4 h； ④固定、染色和脱色： 电泳完毕，将胶板从玻璃板上取下，分别在固定液与染色液中浸泡10～30 min，用水漂洗
溶菌酶的提取-分离纯化-产物纯度鉴定和活性测定
溶菌酶的提取，分离纯化，产物纯度鉴定及活性测定 实验目的： 1、学习和掌握溶菌酶的制备过程 2、学习和掌握溶菌酶的纯化过程 3、学习和掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的德原理和技术 4、测定溶菌酶的分子量和所提取的溶菌酶的浓度 5、测定所提取的溶菌酶的活性 试验原理： 溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适pH值6.5。酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。 该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。 2.1、离子交换层析 离子交换层析是依据混合样品中各种离子或离子化合物与离子交换树脂的可交换离子之间的交换程度不同而进行分离纯化的。离子交换层析主要是离子交换剂与溶液中离子或离子化合物以离子交换方式进行，过程是可逆的。由于离子交换剂对溶液中各种离子具有不同的结合力，也就是说，离子交换剂对各离子的排斥和阻滞作用不同，从而引起各离子在柱内的流速差异，逐渐发生分离，最终分别流出层析柱。该法可同时分析多种离子化合物，具有灵敏度高，重复性、选择性好，分离速度快等优点。本实验分离溶菌酶采用732型弱酸性阳离子交换树脂。 2.2、盐析 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶。当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶解中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO42-和NH4+）有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之失水，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析是若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样。溶菌酶在32%硫酸铵盐浓度下的沉淀最多，最适宜作为盐析液浓度。经盐析得到的沉淀为溶菌酶的粗制品。 2.3 透析脱盐 将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚
溶菌酶结晶法提取及其酶活力的探讨_黄赞良
作为一种糖苷水解酶的溶菌酶，又称N-乙酰胞壁质聚糖水解酶或胞壁质酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶广泛存在于鸟类的蛋清及哺乳动物的尿液、泪液、血液、体液(如淋巴液)、组织(如肝)、肾细胞内等[1]。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸(NAM)和N-乙酰氨基葡糖(NAG)之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解为可溶性糖肽，导致细胞壁破裂而使细菌溶解。溶菌酶对人体无毒副作用，是一种安全的天然防腐剂，具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤之功效。可用作为药物制剂、防腐剂、基因与细胞工程中细胞融合剂等[2]。 作为碱性酶的溶菌酶，其来源不同，水解细胞壁的性能也表现为较大差异[3]。溶菌酶水解微生物细胞壁的作用机理是破坏细胞壁结构中的肽聚糖，作用位点是NAM与NAG碳原子间的β-1.4糖苷键[4]。肽聚糖作为微生物细胞壁的主要成份(骨架)，是NAG 与NAM 通过 β-1，4 糖苷键交替排列形成的多层网状结构的共聚物[5]。肽聚糖结构中的任何化学键断裂，都能促使细胞壁中的肽聚糖分解，导致细菌细胞壁被破坏，从而体现溶菌酶的溶菌特性[6]。 近年来，根据不同原料及溶菌酶的特性，提取分离溶菌酶的方法有结晶法、反胶团萃取法、离子交换法、色谱法、亲和层析法等。结晶法这一传统的方法，是由 Mayer Abraham 等提出并获得结晶状溶菌酶[7]。本文利用湖光岩地区的鹌鹑蛋为提取原料，采用结晶法提取分离溶菌酶，进而利用重结晶的方法反复精制，可提取到所需纯度的溶菌酶晶体[8]。 1 实验 1.1 主要仪器、试剂与材料 1.1.1 主要仪器 UV-29200 紫外可见分光光度计；JJ-a 数控恒温磁力搅拌器；M304781 离心机；DSX-280B蒸气压力灭菌锅；KYC-111 摇床；SW-CJ-2F 超净工作台；FD-1B-50 冷冻干燥机；2X-15D 旋片式真空泵；R201 旋转蒸发仪；Sorvalls Upert-21 高速离心机；YP-5002 电子天平。 1.1.2 主要试剂 R-250、G-250考马斯亮蓝；NaH2PO4；Na2HPO4；1mol/L NaOH；20000 u/mg溶菌酶标准液；3g/L牛肉膏；营养肉汤；10g/L胰蛋白陈；微球菌； 5.1%的 NaCl溶液；HCl；CH3COOH；琼脂。 1.1.3 主要材料 新鲜湖光岩鹌鹑蛋，购置于湖光岩农贸市场。 1.2 实验方法 溶菌酶结晶法提取及其酶活力的探讨 黄赞良，谈海玉，邓彩思，张兆霞*，李 泳* （广东海洋大学，广东 湛江 524088） 摘 要：以湖光岩鹌鹑蛋为原料，采用结晶法从蛋清中分离提取溶菌酶。探讨不同条件对溶菌酶收率及活性的影响，确定溶菌酶最佳的分离提取条件：盐析NaCl质量分数为5.1%，pH=10.7，盐 析时间为120h，收率达到 0.378%，酶活力达到 13700 U/mg。 关键词：盐析法；溶菌酶；酶活力 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1004-275X（2017）05-083-04 _________________________ 收稿日期：2017-04-25 基金项目：广东海洋大学团队项目（项目编号：C13435）, 大学生创新创业项目（项目编号：CXXL2016152）。 作者简介：黄赞良，广东海洋大学，制药工程专业，大学生。 *通讯作者：张兆霞，李泳，广东海洋大学教师，从事生物酶相关方面的科研工作。
牛奶煮鸡蛋的正确方法
牛奶煮鸡蛋的正确方法 鸡蛋是平常生活中最不能少的食材，像是清晨的早饭，平常的炒菜以及鸡蛋汤等等都不能少了鸡蛋，鸡蛋的做法多种多样，我们都知道清水煮蛋，但是不知道大家有没有听过牛奶煮蛋，更不知道大家是不是知道牛奶煮蛋的正确方法是什么，如果大家不知道的话，那这篇文章可能就让大家读有所学了! 牛奶煮鸡蛋是一道美食，主要材料有牛奶、鸡蛋、白糖等。营养均衡，简单易学。 原料：牛奶、鸡蛋、白糖。 做法： 1、牛奶煮开后先放入白糖，糖煮化之后再倒入鸡蛋打散，再次煮开; 2、关火!牛奶鸡蛋就煮好了。折叠编辑本段小贴士奶起泡就可以加鸡蛋进去，加进去煮沸一会就可以关火，不要煮太久，不要用配方奶粉去煮，用全脂的就行。牛奶和鸡蛋中所含的蛋白质有不相容性，会互相影响身体对两者营养的吸收，所以最好分开吃。 营养价值： 熟鸡蛋的大部分营养集中在蛋黄，吃蛋黄可以补脑，蛋白含100%蛋白质，剥壳鸡蛋的含钙量不如牛奶，但蛋壳含碳酸钙需要加酸溶解，就会变成可以吸收的钙，相对大部分人鸡蛋营养超过牛奶。
小部分人认为牛奶营养高，如果可以吸收乳糖，那牛奶的营养含大量油水营养就很一般。如果不能吸收乳糖导致喝牛奶就腹泻等就谈不上有营养，得和面包馒头包子等一起吃才能较好吸收。 鸡蛋还有其它重要的微营养素，如钾、钠、镁、磷，特别是蛋黄中的铁质达7毫克/100克;蛋中的磷很丰富，但钙相对不足，所以，将奶类与鸡蛋共同食用可营养互补。鸡蛋中维生素A、B也很丰富。 牛乳中的碳水化合物为乳糖，对幼儿智力发育非常重要。它能促进人类肠道内有益酸菌的生长，抑制肠内异常发酵造成的中毒现象，有利于肠道健康。乳糖还有利于钙的吸收，起到预防小儿佝偻病，中老年人骨质疏松症的效果。 牛奶煮鸡蛋，大家感兴趣的话可以试试!