酵母扩培工艺

酵母扩大培养工艺

1、目的

规范酵母扩培作业程序，有效控制扩培工艺参数，保证培养酵母质量均一、稳定。

2.适用范围

适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。

3.职责

由公司技术处负责编制、修改，实验室和酿造车间负责实施。

4.规定内容

4.1实验室培养

4.1.1培养基制备流程

4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至

5.3-5.5,进行稀释，稀释比例

以最终煮沸浓度控制在12度为准。

4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。升温

至60℃保温30分钟，保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。

4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶， 0.07Mpa灭

菌30分

钟。

4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签，空培(室温放置)3天以上确认无菌后

方可使用。

4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0．10Mpa蒸汽杀菌

1 小时后的卡氏罐中0．10Mpa灭菌30分钟，提前1-2天完成，确保接

种温度稳定。当天能够迅速冷却的，则取当天麦汁处理，冷却后接种。

4.1.2无菌室卫生操作流程

4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。超净台用前提前打开风机及自带的紫

外灯灭菌30分钟。

4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。地面、墙壁、天棚及空间采用甲

醛熏蒸或75%酒精擦试。同时用紫外杀菌30分钟。

4.1.2.3卡氏罐接种，超净台无法操作时，室内空间当天再次进行上述空间杀菌。

4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放，尤其操净台面。以免破坏空气层流。

4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。斜面接

出及卡氏罐接种时各进行一次。

4.1.3实验室阶段扩培工艺流程

1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm

试管中，在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次).

2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的

18×180mm试管中，在25℃培养箱中培养活化24小时.

3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中,

在22℃培养箱中培养24小时.

4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角

瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时.

5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液的5000ml三

角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时.

6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐, 在

13℃培养箱中培养24小时～48小时.

7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐),

在13℃条件下培养24小时～48小时.

4.1.3.1斜面菌种挑取应在距离斜面顶部1/3处边缘部位轻挑一菌耳。液体管之

间的活化过程采取用无菌吸管吸取0.5ml注入10ml液体管内，其他接种方式为全部到入(对瓶口粘培养液的用火烤干再塞盖)。

4.1.3.2对采用软管连接进行接种时，乳胶管能够进行拉刷刷洗时进行拉刷清洗，

用前连同罐一同蒸汽杀菌或采取105℃干热灭菌30分钟后放无菌室备

用，为防止胶管老化，定期更换。不能采取拉刷刷洗时，水冲洗后用75%酒精进行浸泡备用。连接管路进行蒸汽杀菌。

4.2现场培养

4.2.1 CIP刷洗程序

4.2.1.1罐体碱刷洗：清水冲洗(其中包括能走碱水部分)无沫后,采用片碱熔化后

配成2~3%、不低于70℃碱液循环清洗罐体30分钟.

4.2.1.2清水冲洗：清水冲洗20分钟(走碱部分),最后以PH试纸中性为准。

4.2.1.3酸洗：清水冲洗后,用1.0-1.5%的磷酸循环刷洗一次，方法同碱液刷洗。

4.2.1.4清水冲洗：清水冲洗20分钟(走酸部分),最后以PH试纸中性为准。

注：以上清洗以无酸、碱残留为准(最终以PH试纸中性为准)。

4.2.1.4 扩培锥罐执行车间锥罐CIP刷洗工艺。

4.2.2蒸汽杀菌

4.2.2.1罐体及管路、风过滤器包蒸汽杀菌

罐体及管路采用105~110℃杀菌30分钟，其中包括冲氧管、备压管杀菌、风过滤器包杀菌，杀菌结束后保压备用并用无菌风将风过滤器包吹干。罐体杀菌时排气阀、取样阀及管盘接口排放蒸汽保证杀菌20分钟。麦汁、倒酒管路采用105~110℃杀菌20分钟。

4.2.2.2麦汁杀菌

汉生罐、扩大罐麦汁采用热麦汁，升温至100℃保温30分钟，保温结束

后保压降温至接种温度，接种前通风搅拌2分钟,锥罐采用大生产冷麦汁。

4.2.3扩培工艺流程（暂行）

卡氏罐（25L）→汉生罐（0.3KL15.0℃）———→扩大罐（3KL13.0℃）

↓

汉生罐（0.3KL15.0℃）

↓

100吨罐50KL10℃←锥罐35KL11℃←锥罐12KL11℃←扩大罐（3KL13.0℃）

锥罐追加12KL后，当酵母数达到3000-4000万个/ml后追加35KL麦汁；

当酵母数达到3000-4000万个/ml后4小时之内追加麦汁，满罐温度10℃。

注：1.麦汁浓度采用12度麦汁。

4.3保种

汉生罐迅速冷却至2-4℃保种,一次保种≤10天。

4.4其他要求

4.4.1 各级扩培罐倒空后立即清洗,清洗结束背压，超过48小时重新进行清洗，

接麦汁前进行蒸汽杀菌。

4.4.2灭菌麦汁冷却后存放时间不超过6小时，冷麦汁不超过2小时。

4.4.3各级扩培酵母数应提前预测,达到工艺标准后追加麦汁时间不超过2小时。

4.4.4风（蒸汽）滤芯清洗、更换。绝对精度0.01-0.02 um滤芯一年内更换一次

无菌风滤芯（以实际微检情况为准并参照使用说明）,粗滤、精滤及蒸汽过滤滤芯每月拆卸刷洗一次。

4.4.5扩培过程每罐酵母液进行微生物检验：细菌总数。过滤后风系统每3天检

测一次细菌总数。每一批菌种接种前的冷麦汁检一批次。

4.5培养过程酵母检测方法（包括锥罐酵母）个/ml

4.5.1 酵母数和出芽率测定方法

取洁净的血球计数板,在计算室上面加一个盖玻片,将被测的酵母菌悬浮液摇匀,用洁净的玻璃棒取少许,从盖玻片的边缘滴一滴, 使菌液自行渗入,计算室内不得有气泡,静置放一会,在600倍显微镜下观察,计算:即5个中格的细胞总数(?包括出芽细胞)和出芽的细胞数,计算方法以“计上不计下，计左不计右”为原则。

注:计算酵母数时,当细胞(芽)大于或等于母细胞1/2时,该细胞不算出芽,?而算两个

细胞,当子细胞(芽)小于母细胞的1/2时, 该细胞算作出芽的一个细胞.

4.5.2 酵母死亡率测定方法

4.5.2.1 0.01%美兰试剂配置：取0.010g美兰溶于10ml蒸馏水中,加2.0克二水

柠檬酸

搅拌溶解,再用蒸馏水定容至100ml.每3个月更换一次。

4.5.2.2死亡率测定：在洁净的血球计数板计算室上加盖盖玻片，取摇匀后待检样

品于盖玻片边缘滴入，菌液自行渗入后同法滴入0.01%美兰一滴,与之混合后在600倍显微镜下观察细胞着色情况,已柒成兰色的为死细胞,计算死细胞占总细胞百分率.

培养液、酵母泥检测细胞总数不少于500个。

啤酒发酵酵母扩培学习资料

啤酒发酵酵母扩培学习资料啤酒厂获得接种酵母的方式有三种方式，其优缺点见图2.1：这三种方式是：购买酵母泥；购买纯种酵母；自己保存和培养纯种酵母。图2.1 啤酒获得酵母的方式和其优缺点第一节纯种酵母的培养一、培养啤酒纯种酵母工艺原理酵母是一种兼性微生物，这就是说，细胞的新陈代谢和繁殖即可以在有氧的状态下也可以在无氧的状态下进行。啤酒酵母菌的的繁殖过程分为四个阶段（见图2.7）： 1．迟缓期：在此期间，虽有营养物质存在，但酵母基本不繁殖； 2．对数生长期：此期间酵母繁殖最为迅速； 3．稳定期：此时，代谢产物CO2和酒精的积累使酵母繁殖逐渐变慢，活菌数最高； 4．衰亡期：营养物质耗尽和有毒代谢产物大量积累，酵母菌死亡率增加，活菌数减少。酵母培养中，最重要的阶段是对数生长期，此时的营养、氧气供给及其他条件如：酵母细胞浓度和温度都必须达到最佳。酵母由于不断地消耗氧气，必须连续通入足够的无菌空气。因为氧气缺乏时，其中一部分酵母会进行发酵，从而产生CO2和酒精，而不是产生新细胞，这样生成的有活力的细胞数就减少了。二、啤酒纯种酵母的分离培养啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的单细胞酵母从原菌中分离出来，加以扩大培养，供生产使用。分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离法或划

线分离法。获得原菌的方法：（1）从实验室保存的原菌种中分离，原菌种必须先经过几次培养活化的再行分离；（2）从生产中的酵母泥或主发酵液中分离。 1．平板分离培养法（又称稀释分离法，见图2.2）这种方法简单易行，适合于工厂现场使用。先将盛有麦汁的琼脂试管培养基放在热水中融化，冷却至42～45℃，再将准备分离培养的酵母原菌用白金针移植到已融化的培养基内。如分离培养发酵液的酵母，则先使之静置，倾出上部清液，留少量发酵液，混合均匀后接种。如分离培养酵母泥，需加少量无无菌水或麦汁，稀释后再接种。将分离培养的酵母移植于融化的培养基内后，充分振荡，使混合均匀，用白金针从该试管挑少许移植到第2支试管中，随即将第1支试管中的培养基倾注在已灭菌的培养皿中，均匀分布在培养皿底面，使之凝固。用同样方法再从第2支试管移植到第3支，而后第4支试管内，分别将取样后的培养基倾注在培养皿内，如图所示。然后，将培养皿置25～27℃保温箱中培养2～3天，每天检查菌落生长情况，剔除形态上有改变的菌落，选择菌落形态正常、细胞大小均匀的菌落进行培养。必要时应进行2～3次重复分离。图2.2 平板分离培养法 2．划线分离培养法此法和平板分离法的根据是相似的，各有优点。划线法简单，速度较快；平板法在平板上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率略高。用接种针挑取适当稀释的菌液，直接在已灭菌的平面皿培养基上划线（图2.3），在第3或第4划线区可能得到单一菌落。然后将所需要的菌落移植到斜面培养基上，以待进一步检查。这个方法一般用于分离纯化生产上已有的菌种。图2.3 划线分离培养法 1,2,3,4-分别表示第1,2,3,4次划线区

酵母表达系统使用心得

Pichia酵母表达系统使用心得甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕赤酵母表达的经典试剂盒过程中的心得体会。其中Xiang Yang是来自美国乔治城大学（Georgetown University）Lombardi癌症中心（Lombardi Cancer Center），部分用户来自国内。甲醇酵母部分优点： 1.属于真核表达系统，具有一定的蛋白质翻译后加工，有利于真核蛋白的表达； 2.AOX强效启动子，外源基因产物表达量高，表达产物可以达到每升数克的水平； 3.酵母培养、转化、高密度发酵等操作接近原核生物，远较真核系统简单，非常适合大规模工业化生产； 4.可以诱导表达，也可以分泌表达，便于产物纯化； 5.可以甲醇代替IPTG作为诱导物，部分甲醇酵母更可以用工业甲醇替代葡萄糖作为碳源，生产成本低。产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-myc epitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alpha factor（α-factor）用以分泌表达，并且在表达后α-factor可以自动被切除。在进行克隆的时候，如果你选择的是EcoRI，那么只需在目标蛋白中增加两个氨基酸序列即可完成。另外pPICZ系列选用的是Zeocin抗生素作为筛选标记，而诱导表达的载体需要甲醇——甲醇比一般用于大肠杆菌表达诱导使用的IPTG便宜。第一步——构建载体 Xiang Yang：pPICZ系列有许多克隆位点可供选择，同时也有三种读码框以便不用的用户需要。红叶山庄：有关是选择pPIC9K还是pPICZ系列？pPIC9K属于穿梭质粒，也可以在原核表达，而pPICZ系列比较容易操作，大肠和毕赤酵母均用抗Zeocin筛选（PIC9K操作麻烦一点，大肠用amp抗性，而毕赤酵母先用His缺陷筛选阳性克隆，在利用G418筛选多拷贝），而且对于大小合适（30—50KD）的蛋白在产量上是pPIC9K无法比拟的。 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的

【免费下载】酵母及酵母制品生产许可证审查细则

酵母及酵母制品生产许可证审查细则一、发证产品范围及申证单元酵母及酵母制品按生产工艺可分为食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品等三类产品品种。食用酵母是以糖蜜、淀粉质等为主要培养基，采用优良的啤酒酵母菌，经发酵培养、分离、洗涤、处理、浓缩或灭活浓缩、干燥而得的食用酵母。酵母深加工产品是以完整新鲜食用酵母为原料，经自溶、酶解、提取等生物技术处理所得到的酵母深加工产品。酵母调配食品是以食用酵母或酵母深加工产品为主要原料，添加适量的食品辅料或食品添加剂，经相应工艺制成的酵母调配食品。酵母及酵母制品申证单元为1个。在生产许可证上要注明申证单元名称和获证产品名称，即其他食品[酵母及酵母制品（食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品）]。生产许可证有效期为3年，其产品类别编号为2801。二、基本生产流程和关键控制环节（一）基本生产流程食用酵母生产流程原料处理→发酵培养→酵母菌分离、洗涤→处理、浓缩→干燥→包装→成品酵母深加工产品生产流程：已洗涤的新鲜食用酵母→自溶、酶解→提取→浓缩或浓缩干、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

毕赤酵母实验操作手册簿

毕赤酵母表达实验手册大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠，是以包含体状态存在。包含体的形成虽然简化了产物的纯化，但不利于产物的活性，为了得到有活性的蛋白，就需要进行变性溶解及复性等操作，这一过程比较繁琐，同时增加了成本。与大肠杆菌相比，酵母是低等真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点，又具有真核生物时表达的蛋白质进行正确加工，修饰，合理的空间折叠等功能，非常有利于真核基因的表达，能有效克服大肠杆菌系统缺乏蛋白翻泽后加工、修饰的不足。因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。大肠杆菌是用得最多、研究最成熟的基因工程表达系统，当前已商业化的基因工程产品大多是通过大肠杆菌表达的，其主要优点是成本低、产量高、易于操作。但大肠杆菌是原核生物，不具有真核生物的基因表达调控机制和蛋白质的加工修饰能力，其产物往住形成没有活性的包涵体，需要经过变性、复性等处理，才能应用。近年来，以酵母作为工程菌表达外源蛋白日益引起重视，主更是因为酵母是单细胞真核生物，不但具有大肠杆菌易操作、繁殖快、易于工业化生产的特点，还具有真核生物表达系统基因表达调控和蛋白修饰功能，避免了产物活性低，包涵体变性、复性等等间题［1］。与大肠杆菌相比，酵母是单细胞真核生物，具有比较完备的基因表达调控机制

酵母扩培工作流程

酵母扩培工作流程 1，菌种选购首先购买具备国家权威机构认可（或注册）的单位提供的菌种，并与提供菌种的科研单位沟通，让其将此菌种制成二十支冻干管（便于常温下长期保存不会变异），以后每年拿出一支冻干管进行转移、保藏（使用至当年年底）、扩培。这种方式培养菌种可以确保生产上使用的酵母不会变异、退变。 2，菌种移植将菌种移植在斜面培养基上（4-7支斜面管），25°培养2-3天，挑选出边缘整齐、呈乳白色无污染长势良好的菌株两只管，放入4°冰箱内保存（注明移种日期、操作人、菌株特性等信息，同时做好笔记）。另选出一支长势良好的菌株移至斜面培养基上（活化）培养2-3天，此次最好移植3-5支斜面培养基。最后从此斜面上挑选出1支长势最好的菌种（待用），用于下一步扩培。 3，实验室扩培取上述一支活化过的待用菌种，挑一菌耳接种至含有10ml液体培养基试管内，最好接种3-5管以防失败），25°培养1—2天，培养期间每隔半小时用手震荡一次充氧（或放在恒温振荡器内培养）。选出发酵旺盛的液体试管（掌握好移种时间非常重要），分别全量移至装有100ml麦汁的300ml三角烧瓶内（4个300ml的三角烧瓶），22°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或放在恒温振荡器内培养）。然后全量分别移至装有1500ml麦汁的3000ml烧瓶内（三个3000烧瓶），19°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或在恒温振荡器内培养）。将已培养好的（掌握移种时间非常重要）3000ml烧瓶内的麦汁分别全量移入15L麦汁的卡氏罐内（卡氏罐内的麦汁事先杀好菌，冷却至接种温度后再接种），16°培养1-2天，培养期间应定期充氧（每隔3小时用无菌压缩空气充氧5分钟）。 4，生产车间扩培卡氏罐内培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml，将卡氏罐内的麦汁最大按1:10的比列全量移至培养罐（培养罐内的麦汁要二次杀菌冷却后才能接种），14°C下培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml）后，按1:5的比列转接至下一扩大罐（可直接取沉淀槽冷却的麦汁），培养期间每隔2小时充氧10分钟，转接之前镜检酵母数、死亡率、杂菌。酵母数达到：5-8x107个/ml；死亡率小于2％；镜检下未见杂菌时可用于大罐接种。

6.1酵母工艺流程

酵母生产工艺流程示意图冷藏) 鲜酵母成品干酵母成品

1.原辅材料验收：按《采购控制程序》选择合格的原、辅材料厂家，入厂时按公司制定的相应原材料标准进行验收，因为原材料加入之前要用高温灭菌、热水配制，有灭菌过程，所以卫生方面主要控制重金属含量； 2.包装材料：内包装材料按公司制定的标准验收，并按《包装材料的管理》检验其杂菌数。 3.空气：酵母发酵是有氧发酵，需要大量空气进入发酵液，空气首先经过甲醛消毒，然后经过粗效、精效过滤器过滤除杂菌。 4.辅助材料的配制：辅助原材料用90 ℃以上热水溶配，并在贮罐60 ℃以上保温，然后泵入发酵、干燥使用，流加原料，每周检测各配制原料的杂菌数。 5.糖蜜处理：糖蜜先经过≥80 ℃加热(时间≥2小时）分离除渣，然后经125-135 ℃高温瞬时灭菌（时间：9秒），泵入发酵罐。输送管线糖蜜循环，以保证管线温度高，而不残存杂菌。每周检测各配制原料的杂菌数。 6.菌种选育：菌种按《菌种选育操作规程》选育菌种，菌种选育最重要的要求保证操作过程中不能染菌，菌种无杂菌，然后经过三角瓶、卡氏瓶扩大培育，接入纯培养罐。 7.纯培养罐培养：将糖蜜加入PC罐里，经过121℃ 30分钟灭菌后，降温至30℃，接入卡氏瓶菌种，经过通风纯培养，发酵液达到乙醇和湿重指标后，转入种子培养罐培养。

8.种子罐发酵：发酵罐加入工艺水、转入纯培养菌种、流加入N、P营培盐，通风扩大培养，按发酵工艺规程规定的时间和指标发酵。 9.酵母分离：种子发酵液培养结束后，通过分离机把酵母和水等分开，成干物质20%左右的酵母乳，进入酵母乳贮罐。 10.商品培养：在商品发酵加入工艺底水，接入种子酵母乳、流加N、P、硫酸镁、硫酸锌等营养盐，通风发酵。 11.商品酵母分离：按9方法将商品酵母液分离成酵母乳，进入酵母乳贮罐。 12 酵母乳贮存:分离后酵母乳进入贮罐,然后泵入真空转鼓过滤. 13.过滤：商品酵母乳加入盐水,泵入真空转鼓过滤器,通过真空转鼓抽滤，把酵母乳抽滤成含水量为36%左右的酵母泥。流加乳化剂与酵母泥混合后造粒. 14.造粒：通过造粒机把酵母泥挤压成很细酵母面条以增大表面积，便于热交换。造粒后酵母进入干燥床. 15.干燥：酵母粒通过在沸腾干燥床中和干燥的热空气进行交换，迅速脱水干燥成干酵母。 16.震荡筛：干燥后酵母,通过20目震荡筛除去干燥过程中结团的酵母。过筛后的酵母送入干酵母贮罐. 17.干酵母均质:将干酵母贮罐里的酵母分批放入均质器里,开搅拌器均质,送入包装机.

酵母表达系统使用心得

精心整理 Pichia酵母表达系统使用心得甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会这个是来中心（ 1. 3. 4. 5. 产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由

于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-mycepitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alphafactor（α-factor）用以的是系 PIC9K G418无 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微

镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的时间了。基本熟悉了毕赤酵母，了解了她生长的喜好（多糖偏酸环境），生长的周期等等有的余的（起始密码子），有人认为酵母启动子与外源基因的ATG之间的距离越短对于表达的该基因越有利； ⑤如果不希望有c-myc和His-tag，可以在基因片段末尾加入终止密码子；

酵母扩培工艺

酵母扩大培养工艺 1、目的规范酵母扩培作业程序，有效控制扩培工艺参数，保证培养酵母质量均一、稳定。 2.适用范围适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。 3.职责由公司技术处负责编制、修改，实验室和酿造车间负责实施。 4.规定内容 4.1实验室培养 4.1.1培养基制备流程 4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至 5.3-5.5,进行稀释，稀释比例以最终煮沸浓度控制在12度为准。 4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。升温至60℃保温30分钟，保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。 4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶， 0.07Mpa灭菌30分钟。 4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签，空培(室温放置)3天以上确认无菌后方可使用。 4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0．10Mpa蒸汽杀菌 1 小时后的卡氏罐中0．10Mpa灭菌30分钟，提前1-2天完成，确保接种温度稳定。当天能够迅速冷却的，则取当天麦汁处理，冷却后接种。 4.1.2无菌室卫生操作流程

4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。超净台用前提前打开风机及自带的紫外灯灭菌30分钟。 4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。地面、墙壁、天棚及空间采用甲醛熏蒸或75%酒精擦试。同时用紫外杀菌30分钟。 4.1.2.3卡氏罐接种，超净台无法操作时，室内空间当天再次进行上述空间杀菌。 4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放，尤其操净台面。以免破坏空气层流。 4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。斜面接出及卡氏罐接种时各进行一次。 4.1.3实验室阶段扩培工艺流程 1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm 试管中，在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次). 2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的 18×180mm试管中，在25℃培养箱中培养活化24小时. 3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中, 在22℃培养箱中培养24小时. 4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液的5000ml三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐, 在 13℃培养箱中培养24小时～48小时. 7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐), 在13℃条件下培养24小时～48小时.

酵母扩大培养过程关键控制点

酵母扩大培养过程关键控制点金星集团信阳啤酒有限公司黄华龙465100 啤酒工厂从单细胞分离得到一个酵母细胞，经过鉴定确认、生产试验，得到优良菌株，然后经过若干次扩大培养，最后制备成107～108个细胞/ml后供发酵用，酵母扩大培养关键在于：第一，选择优良的单一细胞出芽菌株；第二，在整个扩大培养中保证酵母菌种的强壮、无污染。近代由于发酵规模越来越大，对接种酵母要求越来越严。各工厂扩大培养方式和顺序大致相同，而扩陪的结果得到种酵母的纯度、强壮情况、污染情况却差异很大，其原因在于是否有一个科学、无菌的扩培技术管理。一、出芽菌株的选择作为扩大培养的出芽菌株，，无论是实验室保藏菌株还是生产现场（主酵或酵母泥）分离得到的菌株。一般均需进行单细胞分离，并通过一系列生理特性和生产性能测定，包括酿酒口味鉴评后，确认是工厂生产需要的优良纯种后才允许投入生产扩大培养。此单细胞分离和菌株鉴定，需要在有丰富微生物理论和实践经验的技术人员指导下进行。二、扩陪过程的无菌操作扩大培养应严格建立在纯种的基础上，扩大培养过程的无菌技术是扩陪成败的关键。它包括：培养器皿、设备的无菌，移种操作的无菌，培养过程中通风调节温度的无菌。在汉生罐以后从麦汁进罐至移种结束，必须保证汉生罐处于正压状态，这是杜绝吸入有菌空气的先

决条件。三、优良的培养基麦汁是啤酒厂最方便的酵母培养基，但绝对不是“凡可以用来酿造啤酒的麦汁均是优良的培养基”。许多工厂，常常从大生产麦汁中分割作为任何一级扩陪培养基，由于麦汁组成太差，会造成扩大培养失败。无论是哪级扩陪，培养基均需要有特殊要求的麦芽汁。实验室（从试管至大锥形瓶）培养用麦汁，一般应有实验室自己制备，可按以下方式制备成10°P全麦芽麦汁用于试管活化及菌种保藏。 1.麦汁制备: 1)称取优级麦芽约200g，除去铁屑、石粒等坚硬杂质，采用EBC 粉碎。 2)调EBC粉碎机的磨间距，使细粉颗粒直径为0.2㎜。 3)料水比例：1：3～3.5 4)称取细粉适量（准确至0.1g），于已知重量的糖化杯（500～ 600ml专用金属杯中），加入46℃水200ml,在不断搅拌下于 45℃水浴中保温30min。 5)把温度数显表调至70℃，设定。使醪液以1℃/min的速度升温，在25min内升至70℃，此时于杯内加入70℃水100ml（加水时注意冲洗杯壁和搅拌棒）。 6)醪液在70℃下保温1hr，在保温10min时开始碘检，用玻璃棒取一滴麦汁，置于白瓷滴板上，冷却后加一滴碘溶液，混

酵母表达载体pPICZ手册

pPICZ A, B, and C Pichia expression vectors for selection on Zeocin? and purification of recombinant proteins Catalog no. V190-20 Rev. Date: 7 July 2010 Manual part no. 25-0148 MAN00000034 User Manual

Table of Contents Kit Contents and Storage (iv) Accessory Products (v) Introduction (1) Overview (1) Methods (3) Cloning into pPICZ A, B, and C (3) Pichia Transformation (9) Expression in Pichia (13) Purification (15) Appendix (17) Recipes (17) Zeocin? (19) Map and Features of pPICZ A, B, and C (21) Lithium Chloride Transformation Method (23) Construction of In Vitro Multimers (24) Technical Support (32) Purchaser Notification (33) References (34) iii

Kit Contents and Storage Contents The following components are included with Catalog no. V190–20. Note that the pPICZ expression vectors are supplied in suspension. Component Quantity Composition pPICZ A Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ B Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ C Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 GS115/pPICZ/lacZ Positive 1 stab -- Control strain Shipping/Storage The components included with Catalog no. V190–20 are shipped on wet ice. Upon receipt, store as directed below. For long-term storage of your positive control stab strain, we recommend preparing a glycerol stock immediately upon receipt and storing at –80°C. Component Shipping Storage pPICZ A Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ B Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ C Expression Vector Wet ice Store at –20°C GS115/pPICZ/lacZ positive control strain Wet ice Store at 4°C iv

酵母管理系统知识

1.目的使用糖化醪，在密闭罐内接入酵母菌种，通入微量的无菌空气，保压培养，获得发酵力强的纯酒母醪，供酒精发酵。 2.扩培工艺流程 3.工艺数据复活温度：35℃—38℃。培养温度：28℃—30℃。分割时，留种量：15%左右。酒母培养时间：8小时。通风量：观察罐内液体翻动即可，每两小时开一次，每次15分钟左右。 4.要点配料：酒母糖液罐全容积为18m3，实装容积为80%，计算15.0m3。配方：糖化醪15m3，尿素0.15%（12kg），青霉素50g。 5.看罐值班人员每小时检查一次酒母罐温度，做好原始记录，发现异常及时调整，至培养成熟为止。 6.生产工艺

6.1 破碎工艺破碎颗粒直径：1.5mm—1.8mm；拌料温度：70℃—75℃；拌料加水比：1：2.5—2.8；添加耐高温α-淀粉酶：用量0.8ц/g—1.2ц/g淀粉。 6.2 蒸煮糖化蒸煮温度为81℃—83℃，蒸煮时间为90min，用酶量为90单位/g—120单位/g，控制糖化时间在60℃±2。 6.3 发酵糖化醪入二分之一，加入青霉素1ц/mL，入罐温度32℃—34℃，主发酵期34℃—36℃，发酵周期60小时。 7.结论 7.1 扩培后使用，干酵母的用量较少，并减少了传统酵母多级培养中小酒母前的操作环节，便于控制酒母质量。 7.2 扩培中，糖液是直接由糖化锅泵入，省去了传统酵母培养中对醪液的杀菌过程，从而节约了水、电、汽。 7.3 发酵成绩提高，发酵醪酒精浓度提高1%，吨酒精节省蒸汽消耗约300kg，降低生产成本约50元。同时，吨酒精节省工艺用水1.2t—1.5t，减少酒糟排放量1.5t—2t。汉生罐留种扩大培养酵母的控制点击数：199 发布时间：2009年11月1日来源：中国发酵在线进入论坛交流

酵母的保存和管理

“酵母是啤酒酿造的灵魂！”啤酒生产不仅要有优质的原料、先进的生产工艺，更要有优良的酵母菌种。如何做好菌种的保存，以及酵母的正确使用、回收、排放等管理工作，对促进企业产品质量有着极其重要的作用。一、菌种保存 1.建立菌种管理档案建立原始酵母菌种的档案，例如菌种的编号、使用状态、转接时间、菌种来源等，定期进行原菌的活化、转接、筛选等工作，做好菌种跟踪检测。检测项目包括满罐酵母数、死亡率、发芽率、降糖速度、还原降双乙酰情况、酵母凝聚性、酵母回收质量等。 2.原始菌种的保存方法 2.1 固体斜面保存法将保存的酵母接种到麦汁琼脂培养基斜面上，25℃保温培养2至3天，待酵母繁殖成菌落，经检查无污染后，即放入4℃的冰箱中保存。每年移接3至4次。 2.2 液体石蜡斜面保存法酵母菌种接在培养基的斜面试管中，加入已灭菌的不含水分的液体石蜡，防止培养基水分蒸发，并隔绝与空气的接触，然后置于2℃—4℃下保存。 2.3 液体试管保存将要保存的酵母接种到10%的灭菌蔗糖溶液中，25℃培养24小时后，置于2℃—4℃下保存。二、酵母扩培 1.编制扩培计划 1.1 每次扩培前，编写详细的扩培计划，安排、协调好车间糖化生产，提供组分合理的扩培麦汁，有利于菌种的扩培质量。 1.2 建立扩培各阶段的质量控制点，及时依据实测数据掌握酵母转接的时机。 2.啤酒酵母的实验室扩培斜面试管（原菌）→20毫升试管→500至1000毫升三角瓶→卡氏罐。步骤：取适量麦汁于试管内灭菌，将斜面原菌接种到试管内，在25℃—27℃保温下，培养

2至3天，每天定期摇动，使沉淀的酵母细胞重新分布到培养基中。无菌条件下，将试管中的酵母液接种到500mL—1000mL的灭菌麦汁中，25℃培养2至3天，每天检查培养情况。无菌条件下，将三角瓶中的酵母液接种到10L—20L的灭菌麦汁中，混合均匀于15℃—20℃保温培养3至5天，即可接入生产现场扩培。 3.啤酒酵母的扩培三、酵母生产现场保存 1.保存要求在酵母菌种的保存中，由于贮存时间长，酵母会因长期处于饥饿状态，造成酵母细胞营养不良。为恢复酵母细胞活力，麦汁生产使用的辅料比例不能超过30%，麦汁浓度不低于10°P，有利于提高酵母活性。 2.保存方法 2.1 种子罐酵母菌种的保存种子罐保存菌种要注意事项：（1）种子罐保种前，酵母扩培室内墙、地面要清洗、杀菌，设备罐体、管道要严格彻底地清洗灭菌。（2）种子罐菌种起发后，当糖度降至7.5°P（以10°P麦汁为例），酵母数在40×106 个/mL左右时，即可降温至3℃保压在0.01Mpa—0.02Mpa下保存菌种。 2.2 锥形罐保存种酵母 2.2.1 保种酵母的温度控制发酵罐种酵母在贮存期间，发酵罐上、中、下温度要控制在0℃—-1℃，控温要平稳，不能忽高忽低，更要谨防因供冷过低造成罐内壁结冰，这样会使锥底保存酵母细胞的生理受损、性能退化。 2.2.2 锥形罐保存种酵母的选择标准（1）选主酵期间发酵正常，双乙酰还原速度快的罐。

毕赤酵母表达操作手册(精译版)

毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒用于在含多拷贝基因的毕赤酵母菌中表达并分离重组蛋白综述：基本特征：作为真核生物，毕赤酵母具有高等真核表达系统的许多优点：如蛋白加工、折叠、翻译后修饰等。不仅如此，操作时与E.coli及酿酒酵母同样简单。它比杆状病毒或哺乳动物组织培养等其它真核表达系统更快捷、简单、廉价，且表达水平更高。同为酵母，毕赤酵母具有与酿酒酵母相似的分子及遗传操作优点，且它的外源蛋白表达水平是后者的十倍以至百倍。这些使得毕赤酵母成为非常有用的蛋白表达系统。与酿酒酵母相似技术：许多技术可以通用：互补转化基因置换基因破坏另外，在酿酒酵母中应用的术语也可用于毕赤酵母。例如：HIS4基因都编码组氨酸脱氢酶；两者中基因产物有交叉互补；酿酒酵母中的一些野生型基因与毕赤酵母中的突变基因相互补，如HIS4、LEU2、ARG4、TR11、URA3等基因在毕赤酵母中都有各自相互补的突变基因。毕赤酵母是甲醇营养型酵母：毕赤酵母是甲醇营养型酵母，可利用甲醇作为其唯一碳源。甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛，还有过氧化氢。为避免过氧化氢的毒性，甲醛代谢主要在一个特殊的细胞器－过氧化物酶体－里进行，使得有毒的副产物远离细胞其余组分。由于醇氧化酶与O2的结合率较低，因而毕赤酵母代偿性地产生大量的酶。而调控产生醇过氧化物酶的启动子也正是驱动外源基因在毕赤酵母中表达的启动子。两种醇氧化酶蛋白：毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶－AOX1及AOX2。细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1基因产物。甲醇可紧密调节、诱导AOX1基因的高水平表达，较典型的是占可溶性蛋白的30%以上。AOX1基因已被分离，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。AOX2基因与AOX1基因有97%的同源性，但在甲醇中带AOX2基因的菌株比带AOX1基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离Muts菌株。表达： AOX1基因的表达在转录水平受调控。在甲醇中生长的细胞大约有5%的polyA+ RNA 来自AOX1基因。AOX1基因调控分两步：抑制/去抑制机制加诱导机制。简单来说，在含葡萄糖的培养基中，即使加入诱导物甲醇转录仍受抑制。为此，用甲醇进行优化诱导时，推荐在甘油培养基中培养。注意即使在甘油中生长（去抑制）时，仍不足以使AOX1基因达到最低水平的表达，诱导物甲醇是AOX1基因可辨表达水平所必需的。 AOX1突变表型：缺失AOX1基因，会丧失大部分的醇氧化酶活性，产生一种表型为Muts的突变株（methanol utilization slow），过去称为Mut，而Muts可更精确地描述突变子的表型。结果细胞代谢甲醇的能力下降，因而在甲醇培养基中生长缓慢。Mut+（methanol utilization plus）指利用甲醇为唯一碳源的野生型菌株。这两种表型用来检测外源基因在毕赤酵母转化子中的整合方式。蛋白胞内及分泌表达：外源蛋白可在毕赤酵母胞内表达或分泌至胞外。分泌表达需要蛋白上的信号肽序列，将外源蛋白靶向分泌通路。几种不同的分泌信号序列已被成功应用，包括几种外源蛋白本身分

益生菌使用手册

第一部分：益生菌相关介绍索引一、什么是益生菌二、益生菌的种类三、益生菌的作用四、人体中的益生菌五、如何补充益生菌六、哪一些需要补充益生菌七、补充益生菌的注意事项八、如何正确冲服益生菌一、什么是益生菌益生菌（Probiotics）是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内、口腔、食道等处，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。二、益生菌的种类（1）乳杆菌类（如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌等）（2）双歧杆菌类

（如长双歧杆菌、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌等）（3）革兰氏阳性球菌（如粪链球菌、乳球菌、中介链球菌等）。三、益生菌的作用益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。益生菌是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。 1、益生菌有缓解乳糖不耐症状，促进机体营养吸收的作用：益生菌有助于营养物质在肠道内的消化。它能分解乳糖成为乳酸，减轻乳糖不耐症。双歧杆菌和乳酸杆菌不仅可以产生各种维生素如维生素B1、B 2、B6、B12、烟酸和叶酸等以供机体所需，还能通过抑制某些维生素分解菌来保障维生素的供应。另外，双岐杆菌还可以降低血氨改善肝脏功能。 2、益生菌有整肠作用，调整微生态失调，防治腹泻：益生菌活着进入人体肠道内，通过其生长及各种代谢作用促进肠内细菌群的正常化，抑制肠内腐败物质产生，保持肠道机能的正常。对病毒和细菌性急性肠炎及痢疾，便秘等都有治疗及预防作用。益生菌和很多慢性胃炎，消化道溃疡等消化道疾病有密切的关系。一部分的益生菌能抗胃酸，粘附在胃壁上皮细胞表面，通过其代谢活动抑制幽门螺旋杆菌的生长，预防胃溃疡的发生。 3、益生菌能代谢产物产生生物拮抗，增强人体免疫力：肠道决定人体70%的免疫力，益生菌可以修复肠道黏膜、提升机体免疫力。益生菌可产生有机酸、游离脂肪酸、过氧化氢、细菌素抑制其它有害菌的生长；通过“生物夺氧”使需氧型致病菌大幅度下降，益生菌能够定殖于粘膜、皮肤等表面或细胞之间形成生物屏障，这些屏障可以阻止病原微生物的定殖，起着占

鲜酵母的用法

鲜酵母的用法鲜酵母顾名思义指的是未经造料工艺、干燥等处理的酵母。鲜酵母具中包含更多的活细胞，其发酵速度十分快，风味足。另外从经济的角度上说也有较高的经济价值，那么你知道鲜酵母是怎么制作出来的吗？日常生活中又要如何利用鲜酵母，要如何充分发挥此种材料的优势与作用吗？本篇就告诉你答案吧。鲜酵母是一种没有经过干燥、造粒工艺的酵母。与干酵母相比，鲜酵母具有活细胞多，发酵速度快、发酵风味足、使用成本低等优点。鲜酵母分为高糖型和低糖型两种： (1)低糖型鲜酵母适用于每百斤面粉中加糖量5斤以下或不加糖的面制品，低糖鲜酵母用于不加糖面制品更有优势，发面快，口感好。如：馒头、包子、花卷、含糖量较少的饼。 (2)高糖型鲜酵母适用于每百斤面粉中加糖量5斤以上的面制品。高糖鲜酵母用于含糖量高的产品，发面稳定、后劲足。如：各种面包、甜馒头、高档发酵型点心、饼等。使用方法用法1)面制品制作时，将面粉及各种辅料放入和面机后，将鲜酵母直接搓碎均匀撒在面粉上，充分拌匀后加水搅拌至面筋形成。用法2)也可将鲜酵母搓碎加入部分水中溶解，在和面操作中加水阶段时加入，水温根据气温定，气温低水温高，水温最高不

能超过40℃。用量：正确选用高、低糖酵母，一般面包用面粉量的2-3%，做馒头用面粉量的0.5-1%。用量随气温调整，温度高，用量少。随鲜酵母存放时间延长，相应要加大用量保存条件鲜酵母最适合的存放是在0-4℃冷藏。，因为0-4℃酵母处于休眠状态，只有缓慢的代谢来维持生命。鲜酵母在0-4℃条件下可存放45天。如果存放温度低于0℃，由于鲜酵母含70%左右的水，鲜酵母会开始结冰，酵母会停止代谢逐渐死亡，导致酵母逐渐失活，发面速度逐渐变慢。冷冻使水结冰后还会将酵母细胞壁胀破，酵母受到损伤，过多的水结成冰块后还使酵母块周边鼓起来，化冻后酵母变软没弹性、严重的变成稀糊状，酵母彻底死亡，不能发面。如果存放温度高于5℃，鲜酵母开始复苏，若存放温度过高，酵母代谢旺盛，老化加快，活酵母减少，发面速度变慢甚至不发面。酵母死亡后成了营养丰富的培养基，会生长霉菌。运输储存鲜酵母运输一般选择冷藏车，确保酵母温度0-4℃。如果短距离运输没有冷藏车，车内需要添加保温设备，确保酵母温度不要升高太多。鲜酵母忌讳反复冷冻(冷冻指0℃以下)、反复升降温度，如：先在库房冷冻，运送时再升温化冻，送到后再冷冻，化冻后送到用户再冷冻等反复操作。这样酵母活性会下降，出现发软、变稀等问题，发面慢甚至不发面。

酵母及酵母制品生产许可证审查细则

→包装→成品酵母调配食品生产流程：原料验收→配料→混合→处理、成型→包装→成品（二）关键控制环节食用酵母：（1）发酵用原辅材料控制；（2）食品添加剂的控制；（3）酵母菌种的控制；（4）工艺要求的控制（防止发酵过程染菌）；酵母深加工产品：（1）食用鲜酵母的控制；（2）食品添加剂的控制；（3）自溶、酶解过程的控制；（4）提取过程控制。酵母调配食品：（1）原辅材料控制；（2）食品添加剂的控制。（三）容易出现的质量安全问题食用酵母：（1）菌种的安全性；（2）发酵过程出现染菌；（3）食品添加剂超范围和超量使用。酵母深加工产品：（1）菌种的安全性；（2）食用酵母的控制；（3）食品添加剂超范围和超量使用；（3）微生物超标。酵母调配食品：（1）菌种的安全性；（2）微生物超标；（3）食品添加剂超范围和超量使用。

毕赤酵母表达操作手册(PDF精译版)

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