酵母扩培工艺流程图

油砂

选修课期末论文课程：非常规油气资源开发理论与技术论文题目：油砂分布与开采的相关问题研究分析 10级勘查技术与工程专业一班 1400100102 李阳

油砂分布与开采的相关问题研究分析一、非常规油气资源的前景世界范围内的非常规资源蕴藏十分丰富，非常规油产量超过7500×104t∕a，非常规天然气超过1800×108m3∕a。近年来非常规油气资源的勘探开发，已经使人们认识到了它对未来世界资源格局的影响。作为非常规油气资源的主要来源，在世界能源供给中起着巨大作用。我国非常规油气资源也比较丰富，油页岩、油砂、煤层气和天然气水合物等开发潜力巨大。与世界非常规油气资源研究与利用相比，我国在非常规油资源的研究和开发方面相对比较滞后，对油砂矿的资源潜力研究与评价技术、开采技术及综合利用技术研究得比较少，有待进一步的加大科研投入。油砂及其利用前景油砂是一种非常规性含原油的砂状矿藏，由砂、沥青、矿物质、黏土和水以相互结合的方式构成，是地壳表层的碎屑物或岩石与其中所含的水和沥青形成的混合物的统称。不同地区油砂矿的组成不同，沥青是其主要成分，含量可占到1％～20％，砂和粘土占80% ～85%，水占3% ～6%。又称“沥青砂”、“稠油砂”、“重油砂”或“焦油砂”。其中的沥青经过焦化、蒸馏、催化转换、加氢处理等复杂的工艺环节被从油砂中提取出来后，可产生类似天然石油的“合成原油”。用油砂生产合成石油的第一步，是将其中的沥青与砂、矿物质、黏土以及水分进行分离。然后在分选厂，

通过加热过程，将漂浮在大型分离池表面的沥青加工成各种石油产品。油砂的特点：1、通常含有80%～90%的无机质（砂、矿物等）、3%～6%的水和6%～20%的沥青。油砂沥青是烃类和非烃类有机物质，是稠粘的半固体2、沥青流动性极差，一般不能以打井开采原油、稠油的方法来获取油砂沥青。3、油砂中的沥青大部分溶于有机溶剂，而有别于油页岩中有机质不能溶于有机溶剂。 4、油砂中的沥青多来自降解作用，正构石蜡族烃达到了几乎耗尽的程度，因此饱和馏分中没有或几乎没有正构石蜡族烃。油砂资源分布广泛，根据美国地质调查局的相关数据表明，世界油砂油可开采资源量为6510亿桶，约占世界石油资源可开采总量的32%，开发潜力巨大。如果全部开发利用，大概可使世界消费上百年。由于其开采成本较高，起初并不被人们所重视，但随着油价的飙升与油砂开采技术的革新，油砂越来越吸引投资者的目光。随着世界经济对烃类需求的不断上升，未来能源的巨大缺口在很大程度上要依靠包括油砂在内的非常规油气资源来弥补。目前，对于油砂资源的研究和开发，世界各国均在加速进行，其占世界烃类能源的比重在不断增加，在今后的能源结构中起着至关重要的作用，勘探前景巨大，综合利用前景广泛。

啤酒发酵酵母扩培学习资料

啤酒发酵酵母扩培学习资料啤酒厂获得接种酵母的方式有三种方式，其优缺点见图2.1：这三种方式是：购买酵母泥；购买纯种酵母；自己保存和培养纯种酵母。图2.1 啤酒获得酵母的方式和其优缺点第一节纯种酵母的培养一、培养啤酒纯种酵母工艺原理酵母是一种兼性微生物，这就是说，细胞的新陈代谢和繁殖即可以在有氧的状态下也可以在无氧的状态下进行。啤酒酵母菌的的繁殖过程分为四个阶段（见图2.7）： 1．迟缓期：在此期间，虽有营养物质存在，但酵母基本不繁殖； 2．对数生长期：此期间酵母繁殖最为迅速； 3．稳定期：此时，代谢产物CO2和酒精的积累使酵母繁殖逐渐变慢，活菌数最高； 4．衰亡期：营养物质耗尽和有毒代谢产物大量积累，酵母菌死亡率增加，活菌数减少。酵母培养中，最重要的阶段是对数生长期，此时的营养、氧气供给及其他条件如：酵母细胞浓度和温度都必须达到最佳。酵母由于不断地消耗氧气，必须连续通入足够的无菌空气。因为氧气缺乏时，其中一部分酵母会进行发酵，从而产生CO2和酒精，而不是产生新细胞，这样生成的有活力的细胞数就减少了。二、啤酒纯种酵母的分离培养啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的单细胞酵母从原菌中分离出来，加以扩大培养，供生产使用。分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离法或划

线分离法。获得原菌的方法：（1）从实验室保存的原菌种中分离，原菌种必须先经过几次培养活化的再行分离；（2）从生产中的酵母泥或主发酵液中分离。 1．平板分离培养法（又称稀释分离法，见图2.2）这种方法简单易行，适合于工厂现场使用。先将盛有麦汁的琼脂试管培养基放在热水中融化，冷却至42～45℃，再将准备分离培养的酵母原菌用白金针移植到已融化的培养基内。如分离培养发酵液的酵母，则先使之静置，倾出上部清液，留少量发酵液，混合均匀后接种。如分离培养酵母泥，需加少量无无菌水或麦汁，稀释后再接种。将分离培养的酵母移植于融化的培养基内后，充分振荡，使混合均匀，用白金针从该试管挑少许移植到第2支试管中，随即将第1支试管中的培养基倾注在已灭菌的培养皿中，均匀分布在培养皿底面，使之凝固。用同样方法再从第2支试管移植到第3支，而后第4支试管内，分别将取样后的培养基倾注在培养皿内，如图所示。然后，将培养皿置25～27℃保温箱中培养2～3天，每天检查菌落生长情况，剔除形态上有改变的菌落，选择菌落形态正常、细胞大小均匀的菌落进行培养。必要时应进行2～3次重复分离。图2.2 平板分离培养法 2．划线分离培养法此法和平板分离法的根据是相似的，各有优点。划线法简单，速度较快；平板法在平板上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率略高。用接种针挑取适当稀释的菌液，直接在已灭菌的平面皿培养基上划线（图2.3），在第3或第4划线区可能得到单一菌落。然后将所需要的菌落移植到斜面培养基上，以待进一步检查。这个方法一般用于分离纯化生产上已有的菌种。图2.3 划线分离培养法 1,2,3,4-分别表示第1,2,3,4次划线区

铸造实用工艺流程

消失模铸造工艺流程一、工艺流程示意图二、工艺流程模样生产工艺流程图铸件清砂（抛丸机）、打磨浇冒口上涂料烘干粘接发泡膜浇注及冷却埋箱造型落砂铸件热处理铸件成品 EPS EPMMA STMMA 预热 → 加料、搅拌 → 抽真空 → 喷水雾 → 停止抽真空 → 出料 → 干燥 → 料仓珠粒可发性预发泡发泡成型干燥筛分熟化闭模 → 预热模具 → 加料 → 合模 → 发泡成型 → 冷却 → 脱模浇冒口组合落砂斗 → 水平振动筛 → 型砂冷却 → 提升机 → 磁选、除尘 → 储砂斗零件图铸件图模样图模具图模具 EPS 珠粒预发泡熟化成型冷却出模干燥模样组合检验新砂、旧砂、覆塑料膜密封砂箱、置浇口杯

（一）预发泡：预发泡目的：为了获得低密度、表面光洁、质量优良的泡沫模样。流程：预热→ 加料、搅拌→ 抽真空→ 喷水雾→ 停止抽真空→ 出料→ 干燥→ 料仓、熟化 EPS预发温度100~105℃；STMMA预发温度105~115℃；EPMMA预发温度120~130℃。进入预发机的加热蒸汽压力在0.15~0.20MPa范围调节。说明： ①间歇式蒸汽预发泡机必须满足加热均匀(蒸汽与珠粒接触)筒体内温度在90~130℃范围容易调节和控制。搅拌要充分、均匀，筒体底部和侧壁要有刮板，防止珠粒因过热而粘壁，搅拌速度可调。筒体底部冷凝水的排除要畅通，否则影响预发泡效果。 ②加热蒸汽压力可调并稳定，且蒸汽中不能夹带水分。 ③出料要干净，每批发泡后，筒体内残留的料要吹扫干净。熟化：把预发泡珠放置几小时以上，让空气进入珠粒内，使珠粒变得干燥有弹性，变形后又能复原的过程。熟化时间一般为10~24h，熟化时间不能太长否则发泡剂损失太多影响发泡成型质量。（二）成形发泡的工艺过程为：闭模→ 预热模具→ 加料→ 合模→ 发泡成型→ 冷却→ 脱模→ 模样熟化要点：珠粒均匀填满模具，模具必须预热到100℃，水蒸气温度一般在120℃左右，压力为0.15MPa。模样熟化：将模样置入50~70℃的烘干室强制干燥5~6h,可达到在室温下自然熟化2天的效果。（三）模样的粘合对复杂的模样往往不能整体发泡成形，而分块制造，最后需要将各块粘合成整体。另外，模样与浇冒口系统组成模样组，也需要粘合工序。粘合工序一般是采用粘结剂来完成的。目前国内使用的消失模铸造用的粘结剂可分为热熔胶型、水溶型和有机溶剂型粘胶。粘接剂要求：

酵母表达系统使用心得

Pichia酵母表达系统使用心得甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕赤酵母表达的经典试剂盒过程中的心得体会。其中Xiang Yang是来自美国乔治城大学（Georgetown University）Lombardi癌症中心（Lombardi Cancer Center），部分用户来自国内。甲醇酵母部分优点： 1.属于真核表达系统，具有一定的蛋白质翻译后加工，有利于真核蛋白的表达； 2.AOX强效启动子，外源基因产物表达量高，表达产物可以达到每升数克的水平； 3.酵母培养、转化、高密度发酵等操作接近原核生物，远较真核系统简单，非常适合大规模工业化生产； 4.可以诱导表达，也可以分泌表达，便于产物纯化； 5.可以甲醇代替IPTG作为诱导物，部分甲醇酵母更可以用工业甲醇替代葡萄糖作为碳源，生产成本低。产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-myc epitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alpha factor（α-factor）用以分泌表达，并且在表达后α-factor可以自动被切除。在进行克隆的时候，如果你选择的是EcoRI，那么只需在目标蛋白中增加两个氨基酸序列即可完成。另外pPICZ系列选用的是Zeocin抗生素作为筛选标记，而诱导表达的载体需要甲醇——甲醇比一般用于大肠杆菌表达诱导使用的IPTG便宜。第一步——构建载体 Xiang Yang：pPICZ系列有许多克隆位点可供选择，同时也有三种读码框以便不用的用户需要。红叶山庄：有关是选择pPIC9K还是pPICZ系列？pPIC9K属于穿梭质粒，也可以在原核表达，而pPICZ系列比较容易操作，大肠和毕赤酵母均用抗Zeocin筛选（PIC9K操作麻烦一点，大肠用amp抗性，而毕赤酵母先用His缺陷筛选阳性克隆，在利用G418筛选多拷贝），而且对于大小合适（30—50KD）的蛋白在产量上是pPIC9K无法比拟的。 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的

【免费下载】酵母及酵母制品生产许可证审查细则

酵母及酵母制品生产许可证审查细则一、发证产品范围及申证单元酵母及酵母制品按生产工艺可分为食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品等三类产品品种。食用酵母是以糖蜜、淀粉质等为主要培养基，采用优良的啤酒酵母菌，经发酵培养、分离、洗涤、处理、浓缩或灭活浓缩、干燥而得的食用酵母。酵母深加工产品是以完整新鲜食用酵母为原料，经自溶、酶解、提取等生物技术处理所得到的酵母深加工产品。酵母调配食品是以食用酵母或酵母深加工产品为主要原料，添加适量的食品辅料或食品添加剂，经相应工艺制成的酵母调配食品。酵母及酵母制品申证单元为1个。在生产许可证上要注明申证单元名称和获证产品名称，即其他食品[酵母及酵母制品（食用酵母、酵母深加工产品、酵母调配食品）]。生产许可证有效期为3年，其产品类别编号为2801。二、基本生产流程和关键控制环节（一）基本生产流程食用酵母生产流程原料处理→发酵培养→酵母菌分离、洗涤→处理、浓缩→干燥→包装→成品酵母深加工产品生产流程：已洗涤的新鲜食用酵母→自溶、酶解→提取→浓缩或浓缩干、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

油砂的传统开采方法及新技术展望

（一）、油砂的开采方法最近几年, 油砂开发技术的进步不断推进着油砂工业的发展, 并已经取得了巨大的进步。主要有以下几方面: 用巨型卡车和铲车开采油砂, 增加了开采的灵活性, 同时降低了成本; 用水力运输管道系统代替了传送带系统, 使油砂达到管输要求, 并简化了把沥青和砂分离开来的萃取过程; 在萃取阶段, 降低了加工的温度; 采用固化或合成残渣的技术, 加快了大面积残渣池的治理, 并在努力研究一种覆盖技术来处理残渣。目前，油砂开采方式有两种，一类是露天开采，适用于埋深小于75m，厚度大于3m，另一类是井下开采，适用于埋深大于75m的矿层。针对莫尔图克矿一层埋深较浅（0-46m），因此采用露天开采。露天开采程序上分为采矿和萃取两个部分，主要用于开采埋藏较浅的近地表油砂，具有回收率高、效率高、安全的特点。露天开采所需的设备及费用、油砂油采收率较其他方法好，技术上较为成熟，在加拿大及委内瑞拉等都已形成大规模工业开采。多年来，油砂的露天开采技术已经取得的重要进步如下：采矿过程主要分为以下几个部分: ?用卡车和铲车除去盖层; ?用电动或水力铲车挖出油砂; ?把油砂从矿场运送到压碎机; ?把油砂加工碾碎; ?将油砂混合成砂浆; ?用离心泵和管线（常称为水力输送）把油砂从矿区运送到萃取区域。

图1-1 采矿过程示意图（二）、油砂的萃取分离 1、油砂的分离工艺步骤采矿设备和某些采矿操作是油砂工业所独有的, 现在这一操作主要受到下一分离过程的限制;而萃取过程也是沥青损失最大的过程, 因此, 必须综合考虑采矿和萃取两个步骤。在过去的15 年里, 水力传输已经代替了其他的设备。从矿石浆中萃取沥青由两个步骤组成: 步骤一: 分离初级分离器( primary separat io nvessel) 中的沥青泡沫, 其中含60% 沥青, 30%水, 10% 微固体。步骤二: 稀释发泡处理(见图2-1) : 提取沥青, 尽可能排除水和固体。如今, 实现此过程主要有两种方法: 最初的石脑油溶剂处理过程需要斜板分离器 ( inclined plate separators) 和离心分离机除去残余固体和水; 新的石蜡溶剂处理过程需要沉降容器, 但是由于不用离心分离机, 可以得到较纯净的产品。图2-1 萃取过程示意图 ( 1) 初级分离初级分离器是一个巨大、昂贵、固定不易移动的装置。运行条件必须稳定, 对矿石等级、温度、进料速度和其他因素的微小变化非常敏感。35℃以上的温度条件需要大量的能量, 占一桶合成原油能量消耗的40%。此过程还需要加入添加剂, 将pH值控制在8.5 左右。

毕赤酵母实验操作手册簿

毕赤酵母表达实验手册大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠，是以包含体状态存在。包含体的形成虽然简化了产物的纯化，但不利于产物的活性，为了得到有活性的蛋白，就需要进行变性溶解及复性等操作，这一过程比较繁琐，同时增加了成本。与大肠杆菌相比，酵母是低等真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点，又具有真核生物时表达的蛋白质进行正确加工，修饰，合理的空间折叠等功能，非常有利于真核基因的表达，能有效克服大肠杆菌系统缺乏蛋白翻泽后加工、修饰的不足。因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。大肠杆菌是用得最多、研究最成熟的基因工程表达系统，当前已商业化的基因工程产品大多是通过大肠杆菌表达的，其主要优点是成本低、产量高、易于操作。但大肠杆菌是原核生物，不具有真核生物的基因表达调控机制和蛋白质的加工修饰能力，其产物往住形成没有活性的包涵体，需要经过变性、复性等处理，才能应用。近年来，以酵母作为工程菌表达外源蛋白日益引起重视，主更是因为酵母是单细胞真核生物，不但具有大肠杆菌易操作、繁殖快、易于工业化生产的特点，还具有真核生物表达系统基因表达调控和蛋白修饰功能，避免了产物活性低，包涵体变性、复性等等间题［1］。与大肠杆菌相比，酵母是单细胞真核生物，具有比较完备的基因表达调控机制

酵母扩培工作流程

酵母扩培工作流程 1，菌种选购首先购买具备国家权威机构认可（或注册）的单位提供的菌种，并与提供菌种的科研单位沟通，让其将此菌种制成二十支冻干管（便于常温下长期保存不会变异），以后每年拿出一支冻干管进行转移、保藏（使用至当年年底）、扩培。这种方式培养菌种可以确保生产上使用的酵母不会变异、退变。 2，菌种移植将菌种移植在斜面培养基上（4-7支斜面管），25°培养2-3天，挑选出边缘整齐、呈乳白色无污染长势良好的菌株两只管，放入4°冰箱内保存（注明移种日期、操作人、菌株特性等信息，同时做好笔记）。另选出一支长势良好的菌株移至斜面培养基上（活化）培养2-3天，此次最好移植3-5支斜面培养基。最后从此斜面上挑选出1支长势最好的菌种（待用），用于下一步扩培。 3，实验室扩培取上述一支活化过的待用菌种，挑一菌耳接种至含有10ml液体培养基试管内，最好接种3-5管以防失败），25°培养1—2天，培养期间每隔半小时用手震荡一次充氧（或放在恒温振荡器内培养）。选出发酵旺盛的液体试管（掌握好移种时间非常重要），分别全量移至装有100ml麦汁的300ml三角烧瓶内（4个300ml的三角烧瓶），22°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或放在恒温振荡器内培养）。然后全量分别移至装有1500ml麦汁的3000ml烧瓶内（三个3000烧瓶），19°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或在恒温振荡器内培养）。将已培养好的（掌握移种时间非常重要）3000ml烧瓶内的麦汁分别全量移入15L麦汁的卡氏罐内（卡氏罐内的麦汁事先杀好菌，冷却至接种温度后再接种），16°培养1-2天，培养期间应定期充氧（每隔3小时用无菌压缩空气充氧5分钟）。 4，生产车间扩培卡氏罐内培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml，将卡氏罐内的麦汁最大按1:10的比列全量移至培养罐（培养罐内的麦汁要二次杀菌冷却后才能接种），14°C下培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml）后，按1:5的比列转接至下一扩大罐（可直接取沉淀槽冷却的麦汁），培养期间每隔2小时充氧10分钟，转接之前镜检酵母数、死亡率、杂菌。酵母数达到：5-8x107个/ml；死亡率小于2％；镜检下未见杂菌时可用于大罐接种。

6.1酵母工艺流程

酵母生产工艺流程示意图冷藏) 鲜酵母成品干酵母成品

1.原辅材料验收：按《采购控制程序》选择合格的原、辅材料厂家，入厂时按公司制定的相应原材料标准进行验收，因为原材料加入之前要用高温灭菌、热水配制，有灭菌过程，所以卫生方面主要控制重金属含量； 2.包装材料：内包装材料按公司制定的标准验收，并按《包装材料的管理》检验其杂菌数。 3.空气：酵母发酵是有氧发酵，需要大量空气进入发酵液，空气首先经过甲醛消毒，然后经过粗效、精效过滤器过滤除杂菌。 4.辅助材料的配制：辅助原材料用90 ℃以上热水溶配，并在贮罐60 ℃以上保温，然后泵入发酵、干燥使用，流加原料，每周检测各配制原料的杂菌数。 5.糖蜜处理：糖蜜先经过≥80 ℃加热(时间≥2小时）分离除渣，然后经125-135 ℃高温瞬时灭菌（时间：9秒），泵入发酵罐。输送管线糖蜜循环，以保证管线温度高，而不残存杂菌。每周检测各配制原料的杂菌数。 6.菌种选育：菌种按《菌种选育操作规程》选育菌种，菌种选育最重要的要求保证操作过程中不能染菌，菌种无杂菌，然后经过三角瓶、卡氏瓶扩大培育，接入纯培养罐。 7.纯培养罐培养：将糖蜜加入PC罐里，经过121℃ 30分钟灭菌后，降温至30℃，接入卡氏瓶菌种，经过通风纯培养，发酵液达到乙醇和湿重指标后，转入种子培养罐培养。

8.种子罐发酵：发酵罐加入工艺水、转入纯培养菌种、流加入N、P营培盐，通风扩大培养，按发酵工艺规程规定的时间和指标发酵。 9.酵母分离：种子发酵液培养结束后，通过分离机把酵母和水等分开，成干物质20%左右的酵母乳，进入酵母乳贮罐。 10.商品培养：在商品发酵加入工艺底水，接入种子酵母乳、流加N、P、硫酸镁、硫酸锌等营养盐，通风发酵。 11.商品酵母分离：按9方法将商品酵母液分离成酵母乳，进入酵母乳贮罐。 12 酵母乳贮存:分离后酵母乳进入贮罐,然后泵入真空转鼓过滤. 13.过滤：商品酵母乳加入盐水,泵入真空转鼓过滤器,通过真空转鼓抽滤，把酵母乳抽滤成含水量为36%左右的酵母泥。流加乳化剂与酵母泥混合后造粒. 14.造粒：通过造粒机把酵母泥挤压成很细酵母面条以增大表面积，便于热交换。造粒后酵母进入干燥床. 15.干燥：酵母粒通过在沸腾干燥床中和干燥的热空气进行交换，迅速脱水干燥成干酵母。 16.震荡筛：干燥后酵母,通过20目震荡筛除去干燥过程中结团的酵母。过筛后的酵母送入干酵母贮罐. 17.干酵母均质:将干酵母贮罐里的酵母分批放入均质器里,开搅拌器均质,送入包装机.

加拿大油砂开采脱砂工艺简述

加拿大油砂开采脱砂工艺简述油砂从矿场开采完成后，重要的是对油砂进行分离处理。加拿大油砂分离处理工艺经过20多年的研究和实践，形成了以热水/表面活性剂洗油法、有机溶剂提取法和干溜法为主的油砂分离方法。在分离方法的选择上主要考虑油砂特点、性质以及成本和环保等方面因素，本着优先选择热水/表面活性剂洗油法，然后再考虑干溜法、有机溶剂提取法。（一）热水/表面活性剂洗油法 1、工作原理通过热碱的作用，改变砂子表面润湿性，使砂子表面更加亲水，实现砂与吸附在上面的沥青分离，分离后的原油上浮进入碱液中，而油砂沉降在下部，以达到分离的目的。表面活性剂的目的是降低油水界面张力，增强油的乳化能力，促使油砂与油的分离。；表面活性剂还可产生协同效应，降低界面张力，提高洗油效率。该方法适合油砂性质比较好，沙粒表面有水膜，表面润湿性为亲水的油砂。 2、工艺流程油砂经过传送系统运输到分离中心，在反应器中加入热碱活性剂，在一定温度(一般为80摄氏度)下化学剂与油砂相互作用形成砂浆，原油乳化脱落；然后进入分离器将油砂与液体、油分离。砂子通过输送系统再返回矿场掩埋或在专门地方存放；分离油再经过破乳、提取分离，得到原油与分离出的液体，回收的液体通过补充可以重复利用。

（二）有机溶剂萃取法 1、工作原理主要是根据物质的相似相容原理来实现油砂分离。即：采用石脑油或甲苯/酒精混合物，在室温状态下，溶剂与油砂混合搅拌，油砂溶解到溶剂中，然后进行蒸馏，实现油砂分离。这种方法是洗油效率高，溶剂可重复利用。 2、工艺流程粉碎油砂进入离心分离前加入溶剂萃取，通过分离后，干净砂子回填或堆放在指定地点，混合物进行蒸馏，产生的溶剂回收再利用，分离出的油进行精炼。（三）干馏法（1）工作原理采用250摄氏度以上高温进行裂解，经过高温处理后，沥青的质量得到很大改变，分子质量变小，胶质减少，高温处理过程中产生轻质油。该方法适合地表干燥油砂资源的开发利用。（2）工艺流程油砂进行粉碎，通过送料系统进入干馏炉高温燃烧，然后进入洗涤塔洗涤、分离塔进行分离，产生的副产品天然气可补充燃烧。

酵母表达系统使用心得

精心整理 Pichia酵母表达系统使用心得甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会这个是来中心（ 1. 3. 4. 5. 产品性能：优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化；缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题。巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由

于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-mycepitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alphafactor（α-factor）用以的是系 PIC9K G418无 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微

镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的时间了。基本熟悉了毕赤酵母，了解了她生长的喜好（多糖偏酸环境），生长的周期等等有的余的（起始密码子），有人认为酵母启动子与外源基因的ATG之间的距离越短对于表达的该基因越有利； ⑤如果不希望有c-myc和His-tag，可以在基因片段末尾加入终止密码子；

铸造工艺流程

消失模铸造工艺流程一、工艺流程示意图 r A EPS EPMMA 预热T加料、搅拌T抽真空T喷水雾T停止抽真空T出料T干燥T料仓闭模T预热模具T加料T合模T发泡成型T冷却T脱模新砂、旧砂、覆塑料膜密封砂箱、置浇口杯落砂斗T水平振动筛T型砂冷却T提升机T磁选、除尘T储砂斗二、工艺流程模样生产工艺流程图 STMMA 干上 { 抛丸机 ? 打磨浇冒口却浇珠粒可发性铸件成品砂件

（一）预发泡：预发泡目的：为了获得低密度、表面光洁、质量优良的泡沫模样。流程：预热f加料、搅拌f抽真空f喷水雾f停止抽真空f 出料f干燥f料仓、熟化 EPS预发温度100~105C；STMMA 预发温度105~115°C；EPMMA 预发温度120~130C。进入预发机的加热蒸汽压力在0.15~0.20MPa范围调节。说明： ①间歇式蒸汽预发泡机必须满足加热均匀（蒸汽与珠粒接触）筒体内温度在90~130C 范围容易调节和控制。搅拌要充分、均匀，筒体底部和侧壁要有刮板，防止珠粒因过热而粘壁，搅拌速度可调。筒体底部冷凝水的排除要畅通，否则影响预发泡效果。 ②加热蒸汽压力可调并稳定，且蒸汽中不能夹带水分。 ③出料要干净，每批发泡后，筒体内残留的料要吹扫干净。熟化：把预发泡珠放置几小时以上，让空气进入珠粒内，使珠粒变得干燥有弹性，变形后又能复原的过程。熟化时间一般为10~24h,熟化时间不能太长否则发泡剂损失太多影响发泡成型质量。（二）成形发泡的工艺过程为：闭模f预热模具f加料f合模f发泡成型f冷却f脱模 f 模样熟化要点：珠粒均匀填满模具，模具必须预热到100C，水蒸气温度一般在 120C左右，压力为0.15MPa。模样熟化：将模样置入50~70C的烘干室强制干燥5~6h可达到在室温下自然熟化2 天的效果。（三）模样的粘合对复杂的模样往往不能整体发泡成形，而分块制造，最后需要将各块粘合成整体。另外，模样与浇冒口系统组成模样组，也需要粘合工序。粘合工序一般是采用粘结剂来完成的。目前国内使用的消失模铸造用的粘结剂可分为热熔胶型、水溶型和有机溶剂型粘胶。粘接剂要求： ①足够的粘接强度，大于100MPa。 ②快干性好，最好能在1h 内干燥，并具有一定的粘接强度，不致在加工或搬运过程中损坏模样。

酵母扩培工艺

酵母扩大培养工艺 1、目的规范酵母扩培作业程序，有效控制扩培工艺参数，保证培养酵母质量均一、稳定。 2.适用范围适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。 3.职责由公司技术处负责编制、修改，实验室和酿造车间负责实施。 4.规定内容 4.1实验室培养 4.1.1培养基制备流程 4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至 5.3-5.5,进行稀释，稀释比例以最终煮沸浓度控制在12度为准。 4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。升温至60℃保温30分钟，保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。 4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶， 0.07Mpa灭菌30分钟。 4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签，空培(室温放置)3天以上确认无菌后方可使用。 4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0．10Mpa蒸汽杀菌 1 小时后的卡氏罐中0．10Mpa灭菌30分钟，提前1-2天完成，确保接种温度稳定。当天能够迅速冷却的，则取当天麦汁处理，冷却后接种。 4.1.2无菌室卫生操作流程

4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。超净台用前提前打开风机及自带的紫外灯灭菌30分钟。 4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。地面、墙壁、天棚及空间采用甲醛熏蒸或75%酒精擦试。同时用紫外杀菌30分钟。 4.1.2.3卡氏罐接种，超净台无法操作时，室内空间当天再次进行上述空间杀菌。 4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放，尤其操净台面。以免破坏空气层流。 4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。斜面接出及卡氏罐接种时各进行一次。 4.1.3实验室阶段扩培工艺流程 1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm 试管中，在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次). 2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的 18×180mm试管中，在25℃培养箱中培养活化24小时. 3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中, 在22℃培养箱中培养24小时. 4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液的5000ml三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时. 6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐, 在 13℃培养箱中培养24小时～48小时. 7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐), 在13℃条件下培养24小时～48小时.

酵母扩大培养过程关键控制点

酵母扩大培养过程关键控制点金星集团信阳啤酒有限公司黄华龙465100 啤酒工厂从单细胞分离得到一个酵母细胞，经过鉴定确认、生产试验，得到优良菌株，然后经过若干次扩大培养，最后制备成107～108个细胞/ml后供发酵用，酵母扩大培养关键在于：第一，选择优良的单一细胞出芽菌株；第二，在整个扩大培养中保证酵母菌种的强壮、无污染。近代由于发酵规模越来越大，对接种酵母要求越来越严。各工厂扩大培养方式和顺序大致相同，而扩陪的结果得到种酵母的纯度、强壮情况、污染情况却差异很大，其原因在于是否有一个科学、无菌的扩培技术管理。一、出芽菌株的选择作为扩大培养的出芽菌株，，无论是实验室保藏菌株还是生产现场（主酵或酵母泥）分离得到的菌株。一般均需进行单细胞分离，并通过一系列生理特性和生产性能测定，包括酿酒口味鉴评后，确认是工厂生产需要的优良纯种后才允许投入生产扩大培养。此单细胞分离和菌株鉴定，需要在有丰富微生物理论和实践经验的技术人员指导下进行。二、扩陪过程的无菌操作扩大培养应严格建立在纯种的基础上，扩大培养过程的无菌技术是扩陪成败的关键。它包括：培养器皿、设备的无菌，移种操作的无菌，培养过程中通风调节温度的无菌。在汉生罐以后从麦汁进罐至移种结束，必须保证汉生罐处于正压状态，这是杜绝吸入有菌空气的先

决条件。三、优良的培养基麦汁是啤酒厂最方便的酵母培养基，但绝对不是“凡可以用来酿造啤酒的麦汁均是优良的培养基”。许多工厂，常常从大生产麦汁中分割作为任何一级扩陪培养基，由于麦汁组成太差，会造成扩大培养失败。无论是哪级扩陪，培养基均需要有特殊要求的麦芽汁。实验室（从试管至大锥形瓶）培养用麦汁，一般应有实验室自己制备，可按以下方式制备成10°P全麦芽麦汁用于试管活化及菌种保藏。 1.麦汁制备: 1)称取优级麦芽约200g，除去铁屑、石粒等坚硬杂质，采用EBC 粉碎。 2)调EBC粉碎机的磨间距，使细粉颗粒直径为0.2㎜。 3)料水比例：1：3～3.5 4)称取细粉适量（准确至0.1g），于已知重量的糖化杯（500～ 600ml专用金属杯中），加入46℃水200ml,在不断搅拌下于 45℃水浴中保温30min。 5)把温度数显表调至70℃，设定。使醪液以1℃/min的速度升温，在25min内升至70℃，此时于杯内加入70℃水100ml（加水时注意冲洗杯壁和搅拌棒）。 6)醪液在70℃下保温1hr，在保温10min时开始碘检，用玻璃棒取一滴麦汁，置于白瓷滴板上，冷却后加一滴碘溶液，混

铸造工艺流程

消失模铸造工艺流程一、工艺流程示意图 r A EPS EPMMA 预热T 加料、搅拌 T 抽真空 T 喷水雾 T 停止抽真空 T 出料T 干燥T 料仓二、工艺流程模样生产工艺流程图 STMMA 干上闭模T 预热模具 T 加料T 合模T 发泡成型 T 冷却T 脱模珠粒可发性组浇合冒落砂斗 T 水平振动筛 T 型砂冷却 T 提升机 T 磁选、除尘 T 储砂斗冒打机口磨）浇、铸件成品却浇

（一）预发泡：预发泡目的：为了获得低密度、表面光洁、质量优良的泡沫模样。流程：预热f加料、搅拌f抽真空f喷水雾f停止抽真空f 出料f干燥f料仓、熟化 EPS预发温度100~105C；STMMA 预发温度105~115°C；EPMMA 预发温度 120~130C。进入预发机的加热蒸汽压力在0.15~0.20MPa范围调节。说明： ①间歇式蒸汽预发泡机必须满足加热均匀（蒸汽与珠粒接触）筒体内温度在 90~130C范围容易调节和控制。搅拌要充分、均匀，筒体底部和侧壁要有刮板，防止珠粒因过热而粘壁，搅拌速度可调。筒体底部冷凝水的排除要畅通，否则影响预发泡效果。 ②加热蒸汽压力可调并稳定，且蒸汽中不能夹带水分。 ③出料要干净，每批发泡后，筒体内残留的料要吹扫干净。熟化：把预发泡珠放置几小时以上，让空气进入珠粒内，使珠粒变得干燥有弹性，变形后又能复原的过程。熟化时间一般为10~24h,熟化时间不能太长否则发泡剂损失太多影响发泡成型质量。（二）成形发泡的工艺过程为：闭模f预热模具f加料f合模f发泡成型f冷却f脱模f模样熟化要点：珠粒均匀填满模具，模具必须预热到100C，水蒸气温度一般在 120C左右，压力为0.15MPa。模样熟化：将模样置入50~70C的烘干室强制干燥5~6h可达到在室温下自然熟化2天的效果。（三）模样的粘合对复杂的模样往往不能整体发泡成形，而分块制造，最后需要将各块粘合成整体。另外，模样与浇冒口系统组成模样组，也需要粘合工序。粘合工序一般是采用粘结剂来完成的。目前国内使用的消失模铸造用的粘结剂可分为热熔胶型、水溶型和有机溶剂型粘胶。粘接剂要求: ①足够的粘接强度，大于lOOMPa。 ②快干性好，最好能在1h内干燥，并具有一定的粘接强度，不致在加工或搬运过程中损坏模样。

酵母表达载体pPICZ手册

pPICZ A, B, and C Pichia expression vectors for selection on Zeocin? and purification of recombinant proteins Catalog no. V190-20 Rev. Date: 7 July 2010 Manual part no. 25-0148 MAN00000034 User Manual

Table of Contents Kit Contents and Storage (iv) Accessory Products (v) Introduction (1) Overview (1) Methods (3) Cloning into pPICZ A, B, and C (3) Pichia Transformation (9) Expression in Pichia (13) Purification (15) Appendix (17) Recipes (17) Zeocin? (19) Map and Features of pPICZ A, B, and C (21) Lithium Chloride Transformation Method (23) Construction of In Vitro Multimers (24) Technical Support (32) Purchaser Notification (33) References (34) iii

Kit Contents and Storage Contents The following components are included with Catalog no. V190–20. Note that the pPICZ expression vectors are supplied in suspension. Component Quantity Composition pPICZ A Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ B Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 pPICZ C Expression Vector 20 μg 40 μl of 0.5 μg/μl vector in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 GS115/pPICZ/lacZ Positive 1 stab -- Control strain Shipping/Storage The components included with Catalog no. V190–20 are shipped on wet ice. Upon receipt, store as directed below. For long-term storage of your positive control stab strain, we recommend preparing a glycerol stock immediately upon receipt and storing at –80°C. Component Shipping Storage pPICZ A Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ B Expression Vector Wet ice Store at –20°C pPICZ C Expression Vector Wet ice Store at –20°C GS115/pPICZ/lacZ positive control strain Wet ice Store at 4°C iv

酵母管理系统知识

1.目的使用糖化醪，在密闭罐内接入酵母菌种，通入微量的无菌空气，保压培养，获得发酵力强的纯酒母醪，供酒精发酵。 2.扩培工艺流程 3.工艺数据复活温度：35℃—38℃。培养温度：28℃—30℃。分割时，留种量：15%左右。酒母培养时间：8小时。通风量：观察罐内液体翻动即可，每两小时开一次，每次15分钟左右。 4.要点配料：酒母糖液罐全容积为18m3，实装容积为80%，计算15.0m3。配方：糖化醪15m3，尿素0.15%（12kg），青霉素50g。 5.看罐值班人员每小时检查一次酒母罐温度，做好原始记录，发现异常及时调整，至培养成熟为止。 6.生产工艺

6.1 破碎工艺破碎颗粒直径：1.5mm—1.8mm；拌料温度：70℃—75℃；拌料加水比：1：2.5—2.8；添加耐高温α-淀粉酶：用量0.8ц/g—1.2ц/g淀粉。 6.2 蒸煮糖化蒸煮温度为81℃—83℃，蒸煮时间为90min，用酶量为90单位/g—120单位/g，控制糖化时间在60℃±2。 6.3 发酵糖化醪入二分之一，加入青霉素1ц/mL，入罐温度32℃—34℃，主发酵期34℃—36℃，发酵周期60小时。 7.结论 7.1 扩培后使用，干酵母的用量较少，并减少了传统酵母多级培养中小酒母前的操作环节，便于控制酒母质量。 7.2 扩培中，糖液是直接由糖化锅泵入，省去了传统酵母培养中对醪液的杀菌过程，从而节约了水、电、汽。 7.3 发酵成绩提高，发酵醪酒精浓度提高1%，吨酒精节省蒸汽消耗约300kg，降低生产成本约50元。同时，吨酒精节省工艺用水1.2t—1.5t，减少酒糟排放量1.5t—2t。汉生罐留种扩大培养酵母的控制点击数：199 发布时间：2009年11月1日来源：中国发酵在线进入论坛交流