糖化血红蛋白常用检测方法

糖化血红蛋白是指血红蛋白与血糖结合形成的一种化合物，它可以反映人体近3个月内的血糖控制情况。目前常用的糖化血红蛋白检测方法主要有以下几种：

1. 离子交换色谱法：该方法使用离子交换树脂分离血红蛋白和

糖化血红蛋白，再通过高效液相色谱分析法测定糖化血红蛋白的含量。

2. 免疫测定法：该方法利用特异性抗体与糖化血红蛋白结合，

再通过酶标记或荧光标记等方法检测糖化血红蛋白的含量。

3. 比色法：该方法利用糖化血红蛋白与氨基甲酸钠反应生成的

褐色化合物的吸光度与糖化血红蛋白的含量成正比，通过测定吸光度来计算糖化血红蛋白的含量。

4. 毛细管电泳法：该方法将血液样品通过毛细管，根据血红蛋

白与糖化血红蛋白的电泳迁移率差异来分离并测定糖化血红蛋白的

含量。

以上几种方法各有优缺点，在临床上应根据具体情况选择适当的检测方法。

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糖化血红蛋白

1、在一新鲜的血液中加高、中、低三种不同的标准参比物，同时用三种不同方法进行回收试验，每一浓度测定5份，取均值。 2、通过对两种方法进行的准确度、重复性、线性回归，以及其他干扰因素进行综合分析。Hplc法具有准确性高、重复性好、线性佳，影响因素少，而且操作十分简便，检测时间短等优点。免疫法法虽然准确度、重复性、回归线性还可以，但受到一定条件的限制，试剂保留时间较短。 3、临床实验室主要使用的测定血中糖化血红蛋白(HbA1c)的方法是免疫比浊法。方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。我们依据美国国家临床实验室标准化委员会( NCCLS) 批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差估计EP9-A 指南文件》( Method Comparison and Bias Est imat ion Using Patient Samples; Approved Guideline; EP9-A) , 4、我们根据NCCLS 的标准化文件EP9-A 对测定糖化血红蛋白的两种方法进行了比较。EP9-A 文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。对于使用者, 评价的目的在于两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。在实验室中,经常会进行方法学评价的实验, EP9-A 为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。根据EP9 -A 文件, 比较实验至少应有40 例样本,排除异常点数不得多于1个,当r2< 0. 95 时, 应增加测定样本。 5、因此, 在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时,应选择适当的产品。在使用定值质控品评价方法的准确性时,应考虑测定原理对测定结果的影响。 6、[摘要] 目的: 建立高效液相色谱(HPLC )测定糖化血红蛋白(GHb)方法, 并对其进行评价。方法: 以Bio-Rex 70阳离子交换树脂为填料, 在HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定GHb , 对其分析性能进行评价。对50例健康人和50例糖

糖化血红蛋白的检测方法和原理

糖化血红蛋白的检测方法和原理糖化血红蛋白（Glycated Hemoglobin，HbA1c）是在血液中存在的一种特定的蛋白质，它可以反映在过去的2至3个月内血糖水平的平均值。因此，检测糖化血红蛋白是诊断糖尿病和监测糖尿病控制的重要手段之一。目前常用的糖化血红蛋白检测方法有以下几种： 1. 凝胶过滤层析法（HPLC）这种方法主要是利用电泳法将血红蛋白分离出来，然后再利用柱层析法将血红蛋白与糖化血红蛋白分开。凝胶过滤层析法可以检测出HbA1c 的含量，其检测亚达可达到99%，具有较高的准确性和灵敏度，是目前用于判断糖尿病患者控制水平的首选方法。但这种方法检测需要使用高昂的仪器和试剂，并需要专业人员进行操作和分析，因此保守分析已经慢慢淘汰。 2. 免疫测定法（Immunoassay）免疫测定法主要是利用抗体-抗原反应来检测糖化血红蛋白的含量。这种检测方法不需要使用昂贵的仪器设备，检测速度较快，准确性也相对较高，因此被广泛用于临床糖尿病的监测和诊断。但是，由于某些因素的干扰，包括药物或化学物质的影响，其准确性略有差异。但也是买家和品牌主们选用的检测方法。 3. HbA1C快速检测（NGSP）此外，还开发了NGSP（National Glycohemoglobin Standardization Program）认证的HbA1C快速检测方法，它主要应用电泳法和柱层析技

术来检测血红蛋白和糖化血红蛋白。这种方法的灵敏度较高，检测时间短，结果较准确。缺点是价格稍高，但是一旦处理，结果可迅速传递给患者，并提供诊断和治疗方案的指导。总结：以上三种方法是目前糖化血红蛋白检测的主要方法，在不同的场合下可以根据需要选择最合适和方便的方法。不论是哪种方法，都可以帮助监测和控制糖尿病人的血糖水平，及时发现和治疗病情，预防糖尿病的并发症，保障病人的健康和生活质量。

糖化血红蛋白的检测

糖化血红蛋白的检测（一）糖化血红蛋白检测技术的分类及评价 HbA1c检测技术繁多，目前临床常用的检测方法可分为两大类。一类利用糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白电荷差异进行分离，包括：离子交换HPLC、毛细管电泳法、等电聚焦电泳法等；另一类则利用血红蛋白糖基化基团与非糖基化基团结构的不同开展检测，包括：硼酸盐亲和层析法、免疫法和酶法。离子交换HPLC作为DCCT（美国糖尿病控制与并发症研究）和IKPDS （英国糖尿病前瞻性研究）的推荐方法，具有精密度和准确性良好、方便快捷、干扰因素较小等优点。其缺点在于成本较高，部分产品受血红蛋白浓度和血红蛋白变异体的影响。卫生部临检中心室间质评结果显示，采用该方法的实验室从2013年的278家上升到2018年的1284家，显示近年来离子交换HPLC早我国临床实验室得到广泛应用。毛细管电泳法是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的液相分离分析技术，可分离HbA2、血红蛋白C（HbC）、血红蛋白E（HbE）、血红蛋白S（HbS）、血红蛋白D（HbD）、胎儿血红蛋白（HbF）、HbA0，以及其他血红蛋白和HbA1a、HbA1b、HbA1c。该方法具有所需样本量少、可自动化、重复性好、可用于β-地中海贫血以及其他血红蛋白合成障碍性疾病的筛查等优点，但存在检测成本较高、检测速度慢等缺点。硼酸盐亲和层析法则利用m-氨基苯硼酸与结合于血红蛋白的葡萄糖顺位二醇基发生特异性反应，该方法检测总的糖化血红蛋白，包括HbA1c和其他位点的糖化血红蛋白。其优点在于所需标本量少、检测速度快、可用于POCT、受血红蛋白变异体影响最小。其缺点在于受HbF影响，无法发现Hb变异体。大多数免疫测定法能特异地识别血红蛋白β链N端糖基化的氨基酸（通常是开始的4~10个氨基酸），免疫法又可分为免疫化学发光法、免疫比浊法、乳胶凝集法和免疫层析法。该方法优点包括：特异性高、可自动化、成本低廉、无Hb变异的干扰。缺点在于：受乳糜血和胆红素影响，无法发现Hb变异体。酶法则使用一种特异性酶酶切N端缬氨酸来测定HbA1c。由于采用比色法，该方法不需要昂贵、精密的检验仪器，实验室常用的全自动生化分析仪即可完成检测。其优点在于：方便快速、成本低廉。但目前国内不同厂家生产的试剂质量良莠不齐，不同检测系统间的精密度和准确性差异明显。建议临床实验室在引入该方法前严格开展性能验证工作，验证能否满足临床要求。鉴于离子交换HPLC为每个患者样品提供了一张便于判断的层析图，很多临床实验室将其作为HbA1c的首选方法。但该方法受血红蛋白变异体的影响，会掩盖HbA1c而导致结果错误。因此，有专家提出，实验室采用离子交换HPLC 检测HbA1c时，应选用两种检测方法。审核离子交换HPLC结果前，首先筛查层析图是否存在异常血红蛋白，如果存在，则可以选择免疫法或毛细管电泳法进行复查，确保HbA1c检测结果准确。（二）糖化血红蛋白检测中的干扰问题在糖化血红蛋白检测过程中，多种因素均会引起血红蛋白数量与质量变化，最终干扰HbA1c的检测结果。 1、生理因素：如种族差异、年龄差异、性别差异，地区差异（高原与平原地区）和妊娠（妊娠中期女性HbA1c水平略降低，而妊娠晚期略升高）。

糖化血红蛋白检测金标准

糖化血红蛋白检测金标准糖化血红蛋白检测金标准近年来，糖化血红蛋白检测作为糖尿病管理的重要指标备受关注。糖化血红蛋白检测金标准是什么？在了解这一主题之前，我们首先需要了解什么是糖化血红蛋白，它在糖尿病管理中的作用以及它的检测标准。接下来，我们将从浅入深地探讨这一主题，帮助你更加全面地了解糖化血红蛋白检测金标准。 1. 糖化血红蛋白的作用糖化血红蛋白是指血液中的血红蛋白与葡萄糖发生非酶促反应结合形成的新的化合物。它可以反映出过去两到三个月内的血糖平均水平，因此被认为是糖尿病管理中的重要指标。它能够帮助医生了解患者的血糖控制情况，从而制定更合理的治疗方案。 2. 糖化血红蛋白的检测方法目前，常用的糖化血红蛋白检测方法主要有HPLC法、凝胶高效液相色谱法和免疫比浊法。这些方法各有优劣，但目前来看HPLC法被认为是最准确、最稳定的检测方法，被广泛应用于临床实践中。 3. 糖化血红蛋白检测金标准

糖化血红蛋白检测金标准是指在进行糖化血红蛋白检测时所需符合的一系列标准和规定。这些标准通常包括检测方法的选择、标本的采集和保存、实验室的质控要求等方面。具体来说，金标准要求所选择的检测方法应该具有高准确性、高重现性和较低的干扰因素。标本的采集和保存也需要遵循严格的规定，以确保检测结果的准确性。实验室应该有完善的质控体系，确保每一次检测结果都是可靠的。总结回顾通过以上的了解，我们可以清晰地知道糖化血红蛋白检测金标准是多么重要。它不仅直接关系到糖尿病患者的治疗效果，也关系到医生对患者病情的准确判断。我们必须严格遵守糖化血红蛋白检测金标准的要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。个人观点和理解在我看来，糖化血红蛋白检测金标准的制定和执行对于糖尿病管理来说至关重要。只有通过严格执行金标准，我们才能够获得准确可靠的检测结果，从而更好地指导临床实践和患者的治疗。我认为在未来的临床实践中，我们还需要不断完善糖化血红蛋白检测金标准，以适应不断变化的医疗需求和技术进步。在知识的文章格式中，我们可以将以上内容逐步展开，从简到繁地介绍糖化血红蛋白及其检测金标准，以便读者更好地理解和掌握这一重要主题。使用序号标注和多次提及主题文字，可以使文章更加严谨和

糖化血红蛋白的不同检测方法及公认的金标准方法

糖化血红蛋白的不同检测方法及公认的金标准方法目前HPLC法测定HbA1c使其准确性和重复性得到很大的提高。美国临床化学协（AACC）糖化血红蛋白标准化分会和IFCC HbA1C标准化工作组建议，以DCCT研究中所“指定的方法”- HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准，希望以此使大多数的实验方法能够参照“指定的方法”实现标准化。 1993年美国 1型糖尿病控制及并发症实验（DCCT）和英国大规模的2型糖尿病控制与并发症关系研究（UKPDS）的研究中把HbA1c作为糖尿病控制的一个观察指标。1996年4月起在日本，HbA1c被纳入老年人保健法中糖尿病筛选的检查项目。2002年美国糖尿病协会（ADA）已将其作为监测糖尿病控制的金标准，对其应用也作了明确的规定：即所有糖尿病患者均应常规测定HbA1c。其初诊时测定结果为基线时的代谢状况，此后的测定值则作为糖尿病长期治疗控制中的一部分，这样在提高糖尿病诊断水平、血糖控制、慢性并发症的防治中具有十分重要的应用价值。目前通常认为检测HbA1c的临床意义有三点： 1.在糖尿病的筛选普查中有早期提示的价值，可作为轻症、2型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 2.在糖尿病的治疗中， HbA1C是评价血糖控制好坏的重要标准。 3.预示微、小血管并发症，估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。糖化血红蛋白的几种不同检测方法

测定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化学性质的不同而进行的，目前主要的检测方法有5种：离子交换高效液相色谱分析法- 检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准基于Hbb链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。在中性pH条件下,HbA1c携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将其与其它组分(HbA1c,HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0)区分开,得到分离。此方法曾应用于美国DCCT的研究，是目前检测HbA1c的金标准。微柱法微柱内的阳离子交换树脂（如Biorex 70）在PH近7时解离后带阴电荷，而Hb解离后带阳电荷，二者可形成离子键。由于GHb的阳电荷比HbA少，与树脂的结合力相对低，容易被洗脱。用分光光度计分别测定洗脱液中GHb和溶血物中总Hb的吸光率（A），可计算出GHb占总Hb的百分比（%）。但此方法的影响影响因素比较多： 1. 洗脱温度对结果有较大影响 2. 抗凝剂肝素能使测定结果增高 3. 某些血红蛋白如HbF异常增加时，也会与糖化血红蛋白同时洗脱，从而使结果产生偏差电泳法胶体颗粒在一定条件下可以带有电荷，带有电荷的胶体颗粒可以借静电吸引力在电场中泳行，带正电荷者泳向负极，带负电荷者泳向正极，此种现象称为电泳。血清中各种蛋白质都有它特有的等电点，各种蛋白质在各自的等电点时呈中性状态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。但此方法学的弱点是：

糖化血红蛋白测定胶体金法检测原理

糖化血红蛋白测定胶体金法检测原理糖化血红蛋白测定胶体金法是一种常用的血糖控制指标测定方法。本文将详细介绍该方法的原理和应用。糖化血红蛋白（HbA1c）是指红细胞内血红蛋白与葡萄糖发生非酶促的糖化反应，形成的稳定化合物。它的浓度与血浆中葡萄糖水平长期平均值成正相关。因此，糖化血红蛋白的浓度可以反映出过去2-3个月内的血糖控制情况，被广泛用于糖尿病患者的血糖监测和治疗效果评估。糖化血红蛋白测定胶体金法是一种基于免疫反应的测定方法。其原理主要包括以下几个步骤： 1. 血液样本处理：首先，需要从患者的静脉血样本中提取红细胞。然后，通过离心等方法将血浆分离出来。 2. 样本预处理：为了减少测定中的干扰因素，需要对血浆样本进行预处理。通常，常用的预处理方法包括去除胆红素和脂质等干扰物质。 3. 抗体反应：将经过预处理的血浆样本与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。这些特异性抗体能够与糖化血红蛋白结合，并具有高度的特异性和亲和性。 4. 胶体金标记：将胶体金标记物与抗体结合，形成胶体金标记的抗

体。胶体金是一种颗粒状的金纳米材料，具有良好的光学性能和稳定性。 5. 检测信号：将标记的抗体加入到血浆样本中，与已结合的抗原-抗体复合物发生竞争反应。当浓度较高的糖化血红蛋白存在时，竞争反应较弱，标记的抗体与复合物结合。而当糖化血红蛋白浓度较低时，竞争反应较强，标记的抗体与复合物结合较少。 6. 信号测定：利用光学检测设备，测定标记的抗体与复合物的结合情况。常用的测定方法包括吸光度测定和荧光测定。通过测定信号的强度，可以确定糖化血红蛋白的浓度。糖化血红蛋白测定胶体金法具有许多优点。首先，该方法具有高度的特异性和敏感性，能够准确测定低浓度的糖化血红蛋白。其次，该方法操作简便，检测时间短，适用于大规模的临床应用。此外，该方法对血红蛋白的变异性影响较小，结果相对稳定可靠。糖化血红蛋白测定胶体金法在临床中有着广泛的应用。首先，它被广泛用于糖尿病的血糖控制监测。通过定期测定糖化血红蛋白的浓度，可以评估糖尿病患者的长期血糖控制情况，指导治疗方案的制定和调整。其次，该方法还可以用于糖尿病的早期筛查和诊断。糖化血红蛋白浓度的升高可以提示患者存在潜在的糖尿病风险。此外，糖化血红蛋白测定胶体金法还可以用于其他疾病的辅助诊断，如肾病、心血管疾病等。

糖化血红蛋白测试方法学

糖化血红蛋白测试方法学糖化血红蛋白测试方法学解析糖化血红蛋白（HbA1c）作为评估糖尿病患者血糖控制状况的重要指标，其测试方法学的准确性及可靠性至关重要。本文将为您详细解析糖化血红蛋白的测试方法及其相关技术要点。一、糖化血红蛋白概述糖化血红蛋白是红细胞中的血红蛋白与血液中的葡萄糖发生非酶促反应而形成的化合物。糖化血红蛋白的测定可以反映过去2-3个月内的平均血糖水平，是评价糖尿病患者血糖控制状况的重要指标。二、糖化血红蛋白测试方法 1.高压液相色谱法（HPLC）高压液相色谱法是糖化血红蛋白测定的金标准，具有准确性和重复性好的特点。该方法通过将血液样本中的血红蛋白与其他蛋白质分离，然后测定糖化血红蛋白的比例，从而得出HbA1c的浓度。 2.免疫比浊法免疫比浊法是一种基于抗原-抗体反应原理的测试方法。该方法通过特异性抗体与糖化血红蛋白结合，形成免疫复合物，然后通过比浊仪测定复合物的浓度，从而计算HbA1c的值。 3.紫外可见光谱法紫外可见光谱法是通过测定血液样本在特定波长下的吸光度，进而计算糖化血红蛋白的浓度。该方法操作简便，但准确性相对较低，适用于快速筛查。

4.电泳法电泳法是将血液样本中的蛋白质通过电泳分离，然后通过染色剂对糖化血红蛋白进行染色，从而测定HbA1c的浓度。该方法操作复杂，但具有较高的准确性。三、糖化血红蛋白测试方法学注意事项 1.样本采集与处理：采集血液样本时应避免溶血、污染和稀释，确保测试结果的准确性。 2.试剂与仪器：选择合适的试剂和仪器，严格按照制造商的操作规程进行测试。 3.质量控制：定期进行室内质控和室间质评，确保测试结果的可靠性和稳定性。 4.方法学比较：不同测试方法之间存在一定差异，实验室应根据自己的条件选择合适的方法，并进行方法学比较。四、总结糖化血红蛋白测试方法学的选择对于糖尿病患者血糖控制评估具有重要意义。实验室应根据自己的条件、需求及测试方法的特点，选择合适的测试方法，为临床提供准确、可靠的糖化血红蛋白检测结果。

糖化血红蛋白操作程序

糖化血红蛋白操作程序一、检测方法离子交换层析法二、方法学原理 H50采用基于离子交换的高效液相色谱检测原理，测量血红蛋白色谱图，计算相关参数。基于高效离子交换的液相色谱检测原理，测量时先将含有各种血红蛋白的血液样本载入层析柱，在选定的低离子强度缓冲液及pH条件下，血液样本中的HbA1c几乎不带正电荷，首先被洗脱；血液样本中的HbA0带正电荷，用高离子强度的洗脱液最后洗脱出来，得到相应的血红蛋白层析谱，然后算出HbA1c峰值和总Hb的比值。三、试剂品牌、包装规格、内含物 3.1试剂品牌：迈瑞 3.2试剂成分和规格 3.2.1：离子交换层析柱：规格：1*1 3.2.2糖化血红蛋白溶血剂：磷酸缓冲液规格：2L*3 3.2.3糖化血红蛋白洗脱液A：琥珀酸缓冲液规格：900ml*4 3.2.4糖化血红蛋白洗脱液B：磷酸缓冲液规格100ml*2 3.3储存温度：2℃—30℃ 3.4开瓶有效期：100day。四、仪器品牌、型号品牌型号：迈瑞H-50 五、操作程序 5.1开机程序 5.1.1按主机上的电源开关，接通电源； 5.1.2仪器自动执行一项自检操作，包括系统检查、关机检查和机械初始化。整个过程约持续15分钟； 5.1.3系统自检完成后，弹出登录对话框。在对话框中输入用户名和密码后，点击“登陆”； 5.1.4“液路初始化”完成后进入主界面，进行样本分析；

5.2质控程序 5.2.1容器类型 1.使用离心管或微量杯，分别使用各自的适配器，放入质控品试管架，试管架上部有CRL标贴。 2.仪器会自动识别试管架，采用预稀释模式测量。 5.2.2质控品样本液的制备 5.2.2.1厂家质控 1.对于新开瓶质控品，首先将其自2~8℃冰箱中取出； 2.轻敲瓶盖，确保冻干样品全部散落在瓶底，小心地打开瓶盖和橡皮塞，使瓶盖朝上，当心瓶盖上黏附的冰冻粉末被风吹下造成内容物的损失； 3.获取2mL糖化血红蛋白溶血剂，缓慢注入两个水平的质控品瓶中，仔细盖上橡皮塞后，轻缓翻转小瓶10秒进行混匀，然后避光放置约2-3分钟（期间轻缓翻转小瓶，确保内容物完全溶解，翻转过程避免产生泡沫）； 4.待其完全复溶后混匀，可用移液器分别取两个水平的质控品各200ul置于两个预稀释样本杯或1.5ml EP管中（剩余的质控品可置于2～8℃低温下保存14天，使用前从低温环境下取出即可直接使用），每一瓶质控品开瓶后均需在瓶身上记录开瓶日期， 5.每一批质控品开瓶后第一次使用时均需在仪器上录入质控品试剂的参考值、批号和有效期：点击“质控”菜单→“设定”→选择新的文件号→点击“编辑”→选择质控水平、参考值类型，偏差限格式，输入批号、有效期、参考值和偏差限，每个水平质控建立一个相对应的文件夹并勾选“在用”列，仪器后续质控测试将默认保存在该文件夹中直到有效期失效。 5.2.2.2上海市临床检验中心质控 1. 对于新开瓶质控品，首先将其自2~8℃冰箱中取出； 2.取低、高值质控品各5ul分别用5ml的糖化血红蛋白溶血剂溶血备用。（注：溶解的质控品可以做两次质控，第一次做好之后盖好盖子放入2~8℃冰箱保存） 5.3质控程序 1.分析仪开机完成后，将质控品样本杯或1.5ml EP管分别放置于配套的适配器内，然后放置于质控试管架上，低值质控品放置于2号位，高值质控品放置于4号位）； 2.将试管架置于自动进样器上，在仪器的“样本分析”界面，点击“模式”，选

糖化血红蛋白计算方法

糖化血红蛋白计算方法糖化血红蛋白是指血红蛋白与血糖结合后形成的一种化合物，它是反映血糖控制情况的重要指标。糖化血红蛋白的测定方法有多种，其中最常用的是高效液相色谱法（HPLC）和离子交换层析法（IEF）。本文将介绍糖化血红蛋白的计算方法及其临床意义。一、糖化血红蛋白的计算方法糖化血红蛋白的计算方法是将糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比表示为糖化血红蛋白百分比（HbA1c%）。目前，国际上通用的糖化血红蛋白标准是以DCCT（糖尿病控制与并发症试验）为基础的，其糖化血红蛋白标准为HbA1c≤6.5%。糖化血红蛋白的计算方法是通过测定血液中的糖化血红蛋白浓度来计算的。测定方法有多种，其中最常用的是HPLC法和IEF法。HPLC法是一种高效液相色谱法，它可以快速、准确地测定糖化血红蛋白的浓度。IEF法是一种离子交换层析法，它可以将血液中的糖化血红蛋白分离出来，然后通过比色法测定其浓度。二、糖化血红蛋白的临床意义糖化血红蛋白是反映血糖控制情况的重要指标，它可以反映出过去2-3个月内的平均血糖水平。因此，糖化血红蛋白的测定可以用于评估糖尿病患者的血糖控制情况，以及预测糖尿病患者的并发症风

险。 1. 评估血糖控制情况糖化血红蛋白的测定可以反映出过去2-3个月内的平均血糖水平，因此可以用于评估糖尿病患者的血糖控制情况。如果糖化血红蛋白水平高于正常范围，说明糖尿病患者的血糖控制不良，需要加强治疗措施。 2. 预测并发症风险糖化血红蛋白的测定可以预测糖尿病患者的并发症风险。糖尿病患者的糖化血红蛋白水平越高，其发生心血管疾病、肾病、神经病变等并发症的风险就越高。因此，糖化血红蛋白的测定可以帮助医生及时发现并预防糖尿病患者的并发症。三、糖化血红蛋白的影响因素糖化血红蛋白的测定结果受多种因素的影响，包括血红蛋白的寿命、血糖水平、贫血、肝病、肾病、药物等。因此，在进行糖化血红蛋白测定时，需要注意以下几点： 1. 血红蛋白的寿命血红蛋白的寿命是影响糖化血红蛋白测定结果的重要因素。血红蛋白的寿命受多种因素的影响，包括年龄、性别、贫血、疾病等。因

糖化血红蛋白检验

糖化血红蛋白检验 1.原理用偏酸缓冲剂处理Bio-Rex70阳离子交换树脂，使之带负电荷。它与带正电荷的Hb有亲和力。HbA及HbA，均带正电荷，由于HbA1的两个β-链N-末端正电荷被糖基清除，正电荷较HbA少，两者对树脂的附着力不同。用pH6.7磷酸盐缓冲液可首先将带正电荷较少、吸附力较弱的HbA1洗脱下来，用分光光度计测定洗脱液中的HbA1占总Hb的百分数。 2.试剂 (1)0.2 mol／L磷酸氢二钠溶液：称取无水Na2HPO428.396 g，溶于蒸馏水中，并加蒸馏水至 1 L(即试剂1)。 (2)0.2 mol／L磷酸二氢钠溶液：称取NaH2PO4?2H2O31.206 g，溶于蒸馏水中，并加蒸馏水至1 L(即试剂2)。 (3)溶血剂：pH 4.62，取25 ml试剂2，加0.2 ml Triton X-100，加蒸馏水至100 ml。 (4)洗脱剂I(磷酸盐缓冲液，pH 6.7)：取100 ml试剂 1150 ml试剂2于1 000 ml容量瓶内，加蒸馏水至1 L。 (5)洗脱剂Ⅱ(磷酸盐缓冲液pH 6.4)：取300 ml试剂1及700 ml试剂2，加蒸馏水300 ml，混匀即成。 (6)Bio-Rex70阳离子交换树脂，200～400目，钠型，分析纯级。 3.操作 (1)树脂处理：称取Bio-Rex70阳离子交换树脂10g，加 0.1 mol／L NaOH溶液30 ml，搅匀，置室温30分钟，期间搅拌2～3次。然后加浓盐酸数滴，调至pH 6.7，弃去上清液，用约50 ml蒸馏水洗1次，用洗脱剂Ⅱ洗2次，再用洗脱剂I洗4次即可。 (2)装柱：将上述处理过的树脂加洗脱剂I，搅匀，用毛细滴管吸取树脂，加入塑料微柱内，使树脂床高度达30～40 mm，树脂床填充应均匀，无气泡、无断层。 (3)溶血液的制备：将EDTA抗凝血或毛细管血20μl，加于2.0 ml生理盐水中，摇匀并离心，弃去上清液，仅留下红细胞，加溶血剂0.3 ml，摇匀，置37℃水浴中15分钟，以除去不稳定的 HbAl。 (4)柱的准备：将微柱颠倒摇动，使树脂混悬，然后去掉上下盖，将柱插入15 mm×150 mm 的大试管中，让柱内缓冲液完全流出。 (5)上样：用微量加样器取100μl溶血液，加于微柱内树脂床上，待溶血液完全进入树脂床后，将柱移人另一支15 mm×150 m洁净的空试管中。 (6)层析洗脱：取3.0 ml洗脱剂I，缓缓加于树脂床上，注意勿冲动树脂，收集流出物，此即为HbA1(测定管)。 (7)对照管：取上述溶血液50μl，加蒸馏水7.5 ml摇匀，此即为总Hb管。 (8)比色：用分光光度计，波长415 nm，比色杯光径10 mm，以蒸馏水作空白，测定各管吸光度。 (9)微柱的清洗和保存：用过的柱先加洗脱剂Ⅱ 3.0 ml，使Hb全部洗下，再用洗脱剂I洗3 次，每次3.0 ml，最后加洗脱剂I 3.0 ml，加上下盖，保存备用。

糖化血红蛋白几种常见检测方法

糖化血红蛋白几种常见检测方法正常血红蛋白有三种：血红蛋白A(HbA)，血红蛋白F(HbF)，血红蛋白A2(HbA2)，成人红细胞中主要含有HbA。在用层析法分离血红蛋白时，可洗脱出3种含糖成分即：HbAla，HbAlb和HbA1c，合称为糖化血红蛋白。糖化血红蛋白(HbA1c)是血液中红细胞内血红蛋白与血糖结合的产物。血糖通过弥散方式进入细胞内，无需胰岛素参与。血糖与血红蛋白的结合过程缓慢且不可逆，在红细胞死亡之前一直存在，故体内衰老红细胞比新生红细胞的糖化血红蛋白含量约高出1.5倍。每一个红细胞内都有血红蛋白，而红细胞的寿命为120d，平均60d，所以糖化血红蛋白比例能映反应测定前1—2个月的平均血糖水平。糖化血红蛋白越高表示血糖与血红蛋白结合越多，糖尿病病情也越重。它避免了每日的血糖值的波动，与病人抽血时问、是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。当糖尿病控制较好时其浓度在一定值范围，如糖尿病控制不佳时其浓度可高至正常的2倍以上。因此成为糖尿病治疗过程中疗效监测的重要手段。HbA1c检测用于常规实验室始于20世纪70年代末期，且稳定发展至今，检查糖化血红蛋白已成为了解糖尿病控制良好与否的重要指标。国外已将糖化血红蛋白监测作为糖尿病疗效判定和调整治疗方案的“金指标”。目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类：一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同，如离子层析法、电泳等方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。其中高效液相离子层析

法(HPLC)被公认为金标法。 1检测方法 1.1离子层析法H。离子层析法精密度高、重复性好且操作简单，被临床广泛采用。检测原理由于血红蛋白13链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同，在偏酸溶液中总糖化血红蛋白(GHb)及HbA均具有阳离子的特性，因此经过阳离子交换层析柱时可被偏酸的缓冲液平衡过的树脂来吸附，但二者吸附率不同，GHb正电荷较少吸附率较低，HbA 正电荷较多吸附率较高。用不同pH的磷酸盐缓冲液可以分次洗脱出GHb和HbA，用KCN可将Hb转化为高铁氰化血红蛋白，用分光光度计测定。或者得到相应的Hb层析谱，其横坐标是时间，纵坐标是百分比。HbA1C值以百分率来表示。现在大部分都用全自动测定仪测定，如日本TOSOH公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪曾应用于美国糖尿病控制和并发证试验(DCCT)研究，其离子交换HPLC法是HbA1c检测的金标准。当前推出的HLC一723G7从开机到报告第一个结果仅需3.6min，标本无需前处理，操作维护都非常方便，是目前测试GHb精密度、准确性最高的方法。国内主要采用Bio—Rex70阳离子树脂微柱层析法，其微柱可重复使用多次，更大型的仪器有SCIENTIFIC公司的Hb—Gold，除可全自动测定糖化血红蛋t3~l,，还可分离检测血红蛋白的600多种变异体和亚型，用于地中海贫血等疾病的诊断。但其缺点是价格昂贵，仅在一些发达国家使用，且容易受到如下干扰：胎儿血红蛋白(HB-F)与HbA1C的带电性很相近，在离子交换HPLC分析图上可能呈现一个独立的Hb—F峰，也可能与HbA1c峰重叠(视离子交换柱的分辨能力而定)。 1.2手工微柱法手式微柱操作会受到人工因素影响，可能会洗脱不完全或过度洗脱并受外界环