四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价

陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼

【摘要】目的探讨亲和层析法、高效液相色谱法(HPLC)、免疫比浊法和酶法检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对游离胆红素(F-Bil)、结合胆红素(C-Bil)、血红蛋白(Hb)和乳糜微粒(CM)的抗干扰能力.方法收集EDTA-K2抗凝新鲜血,制备

HbA1c10.4％和6.2％的高、低浓度标本,对4种方法检测HbA1c进行干扰实验.结果 4种干扰物对亲和层析法、HPLC法检测HbA1c无干扰.CM≥15 000FTU时,免疫比浊法测定HbA1c有干扰.F-Bil、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测高浓度HbA1c有干扰;F-Bil≥196.8 μmol/L、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测低浓度HbA1c有干扰.结论酶法检测HbA1c抗胆红素干扰能力有待改进,应剔除黄疸标本.免疫比浊法则应避免高CM标本.

【期刊名称】《临床检验杂志》

【年(卷),期】2013(031)010

【总页数】2页(P786-787)

【关键词】糖化血红蛋白;亲和层析法;高效液相色谱法;免疫比浊法;酶法;干扰

【作者】陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼

【作者单位】中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中

山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403

【正文语种】中文

【中图分类】R446.1

临床上溶血、黄疸和脂血标本较常见，游离血红蛋白(Hb)、胆红素、脂质等可能干扰糖化血红蛋白A1c(glycosylated hemoglobin A1c，HbA1c)的检测结果。本研究参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP7-A2文件[1]及相关文献[2]，评价游离胆红素(F-Bil)、结合胆红素(C-Bil)、Hb和乳糜微粒(CM)是否干扰亲和层析法、高效液相色谱法(HPLC)、免疫比浊法和酶法检测HbA1c。

1 资料与方法

1.1 标本来源实验当日收集本院门诊、住院患者及健康体检者EDTA-K2抗凝新鲜血标本，外观清亮无浑浊、溶血、黄疸、脂血。选择HbA1c浓度范围分别为9.5%～11.5%、5.5%～6.5%的高、低浓度标本，分别混合，用亲和层析法测定HbA1c浓度分别为10.4%和6.2%，作为基础标本。

1.2 仪器与试剂 PDQ Plus糖化血红蛋白分析仪及其配套试剂(亲和层析法)、校准品、质控品(美国Primus公司)；Variant Ⅱ糖化血红蛋白分析仪及其配套试剂(HPLC)、校准品、质控品(美国Bio-Rad公司)；Modular P800全自动生化分析仪及其配套试剂(免疫比浊法)、校准品、质控品(Roche公司)；ADVIA 2400全自动生化分析仪(德国Siemens公司)，HbA1c试剂盒(酶法)、质控品及校准品(北京利德曼公司)；干扰试剂盒(批号JISK0101，F-Bil、C-Bil、Hb和CM干扰物、空白对照冻干粉各1瓶)(日本Sysmex公司)，F-Bil、C-Bil、Hb及CM靶值分别为328.0、328.0、49.6 μmol/L及15 000 FTU。

1.3 溶液配制按干扰试剂盒说明书将各干扰物和空白对照冻干粉用2 mL蒸馏水复溶，充分溶解，配制干扰物和空白对照溶液。分别将1.0 mL F-Bil、C-Bil、Hb和CM干扰物溶液和空白液与9.0 mL高、低浓度HbA1c全血混合，分别标记为

A(含干扰物)、B(空白对照)。将标本A、B分别按0 mL/1.0 mL、0.2 mL/0.8 mL、0.4 mL/0.6 mL、0.6 mL/0.4 mL、0.8 mL/0.2 mL、1.0 mL/0 mL混合，分别制

备成5种不同浓度干扰物(F-Bil：65.6、121.2、196.8、262.4、328.0 μmol/L；

C-Bil：65.6、121.2、196.8、262.4、328.0 μmol/L；Hb：9.9、19.8、29.8、39.7、49.6 μmol/L；CM：3 000、6 000、9 000、12 000、15 000 FTU)标本

和空白对照标本。

1.4 干扰实验分别用4种方法检测HbA1c，空白对照管重复测定10次，5个系

列浓度标本分别按升序、降序、升序检测3次。

1.5 统计学方法用Microsoft Excel及SPSS 11.2软件进行。干扰率=(含干扰物组HbA1c均值-空白对照组HbA1c均值)/空白对照组HbA1c均值。干扰率≥±5%

判定为有干扰作用[1-2]。

2 结果

见表1。4种干扰物对亲和层析法、HPLC法检测HbA1c无干扰。CM≥15 000 FTU时，免疫比浊法测定HbA1c有干扰。F-Bil、C-Bil≥121.3 μmol/L时，酶法

检测高浓度HbA1c有干扰；F-Bil≥196.8 μmol/L、C-Bil≥121.3 μmol/L时，酶

法检测低浓度HbA1c有干扰。

表1 不同浓度干扰物对4种方法检测低、高浓度HbA1c的干扰率(%)参数亲和层

析法低浓度高浓度HPLC低浓度高浓度免疫比浊法低浓度高浓度酶法低浓度高浓

度F⁃Bil(μmol/L)65．61．08-0．64-0．96-1．99-1．49-0．652．000．97121．30．54-1．270．00-0．99-1．93-1．29-4．35-5．81∗196．81．61-0．96-0．96-1．99-3．63-2．02-8．15∗-

9．03∗262．41．08-1．27-0．96-1．99-4．17-2．62-13．04∗-

14．84∗328．01．08-1．27-2．02-2．28-4．70-4．21-18．48∗-

18．39∗C⁃Bil(μmol/L)65．60．53-0．64-1．49-1．26-0．71-0．321．500．64121．3-0．53-0．96-0．43-0．63-2．24-0．97-5．41∗-5．79∗196．80．00-0．96-1．49-1．90-3．90-2．27-9．19∗-

10．24∗262．41．07-1．60-0．96-1．66-3．90-3．59-12．97∗-

14．79∗328．0-1．07-2．24-2．34-2．87-3．90-3．56-18．38∗-

18．33∗Hb(μmol/L)9．9-0．541．04-1．610．560．94-0．63-0．65-0．2619．8-1．08-0．35-1．080．64-1．01-0．18-1．44-0．9229．80．00-0．35-0．54-0．87-1．55-0．880．00-1．4039．7-0．54-0．35-1．08-0．87-1．01-1．59-3．52-2．4149．6-1．61-1．74-1．08-1．85-2．69-3．02-4．55-2．20CM(FTU)30000．54-0．340．540．010．440．59-0．520．0060000．54-0．340．000．350．88-0．07-0．52-0．3490001．08-0．69-1．610．70-1．09-1．02-0．94-0．34120000．00-0．34-2．15-0．34-2．18-3．56-2．80-1．15150001．08-1．37-2．69-0．68-5．31∗-6．73∗-2．743．13 注：*，干扰率≥±5%。

3 讨论

我国目前绝大多数医院均开展HbA1c检测，且检测方法较多，但方法间一致性不理想[3]。亲和层析法、HPLC、免疫比浊法和酶法是国内检测HbA1c广泛应用的方法。本室参考EP7-A2文件并进行部分调整后对4种方法检测HbA1c的干扰情况进行了评价。PDQ Plus、Variant Ⅱ糖化血红蛋白分析仪和Modular P800全自动生化分析仪能自动稀释标本，有助于降低干扰因素的影响，几乎无干扰，与厂家声明及国内外文献报道一致[4-5]。酶法检测HbA1c的干扰随胆红素浓度增加而

增加，与厂家声明一致，临床上用酶法测定HbA1c时，应剔除黄疸标本。免疫比浊法则应避免高CM标本。

4 参考文献

[1]CLSI EP7-A2.Interference testing in clinical Chemistry;approved guideline-second edition[S]. Clinical and Laboratory Standards Institute,2005.

[2] 杨有业,张秀明.临床检验方法学评价[M].北京:人民卫生出版社,2008:196-200.

[3]徐国宾.糖尿病诊断标准的完善及糖化血红蛋白A1c检测的标准化[J].临床检验杂志,2012,30(6):401-405.

[4]Catalina SM,Manuel S,Patricia FR,et al. Evaluation of two HbA1c point-of-care analyzers[J]. Clin Chem Lab Med,2011,49(4):653-657.

[5]彭颖斐,吴炯,郭玮,等.免疫比浊法检测糖化血红蛋白A1c的性能评价[J].临床检验杂志,2012,30(6):410-413.

糖化血红蛋白的检测方法和原理

糖化血红蛋白的检测方法和原理糖化血红蛋白（Glycated Hemoglobin，HbA1c）是在血液中存在的一种特定的蛋白质，它可以反映在过去的2至3个月内血糖水平的平均值。因此，检测糖化血红蛋白是诊断糖尿病和监测糖尿病控制的重要手段之一。目前常用的糖化血红蛋白检测方法有以下几种： 1. 凝胶过滤层析法（HPLC）这种方法主要是利用电泳法将血红蛋白分离出来，然后再利用柱层析法将血红蛋白与糖化血红蛋白分开。凝胶过滤层析法可以检测出HbA1c 的含量，其检测亚达可达到99%，具有较高的准确性和灵敏度，是目前用于判断糖尿病患者控制水平的首选方法。但这种方法检测需要使用高昂的仪器和试剂，并需要专业人员进行操作和分析，因此保守分析已经慢慢淘汰。 2. 免疫测定法（Immunoassay）免疫测定法主要是利用抗体-抗原反应来检测糖化血红蛋白的含量。这种检测方法不需要使用昂贵的仪器设备，检测速度较快，准确性也相对较高，因此被广泛用于临床糖尿病的监测和诊断。但是，由于某些因素的干扰，包括药物或化学物质的影响，其准确性略有差异。但也是买家和品牌主们选用的检测方法。 3. HbA1C快速检测（NGSP）此外，还开发了NGSP（National Glycohemoglobin Standardization Program）认证的HbA1C快速检测方法，它主要应用电泳法和柱层析技

术来检测血红蛋白和糖化血红蛋白。这种方法的灵敏度较高，检测时间短，结果较准确。缺点是价格稍高，但是一旦处理，结果可迅速传递给患者，并提供诊断和治疗方案的指导。总结：以上三种方法是目前糖化血红蛋白检测的主要方法，在不同的场合下可以根据需要选择最合适和方便的方法。不论是哪种方法，都可以帮助监测和控制糖尿病人的血糖水平，及时发现和治疗病情，预防糖尿病的并发症，保障病人的健康和生活质量。

糖化血红蛋白检测方法学比对

糖化血红蛋白检测方法学比对引言：糖化血红蛋白是糖尿病患者血液中的一个重要指标，用于评估患者的血糖控制情况。目前，有多种方法可以检测糖化血红蛋白，本文将对其中几种常用的方法进行比对和分析。一、离子交换色谱法离子交换色谱法是目前最常用的糖化血红蛋白检测方法之一。该方法利用离子交换树脂将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离，通过测定两者的吸收峰面积比值来计算糖化血红蛋白的百分比。该方法具有操作简单、结果准确可靠的优点，但需要专门的色谱仪器和耗材。二、免疫测定法免疫测定法是另一种常用的糖化血红蛋白检测方法。该方法利用特异性的抗体与糖化血红蛋白结合，形成抗原-抗体复合物，再通过测定复合物的光学性质或化学反应来定量糖化血红蛋白的含量。免疫测定法具有高灵敏度、高特异性的特点，但需要特定的抗体和试剂盒，成本较高。三、高效液相色谱法高效液相色谱法也是常见的糖化血红蛋白检测方法之一。该方法利用高效液相色谱仪将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离，

并通过检测两者的峰面积比值来计算糖化血红蛋白的百分比。与离子交换色谱法相比，高效液相色谱法具有操作简便、分离效果好的优点，但需要专门的仪器和耗材。四、毛细管电泳法毛细管电泳法是一种新兴的糖化血红蛋白检测方法。该方法利用毛细管电泳仪将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离，并通过检测两者的迁移时间差来定量糖化血红蛋白的含量。毛细管电泳法具有快速、高效、高分辨率的特点，但需要专门的仪器和耗材。五、比对分析以上几种糖化血红蛋白检测方法各有优劣。离子交换色谱法和高效液相色谱法操作相对简单，结果准确可靠，适用于大规模的临床检测。免疫测定法具有高灵敏度和高特异性，可以检测血液中极低浓度的糖化血红蛋白，适用于特殊情况下的检测。毛细管电泳法具有快速、高效、高分辨率的特点，适用于科研实验室中的研究。因此，在选择糖化血红蛋白检测方法时，需要根据实际需求和条件进行选择。结论：糖化血红蛋白检测是评估糖尿病患者血糖控制情况的重要手段。离子交换色谱法、免疫测定法、高效液相色谱法和毛细管电泳法是常用的糖化血红蛋白检测方法。每种方法都有其优劣，选择适合的方法需要综合考虑实际需求和条件。随着技术的不断发展，糖化血红

糖化血红蛋白的检测

糖化血红蛋白的检测（一）糖化血红蛋白检测技术的分类及评价 HbA1c检测技术繁多，目前临床常用的检测方法可分为两大类。一类利用糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白电荷差异进行分离，包括：离子交换HPLC、毛细管电泳法、等电聚焦电泳法等；另一类则利用血红蛋白糖基化基团与非糖基化基团结构的不同开展检测，包括：硼酸盐亲和层析法、免疫法和酶法。离子交换HPLC作为DCCT（美国糖尿病控制与并发症研究）和IKPDS （英国糖尿病前瞻性研究）的推荐方法，具有精密度和准确性良好、方便快捷、干扰因素较小等优点。其缺点在于成本较高，部分产品受血红蛋白浓度和血红蛋白变异体的影响。卫生部临检中心室间质评结果显示，采用该方法的实验室从2013年的278家上升到2018年的1284家，显示近年来离子交换HPLC早我国临床实验室得到广泛应用。毛细管电泳法是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的液相分离分析技术，可分离HbA2、血红蛋白C（HbC）、血红蛋白E（HbE）、血红蛋白S（HbS）、血红蛋白D（HbD）、胎儿血红蛋白（HbF）、HbA0，以及其他血红蛋白和HbA1a、HbA1b、HbA1c。该方法具有所需样本量少、可自动化、重复性好、可用于β-地中海贫血以及其他血红蛋白合成障碍性疾病的筛查等优点，但存在检测成本较高、检测速度慢等缺点。硼酸盐亲和层析法则利用m-氨基苯硼酸与结合于血红蛋白的葡萄糖顺位二醇基发生特异性反应，该方法检测总的糖化血红蛋白，包括HbA1c和其他位点的糖化血红蛋白。其优点在于所需标本量少、检测速度快、可用于POCT、受血红蛋白变异体影响最小。其缺点在于受HbF影响，无法发现Hb变异体。大多数免疫测定法能特异地识别血红蛋白β链N端糖基化的氨基酸（通常是开始的4~10个氨基酸），免疫法又可分为免疫化学发光法、免疫比浊法、乳胶凝集法和免疫层析法。该方法优点包括：特异性高、可自动化、成本低廉、无Hb变异的干扰。缺点在于：受乳糜血和胆红素影响，无法发现Hb变异体。酶法则使用一种特异性酶酶切N端缬氨酸来测定HbA1c。由于采用比色法，该方法不需要昂贵、精密的检验仪器，实验室常用的全自动生化分析仪即可完成检测。其优点在于：方便快速、成本低廉。但目前国内不同厂家生产的试剂质量良莠不齐，不同检测系统间的精密度和准确性差异明显。建议临床实验室在引入该方法前严格开展性能验证工作，验证能否满足临床要求。鉴于离子交换HPLC为每个患者样品提供了一张便于判断的层析图，很多临床实验室将其作为HbA1c的首选方法。但该方法受血红蛋白变异体的影响，会掩盖HbA1c而导致结果错误。因此，有专家提出，实验室采用离子交换HPLC 检测HbA1c时，应选用两种检测方法。审核离子交换HPLC结果前，首先筛查层析图是否存在异常血红蛋白，如果存在，则可以选择免疫法或毛细管电泳法进行复查，确保HbA1c检测结果准确。（二）糖化血红蛋白检测中的干扰问题在糖化血红蛋白检测过程中，多种因素均会引起血红蛋白数量与质量变化，最终干扰HbA1c的检测结果。 1、生理因素：如种族差异、年龄差异、性别差异，地区差异（高原与平原地区）和妊娠（妊娠中期女性HbA1c水平略降低，而妊娠晚期略升高）。

四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价

四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼【摘要】目的探讨亲和层析法、高效液相色谱法(HPLC)、免疫比浊法和酶法检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对游离胆红素(F-Bil)、结合胆红素(C-Bil)、血红蛋白(Hb)和乳糜微粒(CM)的抗干扰能力.方法收集EDTA-K2抗凝新鲜血,制备 HbA1c10.4％和6.2％的高、低浓度标本,对4种方法检测HbA1c进行干扰实验.结果 4种干扰物对亲和层析法、HPLC法检测HbA1c无干扰.CM≥15 000FTU时,免疫比浊法测定HbA1c有干扰.F-Bil、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测高浓度HbA1c有干扰;F-Bil≥196.8 μmol/L、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测低浓度HbA1c有干扰.结论酶法检测HbA1c抗胆红素干扰能力有待改进,应剔除黄疸标本.免疫比浊法则应避免高CM标本. 【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2013(031)010 【总页数】2页(P786-787) 【关键词】糖化血红蛋白;亲和层析法;高效液相色谱法;免疫比浊法;酶法;干扰【作者】陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼【作者单位】中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中

4种糖化血红蛋白检测系统的IFCC二级参考方法认证

4种糖化血红蛋白检测系统的IFCC二级参考方法认证IFCC(国际临床化学和分子诊断联合会)二级参考方法认证是用于糖化血红蛋白检测系统的认证方法之一、以下将介绍四种糖化血红蛋白检测系统的IFCC二级参考方法认证。 1.HPLC方法认证： HPLC(高效液相色谱)方法是一种常用的糖化血红蛋白检测方法，可通过色谱柱对血红蛋白中的糖化血红蛋白进行分离和定量。该方法的IFCC 二级参考方法认证包括标准曲线的制备、检测精密度和重复性的评估等步骤。认证结果会评估该方法的准确性和可靠性。 2.电泳方法认证：电泳方法是另一种常用的糖化血红蛋白检测方法，通过电泳技术对血红蛋白中的糖化血红蛋白进行分离和测定。这种方法的IFCC二级参考方法认证包括样品的制备、电泳条件的优化和系统的准确性和可重复性的评估。认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。 3.免疫测定方法认证：免疫测定方法是一种常用的高通量糖化血红蛋白检测方法，它利用抗体与糖化血红蛋白特异性结合来进行测定。IFCC二级参考方法认证对于免疫测定方法包括抗体选择和标准的准备、测定系统的优化和准确性与重复性的评估等步骤。认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。 4.质谱法认证：

质谱法是一种新兴的糖化血红蛋白检测方法，通过质谱仪对糖化血红蛋白进行定性和定量分析。IFCC二级参考方法认证对于质谱法包括样品制备、仪器条件的优化和准确性与重复性的评估等步骤。该方法的认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。总结起来，IFCC二级参考方法认证针对四种常用的糖化血红蛋白检测系统进行，包括HPLC方法、电泳方法、免疫测定方法和质谱法。这些认证方法评估了糖化血红蛋白检测系统的准确性和可靠性，有助于确保检测结果的精确和可靠。

糖化血红蛋白方法学

糖化血红蛋白方法学离子交换色谱法是一种常用的测定糖化血红蛋白的方法。其原理是利用离子交换色谱材料，如糖化纤维素柱或离子交换树脂柱，将血红蛋白与其他蛋白质分离。然后通过光度计测定柱床流出液中的吸光度值，从而计算出糖化血红蛋白的含量。常用的柱床流动相是碳酸盐缓冲液和甲醇的混合物。在色谱过程中，通过改变流动相的组成，可以将糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离出来。离子交换色谱法测定糖化血红蛋白的优点是操作简单、结果准确可靠，但缺点是分离过程相对较慢。高效液相色谱法是一种新型的糖化血红蛋白测定方法，其原理是利用高效液相色谱技术，将血红蛋白中的糖化部分与非糖化部分分离，并通过检测器测定其吸光度值。高效液相色谱法的优点是分离速度快，对样品要求低，仪器自动化程度高。通过优化柱床流动相的组成和流速等条件，可以实现对糖化血红蛋白的高灵敏度测定。常用的柱床流动相是缓冲液和有机溶剂的混合物，通过改变混合物中的有机溶剂浓度和pH值，可以实现样品中糖化血红蛋白的分离。高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的缺点是操作复杂、设备成本高，需要专业的操作技术。除了离子交换色谱法和高效液相色谱法，还有其他一些测定糖化血红蛋白的方法，如酶联免疫测定法、免疫扩散法等。这些方法基于血红蛋白与糖化血红蛋白之间的抗原性差异，通过特定抗体的反应进行测定。这些方法操作简单、结果迅速，但对设备要求较高，且结果可能受到其他物质的干扰。总之，糖化血红蛋白是评价糖尿病患者血糖控制情况的重要指标。离子交换色谱法和高效液相色谱法是常用的测定糖化血红蛋白的方法。此外，

还有其他一些方法，如酶联免疫测定法、免疫扩散法等。不同的方法各有优缺点，选择合适的方法应根据实际需要和实验条件进行考虑。

糖化血红蛋白标准检测方法

糖化血红蛋白标准检测方法一、免疫学检测法免疫学检测法是利用抗原抗体反应的原理，检测糖化血红蛋白的一种常用方法。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，常用于临床常规检测。常用的免疫学检测法包括放射免疫分析法、酶联免疫吸附法和化学发光法等。二、电泳法电泳法是一种利用电场对带电分子的迁移作用进行分离和检测的方法。在糖化血红蛋白的检测中，电泳法可以将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，从而进行定性和定量分析。该方法具有分辨率高、重复性好等优点，但操作相对复杂，需要一定的技术和设备支持。三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种分离和检测复杂混合物中单个组分的方法。在糖化血红蛋白的检测中，高效液相色谱法可以利用不同的色谱柱和洗脱液将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，然后通过检测器进行定量分析。该方法具有分离

效果好、灵敏度高、重复性好等优点，但操作复杂，需要专业技术人员操作。四、酶法酶法是一种利用酶促反应进行定量分析的方法。在糖化血红蛋白的检测中，酶法可以利用特定的酶将糖化血红蛋白分解成可测定的产物，然后通过检测这些产物进行定量分析。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但操作复杂，需要特殊的酶和底物。五、亲和色谱法亲和色谱法是一种利用生物分子间的特异性相互作用进行分离和检测的方法。在糖化血红蛋白的检测中，亲和色谱法可以利用特定的亲和柱将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，然后通过检测器进行定量分析。该方法具有分离效果好、特异性强等优点，但需要特殊的亲和柱和检测器。六、离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用离子交换剂对带电分子进行分离和检测的方法。在糖化血红蛋白的检测中，离子交换色谱法可以利用特定的离子交换柱将糖化血红蛋白与其他

糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理

糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理糖化血红蛋白（HbA1c）是一种血红蛋白与血糖结合后形成的糖化产物，是临床上评估血糖控制情况的重要指标。其测定是糖尿病管理中不可或缺的一部分，能够提供有关患者在过去2-3个月内的血糖水平的信息。糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理对于确保检测结果准确可靠、提高糖尿病患者的治疗效果和生活质量具有重要意义。一、糖化血红蛋白检测技术 1.1 HbA1c检测原理 HbA1c检测是通过高效液相色谱法（HPLC）、离子交换色谱法（IEC）、免疫测定法（IHA）等技术对血液中的糖化血红蛋白进行定量检测。HPLC法是目前用于糖化血红蛋白检测的常用方法，其原理是根据血红蛋白A1c（HbA1c）与其他血红蛋白组分的不同特点，在特定的色谱条件下分离并定量测定。 HbA1c检测技术具有操作简便、结果准确可靠、对样本要求较少等优势。与其他血糖检测方法相比，糖化血红蛋白检测不受进食、运动等因素的干扰，能够更好地反映患者长期血糖控制情况，因此被广泛应用于糖尿病患者的血糖管理和治疗监测中。随着现代医学技术的不断进步，糖化血红蛋白检测技术也在不断完善和发展。近年来出现的免清洗技术、毛细管电泳、质谱法等新技术不断拓展了糖化血红蛋白检测的领域，为提高检测效率和准确性提供了新的途径。 2.1 质量控制体系建设建立完善的质量控制体系对于保证糖化血红蛋白检测结果的准确性和可靠性至关重要。包括建立内部质量控制体系、参加外部质量评价、制定检测流程和操作规范、保持检测仪器的良好状态等。只有做好质量控制管理，才能确保检测结果的准确性和稳定性。内部质量控制是指通过每天运行常规的质控品，监测和评价实验室的分析性能和结果可靠性，及时发现实验室检测系统的偏差和波动，以确保分析结果的准确性和可靠性。通过制定合理的内部质量控制计划、及时检验、记录和汇总实验结果、发现和处理异常情况等措施，可有效降低实验室检测过程中的系统误差和随机误差，提高检测结果的准确性。 2.3 外部质量评价参加外部质量评价是实验室建立质量保障体系的重要环节。及时掌握本实验室的检测水平及存在的问题，与其他实验室比对，发现差距，不断提高本实验室检测水平，为临床提供更准确、可靠的检测结果。 2.4 规范化管理

毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的方法学性能评价

毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的方法学性能评价目的：評价miniCAP Flex Piercing全自动毛细管电泳分析系统检测糖化血红蛋白（HbA1c）的方法学性能。方法：精密度评价按照美国临床和实验室标准化委员会（CLSI）颁布的EP15-A3文件的要求进行初步评价；分析测量范围评价按照EP6-A2文件的要求进行；准确度评价使用EP9-A2文件，与高效液相色谱法检测结果进行比对，并计算其在医学决定水平处的偏倚；生物参考区间的验证采用C28-A2文件的方案进行；收集异常高值和异常低值的新鲜标本进行携带污染率的评价；收集确诊的异常血红蛋白病患者的标本进行抗干扰能力的评价。结果：检测系统检测HbA1c浓度在 4.50%和7.50%时的重复性精密度分别为1.14%、0.70%，期间精密度分别为1.80%、1.36%；当HbA1c浓度在3.6%～12.1%时检测结果呈线性；与日本arkray公司的HA-8160高效液相色谱法检测结果比较，回归方程式为y=0.995x-0.177，线性相关系数R2=0.994，相关性较好，在医学决定的水平10%、16%处的偏倚分别为-2.77%、-1.61%均小于5.0%；携带污染率为1.18%小于3.00%可接受；选取的20份健康参考个体，其HbA1c检测结果均在3.6%～6.1%，参考区间可用；对广东地区常见的血红蛋白变异体HbE、HbS、HbC、HbD有良好的抗干扰能力。结论：毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的精密度、准确度、分析测量范围、携带污染率、生物参考区间均符合临床检测的需要，在抗血红蛋白变异体的干扰能力上优于高效液相色谱法。糖化血红蛋白是血红蛋白与血糖进行不可逆的非酶促反应的产物，可以反映近2～3个月血糖的水平，是判断糖尿病长期控制的良好指标，同时也与糖尿病并发症相关[1-3]。糖化血红蛋白检测目前临床上使用较多的为高相液相色谱法，该法具有操作简单、快速、结果可靠等特点，但是对于血红蛋白变异体的抗干扰能力较差[4-5]。广东地区为珠蛋白生成障碍性贫血及血红蛋白病的高发地区[6-8]，因此在选用检测方法的时候需要综合考虑。毛细管电泳法是一种重复性好、结果可靠且能识别血红蛋白变异体的方法[9]。本研究通过精密度、准确度、分析测量范围、抗干扰能力和生物参考区间等指标来评估毛细管电泳法糖化血红蛋白检测的方法学性能，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 实验材料日本arkray公司提供的配套校准品和质控品；法国sebia公司提供的配套定标品和校准品；收集2016年11月-2017年5月来东莞市塘厦医院就诊的通过毛细管血红蛋白电泳检测和基因分析确诊为HbE、HbS、HbC、HbD 等血红蛋白病的患者EDTA标本，同时收集HbA1c各浓度的标本40份，浓度范围分布毛细管电泳法厂家说明书申明的整个分析测量范围。 1.2 仪器试剂高效液相色谱法为日本arkray公司的HA-8160型仪器，使用配套试剂、定标液、质控品；毛细管电泳法为法国sebia公司的minicap Flex Piercing型分析仪（以下简称miniCAP），使用配套试剂、定标液、质控品。仪器使用严格按照厂家说明的要求进行操作、校准和维护保养。

糖化血红蛋白测试方法学

糖化血红蛋白测试方法学糖化血红蛋白测试方法学解析糖化血红蛋白（HbA1c）作为评估糖尿病患者血糖控制状况的重要指标，其测试方法学的准确性及可靠性至关重要。本文将为您详细解析糖化血红蛋白的测试方法及其相关技术要点。一、糖化血红蛋白概述糖化血红蛋白是红细胞中的血红蛋白与血液中的葡萄糖发生非酶促反应而形成的化合物。糖化血红蛋白的测定可以反映过去2-3个月内的平均血糖水平，是评价糖尿病患者血糖控制状况的重要指标。二、糖化血红蛋白测试方法 1.高压液相色谱法（HPLC）高压液相色谱法是糖化血红蛋白测定的金标准，具有准确性和重复性好的特点。该方法通过将血液样本中的血红蛋白与其他蛋白质分离，然后测定糖化血红蛋白的比例，从而得出HbA1c的浓度。 2.免疫比浊法免疫比浊法是一种基于抗原-抗体反应原理的测试方法。该方法通过特异性抗体与糖化血红蛋白结合，形成免疫复合物，然后通过比浊仪测定复合物的浓度，从而计算HbA1c的值。 3.紫外可见光谱法紫外可见光谱法是通过测定血液样本在特定波长下的吸光度，进而计算糖化血红蛋白的浓度。该方法操作简便，但准确性相对较低，适用于快速筛查。

4.电泳法电泳法是将血液样本中的蛋白质通过电泳分离，然后通过染色剂对糖化血红蛋白进行染色，从而测定HbA1c的浓度。该方法操作复杂，但具有较高的准确性。三、糖化血红蛋白测试方法学注意事项 1.样本采集与处理：采集血液样本时应避免溶血、污染和稀释，确保测试结果的准确性。 2.试剂与仪器：选择合适的试剂和仪器，严格按照制造商的操作规程进行测试。 3.质量控制：定期进行室内质控和室间质评，确保测试结果的可靠性和稳定性。 4.方法学比较：不同测试方法之间存在一定差异，实验室应根据自己的条件选择合适的方法，并进行方法学比较。四、总结糖化血红蛋白测试方法学的选择对于糖尿病患者血糖控制评估具有重要意义。实验室应根据自己的条件、需求及测试方法的特点，选择合适的测试方法，为临床提供准确、可靠的糖化血红蛋白检测结果。

糖化血红蛋白

1、在一新鲜的血液中加高、中、低三种不同的标准参比物，同时用三种不同方法进行回收试验，每一浓度测定5份，取均值。 2、通过对两种方法进行的准确度、重复性、线性回归，以及其他干扰因素进行综合分析。Hplc法具有准确性高、重复性好、线性佳，影响因素少，而且操作十分简便，检测时间短等优点。免疫法法虽然准确度、重复性、回归线性还可以，但受到一定条件的限制，试剂保留时间较短。 3、临床实验室主要使用的测定血中糖化血红蛋白(HbA1c)的方法是免疫比浊法。方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。我们依据美国国家临床实验室标准化委员会( NCCLS) 批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差估计EP9-A 指南文件》( Method Comparison and Bias Est imat ion Using Patient Samples; Approved Guideline; EP9-A) , 4、我们根据NCCLS 的标准化文件EP9-A 对测定糖化血红蛋白的两种方法进行了比较。EP9-A 文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。对于使用者, 评价的目的在于两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。在实验室中,经常会进行方法学评价的实验, EP9-A 为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。根据 EP9 -A 文件, 比较实验至少应有 40 例样本,排除异常点数不得多于1个,当 r2< 0. 95 时, 应增加测定样本。 5、因此, 在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时,应选择适当的产品。在使用定值质控品评价方法的准确性时,应考虑测定原理对测定结果的影响。 6、[摘要 ] 目的: 建立高效液相色谱 (HPLC )测定糖化血红蛋白(GHb)方法, 并对其进行评价。方法: 以 Bio-Rex 70阳离子交换树脂为填料, 在 HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定GHb , 对其分析性能进行评价。对 50例健康人和 50例糖

血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰研究进展

血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰研究进展血糖的检测方法主要有两种：血液中测定和尿液中测定。目前临床上常用的是血液中测定血糖水平，可以采用多种方法进行检测，如葡萄糖氧化酶法、电化学法等。这些方法具有灵敏度高、准确性好的特点。血糖的测定结果可能会受到多个因素的影响，如药物干扰、食物摄入等。在进行血糖检测时，患者需遵医嘱，在空腹状态下进行检测，并在检测前一段时间内避免食物或药物摄入。糖化血红蛋白是指血红蛋白与血糖长时间结合产生的化合物，其浓度可以反映血糖平均水平的长期控制情况。糖化血红蛋白的检测方法主要有几种：离子交换层析法、凝胶过滤层析法、高效液相色谱法等。这些方法具有准确性高、稳定性好的特点。糖化血红蛋白的检测结果可能会受到血红蛋白异常、贫血等因素的影响。当进行糖化血红蛋白检测时，需要综合考虑其他相关指标，如红细胞平均血红蛋白含量，来判断检测结果的准确性。在血糖及糖化血红蛋白的检测中，存在一些干扰因素，可能会对检测结果产生影响。有些药物可以影响血糖及糖化血红蛋白的测定结果，如糖皮质激素、阿司匹林等。在进行检测时，需要告知医生所用药物的名称及剂量。食物摄入也会影响血糖的测定结果。在进行血糖检测时，需遵医嘱，并在检测前一段时间内避免食物摄入。血红蛋白异常、贫血等也会对糖化血红蛋白的测定结果产生干扰。在进行糖化血红蛋白检测时，需要综合考虑其他相关指标来判断检测结果的准确性。血糖及糖化血红蛋白的检测是糖尿病患者管理中的重要内容。目前存在一些干扰因素，影响检测结果的准确性和可靠性。继续研究和改进检测方法，解决干扰问题，将对糖尿病患者的治疗和管理产生积极的影响。通过进一步的研究，可以提高血糖及糖化血红蛋白的检测方法的灵敏度和准确性，为糖尿病患者的临床管理提供更好的支持。

血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰研究进展

血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰研究进展近年来，血糖及糖化血红蛋白在临床诊断中得到了广泛的应用，其检测结果可以为医生提供重要的参考依据，帮助医生对患者的疾病进行精确的诊断和治疗。但是，在血糖及糖化血红蛋白的检测过程中，常常会受到许多因素的干扰，导致检测结果产生偏差，甚至误诊。因此，本文将对血糖及糖化血红蛋白的检测方法及其干扰因素进行探讨。一、血糖的检测及干扰因素血糖是测量血液中葡萄糖浓度的指标，其测量结果可以用于诊断糖尿病、低血糖等疾病的发生和进展。目前常用的血糖检测方法有三种：血糖仪法、葡萄糖氧化酶法和酶电极法。血糖仪法是最常用的方法之一，其基本原理是利用电化学反应计算出血液中葡萄糖的浓度。但是，此方法常因测量误差、血样污染、仪器校准等因素产生误差。葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶与葡萄糖催化生成过氧化氢，进一步氧化变为水和氧气，电极测定氧气生成量从而计算出葡萄糖的浓度。但是，此方法常因葡萄糖浓度过高或过低、葡萄糖氧化酶活性降低、外界干扰等因素产生误差。酶电极法是利用导电性变化来计算出葡萄糖的浓度，其优点是速度快、准确度高，但受到环境因素以及校准等因素影响。除了以上因素以外，还有很多干扰因素会影响血糖的检测结果。例如：患者服用某些药物，如肾上腺素、多巴胺等，均可影响胰岛素的分泌，进而增加或减少血糖的含量；血样制备不当，如长时间暴露在空气中或冰箱中存储时间过长等，均会使样本发生物理或化学变化，影响检测结果。糖化血红蛋白（HbA1c）是测量血红蛋白中糖化反应的产物浓度，其测量结果可以用于诊断和监测糖尿病。目前常用的糖化血红蛋白检测方法有两种：高效液相色谱法和免疫测定法。高效液相色谱法是目前国际公认的最可靠、最精确的测定糖化血红蛋白的方法之一。但此方法常因高昂的成本、操作复杂、所需要的仪器设备齐全等因素限制其在一般医院的应用。免疫测定法是一种常用检测糖化血红蛋白的方法。但是，此方法同样存在一些干扰因素，如肝脏疾病、贫血、铁剂治疗、造血系统疾病等因素均会干扰糖化血红蛋白的检测结果。此外，炎症、感染、体内糖类摄入量变化等因素也会影响糖化血红蛋白的检测结果。总结：

糖化血红蛋白的检测方法和干扰因素

糖化血红蛋白的检测方法和干扰因素【摘要】目的：探讨糖化血红蛋白的检测方法，分析干扰检测结果的因素。方法：以本院2013年10月～2015年10月收治的贫血（26例）、肾功能衰竭（31例）、服用阿司匹林治疗（35例）的患者为研究对象，并以同期在本院中进行体检的健康者（30例）为对照组，均采用不同方法检测糖化血红蛋白（HbAlc），比较检测结果。结果：贫血组、阿司匹林组及肾功能衰竭组患者中，毛细血管电泳法HbAlc检测结果均高于其他两种方法，差异具有统计学意义（P＜0.05）；对照组三种方法HbAlc检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：临床上用于检测HbAlc的方法比较多，且易受多种因素干扰，报告结果时应考虑到检测方法及患者自身因素干扰，为临床提供合理准确的分析。【关键词】糖化血红蛋白；检测方法；干扰因素糖化血红蛋白（HbAlc）是糖尿病诊断与监测中一项十分重要的指标。目前，临床上可用于检测HbAlc的方法比较多，每种方法所具备的优势各不相同，而且有些方法受到多种因素的干扰，例如血红蛋白变异体、血液系统疾病等，导致检测的准确性降低。本研究以4组不同人群为研究对象，分别采用毛细血管电泳法、离子交换层析法及免疫比浊法检测，观察检测结果，现报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料以本院2013年10月～2015年10月收治的贫血（26例）、肾功能衰竭（31例）、服用阿司匹林治疗（35例）的患者为研究对象。贫血组26例患者中，男16例，女10例；年龄 51～82岁，平均（63.4±3.2）岁；均符合贫血临床诊断标准。肾功能衰竭组31例患者中，男19例，女12例；年龄49～81岁，平均（63.2±3.5）岁。阿司匹林组35例患者中，男20例，女15例；年龄43～85岁，平均（62.8±3.1）岁，均服用阿司匹林1个月以上。另以同期在本院进行体检的健康者30例为对照组，男18例，女12例；年龄37～72岁，平均（49.5±3.1）岁。四组人群一般资料不存在差异，无统计学意义（P＞0.05）。 1.2 标本采集患者组和对照组均于清晨抽取空腹静脉血，注入到EDTA-K2抗凝管中，充分混匀，待检测用。 1.3 仪器和方法患者组和对照组均采用毛细血管电泳法、离子交换层析法及免疫比浊法检测HbAlc水平。先利用毛细血管电泳法检测HbAlc水平，检测仪器为Sebia CaPilary毛细血管蛋白电泳分析仪，利用HbAlc试剂盒进行检测，操作严格按照说明进行。接着利用离子交换层析法检测，检测仪器为DS-5糖化血红蛋白检测仪。最后利用免疫比浊法检测，检测仪器为Becman Au5400 全自动生化仪。 1.4统计学分析采用SPSS18.0统计分析，平均数±标准差（）表示计量资料，利用t检验，P＜0.05表明差异具有统计学意义。 2结果贫血组、阿司匹林组及肾功能衰竭组患者中，毛细血管电泳法HbAlc检测结果均高于其他两种方法，差异具有统计学意义（P＜0.05）；对照组三种方法HbAlc检测结果差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。