凝胶柱层析操作要点
凝胶柱层析操作要点
(一) 基本原理
凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，象筛子，直径大于孔径的分子将不能迸入凝胶内部，便直接沿凝胶颗粒的间隙流出，称为全排出。较小的分子在容纳它的空隙内，自由出入，造成在柱内保留时间长。这样，较大的分子先被洗脱下来，而较小的分子后被洗脱下来，从而达到相互分离的目的。洗脱时峰的位置和该物质相对分子质量有直接的定量关系。在一根凝胶柱中，颗粒间自由空间所含溶液的体积为外水体积V。不能进入凝胶孔径的那些大分子，当洗脱体积为V。时，出现洗脱峰。凝胶颗粒内部孔穴的总体积称为内水体积Vi ，能全部渗入凝胶的那些小分子，当洗脱体积为V。+ Vi 时出现洗脱峰。
(二)凝胶的类型及性质
1.交联葡聚糖凝胶
交联葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，由葡聚糖和3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状结构的高分子化合物。交联葡聚糖凝胶，按其交联度大小分成8种型号(表6–2)。交联度越大，网状结构越紧密，孔径越小，吸水膨胀就愈小，故只能分离相对分子质量较小的物质;而交联度越小，孔径就越大，吸水膨胀大，则可分离相对分子质量较大的物质。各种型号是以其吸水量(每g干胶所吸收的水的质量)的10倍命名，如，Sephadex G–25表示该凝胶的吸水量为每g干胶能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分别引入羟丙基基团，即可构成LH型烷基化葡聚糖凝胶。
交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定，但当暴露于强酸或氧化剂溶液中，则易使糖甘键水解断裂。在中性条件下，交联葡
聚糖凝胶悬浮液能耐高温，用120?消毒10分钟而不改变其性质。如要在室温下长期保存，应加入适量防腐剂，如氯仿、叠氮钠等，以免微生物生长。
交联葡聚糖凝胶由于有羧基基团，故能与分离物质中的电荷基团(如碱性蛋白质)发生吸附作用，但可借助提高洗脱液的离子强度得以克服。因此在进行凝胶层析时，常用含有NaCl的缓冲溶液作洗脱液。交联葡聚糖凝胶可用于分离蛋白质、核酸、酶、多糖、多肽、氨基酸、抗菌素，也可用于高分子物质样品的脱盐及测定蛋白质的相对分子质量。
(三)操作要点
1.凝胶处理
交联葡聚糖及聚丙烯酰胺凝胶的市售商品多为干燥颗粒，使用前必须充分溶胀。方法是将欲使用的干凝胶缓慢地倾倒入5,10倍的去离子水中，参照表6–2及其他相关资料中凝胶溶胀所需时间，进行充分浸泡，然后用倾倒法除去表面悬浮的小颗粒，并减压抽气排除凝胶悬液中的气泡，准备装柱。在许多情况下，也可采用加热煮沸方法进行凝胶溶胀，此法不仅能加快溶胀速率，而且能除去凝胶中污染的细菌，同时排除气泡。
2(凝胶柱制备
合理选择层析柱的长度和直径，是保证分离效果的重要环节。理想的层析柱的直径与长度之比一般为1:25,1:100。凝胶柱的装填方法和要求，基本上与离子交换柱的制备相同。一根理想的凝胶柱要求柱中的填料(凝胶)密度均匀一致，没有空隙和气泡。通常新装的凝胶柱用适当的缓冲溶液平衡后，将带色的兰葡聚糖–2000、细胞色素，或血红蛋白等物质配制成质量浓度为2g/L的溶液过柱，观察色带是否均匀下移，以鉴定新装柱的技术质量是否合格，否则，必须重新装填。
3(加样与洗脱
(1)加样量加样量与测定方法和层析柱大小有关。如果检测方法灵敏度高或柱床体积小，加样量可小;否则，加样量增大。例如利用凝胶层析分离蛋白质时，若采用28Onm波长测定吸光度，对一根2cm×6Ocm的柱来说，加样量一般来说，加样量越少或加样体积越小(样品浓度高)，分辨率越需5mg左右。
高。通常样品液的加入量应掌握在凝胶床总体积的5,,10,。样品体积过大，分离效果不好。
对高分辨率的分子筛层析，样品溶液的体积主要由内水体积(Vi)所决定，故高吸水量凝胶如Sephadex G-200，每mL总床体积可加0.3,0.5mg溶质，使用体积约为0.O2倍总体积;而低吸水量凝胶如Sephadex G–75，每mL总床体积加溶质质量为0.2mg，样品体积为0.Ol倍总体积。
(2)加样方法如同离子交换柱层析一样，凝胶床经平衡后，吸去上层液体，待平衡液下降至床表面时，关闭流出口，用滴管加入样品液，打开流出口，使样品液缓慢渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面持平时，小心加入数mL洗脱液冲洗管壁。然后继续用大量洗脱液洗脱。
(3)洗脱加完样品后，将层析床与洗脱液储瓶、检测仪、分部收集器及记录仪相连，根据被分离物质的性质，预先估计好一个适宜的流速，定量地分部收集流出液，每组分一至数mL。各组分可用适当的方法进行定性或定量分析。
凝胶柱层析一般都以单一缓冲溶液或盐溶液作为洗脱液，有时甚至可用蒸馏水。洗脱时用于流速控制的装置最好的是恒流泵。若无此装置，可用控制操作压的办法进行。
4.凝胶的再生和保存
凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用，因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分析操作。但使用多次后，由于床体积变小，流
此时对凝胶柱需进行再生动速率降低或杂质污染等原因，使分离效果受到影响。
处理，其方法是:先用水反复进行逆向冲洗，再用缓冲溶液平衡，即可进行下一
次分析。
催眠地实用标准操作步骤
催眠的标准操作步骤 ---------摘录自廖阅鹏《每天用一点神奇催眠术》 催眠是可以标准化操作的技术，只要你按部就班来进行，你会发现催眠 其实就像骑自行车一样容易。 只要你按照标准步骤来进行，不但能事半功倍，也能把因为操作不当引起的负面影响减少到最小最小。 我们大致可将催眠分成五个步骤，分别是： 一、询问解疑（Diagnosis）： 与被催眠者建立良好的合作关系，了解他的动机与需求，询问他对催眠既有的看法，解答他有关催眠的疑惑，确定他知道催眠时哪些事情会发生而没有不合理的期待，进行测试敏感度，了解他能进入多深的催眠状态、适合哪种诱导手法。 如果是催眠治疗的话，此阶段要开始广泛搜集资讯，找出个案的真正问题所在。 注意：每一次的催眠都要有明确的目的。 有的时候，个案会有意或无意地隐藏前来求助的真正原因。 Karen Horney曾说过一句名言：「个案接受心理治疗的目的，并非为了治愈他们的精神问题，而是为了让问题更臻完美，变得无懈可击。」
这段话极为辛辣，所以催眠师必须洞悉人性，有能力穿透个案的故布疑阵，然后朝正确方向前进，带领个案远离黑暗，走到光明的地方。 二、诱导阶段（Induction）： 催眠师运用语言引导，让对方进入催眠状态。一般而言，常用的诱导技巧有渐进放松法（progressive relaxation）、眼睛凝视法（eye fixation）、深呼吸法、数数法、手臂上浮法，及其它变形与伪装的方法。 催眠诱导技巧有几种呢？答案是：无数种。 你有多少想象力，就能创造出多少种催眠诱导技巧。 三、深化阶段（Deepening）： 引导被催眠者从轻度催眠状态，进入更深的催眠状态。常用的深化技巧有手臂下降法、数数法、甩手法、下楼梯法、搭电梯法、过隧道法等等，除了这些常用技巧，这个阶段常常随机应变，即席创制新招。 催眠深化技巧有几种呢？答案是：一样有无数种。 四、治疗阶段（Healing）：
凝胶过滤层析的基本操作
凝胶过滤层析的基本操 作 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
凝胶过滤层析的基本操作 ①凝胶介质的选择 根据待分离蛋白质的分子量选择具有相应分离范围的凝胶。对于未知蛋白，应选用分离范围较宽的凝胶，如用Sephacryl S-300。对于分子量在3~5kDa的蛋白质，脱盐时应选用Sephadex G 50或G 25；而对于小分子量多肽物质（1~5kDa），脱盐则应选用Sephadex G 10或Sephadex G 15。 ②凝胶介质的处理和装柱 商品凝胶一般是干粉，使用前应用水溶胀。一般情况下，1份凝胶加十份水，自然溶胀至少24小时。溶胀后，将上清中细小的凝胶碎块弃除，重新搅拌悬起，待凝胶沉淀后，再次弃去凝胶碎块，重复数次，直到液相澄清为止。为加速溶胀，可将凝胶煮沸一小时，该法同时具有灭菌的作用。 凝胶过滤层析柱的长与直径的比例应为50~100:1。装柱时柱体要垂直，先在柱内加入约 1/3柱床体积的水或缓冲液，然后沿柱一侧将缓冲液中的凝胶（凝胶：缓冲液=3：1）搅拌均匀，缓慢并连续地一次性注入柱内。装柱过程中，要避免柱内缓冲液流干，注意保持柱体凝胶均匀无气泡和裂缝。装完后，可用2 ml蓝色葡聚糖溶液检查柱体的均匀性。如柱体均匀，可见蓝色区带均匀平稳地通过凝胶，不留任何条纹。要保持凝胶和缓冲液温度一致，以减少气泡的产生。 ③上样 凝胶过滤柱层析对于样品的体积有严格的要求。样品体积不应超过柱床体积的1~5 %，如超过5 %，则会导致分离效率降低，低于1 %则分离效率也不会提高，所以蛋白质样品应尽可能浓缩至10~20 mg/ml。样品本身对洗脱液的相对粘度不能超过2，样品粘度过高，会使层析区带不稳定，或流速不规律，区带变宽或扭曲。上样前样品应经μm孔径滤膜过滤或10， 000 g离心5 min，去除残渣，加样时避免破坏柱体表面，保持其表面均匀平整。 ④洗脱 洗脱液应保持一定的离子强度以消除凝胶中含有的游离羧基和硫酸根等与蛋白质的结合作用。Sephadex和Sepharose CL凝胶层析所用的洗脱液的离子强度至少应为 mol/L；Sephacryl凝胶应为 mol/L。有时洗脱溶液的离子强度甚至可达 mol/L，以保证蛋白质不与凝胶介质结合。 在凝胶过滤层析过程中，洗脱速度要恒定。流速不应过高，一般在 1ml/min左右，低流速可提高分辨率。可以用恒流泵控制流速。 ⑤分离蛋白的监测和收集 凝胶过滤层析中，分离蛋白的监测和搜集与离子交换层析相同。
层析柱使用说明书
目录 一产品介绍 (2) 二产品特点 (2) 三技术参数 (2) 四操作说明 (2) 五操作注意事项 (4) 六售后服务承诺 (5) 七合格证 (5) 八随机附件 (6)
一产品介绍: 层析过程是采用特殊的吸附剂，从植物提取液中选择性地吸附其中的有效部分，去除无效成分的一种分离纯化新工艺。可以解决植提生产中所面临的剂量大、产品吸潮和重金属残留等实际问题。经层析技术处理后所得到的精制物，可使有效成分高度富集，杂质少，提取得率仅为原生物的2～5%，而一般水煮法为30%左右，醇沉法为15%左右；可有效地去除吸潮成分，并增强产品的稳定性；可有效地去除重金属。层析分离工艺所得提取物体积小，不吸潮，容易制成外型美观的各种剂型，尤其适用于颗粒剂、胶囊剂、片剂等的生产。该技术将是对中药提取工艺影响最大、带动面最广的技术进步之一。用于生物工程、制药工业、精细化工领域的分离纯化设计制造的工业制备，具有分辨高、选择性好、流动连续、效率高、处理稳定、样品可多可少、易于操作的特点，适用于含量少的复杂高分子物质的分离纯化，是中草药、化学合成药及生物活性物质有效成分分离提纯的核心设备。 二产品特点: ①合理的高径比，精密的进出口流体分布装置，保证层析柱装填效果和填 料再生效果，为高效分离提供了保障。 ②产品采用不锈钢材料，并进行内外抛光，耐腐蚀、使用寿命长、硬度高、 运输安全，质量有保障。 ③本设备确保无污染、效率高、操作方便等。 三技术参数
四操作说明 层析操作流程一般为：预处理，逆流洗柱，水洗，吸附，解吸、再生等工艺。 1、预处理：在吸附树脂的生产过程中，一般均采用工业级原料，产品没有经过进一步纯化处理，因此树脂内部往往残留少量单体，致孔剂和其他有机杂质，所以在使用之前必须进行预处理。 吸附树脂预处理方法如下： （1）将准备装柱使用的新树脂，用2倍左右体积的甲醇或其他水溶性溶剂（如乙醇、丙酮）浸泡2小时，并不时搅动，使树脂充分溶胀。 （2）、将已充分溶胀的吸附树脂装柱，以每小时3至4倍床体积的流速，将5至8倍的甲醇或其他水溶性的溶剂（如乙醇、丙酮）通过树脂层，至流出液加水稀释不变混。 （3）、甲醇处理后，以每小时6至8倍床体积的流速将去离子水通过树脂层，置换出甲醇即可投入使用。 2、逆流洗柱：逆流洗柱是用水洗除去水离子及破碎填料，树脂装入交换柱后，用蒸留水反洗树脂层，展开率为50-70%，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止，再用50%-100%乙醇10-15倍体积慢速淋洗。2、用约2倍体积的4-5%HCl溶液，以2m/h流速通过树脂层。全部通入后，浸泡4-8小时，排去酸液，用洁净水冲洗至出水呈中性。冲洗流速为10-20m/h。 3、用约2倍树脂体积的2-5%NaOH溶液，按上面进HCl的方法通入和浸泡。排去碱液，用洁净水冲洗至出水呈中性。流速同上。酸碱溶液若能重复进行2-3次，则效果更佳。经预处理后的树脂，在第一次投入运行时应适当增加再生剂用量，以保证树脂获得充分的再生。 3、水洗：水洗目的主要是除去层析柱上所附着的渣滓。 4、吸附：吸附操作自上而下(或自下而上)通液，可采用不同流速，以选取最佳条件，一般流速sV 2—8。流出液每间隔一段时间取样检测，达泄漏点
凝胶渗透柱层析法
凝胶渗透柱层析法 南大生科院基础实验中心庄苏新、罗喜牛 4、试剂与配制： 4-1、试剂： (1)、葡聚糖凝胶 (2)、磷酸氢二钠 (3)、磷酸二氢钠 (4)、血红蛋白 (5)、核黄素 4-2、试剂配制： (1)、磷酸缓冲液（0.05 mol / L,pH 7.4）的配制： 分别称取磷酸二氢钠克；磷酸氢二钠克于一烧杯中，加蒸馏水毫升，搅拌溶解即可。 (2)、样品溶液的配制： 分别称取血红蛋白20.0毫克;核黄素20.0毫克于一烧杯中，加磷酸缓冲液10.0毫升， 搅拌溶解即可(2.0mg/ml)。 5、操作步骤： （1）、选择固定层析柱： 观察层析柱底端过滤及其它部件连接是否完好？将选择的层析柱垂直固定到台式铁架上，关闭柱底端出口，并向柱内注入一定量的平衡缓冲液，然后再打开柱底端出口，排除柱低端和连接出口的塑料管道内气泡，气泡排除完毕，再次关闭柱底端出口，并在层析柱内留有适量的平衡缓冲液。 （2）、装柱方法： 将烧杯中处理好的葡聚糖凝胶，用玻棒充分搅拌成悬浮液，随即用玻棒引流缓缓倒入层析柱中，静置约5分钟（或出现明显分层现象），再打开层析柱底端出口，让其柱内液体流出，同时柱内葡聚糖凝胶此时也向柱底端下沉，当柱床体积表面不下沉时，此时的高度即为柱床体积的实际高度，观其柱床体积高度是否与实验要求相一致。如果柱床体积过高或过低，则需要弃去多余或添加适量的葡聚糖凝胶，但是，无论是弃去多余葡聚糖凝胶还是添加适量的葡聚糖凝胶，首先需要关闭层析柱底端出口。然后用玻棒将柱床体积上部（要有足够的磷酸缓冲液，便于搅匀）1/3处充分搅匀，搅匀后用滴管吸去多余的葡聚糖凝胶或继续添加适量的葡聚糖凝胶悬浮液，如此反复多次操作，直至沉积高度达到实验所需的柱床体积高度为止。同时在装柱过程中要防止柱床流干。柱装好后，应无节痕，气泡，斑纹，界面平整等。（3）、平衡方法： 柱装好后，使柱床体稳定5.0—10.0分钟，然后接上恒流泵，打开柱下端的出口，用 2.0倍于床体积的磷酸缓冲液进行充分的平衡。同时也使层析柱床体稳定。平衡完毕，关闭恒流泵，打开柱上端端口，让其柱内平衡缓冲液继续流出至与柱床体积表面相平时，关闭层析柱底端出口，准备加样。 （4）、加样方法： 加样前先启动已调试完毕的色谱工作站（如：电脑、紫外检测仪和恒流泵等装置），使整个装置处于工作状态。然后按实验要求吸取1.0毫升样液沿柱管内壁缓缓加入，加样完毕，打开层析柱底端出口，等样液面流至与柱床体积表面相平时，关闭层析柱底端出口，准备洗涤。（5）、洗涤方法： a、洗涤柱内壁：取少量磷酸缓冲液（与上样量等体积），沿柱内壁四周缓缓加入柱内，加完毕，打开层析柱底端出口，等洗涤液面流至与柱床体积表面相平时，关闭层析柱底端出口。
葡聚糖凝胶层析实验报告
葡聚糖凝胶层析实验报告 一、实验目的 1、学习凝胶(Gel)层析法的基本原理； 2、掌握葡聚糖凝胶（Sephadex）柱层析的操作技术。 二、实验原理 凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。 对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排 阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外（所用洗脱液的体积为外水 体积）；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的 筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走（所用洗脱液的体积为内水体积）。 分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出 柱外，而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小 分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这 些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶 层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。 三、仪器、材料和试剂 1、仪器：内直径为1cm，外直径为1.5cm的层析柱，恒流泵、收集器、酶标仪、试管、烧杯、移液枪。 2、材料与试剂：交联葡聚糖、双蒸水、蛋白溶液样品。 四、实验步骤 1、装柱
将交联葡聚糖溶液用玻璃棒引流导入层析柱中，要注意，不能让柱子中有气泡，可以边装边用玻璃棒搅拌。 2、上样 装好柱后，用移液枪将柱子中上面的水吸出，再用移液枪将1ml 的蛋白溶液加入层析柱中。 3、洗脱和收集 打开恒流泵和收集器装置，待样品刚好渗入到凝胶中时，再向层析柱中加入3-4ml的蒸馏水，此时盖上层析柱的上盖，将上盖的细管插入到盛有双蒸水的烧杯中，调节恒流泵的速度和收集器时间，开始洗脱收集。 4、样品的检测 收集一段时间后，将样品取出，依次编号，依次加入200μl到酶标版上，选用一个孔加入双蒸水作为对照，用酶标仪在280nm下测检测。 五、实验结果及分析 1、实验结果： 2、蛋白质样品洗脱曲线：
生物制药工艺学习题 第七章 凝胶层析
第七章凝胶层析 一、填空题 1、凝胶层析的分离原理有、、。这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下起主导作用；的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时才起作用。 2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而，颗粒强度随浓度上升而。 3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率，多用于等。粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率，多用于等。 4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大倍以上的柱体积， 以上的柱比，较吸液量、较粒的凝胶固定相。5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括、、 、。 6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于，其越小，凝胶孔径越；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于。 二、选择题 1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（） A.凝胶排斥 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低 2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（） A.水合作用 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低 3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（） A.分子量最大的 B.体积最大的 C.分子量最小的 D.体积最小的 4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（） A.观察柱床有无沟流 B.观察色带是否平整 C.测量流速 D.测量层析柱的外水体积 5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（） A.粗且长的 B.粗且短的 C.细且长的 D.细且短的
三、名词解释 1、全排阻： 2、类分离： 3、分级分离： 4、柱比： 5、操作压： 6、全渗入： 7、分离度R s： 四、问答题 1、试述公式V e=V0+K d V i 各字母的物理意义。 2、利用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？ 3、凝胶层析的应用主要有哪些？并说明其原理。 第七章凝胶层析（答案） 一、填空题 1、凝胶层析的分离原理有平衡排除理论、扩散分离理论、流动分离理论。这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下平衡排除理论起主导作用；扩散分离理论的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时流动分离理论才起作用。 2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随浓度上升而提高。 3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率高，多用于精制分离等。粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率低，多用于脱盐等。 4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大25 倍以上的柱体积，25 以上的柱比，较大吸液量、较细粒的凝胶固定相。 5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括分子扩散、涡流扩散、流动相中传质阻力、固定相中传质阻力。 6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于交联度，其越小，凝胶孔径越大；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于琼脂糖浓度。 二、选择题 1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（B ） A.凝胶排斥 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低 2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（A） A.水合作用 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低
葡聚糖凝胶G-25的使用方法
葡聚糖凝胶柱的使用方法： (1) 预处理 称取Sephadex G-25（50－100目）约5g ，加入蒸馏水100ml ，置室温下3h 进行溶胀。 (2) 装柱 凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。同时大开下口慢速流出蒸馏水。装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h 即可加样品分离。 (3) 加样 加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。然后，由柱的上端加水解液2ml ，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。 (4) 洗脱与收集 洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min 。洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml ，共收集10管。据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm ，找出浓度最大的管号。 (5) 凝胶的再生和回收 凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。若使用数次，就需要再生处理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl 溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
凝胶层析.
凝胶层析 简介 凝胶层析（gel chromatography）又称为凝胶排阻层析（gel exclusion chromatography）、分子筛层析（molecular sieve chromatography）、凝胶过滤（gel filtration）、凝胶渗透层析（gel permeation chromatography）等。它是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。1959年，Porath 和Flodin首次用一种多孔聚合物－交联葡聚糖凝胶作为柱填料，分离水溶液中不同分子量的样品，称为凝胶过滤。1964年，Moore制备了具有不同孔径的交联聚苯乙烯凝胶，能够进行有机溶剂中的分离，称为凝胶渗透层析（流动相为有机溶剂的凝胶层析一般称为凝胶渗透层析）。随后这一技术得到不断的完善和发展，目前广泛的应用于生物化学、高分子化学等很多领域。 凝胶层析是生物化学中一种常用的分离手段，它具有设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、特别是不改变样品生物学活性等优点，因此广泛用于蛋白质（包括酶）、核酸、多糖等生物分子的分离纯化，同时还应用于蛋白质分子量的测定、脱盐、样品浓缩等。 凝胶层析的基本原理 凝胶层析是依据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。层析过程如图11 所示。凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部，完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，它们经历的流程短，流动速度快，所以首先流出；而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部，经历的流程长，流动速度慢，所以最后流出；而分子大小介于二者之间的分子在流动中部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，所以它们流出的时间介于二者之间，分子越大的组分越先流出，分子越小的组分越后流出。这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到了分离的目的。 凝胶层析的基本概念 1. 外水体积、内水体积、基质体积、柱床体积、洗脱体积 如图3－6 所示，外水体积是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。内水体积是指凝胶颗粒中孔穴的体积，凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。基质体积是指凝胶颗粒实际骨架体积。而柱床体积就是指凝胶柱所能容纳的总体积。洗脱体积是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。我们设柱床体积为Vt，外水体积为Vo，内水体积为Vi，基质体积为Vg，则有： Vt＝Vo＋Vi＋Vg 由于Vg相对很小，可以忽略不计，则有： Vt＝Vo＋Vi 设洗脱体积为Ve，Ve一般是介于Vo 和Vt之间的。对于完全排阻的大分子，由于其不进入凝胶颗粒内部，而只存在于流动相中，故其洗脱体积Ve＝Vo；对于完全渗透的小分子，
专业催眠自学方式(无师自通法)
有人会问说，学习催眠一定要花钱去拜师吗？事实上也不一定。但如果你只是想要自己学学看，只有多下功夫喽，以下就教你如何【无师自通】。 一、阅读相关书籍：有关催眠的书籍在书店可能不好找到，而网上有不少免费的电子 书可以下载来看。 二、不断练习：学习催眠的不二法门，就是不断地练习、再练习。不管是自我练习、亦 或是有人愿意配合你做实际催眠练习，不断地充实自己应对不同的状况才是一位称职的催眠师所要做的课程。 三、自言自语：哈，没错，就是自言自语！当你有了催眠步骤的底子时，可以以书上举 例的【暗示用语】来自我练习。对着镜子练、对着墙练都随便你，最要紧的是先【独自】练习，不要一看完书就兴奋得抓个人来练习，结果可能是败兴而归、挫折感很重、放弃练习，那岂不可惜！刚开始先把所有的步骤牢记，不要想说自己要怎么变化方法，把每句暗示用语说的流畅，不急不徐，把整个流程跑过一遍，如此反复练习。接着，把相关的表达方式用不同说法来表达，慢慢的，脑袋中的【词汇】就多了起来，不会因为状况不一而【词穷】！ 四、小团体练习：一般人可能没有这样的机会做团体练习，但是【如果】可能的话，几 个对催眠有兴趣的人凑在一个小团体做实际状况的练习，对催眠技巧的熟练有很大帮助。一方面，不会因为催眠不成功而被取笑丧失信心，二方面，可以互相交换意见，一举数得。 五、时间由短变长“刚开始练习催眠时，先练习一些小技巧，例如只做初期诱导，接着 做觉醒步骤。花催眠的时间不要太长，等到慢慢熟练后，再加入其它技巧，催眠时间也慢慢增长，以此方式渐进，比较可以从中得到微妙的变化，对状况处理也可以循序渐进的掌控。 六、牢记过程：不管是自我练习亦或是实际催眠练习，事后都要牢记所使用的步骤及暗 示用语，可以的话用笔记下来，在下回催眠练习中可以开始变换暗示用语或调整催眠程序，试着找出你最顺手的过程。尽量做到在催眠过程中很顺畅的指示暗示用语，不要犹豫，要很有自信！通常，在第一次做实战催眠时，如果成功了，保证你会是信心满满； 失败，挫折感会特别强烈。在此，我要告诉初学者，在做第一次催眠时一定要抱着【我一定做的很好】的信念，因为，受试者会对催眠师的一举一动特别敏感，一旦你的没有自信被看透了，受试者的不信感相对增强，要想顺利进行催眠可能就难喽！ 七、排演：对！就是排演！歌星在演唱会前都要经过排演、排演走位、排演跟乐队的配 合情况、排演自己要做多大动作观众才能看得到演出…..！初学催眠者在【排演】的功夫上更要加强，将平时自我练习的成果要在别人面前真的表现出来，不仅在心理上要做自信心的建设，更要对整个催眠过程做个事前的演练。排演时（当然是独自一个人排演啦），想象自己眼前有位受试者，将所有的暗示用语【大声】说出来，假想正很顺利的催眠，所有【必要动作】都要做出来，将所有的催眠步骤从头到尾【大声地】演练一遍。 如此的排演有助于临场的反应，甚至会进行的更顺利、更有信心。 八、语调配合情境：当你在看一部电影时，如果遇到紧张情节，通常此时的背景音乐都 会很急促或是很高伉响亮，你的心情一方面是被情节带动、一方面也会被音乐的气氛感染得更紧张。催眠中的遇到应用亦是同样道理，当你暗示受试者很愉快、很喜悦时，你总不能低声下气的吧！所以，语调应配合着你所用的催眠用语情境，如此会加深催眠的效果。 九、速度配合呼吸：每个人的身体节奏通常是跟随着呼吸的速度，所以催眠者说出暗示 用语的速度最好是配合着受试者的呼吸速度。观察其呼吸时的肩膀或胸部起伏，当其呼
葡聚糖凝胶 Sephade LH 使用说明及使用心得
葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20 使用说明 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。此君既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由性能颇佳，可再生利用，所以倍受钦睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。 Sephadex LH-20适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。 结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子。因此使用中要考略几种色谱的作用机制。 最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，分离效果可保持不变。上样量视被分离物的结构性能的差异而定：差异大，则大；差异小，则小。凝胶过滤的上样量一般为5－7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1－2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关――难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC 的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。 流动相的常用溶剂为：水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷 上述溶剂的极性依次降低，对带有极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。 溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的。 二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。甲醇通常对带环状（包括苯环）物质分离采用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。 LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。 使用方法：将干粉浸泡于60—70％乙醇中过夜（充分搅拌），洗去可能存在的残留物，抽干然后湿态不间隙装柱，绝对不能出现凝胶断层（否则要重新装柱），动态用一倍柱体积的60—70％乙醇淋洗，再用水洗净乙醇即根据自己选用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为
催眠感受性测试方法
催眠感受性测试方法 1.手臂升降 1）手臂升降测试功能 测试视觉想象能力和躯体感受能力。 （2）手臂升降测试操作分解 姿势： 舒展一下身体，做个深呼吸，让身体放松下来，以舒适的方式站立，脚后跟并拢，脚掌微微八字分开，双手自然下垂；或者以舒适的方式坐在椅子上，双腿并拢，保持身体正值，双手自然地放在大腿上. 引导语： 把双臂向前伸直，与肩同宽，左手掌心向上，右手握拳大拇指指向天花板。现在轻轻闭上你的眼睛做三次深呼吸…让全身跟着放松下来，想象你的眼睛凝视着鼻子尖，把你的注意力关注在鼻尖上，继续保持深呼吸…… 想象，我在你的左手手掌放了一本厚厚的大辞典，你的左手感觉越来越沉重，因此，你的左手慢慢往下降…… 同时，想象我在你右手大拇指上绑了一颗大气球，这颗气球逐渐向上飘浮，舒服地拉着你的右手大拇指，向上飘，你的左手越来越重，越来越往下沉；而你的右手越来越往上飘，越来越往上飘……左手下降，右手上升……左手下降，右手上升…… （经过一段引导，对方双手有明显的上下差距，就可以结束试。） 好，测试结束，现在你的双手固定在这个位置，睁开你的眼睛，看看你双手的距离有多远……
2.双手紧握 （1）双手紧握练习功能 测试催眠感叐性，了解对方肌肉强度、爆収力及能量调动力。 （2）双手紧握训练操作分解 姿势： 舒展一下身体，做个深呼吸，让身体放松下来，以舒适的方式站好，双手自然下垂。 引导语： 把双臂向前伸直，双手手心相对十指相扣，然后轻轻闭上你的眼睛，同时更加放松你的身体。做三次深呼吸…（语气由温柔式转为权威式）好，下面发挥你最大的想象力，想象你的手掌被强力胶紧紧黏在一起，紧紧地黏在一起，黏得越来越紧，越来越紧，你的十指就像老虎钳子一样紧紧地相扣在一起，越来越紧，越来越紧……（给十指紧紧相扣的手势），等一下，你的双臂发得越来越僵硬，越来越僵硬，硬得就像钢条一样强硬，任何向下的力量（给向下的力量，试探其接受暗示程度及肌肉强硬度），都使你的手臂向上弹… 任何向下的力量（给向下的力量，试探其接受暗示程度及肌肉强硬度），都使你的手臂向上弹，就像钢条一样……想象你的眼前有一堵墙，你的手臂吐前伸，僵硬地吐前延伸，手臂充满了力量，这一股力量可以轻松突破前面这堵墙，向前延伸……不断地吐前延伸，冲破这堵墙……（经过一段引导发现对方双手关节处发白发黑，发现手臂明显僵硬，就可以结束测试。）好，测试结束。请你做个深呼吸慢慢地放松你的双臂，手臂僵硬的指令已经取消，现在你的双手固定在这个位置，睁开你的眼睛，看看你双手的颜色……（测试结束）
凝胶柱层析操作要点
凝胶柱层析操作要点 (一) 基本原理 凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，象筛子，直径大于孔径的分子将不能迸入凝胶内部，便直接沿凝胶颗粒的间隙流出，称为全排出。较小的分子在容纳它的空隙内，自由出入，造成在柱内保留时间长。这样，较大的分子先被洗脱下来，而较小的分子后被洗脱下来，从而达到相互分离的目的。洗脱时峰的位置和该物质相对分子质量有直接的定量关系。在一根凝胶柱中，颗粒间自由空间所含溶液的体积为外水体积V。不能进入凝胶孔径的那些大分子，当洗脱体积为V。时，出现洗脱峰。凝胶颗粒内部孔穴的总体积称为内水体积Vi ，能全部渗入凝胶的那些小分子，当洗脱体积为V。+ Vi 时出现洗脱峰。 (二)凝胶的类型及性质 1.交联葡聚糖凝胶 交联葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，由葡聚糖和3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状结构的高分子化合物。交联葡聚糖凝胶，按其交联度大小分成8种型号(表6–2)。交联度越大，网状结构越紧密，孔径越小，吸水膨胀就愈小，故只能分离相对分子质量较小的物质;而交联度越小，孔径就越大，吸水膨胀大，则可分离相对分子质量较大的物质。各种型号是以其吸水量(每g干胶所吸收的水的质量)的10倍命名，如，Sephadex G–25表示该凝胶的吸水量为每g干胶能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分别引入羟丙基基团，即可构成LH型烷基化葡聚糖凝胶。 交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定，但当暴露于强酸或氧化剂溶液中，则易使糖甘键水解断裂。在中性条件下，交联葡
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项 1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。 2 Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分 配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。 看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得 最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。 4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。 如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦， 就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂 洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 5 Sephadex LH-20的步骤。 (1) 选择条件： 梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。首先你的样品须要能溶解在尽量少量的洗脱剂中。极性在的用甲醇水系统;极性小者一般用不含水的系统。我们实验室常用正己烷二氯甲烷甲醇系统，用了很多年，效果较好。 (2) 饱和层析柱： 用洗脱剂将凝胶摇匀，直立柱身，让其自然沉降，此时要防止气泡留在其中。至少半小时打开开关，流出几个柱体种的洗脱剂，目的是使其膨胀在正确比例的洗脱剂中。 (3) 样品处理：用尽量少的洗脱剂溶解样品，常压过滤。 (4) 湿法上柱。这也是要有技巧的步骤。
凝胶层析柱特性测试
凝胶层析柱特性分析 （实验报告） 实验日期：2015年4月21日实验温度：室温 实验地点：生物化学与遗传学实验室指导老师：****** 班级：2013级生物技术1班姓名：***** 学号：****** I. 实验目的 1.掌握凝胶层析柱的基本原理； 2.学习凝胶层析柱的操作技术； 3.了解凝胶层析柱的应用。 II. 实验原理 凝胶层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶，对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。把含有不同大小分子的混合液，铺加在胶面上，让它流过凝胶柱。由于凝胶具有网络结构，当混合液通过凝胶颗粒缝隙中时，溶液中的溶质凡是比网孔小的分子，都能自由进入颗粒内部，而比网孔大的分子则不能进入。因此，在洗脱过程中，大分子物质必然先于小分子物质向下移行，先流出的是大分子物质，小分子物质后流出，从而达到分离的目的。 在凝胶层析中，凝胶粒子间隙的外水相当于移动相，粒子内水相当于固定相。当溶质随洗脱液自上向下移动时，溶质在内水之间连续不断达成分配平衡。相对分子质量大的因不易渗入凝胶孔内，分配系数较小，用较少的洗脱液就能从
柱中洗脱出来；反之，相对分子质量小的因渗入凝胶孔内，分配系数较大，需较多的洗脱液才能从柱中洗脱出来。 为了精确地衡量混合物中某一被分离成分在一定的凝胶柱内的洗脱行为，常采用分配系数K d来衡量，K d的定义为： i o e d V V V K - = 式中V e ——某一成分的洗脱体积，即从加入样品算起， 到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积； V o ——层析柱内凝胶凝胶颗粒之间空隙的总体积， 又称凝胶外水体积； V i——层析柱内部微孔的总体积，亦称为内水体积。 洗脱体积V e与V o及V i之间的关系可表示为： V e=V o+K d V i 当某种成分的K d值为0时，意味着这种成分完全被排阻于凝胶建立的微孔之外而最先洗脱出来，即V e=V o。可以用一个已知相对分子质量远远超过凝胶排阻极限的有色分 子如常用蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床，可测出柱床的外水体积V o。 当另一种成分的K d=1时，意味着这一成分完全不被排阻，它可以自由地扩散进入凝胶颗粒内部的微孔中，在洗脱过程中它将最后流出柱外，V e=V o+V i。 处于上述极端情况（即分子最大与最小）之间的那些分
催眠的标准操作步骤
催眠的标准操作步骤 --—－—-－—－摘录自廖阅鹏《每天用一点神奇催眠 术》 催眠是可以标准化操作的技术，只要你按部就班来进行，你会发现催眠其实就像骑自行车一样容易。 只要你按照标准步骤来进行,不但能事半功倍,也能把因为操作不当引起的负面影响减少到最小最小。 我们大致可将催眠分成五个步骤，分别是: 一、询问解疑（Ｄｉagnｏsis）： 与被催眠者建立良好的合作关系,了解他的动 机与需求，询问他对催眠既有的看法，解答他有关催眠的疑惑，确定他知道催眠时哪些事情会发生而没有不合理的期待，进行测试敏感度，了解他能进入多深的催眠状态、适合哪种诱导手法。...文档交流仅供参考... 如果是催眠治疗的话，此阶段要开始广泛搜集资讯，找出个案的真正问题所在。 注意：每一次的催眠都要有明确的目的. 有的时候,个案会有意或无意地隐藏前来求助 的真正原因.
Karｅn Hｏrney曾说过一句名言：「个案接受心理治疗的目的,并非为了治愈他们的精神问题,而是为了让问题更臻完美，变得无懈可击。」...文档交流仅供参考... 这段话极为辛辣,所以催眠师必须洞悉人性,有 能力穿透个案的故布疑阵,然后朝正确方向前进，带领个案远离黑暗，走到光明的地方。...文档交流仅供参考... 二、诱导阶段（Ｉnｄuctｉon): 催眠师运用语言引导，让对方进入催眠状态.一般而言，常用的诱导技巧有渐进放松法（ｐｒogresｓive relaｘａtion）、眼睛凝视法（ｅyｅ fixation)、深呼吸法、数数法、手臂上浮法，及其它变形与伪装的方法。...文档交流仅供参考... 催眠诱导技巧有几种呢？答案是:无数种。 你有多少想象力,就能创造出多少种催眠诱导技巧。 三、深化阶段（Deepｅnｉng）：
凝胶层析实验步骤及细节
温州大学第四届生物学科实验技能大赛 血清凝胶层析 实验成绩：实验过程＋实验结果＋实验报告 实验时间： 5月6日（周日）8:50到10B正门集合，上午9:00至12:00左右分离器使用指导及凝胶装柱。下午1:30开始血清离心操作及层析操作。 实验前：身穿实验服，用蒸馏水清洗实验器具 实验后：清理实验器具 凝胶层析的实验步骤
实验试剂和用品 1. 试剂 Sephandex 4B 凝胶（凝胶颗粒）、5%重铬酸钾、5%蓝葡聚糖、生理盐水 2. 主要实验用具 铁架台（滴定台架）、凝胶柱（层析柱）<多孔板、筛板>（10×1.0cm）、螺丝夹、移液管、烧杯、胶头滴管、试管（20个）、试管架、玻璃棒 凝胶层析定义 凝胶层析又称凝胶过滤，分子筛层析或排阻层析。它的突出优点是凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂。凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术。 凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离，称凝胶层析。 分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。 实验原理 不同类型凝胶的筛孔的大小不同。如果将这样的凝胶装入一个足够长的柱子中，作成一个凝胶柱。当含有大小不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时，比凝胶珠平均孔径小的蛋白质就要连续不断地穿入珠子的内部，这样的小分子不但其运动路程长，而且受到来自凝胶珠内部的阻力也很大，所以越小的蛋白质，把它们从柱子上洗脱下来所花费的时间越长。凝胶中只有很少的孔径可接受大的蛋白。因此，大的蛋白质直接通过凝胶珠之间的缝隙首先被洗脱下来。凝胶过滤所用的凝胶孔径大小的选择主要取决于要纯化的蛋白质分子量。 凝胶柱的制备 在沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸，1小时即可达到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。 凝胶的装填：将层析柱与地面垂直固定在架子上，下端流出口用夹子夹紧，柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器，柱内充满洗脱液，将凝胶调成较稀薄的浆头液盛于柱顶的容器中，然后在微微地搅拌下使凝胶下沉于柱内，这样凝胶粒水平上升，直到所需高度为止，拆除柱顶装置，用相应的滤纸片轻轻盖在凝胶床表面。稍放置一段时间，再开始流动平衡，流速应低于层析时所需的流速。在平衡过程中逐渐增加到层析的流速，千万不能超过最终流速。平衡凝胶床过夜，使用前要检查层析床是否均匀，有无“纹路”或气泡，或加一些有色物质来观察色带的移动，如带狭窄、均匀平整说明层析柱的性能良好，色带出现歪曲、散乱、变宽时必须重新装柱。 凝胶柱的重复使用、凝胶回收与保存 一次装柱后可以反复使用，不必特殊处理，并不影响分离效果。为了防止凝胶染菌，可在一次层析后加入0.02%的叠氮钠，在下次层析前应将抑菌剂除去，以免干扰洗脱液的测定。 如果不再使用可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，依次用70%、90%、95%乙醇脱水平衡至乙醇浓度达90%以上，滤干，再用乙醚洗去乙醇、滤干、干燥保存。湿态保存方法是凝胶浆中加入抑菌剂或水冲洗到中性，密封后高压灭菌保存。
详细催眠指导语
催眠指导语 这个催眠指导语我是希望大家可以好好的仔细看，也是可以把他当作是自己催眠练习的具体模版，这个是我做催眠前世今生一年半时间，最后固定下来的一个催眠模式，可以说在一年半中我催眠前世今生已经做的很熟练了 当初为了要选择做这个催眠 原因有１，我本身对于一些催眠现象有兴趣，这个是我追求催眠本来目的２，刚开始学习催眠的时候找被试练习催眠实在是一个困难，但如果让来的人给他有一个好的回报呢，所以就急需去找出一个可行的催眠体验出来，所以就选择了这个催眠 ３，我之前带心理团体的时候，曾经用到过冥想技术，那时候找这个资料可是真的是辛苦啊，但我还是把年龄回溯的冥想给做出来，记得第一次做的时候，那种紧张呵呵，不过还好，最后做出来的效果都不错给予我很大的鼓励以上三点就是我为什么专门做催眠前世今生这个催眠了，我学习了催眠多久那我就做了多久了催眠前世今生哈哈，不清楚以后能否靠这个赚到钱来养活自己，３８００／一次不成功不收费， 地点金华浙江师范大学心友ＱＱ１７９０１４４６９催眠交流群3 4710923 完全版的催眠步骤 深呼吸的训练，要求被试坐着，尽可能的让自己的心宁静下来 首先还是深呼吸，进行腹部呼吸，慢慢的把气吸进来，然后在腹部停留下然后在慢慢的把气呼出去（进行多次之后） 想象着吸进来的是所有的氧气，所有的温暖和快乐 呼出去的是所有的二氧化碳，所有的烦恼和所有的忧愁 每一次的呼吸都会使你更加的放松，更加的舒适，更加的宁静 每一次的呼吸都会使你更加的放松，更加的舒适，更加的宁静 每一次的呼吸都会使你更加的放松，更加的舒适，更加的宁静 现在我要从1数到20，每次我间隔5秒，我每数一个数字，你都会感觉到更加的放松，更加的放松，更加的舒适，更加的舒适与更加的宁静，更加的宁静 现在我要从1数到20，每次我间隔5秒，我每数一个数字，你都会感觉
凝胶层析实验报告
凝胶层析实验报告 一.实验目的:将血红蛋白与鱼精蛋白混合物进行分离 二.实验原理: 凝胶是一种具有多孔,网状结构的分子筛. 分子量不同通过凝胶柱的速度也不同,利用这种凝胶分子筛对大小不同的分子进行层析分离. 当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的孔隙,随着溶剂流动,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱; 反之,相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而最后流出层析柱.从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱. 这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离. 三.主要仪器和试剂: 铁架台层析柱胶管交联葡聚糖凝胶G-50 血红蛋白鱼精蛋白混合物(aq) 四.操作步骤: 1 连接装置:将层析柱固定在铁架台上,保持与水平面垂直,底部与胶管连接.胶管下端置于烧杯中. 2 装柱:将尼龙网放入层析柱底部, 使其水平固定;夹住胶管向柱中注水,松手放水,使水流到剩一厘米,让气泡流出,夹住胶管. 3 灌胶:将凝胶搅拌均匀,用玻璃棒引流将凝胶溶液一次性倒入层析柱约20ml;夹住胶管片刻,然后打开夹子,让凝胶沉淀约20分钟(凝胶与水分层),当水流至离凝胶约5mm处时,夹住胶管.用玻璃棒取滤纸一片伸入层析柱,放置于凝胶表面之上水面之下,打开夹子,当露出滤纸,关闭夹子. 4 加样:用胶头滴管取血红蛋白’鱼精蛋白混合液,滴入层析柱,约两滴. 5 洗脱:当待分离混合液渗入滤纸后,加少量水,开夹放水,(水面始终位于滤纸之上),反复两三次;关闭止水夹到入大量水,再开夹.等待分离 6 回收:将洗净的凝胶回收以便再次利用 五.实验现象: 观察看到红色的液体先被分离,流至烧杯中;黄色液体流速很慢,最终流入烧杯.