染色方法总结-免疫学技术讨论版-丁香园论坛
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A
AgNOR染色法:
1、试剂配制：
（1）AgNOR染色液：
甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。
（2）AgNOR工作液
取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。
2、步骤：
（1）切片脱蜡至水
（2）双蒸水洗2次
（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）
（4）双蒸水洗3次
（5）脱水,透明,封固
3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B
鞭毛染色法:
１．试剂配制：
甲液：丹宁酸５克
氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克
福尔马林（１５％）２．０毫升
氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升
乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克
蒸馏水１００毫升
制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。
２．染色方法：
（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。
（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。
（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。
（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
３．注意事项：
（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。
（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。
（３）防止水及培养物沾有氯化物。
（４）切忌用接种环涂抹培养物。
（５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。
（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。
β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。
β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变
为不溶性的深蓝色沉淀。
X-gal可以做为组织染色剂，可以在所有表达β－半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。
应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。
C
CAE染色步骤
1、试剂配制：
（1）A液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。
（2）4％副品红液：取盐酸副品红(EM级)1g，溶于蒸馏水20ml 内，再加入10m1／L的HCl 5m1，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下。于使用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测试，瞬间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的亚硝酸盐。
（3）B液：o．1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml，加入新配制的副品红液3滴，用1moI／L HCl使PH值调至6．3。
2、染色步骤：
（1）将A.、B二液混合，过滤，加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.
（2）切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)
（3）流水冲洗。
（4）苏木素复染。
（5）空气干燥后封固。
G
Grimelius硝酸银反应法（嗜银反应）:
1、试剂配制：
硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升蒸馏水 87毫升
0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升
还原液: 对苯二酚 1克亚硫酸钠 5克蒸馏水 100毫升
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）60℃硝酸银液内3小时
（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗
（4）入45℃的还原液处理1分钟
（5）蒸馏水洗
（6）5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)
（7）水洗,脱水,透明,封固
3、结果：嗜银颗粒呈棕黑色。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。
H
HID染色法1、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟
（3）蒸馏水洗
（4）Schiff液中染10分钟
（5）自来水洗15分钟至细胞核红色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）
（6）蒸馏水洗
（7）高铁二胺液 18～24 小时
（8）爱先蓝液(pH2.5)染10～20分钟
（9）蒸馏水洗
（10）脱水,透明,封固
2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，此法多用于确定肠化的分型。
HP（硝酸银法）
1、试剂配制：
（1）醋酸缓冲贮备液，PH3.6
0.2N醋酸缓冲液，PH3.6 10 ml
蒸馏水 240 ml
以下各液均用此液配制
（2）1 %硝酸银液
硝酸银 1 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml
（3）2 %硝酸银液
硝酸银 0.2 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml
（4）5 %明胶液
明胶 5 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml
先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅
拌。
（5）3 %对苯二酚液
对苯二酚 0.3 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml
（6）明胶对苯二酚液
3 %对苯二酚液 1 ml
5 %明胶液 15 ml
（7）显影液
明胶对苯二酚液 16 ml
2 %硝酸银液
3 ml
在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用。
2、操作方法：
（1）组织脱蜡至蒸馏水
（2）醋酸缓冲贮备液洗2次
（3）入1 %硝酸银液中，56℃，1小时
（4）切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止。
（5）倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟
（6）水洗
（7）脱水，透明，封固。
3、结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。
Highman甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）
1、试剂配制：
甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml
碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至水
（2）甲醇刚果红染液染10～20分钟
（3）用碱性乙醇分化液分化数秒
（4）水洗
（5）苏木素复染2分钟
（6）水洗
（7）脱水,透明,封固
3、结果：淀粉样物呈桔红色。
4、类淀粉染色的应用：
确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织，后者在刚果红法染色后呈淡桔色，常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。
L
六胺银染色法1、试剂配制：
六胺银液配制：
3%六次甲基四胺水溶液 5 ml
2.5%硝酸银水溶液 0.5 ml
摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5~2 ml加蒸馏水至30~40 ml
2、步骤：
（1）切片脱蜡至水，蒸馏水洗
（2）0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗
（3）六胺银液60℃，1-2小时，（或六胺银液80-90℃，半小时左右）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）
（4）0.2% 氯化金调色数秒
（5）丽春红淡染
（6）水速洗
（7）烘干，透明，封片。
3、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。
M
Mallory 三色法1、步骤
（1）切片脱蜡至水
（2）0.5%酸性复红水溶液1 min
（3）蒸馏水洗
（4）入下液1-2min
苯胺蓝0.5g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸 1g，蒸馏水100ml。
（5）蒸馏水洗
（6）95%乙醇分色
（7）脱水，透明，封片。
2、结果：胶原纤维蓝色，红细胞桔黄色，核红色。
M allory磷钨酸～苏木素染色法（PTAH）
1、试剂配制：
苏木素 0.1 g 磷钨酸 2.0 g 蒸馏水 100 ml
先将苏木素加热溶于20毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80毫升蒸馏
水。等苏木素冷却后，加入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可使用。如急用，可加入0.2 g高锰酸钾,加速其成熟。
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）放入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟。
（3）蒸馏水洗。
（4）2.5%草酸漂白5分钟。
（5）蒸馏水洗多次。
（6）置于磷钨酸苏木素溶液12～24小时。
（7）95%酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精，置60℃温箱中烘干。
（8）二甲苯透明，封固。
3、结果：纤维胶质，肌胶质，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝色。胶原，网状纤维和骨基质着黄色或砖红色。在工作中常用于观察横纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征。
Masson 三色染色法、
1、试剂配制：
丽春红酸性品红液：丽春红 0.7 g 酸性品红 0.3 g
蒸馏水 99ml 冰醋酸 1 ml
苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g 蒸馏水 98 ml 醋酸 2 ml
亮绿液：亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml
苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液20 ml,加95%酒精10 ml
2、染色步骤：
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）苏木素染5～10分钟
（3）盐酸酒精分化
（4）流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)
（5）丽春红酸性品红液中染5～8分钟
（6）蒸馏水洗
（7）1% 磷钼酸中染1～3分钟
（8）不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟(如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)
（9）水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固
3、结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。
4、注意：
（1）此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的鉴别，也为肾组织活检，观察肾小球病变的重要染色法，常用于观察缺血病变的心肌。用于观察肾小球病变时，一定要用2um以下半薄切片。
（2）细胞核染色后分化很重要，观察控制着色程度。而HE染色则是最常用的一种常规染色方法，但无法区别胶原纤维和肌肉。
N
粘液染色
（一）PAS染色法
与染糖元的方法相同。
（二）AB(pH2.5)染色法
1、试剂配制：
爱先蓝8GX 1 g 蒸馏水 97 ml 冰醋酸 3 ml
核固红液: 核固红 0.1g 硫酸铝 5g 麝香草酚 50mg 蒸馏水 97ml
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）爱先蓝液染10～20分钟
（3）蒸馏水洗
（4）核复染(核固红5分钟)，水洗
（5）脱水,透明,封固。
唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。常用于确定胞浆内空泡的性质，特别是当细胞呈现印戒样特征时。
J
甲基绿派洛宁法（改良Cook，1974）
1、试剂配制：
（1）2%甲基绿水溶液：
甲基绿（methyl green）1g
蒸馏水加至50ml
用三氯甲烷抽提，方法详后。
（2）5%派洛宁水溶液：
派洛宁G（pyronine G）1g
蒸馏水加至20ml
（3）0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8）
0.2M醋酸液41ml
0.2M醋酸钠液59ml
（4）甲基绿派洛宁染液：
2%甲基绿水溶液（经抽提） 5ml
5%派洛宁水溶液 1ml
蒸馏水 12ml
0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8） 18ml
甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一种化合物。由于甲基化作用，甲基绿就比甲基绿后，所引进的甲基连接得并不牢固，容易从甲基绿中脱失。另一方面，在甲基化过程中，还有一部分结晶紫并没有生成甲基绿，因此，也有人认为甲中，常有少量的甲基紫或结晶紫成份。但是，也有人认为甲基紫乃是甲基绿的衰败产物，甲基绿在储存过程中，会不断产生甲基紫。因此，在配制试剂时，必须先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来，才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染成绿色。抽提方法是取2%甲基绿水溶液20ml倾入洁净分液漏斗，加入三氯甲烷20ml充分摇荡混合，使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞，慢慢把如此反复更换三氯甲烷，
直到三氯甲烷无紫红色为止，即可得到得纯的甲基绿溶液。
2、操作步骤：
（1）新鲜组织固定于Carnoy氏液（4℃）3~6小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
（2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。
（3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。
（4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。
（5）用丙酮迅速分化。
（6）转入丙酮二甲苯（1:1）稍洗。
（7）二甲苯透明2~3次。
（8）中性树胶封固。结果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。
3、对照方法：
（1）取另一连续切片用核糖核酸酶（rihonuclease）1mg/1ml 于37℃温箱内消化3小时，蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。
（2）切片在10%高氯酸（prechloric acid）于4℃处理12~18小时，水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。
4、注意事项：
（1）组织不宜用甲醛固定，应选用Garnoy氏固定液，因为酒精和醋酸能较好地保存核蛋白。
（2）Garnoy氏液固定标本的时间不宜太长，超过一天则染色效果不理想。
（3）要注意试剂的质量，特别是派洛宁，常常不同批号的染料，染色的效果不同。甲基绿和派洛宁二者的比例要恰当。
（4）染色液的pH应为4.8左右，如pH过低，甲基绿染色效果差；pH偏高，则派洛宁染色效果不良。
（5）丙酮分化时间要很好掌握，时间不宜太长。
（6）配妥的甲基绿派洛宁染液用后放冰箱保存，约可使用数周。
染色原理：对此法的染色原理，目前了解得还不够清楚，一般可从下面两方面理解。1、电离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在一定的条件下，可以电离而带电荷，因此都有一定的等电点。甲基绿和派洛宁在水中电离后，都产生带阳电荷的离子。甲基绿电离后，在五价氮处产生二个正电荷，碱性较强。派洛宁电离后仅产生一个正电荷，碱性较甲基绿弱，在染色时二者进行竞争，碱性较强的甲基绿就与胞核（等电点pH3.8~4.2）进行极性吸着而结合，碱性较弱的派洛宁与胞质（等电点pH4.6~5.2）吸附结合。2、聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。因此，思虑在绿选染DNA，而派洛宁选染RNA。应用：PNA主要存在于胞质及核仁内，它主导细胞的蛋白质合成。在细胞增生，胞质蛋白质合成亢进时，核仁和胞质的PNA增加。因此，恶性瘤细胞核仁巨大，胞质嗜碱。浆细胞和免疫母细胞胞质合成免疫球蛋白，胰腺上皮合成胰蛋白酶。因此，这些细胞胞质有很强的嗜碱性。胞质嗜碱，是蛋白质合成增强的标志。
S
脂肪（苏旦Ⅲ）法
1、试剂配制：
苏旦Ⅲ 0.1～0.2 70% 酒精 100 ml
将苏旦Ⅲ置于70%酒精中,加热饱和,在未冷前过滤,静置一夜。
2、染色步骤：
（1）冰冻切片（8～10微米）。
（2）70%酒精固定1分钟。
（3）放入苏旦Ⅲ酒精溶液中20～30分钟。
（4）70%酒精洗去多余的染料。
（5）水洗。
（6）苏木素复染2～5分钟。
（7）1%盐酸酒精分化。
（8）水洗，蓝化,甘油封固。
3、结果：脂肪桔黄或红色。一般用于确定胞浆内空泡究竟是糖原，水变性还是脂滴。
P
高碘酸-六胺银-马休黄染色法(PASM-M)
1、试剂配制：
六胺银原液： 3 %六甲基四胺水溶液(乌洛托品) 20 毫升，5 %硝酸银水溶液 10 毫升。
六胺银工作液：六胺银原液30毫升，双蒸水20毫升，5 %硼砂(四硼酸钠)2毫升。
核固红液：核固红0.1 克，5 %硫酸铝100毫升加热溶解，贮存饱和液待用。
马休黄液：马体黄 0.5 克，无水酒精 98 毫升，磷酸 0.2 克。
2、操作方法：
（1）常规脱蜡至水
（2）0.5%氧化20分钟
（3）蒸馏水洗3次
（4）浸入六胺银工作液中2小时左右(恒温58℃)
（5）蒸馏水洗3次
（6）0.2%氯化金1-2分钟
（7）蒸馏水洗2次
（8）核固红染色10-15分钟
（9）马休黄染色1分钟
（10）放入温箱烤干，二甲苯透明，中性树胶封固
3、结果：肾小球毛细血管基膜呈黑色，背景和红细胞呈黄色，细胞
核呈红色。
4、注意： 1、六胺银工作液现配现用，只能用一次。
2、第3步做完后可入5 %三氧化铬(铬酸)水溶液氧化40 分
钟，再用1 %亚硫酸钠除铬，背景可能效果更佳。
3、马休黄主要是染红细胞。用无水酒精中脱水，黄色的背景就脱掉，可直接放入
温箱或电吹风吹干，封片。
R
瑞氏－姬姆萨染色方法
1、试剂配制：
原料:A:瑞氏染粉0.8--1克；吉姆萨染粉0.5克
B:甘油33ml
C：甲醇500ml
配法：将A放入研钵中，加入少量B研磨，再加入少量B磨，再加入少量B磨……倒出，将未溶部分，继续加入B磨……>全溶，加入C，或中间加入C 亦可。
2、染色步骤：
滴数滴入玻片盖满标本，30秒，再加入双蒸水或PBS2-3倍染1-3分中，倾去染液，水洗……封片。
T
Trypan blue （台盘兰）排斥实验：
细胞悬液0.1ml加入0.4% Trypan blue生理盐水溶液0.1ml,混匀后滴在血球记数板上。存活率=不着色细胞数/细胞总数X100%
TTC方法：
TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞，用来表示细胞的活力。配制多为2％，染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。
V
Van Gieson法1、试剂配制：
饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 150 ml
1%酸性品红 10 ml
两种溶液用前混合在一起。
2、染色步骤：
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）苏木素深染。（10～15分钟）
（3）Van Gieson中染半分钟。
（4）蒸馏水洗。
（5）置60℃温箱中烘干。
（6）二甲苯透明，封固。
3、结果：胶原纤维红色，肌纤维、胞浆、红细胞黄色。
4、建议：用稀释的Van Gieson液进行染色，不用95%的酒精分化，结果色泽鲜艳，而且着色均匀。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
结缔组织染色法 1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2.Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B 1.2 Mssson三色法 图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌 1.3.显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图表 D 4.Weigert间苯二酚法 二、胶原纤维染色法 2.2.Van Gieson〔V.G〕苦味酸-酸性品红法
鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图 心肌堵塞 myocardial infarction ：心肌堵塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 2.1 天狼星红〔Sirius red 〕苦味酸染色法(参照上图) 红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他 三、网状纤维染色 3.1 Gordon-Sweets 银氨染色法 〔梅花开枝图，金色伴树枝〕 黑色：网状纤维 红色：胞核〔核固红复染〕 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质〔红液复染〕 图表 F 3.Gordon-Sweets 氢氧化银氨液浸染法 3.2 Gomori 氏银氨液配制法 图表 GGomori 氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori 醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最正确 图表 H4.GOMORI 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景 图表 I 4.Weigert 间苯二酚法 六、肌肉组织染色 △ 横纹肌组织染色 Mallory 磷钨酸木精染色法〔PTAH 〕 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌 黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维〔有时〕 天狼星红苦味酸染色法：〔偏光显微镜〕 Ⅰ型：强双折光性，呈黄色或红色纤维 Ⅱ型：弱双折光，呈多种色彩疏网状分布 Ⅲ型：弱双折光，呈绿色的细纤维 Ⅳ型：弱双折光的基膜，呈淡黄色
染色方法总结-免疫学技术讨论版-丁香园论坛
染色方法总结-免疫学技术讨论版-丁香园论坛 A AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察） （4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升
制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。 ３．注意事项： （１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。 （２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。 （３）防止水及培养物沾有氯化物。 （４）切忌用接种环涂抹培养物。 （５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。 （６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。 β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。 β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配 图) 结缔组织染色法 1.1 Mallory三色染色法 Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。 1.2 Masson三色染色法 Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。 胶原纤维染色法 2.1 天狼星红苦味酸染色法 天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。 2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法
Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。 三、网状纤维染色 3.1 XXX-Sweets银氨染色法 XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。图表F展示了XXX-Sweets氢氧化银氨液浸染法的效果。 3.2 Gomori氏银氨液配制法 Gomori氏银氨液配制法可用于网状纤维的染色。图表G 展示了Gomori氏银氨液配制法的步骤。
细菌染色技术总结
细菌染色技术 （2010—11-22 22：29:46） 目的要求 初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。 实验内容 1．细菌染色一般程序 涂片干燥固定初染 (媒染）脱色复染(1）涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上，固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水，然后取菌少许在盐水中磨匀，呈轻度混浊.涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。 （2）干燥涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面向上，置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。 （3)固定细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3~5次，温度以手能摸时热而不烫为度.目的在于杀死细菌，凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。 (4) 初染不同的染色方法，所用染液也不同。染液以覆盖菌膜为度。 (5) 媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。媒染剂还可用于固定之后，亦可含在固定液或染液中。 (6) 脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用. (7）复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染，便于观察。复染液的颜色与初染液有明显不同。 2．常用染料原液配制 一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量：美兰2g～5g；结晶紫7g~14g；碱性复红3g~7g. 3．常用的染色方法 （1）单染色法即用一种染料染色的方法。常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。 1) 染液 ①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01%KOH溶液70ml即成。 ②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5％石炭酸溶液90ml，然后用蒸馏水作10倍稀释即成。 2) 菌种大肠埃希菌普通斜面培养物. 3) 染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液，染色1min，以水冲洗至无颜色流下为止，自然干燥或以远火烘干后镜检。 4）结果以美兰染色者菌体呈现兰色；以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色。 （2）革兰染色法 1) 原理细菌被结晶紫着色后,再经媒染剂处理，染成深紫色或紫黑色.如被酒精脱去颜色,经复红复染成红色，称为革兰阴性菌；如不被酒精脱色，则仍为紫黑色，称为革兰阳性菌。 革兰染色的原理尚未完全明了，主要有三种学说：①等电点学说革兰阳性菌的等电点低（pH2~3），革兰阴性菌等电点较高(pH4~5)，一般染色液pH值为
病理学技术——特殊染色最全总结
病理学技术——特殊染色最全总结 特殊染色是病理学中常用的一种技术手段，用于染色并可视化细胞、 组织或病理标本中特定的结构、细胞成分或病理损伤，从而帮助诊断人员 更准确地判断疾病类型和病理变化程度。特殊染色的种类繁多，下面将对 一些常见的特殊染色进行全面总结。 一、银染色法 银染色法是通过化学反应使待染物质与银盐结合，生成黑色或褐色沉淀，并在显微镜下观察变化。常见的银染色方法有：Reticulin（網狀纖維）染色、Gomori银染色、Grocott-Methenamine银染色。 二、PAS染色 PAS染色（Periodic Acid-Schiff染色）是一种常见的特殊染色技术，用于检测糖原以及其他多糖类物质。通常使用的PAS染色是将待染物标本 与过氧化铬酸溶液（Periodic Acid）处理后再使用Schiff试剂进行染色 的方法。PAS染色为酸性物质染成红色，大多为胞浆染色。常见的应用包 括鉴别肝细胞变性、神经纤维、肾小管等结构。 三、 Masson三色染色法 Masson三色染色法是一种多彩染色方法，通过染色剂的组合可染出 细胞核、胶原纤维和细胞质等不同组织成分。Masson三色染色方法包括 酸性区域以绿色染色显示胶原纤维，细胞核以黑色或暗蓝色染色显示，胞 质以红色染色显示。该染色法在组织纤维化、炎症反应等病变的检测中应 用广泛。 四、Mallory三色染色法
Mallory三色染色法和Masson三色染色法类似，可以用于显示胶原 纤维、细胞核和胞质等组织成分。其区别在于Mallory三色染色法标本在 染色前需用盐酸处理，使染色剂更易于沉积在纤维上，能更清晰地显示组 织纤维结构。 五、Giemsa染色 Giemsa染色通常用于血液和骨髓涂片的染色，并可以显示细胞核、 染色质和胞质等成分。Giemsa染色法有多种方法，如Giemsa-Eosin染色法、Giemsa-Wright染色法等，可根据需要选用。 六、von Kossa染色法 von Kossa染色法用于检测组织中的钙盐沉积，如血管壁的钙化、尿 路结石等。染色后，钙盐沉积物呈黑色至棕色颗粒状，可在显微镜下观察到。 七、酶染色 酶染色是通过检测组织中一些特定酶的活性，使用酶底物与酶结合发 生反应，生成可视化的染色产物。常见的酶染色方法包括碱性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色等。 总结： 特殊染色在病理学诊断中起到了至关重要的作用，不同的染色方法可 以染出不同的组织成分和病理变化，帮助医生更准确地进行诊断。以上介 绍了一些常见的特殊染色方法，包括银染色法、PAS染色、Masson三色染 色法、Mallory三色染色法、Giemsa染色、von Kossa染色法以及酶染色等。通过了解和灵活运用这些技术，可以提高病理学诊断的准确性和效率。
细胞各种染色方法
细胞各种染色方法 细胞染色方法是一种用于研究细胞结构和功能的重要技术。通过对细胞进行染色，可以使细胞成分和结构可见，便于观察和研究。下面将介绍几种常用的细胞染色方法。 1.基本染色方法 -干燥染色法 干燥染色法是最常见的染色方法之一，用于观察细胞的形态和结构。在细胞表面涂上染色剂（如吉姆萨、范斯丁染料等），然后用胶片或显微镜进行观察。这种方法方便快捷，适用于常规的细胞观察。 -神经元染色法 神经元染色法主要用于研究神经系统的结构和功能。常见的神经元染色方法包括尼氏染色法、戈登染色法和格尔染色法等。这些方法可以染色神经元的胞体、突触和轴突等结构，以及神经元之间的连接方式。 2.核酸染色方法 -核酸荧光染色法 核酸荧光染色法是一种用于检测细胞核酸的方法。常见的核酸染色剂包括达尔林紫、伊曼纽尔蓝和乳胶蓝等。这些荧光染料可以与DNA或RNA 结合，生成荧光信号，便于观察和分析。 -原位杂交法 原位杂交法是一种利用互补的单链DNA或RNA探针与目标细胞中的互补序列发生杂交反应的方法。这种方法可以检测特定的基因表达情况或检
测一些病毒的感染情况。常见的原位杂交方法包括原位PCR、荧光原位杂 交和非放射性原位杂交等。 3.蛋白质染色方法 -共聚焦显微镜染色法 共聚焦显微镜染色法是一种利用荧光染料标记特定蛋白质的方法。常 见的荧光染料包括荧光素、乳酸钙蓝和荧光蛋白等。这种方法可以使用不 同的荧光染料标记不同的蛋白质，通过共聚焦显微镜观察细胞中的蛋白质 分布和相互作用。 -银染法 银染法是一种用于检测蛋白质的方法，特别适用于低表达量的蛋白质。该方法通过将目标蛋白质与银离子结合，形成黑色或棕色的颗粒，便于观 察和分析。银染法常用于检测蛋白质在凝胶电泳中的分子量和含量。 4.细胞器染色方法 -非特异性染色法 非特异性染色法是一种用于检测细胞器的方法，常用的非特异性染色 剂包括宙斯金、吉姆萨和荧光素等。这些染料可以与细胞器特有的成分结合，使其在显微镜下可见。 -特异性染色法 特异性染色法是一种用于检测特定细胞器的方法，常见的特异性染色 剂包括桡胞蛋白、核蛋白和线粒体染料等。这些染料可以选择性地染色特 定的细胞器，从而更准确地观察和研究细胞器的结构和功能。
病理学技术特殊染色总结
病理学技术特殊染色总结一、结缔组织染色法 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 蓝褐色：胞核 三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 二、胶原纤维染色法 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他 三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维 红色：胞核（核固红复染） 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（伊红复染） 四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳紫红色：弹性纤维 橘黄色：背景五、弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 淡黄色：背景 六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH） 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或玫红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维（有时） 紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌 △早期心肌病变组织染色 Nagar-Olsen染色法（HBFP）红色：缺氧心肌、红细胞 黄色或黄棕色：正常心肌 蓝色：细胞核Poley显示缺氧心肌染色法红色：缺氧心肌 紫色：胞核 绿色：其他组织 1
七、糖类染色 过碘酸-Schiff（PAS）染色法 红色：糖原及其他PAS反应阳性物质 蓝色：细胞核 八、黏液物质（黏多糖）染色 Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（AB-PAS）染色法 红色：中性黏液物质 蓝色：酸性黏液物质 紫红色：混合性黏液物质阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 2.5） 法 蓝色：含硫酸黏液物质 不着色或淡然：强硫酸化黏液物质 红色：胞核 阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 1.0） 法 蓝色：含硫酸黏液物质 不着色：非硫酸化酸性黏液物质 红色：胞核（如复染） 九、黑色素染色 Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒 红色：胶原纤维 浅黄色：背景Lillie硫酸亚铁染色法暗绿色：黑色素 浅绿或不着色：背景 黄色：肌纤维和背景 十、含铁血黄素染色 亚铁氰化钾法（Perls blue普鲁士蓝显示三价铁）蓝色：含铁血黄素 浅红色：其他组织十一、胆色素染色 三氯醋酸染色法 绿色：胆色素 红色和黄色：其他（复染） 十二、脂褐素染色 三氯化铁-铁氰化钾法（非特异性）暗蓝色：脂褐素醛品红法（现配现用）深紫色：脂褐素 浅黄色：背景 十三、脱色素染色 通常用来鉴定是否有黑色素存在，3张连续石蜡切片，1张HE，1黑色素染色，1张氧化漂白脱色素十四、纤维蛋白染色 Lendrum等MSB染色法 *本法的MSB指马休黄猩红蓝法红色：纤维蛋白 紫色：陈旧性纤维蛋白 蓝色：细胞核 黄色：红细胞Gram甲紫染色法蓝黑色：纤维蛋白红色：背景 十五、淀粉样物质染色 刚果红染色法红色：淀粉样物质蓝色：细胞核Jurgens甲紫染色法 红色或紫红色：淀粉样物质蓝色：细胞核 十六、真菌染色 2
用于流式细胞分析的细胞内抗原染色方法总结
用于流式细胞分析的细胞内抗原染色 改进的基本免疫荧光染色和流式细胞分析操作步骤可用于在单细胞水平上同时流式细胞分析表面分子和细胞内抗原。通常，细胞用甲醛固定以稳定细胞膜，然后用破膜剂或酒精透化，使得抗细胞内抗原的抗体可以在细胞内进行染色。染色细胞内的蛋白质时，重要的是要考虑它们的位置，因为这可能决定了最优的操作步骤和缓冲系统。例如，核蛋白和许多分泌蛋白与Foxp3 /转录因子染色液组合配合良好，而分泌蛋白如细胞因子和趋化因子搭配细胞内固定和破膜缓冲液组合很好。最后，有几种磷酸化的信号蛋白可能在前面提到的两种缓冲系统中不起作用，但可与固定/甲醇方案一起使用。应根据经验确定不同缓冲系统和方案中的抗体性能。 细胞表面蛋白质染色操作步骤： 1，取100-200w细胞（流式收20w），1200rpm离心8min，留100μL，将细胞重悬。 2，加入1mL 5% BSA（PBS配），1200rpm离心5min，留100μL，将细胞重悬。重复两次。这步是封闭，封闭非特异性的表面蛋白分子，防止与抗体非特异性结合。 3，每种抗体加0.3-0.5μL，4℃避光30min。 4，加1mL PBS 终止，1200rpm离心5min，留100μL，将细胞重悬。 5，如果不能马上过流式，加100μL4%多聚甲醛（PBS配），4℃固定。 细胞内抗原染色方法： 一、两步法：细胞内（细胞质）蛋白质。 二、一步法：细胞内（核）蛋白质。 三、固定/甲醇的两步法。 一、两步法：细胞内（细胞质）蛋白质 在该操作步骤中，固定步骤之后是破膜，在细胞膜上穿孔，这需要在所有后续步骤中持续存在破膜液。这使得抗体可以进入细胞的细胞质。因此，所有细胞内染色必须在存在破膜液的条件下进行。该操作步骤推荐用于体外或体内活化后个体细胞中的胞浆蛋白、细胞因子或其他分泌蛋白的
SiriusRedstaining天狼星红染色方法
SiriusRedstaining天狼星红染色方法 1、来自丁香园 Sirius red苦陈酸染色法 [试剂配制] (1)天狼星红饱和苦昧酸液 O(5,天狼星红10ml，苦味酸饱和液90ml。 (2)天青石蓝液天青石蓝B1(25g(铁明矾1(25g，蒸馏水250ml。溶解煮沸、待冷却过 滤 加入甘油30ml，然后再加入浓盐酸0(5ml。 [染色步骤] (1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 (2)人大青石蓝液染5一lOmin。 (3)蒸馏水洗3次。 (4)天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min (5)无水乙醇直接分化与脱水。 二甲苯透明，中性树胶封固。 [注意事项] (1)细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染。 (2)染色封固后的切片，须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩 注:在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维。 l型胶原纤维:紧密排列，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维o ll型胶原纤维:显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。
皿型胶原纤维:显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。 lv型胶原纤维:显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。 2、来自网页 Sirius Red Staining Protocol for Collagen John A. Kiernan Department of Anatomy & Cell Biology, The University of Western Ontario, LONDON, Canada N6A 5C1 NovaUltra Special Stain Kits Description: It's one of the best understood techniques of collagen histochemistry. Technical details follow, and are followed by some comments and a few references. You should come to grips with the theory, advantages and limitations of this method before using it on a large scale. Picro-sirius red method (after Puchtler et al., 1973; Junqueira et al., 1979). Step 4 is an addition that prevents the loss of dye that happens if the stained sections are washed in water. Fixation: Fixation is not critical, The method is most frequently used on paraffin sections of objects fixed adequately (at least 24 hours but ideally 1 or 2 weeks) in a neutral buffered formaldehyde solution. This protocol has not been tested on frozen sections. Solutions and Reagents: Picro-sirius Red Solution Sirius red F3B (C.I. 35782) ------------------------- 0.5 g
染色方法总结
第一节结缔组织和肌纤维染色 Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法) 用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。 原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。 固定：10%福尔马林 切片：4-6微米 试剂： Weigert铁苏木精液： A液：苏木精1g，无水酒精100 ml。一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。 B液：29%三氯化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。 两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。24h后失去染色能力。 Van Gieson液： 1%酸性复红水溶液 10 ml 苦味酸饱和水溶液 90 ml 临用时1:9混合过虑后使用。 Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水。 2． Weigert苏木精液5-10 min。 3．充分水洗。 4． Van Gieson液1-5 min。 5． 95%酒精迅速分化数秒。 6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。 结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。 体会与说明：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。 二 Masson三色法 试剂： Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。 将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。 Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
(完整版)活性染料染色方法
活性染料染色方法 活性染料根据其活性基因不同，一般可以分为两类。 1.普通型（或称冷染性）活性染料国产X型活性染料属此类。这类染料的活性基因为含有两个活泼氯原子的三聚氯氰。它的化学性质非常活泼，反应能力较强，但染液的稳定性较差，能在低温（20～30℃）下与纤维发生化学反应而染色，同时也只需在低温和较弱碱剂（pH =10.5左右）的条件下完成固色。 2.热固型活性染料国产K型活性染料属此类。它的活性基因也是由三聚氯氰组成，只是活性基团上仅有一个活泼氯原子。它的化学活性较低，反应能力也差，染液相对稳定。因此在与纤维进行反应时要求条件较为剧烈，固色温度要达90℃左右，同时还需较强的碱剂，固色时间也要比X型活性染料长。 属于热固型活性染料的种类较多，它们具有不同的活性基因。由于所含活性基团的反应活性不同，反应条件也各不相同。比如国产KN型活性染料，它的活性基团为β－羟基乙烯砜硫酸酯基，故又称乙烯砜型活性染料，它的反应活性介于X 型与K型活性染料之间，固色温度为60～65℃。除此之外，还有含双活性基团的M型活性染料和含其他活性基团的活性染料。 (一)活性染料染色性能活性染料染色时，能将染料直接染到布上，同时由于它有较好的扩散能力，容易使染料扩散进入纤维内部，但由于此时尚未与纤维起化学反应，很容易用水把大部分染料洗掉，因此必须用碱剂促使染料与纤维产生化学反应，把染料固着在纤维上。前者称为染色，后者称为固色。活性染料与纤维素纤维的键合反应可用下述通式表示： D-T-X + HO-Cell －→ D－T－0-Cell + X- （1） D-SO 2－CH=CH 2 + HO-Cell-→D-SO 2 －CH 2 －CH 2 －O－Cell （2） (1)式是三聚氯氰型活性染料与纤维素纤维在碱剂存在下所发生的键合反应。在碱剂作用下，纤维上羟基离解而使纤维素纤维带负电，成为亲核试剂进攻活性基团中带正电的反应活性中心，发生亲核取代反应，使染料和纤维合为一体。 (2)式是乙烯砜型活性染料与纤维素纤维产生键合反应，使染料固着在纤维上。由于不产生原子间的取代，而产生了饱和化合物，故称为加成反应。 活性染料在溶液中以阴离子形式存在，与直接染料相似，食盐对它也有促染作用。 （二）活性染料染色工艺活性染料染色可根据不同的染色要求，分别采用卷染与轧染两种方法。
革兰氏染色实验总结
革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家Christain Gram创立。 细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH 条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：１）涂片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。 ２）草酸铵结晶紫染1分钟。 ３）自来水冲洗，去掉浮色。 ４) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 ５）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 ６）用蕃红染液复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。
细胞染色方法总结
Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下 将核染为蓝色。Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！ 染色步骤 PI（Propidium Iodide碘化丙啶）染色：是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶(Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料（红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）.但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够！ annexin—v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变。其中，磷脂酰丝氨酸 （Annexin-V,PS）外翻,Annexin—V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合。这样，Annexin-v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态。Annexin—V 结合不同的荧光抗体，就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。 JC—1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体（monomer)存在，发射光以绿光（～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体（aggregation），发射光以红光（-590nm）为主。线粒体本身存在一定的极性（polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC—l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization）时,线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC—1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential）,而与线粒体的形态、体积和密度都无关,因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性,因此，JC—1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下. JC-l染色非常简单。首先可将成品JC—1以DMSO配成储存液（1～5mg/ml)，储存于—20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度.对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液,10—30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主,当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比. 钙黄绿素-AM（Calcein-AM):Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein -AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。因此Calcein —AM仅对活细胞染色 细胞活力鉴定—-台盼蓝染色法
检验中常用染色镜检方式方法的总结
检验中常用染色镜检方式方法的总结 1.革兰染色 ●鉴别革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，指导临床用药等。 ●革兰染色一般步骤： 1）初染：滴加结晶紫染色液于涂片上1min，水洗。 2）媒染：滴加碘液媒染1min，水洗。 3）脱色：将涂片浸入95%酒精，轻摇玻片，脱去染液后，水洗。 4）复染：滴加番红于涂片上复染1min，水洗，吸水纸吸干，油镜观察。 ●革兰染色结果判读：革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为红色。 2.瑞氏染色 ●瑞氏染液配制： 1）瑞氏染液配制： 瑞氏染料830mg 或1g 甲醇（AR ）500ml 或600ml 先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3 个月以上为佳。 2）缓冲液： 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的pH 使染色稳定，PBS 的pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH 恒定。 缓冲液配制（pH6.4~6.8 ，弱酸性）： 配方1 ：1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 配方2 ：1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H 2 O( 新鲜) 加至1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。 ●瑞氏染色一般步骤： 1）取病料涂片、自然干燥 2）滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醛所固定; 3）加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟; 4）水洗、吸干、镜检 ●瑞氏染色结果判读：细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色或紫色。 3.抗酸染色 ●结核分枝杆菌 ●抗酸染色原理：分枝杆菌的细胞壁内含大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以不易着 色。要经过加热和延长染色时间来促使其着色，分枝杆菌中分支菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 ●抗酸染色一般步骤：
考马斯亮蓝染色总结
考马斯亮蓝染色总结 考马斯亮蓝染色法是一种广泛应用于生物学及医学领域的染色技术，其主要作用是使细胞和组织的结构、形态和组成成分可见，从而帮助科学家们更好地进行观察、研究和分析。在本文中，我们将对考马斯亮蓝染色法进行详细的介绍和总结。 1. 染色原理 考马斯亮蓝染色法是以亮蓝G和甲基绿为主要染色剂，通过它们与细胞结构中的核酸和蛋白质发生亲和作用从而染色的。亮蓝G主要染色细胞核及细胞质内的核糖体、蛋白质及其它细胞结构，而甲基绿则主要染色细胞质囊泡、线粒体等细胞质结构。 2. 染色方法 考马斯亮蓝染色法的染色方法一般分为几个步骤：处理标本、脱水、清洗、染色、除色和封片。下面我们将详细介绍每个步骤。 （1）处理标本：首先需要将待染标本进行处理，可以选 择切片或制片方法制备，一般采用的是石蜡切片，用甲醛或卡尼液（一种带有防腐功能的溶液）固定标本，然后用甲醇或乙醇进行脱水。 （2）脱水：脱水是将固定的标本从水溶液中转移到乙醇（酒精）中，这个过程需要逐渐进行，不可以用高浓度酒精来
快速脱水。脱水的目的是防止固定的标本因含水过多而膨胀变形。 （3）清洗：将标本从酒精中取出后，需要清洗干净，以 防止其中残留的酒精对染色的影响。 （4）染色：将标本浸入考马斯亮蓝染液中进行染色。染 色时间一般在几分钟至半小时之间，具体时间根据标本的大小和厚薄来决定。 （5）除色：染色过程结束后，需要将标本进行除色，以 清除过多的染液，防止染色过重。除色是用95%至100%的酒 精进行。 （6）封片：染色和除色结束后，需要将标本封装在玻璃 片上。封装通常使用覆盖片和封片胶，将标本与玻璃片粘合在一起。 3. 染色结果 经过考马斯亮蓝染色后，标本中的不同细胞结构会被染上不同颜色。细胞核染成深蓝色，细胞质染成浅蓝色或颜色较浅，细胞质囊泡、线粒体等细胞质结构则呈现深绿色。通过染色结果，我们可以清楚地观察到样本中不同结构之间的分布情况。 4. 应用领域 考马斯亮蓝染色法广泛应用于生物学、医学及其它相关领域。在生物学中，它可以帮助研究人员观察细胞的形态、结构及其它相关内容，为进一步的研究提供数据支持。在医学领域
用于神经系统研究的脑组织切片染色方法总结
用于神经系统研究的脑组织切片染色方法 总结 引言 神经系统研究中，脑组织切片染色是一种常用的技术手段。通过染色可以使神经元和其他细胞在显微镜下更清晰可见，从而帮助研究人员观察和分析神经网络的结构与功能。本文将总结一些常用的脑组织切片染色方法，以供参考。 常用的脑组织切片染色方法 1. 始染色法 始染色法是一种简单直接的染色方法，常用于初级研究或快速观察。具体步骤如下： 1. 取得新鲜的脑组织切片。 2. 将切片放入染色试剂中，如格里姆染色试剂或快速尼尔红染色试剂。
3. 根据染色试剂的要求，反应一定时间，一般为几分钟至几十 分钟。 4. 将切片从染色试剂中取出，用去离子水洗涤，直至无色。 5. 过脱水步骤，通过多次浓度递增的乙醇溶液使切片干燥。 2. 免疫染色法 免疫染色法可以识别特定蛋白质在脑组织中的分布和表达水平。具体步骤如下： 1. 取得脑组织固定切片。 2. 进行抗原解蓝，使蛋白质暴露在切片表面。 3. 切片用特异性的抗体与目标蛋白质结合，形成抗原-抗体复 合物。 4. 添加荧光标记的二抗，与抗原-抗体复合物结合。 5. 用荧光显微镜观察切片，在适当的波长下可见荧光信号。 3. 组织化学染色法
组织化学染色法通过特定的染色试剂与脑组织中的成分发生化学反应，以显示不同成分的分布和特征。具体步骤如下： 1. 取得脑组织固定切片。 2. 根据需要选择合适的染色试剂，如尼氏染色试剂、威尔森铬染色试剂等。 3. 将切片放入染色试剂中，在特定条件下进行反应，时间根据试剂而定。 4. 洗涤切片，一般使用去离子水洗涤即可。 5. 观察切片，在显微镜下观察不同成分的染色情况。 结论 综上所述，脑组织切片染色法在神经系统研究中起着重要的作用。无论是初级研究还是高级研究，研究人员可以根据需要选择合适的染色方法。然而，在进行相关实验时务必遵循实验室的安全操作规范，并注意染色试剂的使用方法和处理方式。染色结果的准确性和可靠性需要进一步验证和确认。
dna的染色方法 -回复
dna的染色方法-回复 DNA的染色方法，是指将DNA分子与染色剂结合，使其在显微镜下可见，并能通过颜色变化来研究DNA的组成和结构。DNA染色是分子生物学和遗传学研究中非常重要的技术手段之一。本文将一步一步介绍DNA的染色方法，包括常用的吉姆萨染色法、DAPI染色法和荧光原位杂交技术。 首先，吉姆萨染色法（Giemsa staining）是DNA染色的经典方法之一。该方法可以用于染色体的核型分析、细胞遗传学研究和病原体的检测等。下面是吉姆萨染色法的具体步骤。 第一步，制备Giemsa染液。将吉姆萨染液溶于磷酸缓冲液中，浓度通常为5至10。 第二步，处理细胞或染色体。将需要染色的细胞或染色体进行固定，常用的固定方法包括醋酸甲酯固定、甲醛固定和凝胶固定等。固定后，用磷酸缓冲液进行洗涤。 第三步，染色。将固定的细胞或染色体放入Giemsa染液中，在37摄氏度下浸泡20至30分钟，然后用磷酸缓冲液淋洗。洗净后的细胞或染色体可以直接在显微镜下观察。 其次，DAPI染色法是一种特异性染色方法，主要用于染色DNA分子。
DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吡啶）是一种蓝色荧光染料，可以与DNA分子的腺嘌呤核苷酸结合。下面是DAPI染色法的步骤。 第一步，制备DAPI染液。将DAPI溶于磷酸缓冲液中，浓度通常为1微克/毫升。 第二步，处理细胞或组织样本。将样本进行固定，常用的固定方法包括乙酸溶液和甲醛溶液固定。固定后，用磷酸缓冲液进行洗涤。 第三步，染色。将固定的细胞或组织样本放入DAPI染液中，室温下孵育15至30分钟，然后用磷酸缓冲液淋洗。洗净后的样本可以通过荧光显微镜观察，DAPI染色的DNA呈现出明亮的蓝色荧光。 最后，荧光原位杂交技术（FISH）是一种高分辨率的DNA分子定位方法，可以用于检测染色体异常、确定基因组组装和研究DNA序列的位置等。下面是FISH技术的步骤。 第一步，准备探针。选择合适的DNA片段作为荧光标记的探针，可以使用放射性同位素或荧光染料标记。将探针和标记物反应，得到荧光探针。 第二步，处理细胞样本。将需要染色的细胞进行固定，使DNA保持在原位。固定后，用磷酸缓冲液进行洗涤。
骨髓片染色方法
骨髓片染色方法 一、背景介绍 骨髓是人体内产生血液细胞的重要组织，骨髓片染色是一种常用的方法，用于观察和分析骨髓中各种血细胞的形态、数量和分布。本文将详细介绍常用的骨髓片染色方法及其原理。 二、常用的骨髓片染色方法 2.1 Wright-Giemsa染色法 Wright-Giemsa染色法是一种常用的骨髓片染色方法，它可以同时染色骨髓中的细 胞核和细胞质。该方法具有简便、快速、可靠的特点，被广泛应用于临床实验室。 2.2 染色原理 Wright-Giemsa染色法的染色原理是通过染料与细胞成分之间的化学反应来实现的。染料将与细胞中的某些结构特异性地结合，从而在显微镜下呈现出不同的颜色。 2.3 染色步骤 Wright-Giemsa染色方法的步骤如下： 1. 将待染色的骨髓片固定在玻片上。 2. 将固定的骨髓片浸入Wright-Giemsa染料溶液中，染料浓度根据需要进行调整。 3. 在染料中浸泡时间一般为5-10分钟。 4. 取出骨髓片，用水冲洗去掉多余染料。5. 将骨髓片风干后进行观察。 2.4 显微镜观察 完成染色后，将骨髓片放置在显微镜下观察，可以通过调节镜头来观察不同倍数下的细胞形态和细胞质颜色。不同种类的血细胞在染色后呈现出特定的形态特征和染色性质，通过观察不同细胞的形态和染色特点，可以进行血液病的诊断和分类。
三、骨髓片染色的应用领域 3.1 临床诊断 骨髓片染色方法在临床诊断中起着重要的作用。通过观察骨髓中各种血细胞的形态、数量和分布，可以帮助医生判断患者是否有血液病变，并确定病变的类型和程度。 3.2 科学研究 除了在临床诊断中的应用，骨髓片染色方法也广泛应用于科学研究。通过观察和分析骨髓中不同类型血细胞的形态和染色特点，可以深入了解血液系统的发育、功能和病理。这有助于揭示血液病发生的机制，并为疾病的治疗提供理论依据。 3.3 周期性评估 骨髓片染色方法还可以用于周期性评估，跟踪疾病的进展和治疗效果。通过定期观察和统计骨髓中各种血细胞的数量和形态变化，可以帮助医生及时判断治疗效果，并进行调整。 3.4 预防筛查 骨髓片染色方法也可以用于一些疾病的预防筛查。通过对高风险人群进行骨髓片染色，可以早期发现潜在的血液病变，从而进行早期治疗，提高治愈率和生存率。 四、骨髓片染色方法的优缺点 4.1 优点 •Wright-Giemsa染色法操作简便，快速可靠。 •骨髓片染色方法能够提供丰富的形态和染色信息，有助于准确诊断和分类血液病。 •骨髓片染色方法适用范围广泛，不仅在临床中常用，也在科学研究中得到广泛应用。 4.2 缺点 •骨髓片染色方法依赖于操作人员的经验和技术水平，操作不当会影响染色结果。