六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用

吴文长

【期刊名称】《现代医药卫生》

【年(卷),期】2003(019)011

【摘要】@@ 1六次甲基四胺银种类rn1.1 Gomori液[1]:(1)储备液:5%硝酸银5 ml,3%六次甲基四胺银(乌洛托品)100ml将上述两种溶液分装在4℃冰箱中保存.【总页数】1页(P1468-1468)

【作者】吴文长

【作者单位】涪陵中心医院,重庆,涪陵,408000

【正文语种】中文

【中图分类】R36

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染色方法总结

染色方法总结 AgNOR染色法: 1、试剂配制：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。（2）AgNOR工作液取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2次（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次（5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。B 鞭毛染色法: １．试剂配制：甲液：丹宁酸５克氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克福尔马林（１５％）２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克蒸馏水１００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。２．染色方法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

肾小球基底膜改良PASM染色法

肾小球基底膜改良PASM染色法肾活检组织的PASM染色（六氨银染色法）对于观察肾小球系膜、基底膜的各种形态改变具有极重要的诊断价值，特别是对于观察膜性肾病基底膜的钉突形成、淀粉样变性肾病基底膜的双轨和多轨改变等是其他特殊染色所不可替代的。新月体形成中的基底膜断裂、血管炎中的动脉内膜和弹力纤维的变化也应用PASM染色[1]。目前PASM染色存在多种不同的方法，我们采用的是1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化法，且在染液浓度、染色时间和染色温度上做了调整改良，取得了较好的效果，总结经验如下，供同行交流与参考。 1 材料与方法 1.1 标本本院肾内科2010-2012年送检的肾穿刺活检组织标本674例，10%中性福尔马林溶液固定，全自动组织脱水机按活检小标本程序处理，石蜡包埋，切片厚3μm，70℃烤片30- 40min。 1.2 试剂配制 ⑴贮备液：3%六次甲基四胺液500ml和2%硝酸银液100ml储存于4℃冰箱；5%四硼酸钠溶液100ml储存于室温。⑵六胺银工作液：取3%六次甲基四胺液（乌洛托品）50ml加入2%硝酸银液6ml，此时溶液产生乳白色悬浊液，稍搅拌溶液变澄清，最后加入5%硼砂（四硼酸钠）4ml。⑶1%过碘酸：高碘酸1ml；蒸馏水99 ml。⑷8%重铬酸钾：重铬酸钾8g；蒸馏水 100ml。⑸0.5%偏重亚硫酸钠：偏重亚硫酸钠0.5g；蒸馏水100ml。⑹0.2%绿化金溶液：市售氯化金1g/支，溶解于500ml蒸馏水。⑺5%硫代硫酸钠：硫代硫酸钠5g；蒸馏水100ml。 1.3 染色方法 ⑴石蜡切片脱蜡至蒸馏水；⑵1%过碘酸溶液氧化20min；⑶蒸馏水洗30s；⑷8%重铬酸钾溶液氧化20 min；⑸蒸馏水洗30s；⑹0.5%偏重亚硫酸钠1min；⑺蒸馏水洗30s；⑻切片浸入六胺银工作液，置于62℃水浴箱内并逐渐升温至68℃，时间大约15-30min（光镜下控制染色强度）；⑼蒸馏水洗30s；⑽0.2%氯化金溶液调色1 min；⑾蒸馏水洗30s；⑿5%硫代硫酸钠溶液1min；⒀蒸馏水洗30s；⒁稍水洗，用Gill苏木素液淡染细胞核3-5min；⒂用自来水洗3-5min；⒃梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 2 染色结果肾小球基底膜呈黑色，细胞核呈蓝色（图1）图1 肾穿刺活检组织，肾小球基底膜呈黑色，系膜弥漫性增厚，细胞核呈蓝色 3 讨论 PASM染色过程中，染色时间和温度控制是染色成败的关键，染色10min后，需要每隔数分钟在镜下观察染色强度，切片整体由金黄色至棕黄色，直至基底膜呈现黑色；温度过高，切片很快变黑而难以掌握，有时还会造成组织脱片现象。1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化能将组织内的多糖化合物更好的暴露出醛基，游离醛基还原六氨银的银离子成为金属银而呈黑色。其他染色方法，一般是采用单一氧化法（1%过碘酸或8%重铬酸钾）[2]，且作用时间较短（10min-20min左右）。偏重亚硫酸钠的作用是去除残留的铬酸。氯化金调色至组织呈灰白色为佳，可排除组织中的黄色色调，使背景更清晰。硫代硫酸钠的作用是固定已反应的银盐和清除未还原的银离子。

免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用

免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍【摘要】Objective:To analyze the effect of immunofluorescence and other special staining methods in the pathological diagnosis of renal biopsy.Methods: 58 patients with chronic kidney disease admitted in our hospital from September 2014 to September 2016 were included in the object of study.All patients underwent renal biopsy puncture to obtain tissue using paraffin, respectively by immunofluorescence, six staining of methanol method, Congo red staining and mucin (PAS) and three Masson dye staining, staining results in different ways.Results: The positive rates of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq in the patients with different types of nephropathy were significantly higher than those of IgA nephropathy and membranous nephropathy in patients by immunofluorescence staining.In the comparison of different staining methods, it was found that the positive rate of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq detected by immunofluorescence staining was significantly lower than that of other staining methods, P<0.05.There was no difference in the diagnostic rate of other staining methods, P>0.05.Conclusion:Comparing with other methods, the rate of pathological diagnosis of renal biopsy is lower than that of other methods.It is recommended to use other special staining methods to diagnose renal tissue.%目的:分析免疫荧光染色及其他几种特殊染色法在肾活检病理诊断中的应用效果.方法:临床纳入58例我院2014年9月至2016年9月期间收治的慢性肾脏疾病患者作为研究对象,所有患者均进行肾穿刺活检,穿刺取得组

肾穿刺标本制片的质量控制

肾穿刺标本制片的质量控制 1 标本的固定和保存 1.1 光镜及免疫组化检查标本的固定：选择合适的固定液，及时固定。组织固定是制片的关键，组织干涸及固定不良是染色质量欠佳、脱片的主要原因。首先，将切好的标本应尽快放进固定液里固定，以防止组织的自溶、结构破坏，切勿使其干涸。其次，不同的固定液固定使肾穿刺活检标本切片在不同的镜下观察。因光镜与免疫组化检查共用一份标本，所以在选择固定液时应选择对二者均有良好的染色效果的含有磷酸盐缓冲液的固定液固定。笔者多采用PB-FA固定液进行固定，固定效果好，值得推荐使用。配方：浓甲醛15%，无水乙醇65%，0.05 mol/L pH 7.2-7.4磷酸缓冲液20%。其特点是固定的组织收缩小，肾小管上皮固定良好，无干裂状；组织中的红细胞不被溶解，HE染色及特殊染色色泽鲜艳，对比鲜明；免疫组化染色阳性信号表达好。常温下固定时间以2小时为佳。 1.2 免疫荧光检查标本的处理及保存：正确的标本处理是荧光标记成功的前提。荧光标本不用任何固定液固定，用冷藏或冷冻法保存。分切后的标本应放置在浸有生理盐水的纱布内并装入小标本瓶，盖好瓶口及时冷藏，以防止组织干涸、溶解破坏，阳性表达减弱；纱布以湿润为佳，不要太湿，以免组织浸泡肿胀而影响观察。分好的标本应立即切片染色为最佳。保存的方法有：（1）不包埋保存：于1个小时内制片的可将标本置于4℃冰箱内冷藏保存；（2）包埋保存：如遇当天不能切片的情况，为避免组织的反复冻溶，组织形态改变，不利于观察，最好的保存方法是将标本包埋在金属支持器上，置于-18℃冷冻保存，保存不应超过2天；（3）切片保存：切好的冰冻切片如不立即染色可将切片放在-18℃保存冷冻2天左右。标本应尽可能在短时间内处理，若时间较长则应置于-70℃的冰箱或液氮罐内保存。 2 包埋、切片为保证包埋的平整性，石蜡包埋应在石蜡熔融状态时将组织放好压平，然后迅速冷却。肾穿刺组织相对较小，切取最大切面有利于确诊。因此，包埋时应注意将所有的标本包在同一平面，为切片完整及切取最大切面的提供保障。肾小球细胞的数量、种类、基底膜的形态以及免疫复合物等特殊蛋白的有无和沉积部位，对肾小球疾病的诊断至关重要，要求切片厚度应＜3 μm，如切片过厚会造成细胞重叠，导致细胞增生的假象，与邹万忠等报道相同[1]。常规及特殊染色石蜡切片厚度以1-2 μm为适宜，免疫组化染色切片以2-3 μm最佳，且无皱折及刀痕。荧光染色冰冻切片的制作：将冰冻包埋剂滴在金属支持器上，待其凝固后修平，再将组织摆好压平，并在肾组织上滴加冰冻包埋剂。冰冻切片厚度适中，以5-6 μm为佳，太薄阳性信号表达弱，太厚可致假阳性，不利于观察及判断。

PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会

PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)006 【总页数】2页(P693-694) 【关键词】PASM-Masson染色;特殊染色;肾穿刺活检【作者】李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇【作者单位】南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025 【正文语种】中文【中图分类】R361.2 经皮肾穿刺活检病理诊断是当今肾脏病理学的重要组成部分，是肾脏疾病诊断必不可少的检查方法。肾穿刺活检病理检查主要包括常规HE染色、特殊染色(PAS染色、PASM染色、Masson染色和刚果红染色)、免疫组化染色或免疫荧光染色以及电镜检查。其中，特殊染色能直观地显示肾小球、肾小管、肾间质、血管及特殊蛋白的沉积等。本科室总结20多年5万余例肾穿标本的染色经验，将PASM染色与Masson染色相结合［1］，简化步骤并取得优质的染色效果，有效提高临床标本的利用率，节省制片成本及劳动量，有助于临床病理诊断。现将PASM-

Masson染色法在肾穿刺标本特殊染色中的应用及注意事项介绍如下。 1.1 材料南京军区福州总医院病理科每年共接收肾穿刺活检标本约4 000例，常规行 HE、特殊染色(PAS、PASMMasson)、免疫组化染色及电镜检查。 1.2 试剂六胺银工作液的配制:蒸馏水20 ml+3%六次甲基四胺水溶液10 ml+5%硝酸银水溶液0.5 ml+5%四硼酸钠水溶液 2.5 ml，试剂现配现用(3%六次甲基四胺水溶液和5%硝酸银水溶液于4℃冰箱保存)。 1.3 染色方法与步骤 (1)石蜡1 μm厚切片，常规脱蜡入水。(2)2%过碘酸氧化15～20 min，流水稍洗，再用蒸馏水洗。(3)浸入56～58℃预热的六胺银工作液中30～40 min，20 min后将切片移入新的六氨银工作液中继续染色至组织着色，蒸馏水洗2 min×3次。(4)0.2%氯化金水溶液调色1～2 min，显微镜下观察，至基膜呈明显黑色，蒸馏水洗2 min×3次。(5)浸入0.25%硫代硫酸钠水溶液中1～2 min，自来水洗2 min×3次。(6)Harrias苏木精染色5～10 min，自来水洗。(7)1%盐酸水溶液分化数秒，自来水洗15 min。(8)1%冰醋酸促染2～3 s，入Masson液染色5～8 min，立即流水洗;1%磷钼酸分化3～5 min，再用1%醋酸水溶液2～3 s。(9)0.1%固绿水溶液染色3～5 min，急入水稍洗。(10)迅速吹干，中性树胶封固［2］。肾小球鲍曼囊及毛细血管襻基膜呈棕黑色，弹力纤维及网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，细胞间质及胶原纤维呈绿色，免疫复合物呈红色，组织结构清晰，着色均匀(图1～4)。在PASM-Masson染色过程中，需注意以下问题:(1)六胺银工作液应现用现配，先将3%六次甲基四胺水溶液与5%硝酸银水溶液混合呈乳白色，瞬间透明，待染色时再加入硼砂。(2)硼砂不易溶于水，配液前将硼砂置于水浴箱中预热，充分溶解后方可使用。(3)切片1 μm厚为宜，切片太厚不宜观察基膜病变和组织结构。(4)水浴箱温度不宜过高，控制在56～58℃最佳，使组织缓慢均匀着色。(5)切片

肾活检组织标本的制作

第三章第10节肾活检组织标本的制作前言肾活检病理是诊断肾脏疾病的重要手段，许多疾病的命名主要源于肾活检组织学改变，如局灶节段性肾小球硬化和膜性肾病。肾活检病理诊断的正确性与肾组织标本制作质量关系密切，质量不过关（如切片不够薄，染色不清晰）将直接造成诊断错误，因此，应重视肾活检标本处理（取材、固定、包埋、切片到染色）的各个环节，以保证病理诊断的正确性。肾脏病理包括尸检和活检标本，对于肾脏疾病而言，主要是活检标本，本章主要介绍肾活检标本的处理。目前常规肾活检标本来源有两类：一类为切割式活检，一类为穿刺抽吸式活检，前者所取组织较多，但对肾脏损伤较大，不便在临床推广，临床常采用穿刺抽吸式活检。一、肾组织取材肾活检穿刺时病理技术员必须到场，以便对肾组织标本进行正确的处理，在技术员不能到场的情况下，必须按以下要求对标本处理者进行培训：①处理穿刺所获组织应轻柔，避免牵拉或用力钳夹组织；②分取组织时应在蜡板上进行，用锋利的刀片快速切割，避免用力挤压组织；③尽量用含固定液（光镜或电镜）和生理盐水的专用镊子把分割好的组织块移入固定瓶内；用镊子时避免钳夹组织过度而造成组织受挤压； ④要求穿刺者尽量取两条组织。穿刺所获第一条含皮质组织送光镜检查，第二条组织在肉眼观察下进行分割，尽量切取皮质区1mm组织送电镜检查，余下组织送免疫荧光检查。如果穿刺仅获一条组织，所取组织有三种情况（图3-10-1）：整条均为皮质，皮髓组织和皮-髓-皮质组织，髓质区血供丰富，颜色略红，皮质区组织略白，分布的红色小点是肾小球，根据穿刺获取不同组织的情况，如图3-10-1所示进行分取。也有人建议纵切后，一半送光镜检查，一半分割后分送免疫荧光和电镜检查，但存在组织太细，不易观察的缺点，临床较少使用。⑤分送免疫荧光检查的组织用无菌的TRIS或PBS溶液浸湿的沙布轻轻包裹，置于培养皿中，避免直接置于冰块上，以免局部组织因冷冻收缩，造成结构破坏[1,2]。肾活检穿刺组织的分取图3-10-1 肾活检穿刺组织的分取 LM：光镜；IF：免疫荧光；EM：电镜二、光镜标本的处理（一）固定光镜标本的固定液有多种。目前最常用的固定液为10%的中性福尔马林。中性福尔马林固定液的配方：甲醛（40%）100 ml、蒸馏水900 ml、磷酸二氢钠4 g、磷酸氢二钠6.5 g，固定时间至少6~12 h。（二）前期处理 1. 脱水脱水的目的是去除固定和水洗后组织中的水分，便于后续的透明和浸蜡，常用的脱水剂是乙醇或丙酮，后者脱水能力比乙醇强，但对组织收缩较大，致使组织变脆，多用于快速脱水。为了彻底脱水，一般常规采用不同浓度梯度的乙醇进行脱水：①70%乙醇10~20 min，⨯2次；②80%乙醇10~20 min，⨯2次；③90%乙醇10~20 min，⨯2次；④95%乙醇10~20 min，⨯2次；⑤无水乙醇10~20 min，⨯2次。 2. 透明透明的目的是便于石蜡包埋，因为组织脱水后，所用的脱水剂大多数不能和石蜡相混合，必须通过透明剂的作用才能浸蜡，所用的透明剂必须既能和脱水剂相混合，又能和石蜡相混合，起到桥梁作用，不但能提出脱水剂，又能代替脱水剂利于石蜡的浸入。当组织全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，故称为透明。透明剂都是石蜡溶剂，绝大多数都不能与水混合，最常用的透明剂包括二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油、丁香油等。

肾穿刺活检病理 PASM 染色方法改良探讨

肾穿刺活检病理 PASM 染色方法改良探讨曲乐;刘树军;徐进;高丹;娄岩【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2015(000)004 【总页数】3页(P617-618,619) 【作者】曲乐;刘树军;徐进;高丹;娄岩【作者单位】吉林大学第二医院肾病内科，吉林长春 130041;吉林大学第二医院肾病内科，吉林长春 130041;北京大学第一医院电镜室;吉林大学第二医院肾病内科，吉林长春 130041;吉林大学第二医院肾病内科，吉林长春 130041 【正文语种】中文目前肾穿刺活检是肾病内科诊断肾脏疾病的主要方法[1-3]。在肾穿刺活检病理诊断中，显示肾小球基底膜病变及免疫复合物定位主要采用PASM (Periodic Acid-SilverMethenamine) 染色法。在临床实践中发现，传统的PASM染色法染色效果不佳，不能显示免疫复合物沉积的情况，基底膜显色较重，背景较深，染色时间过长，并且常有杂质粘附于组织表面，影响临床病理诊断。针对以上问题，本实验对染液的配制方法、染色条件及切片的厚度进行了调整。总结出配方合理、染色稳定和可重复性强的染色方法。 1.1 标本处理与分组随机选取吉林大学第二医院肾病内科肾穿刺活检组织标本256例，经10%中性福尔马林溶液固定24 h，组织常规脱水、透明、浸蜡，石蜡包埋，切片厚度为1 μm，63℃烤片4.5 h。将标本随机分为两组，每组为128例，分别用传统PASM染色方法和改良PASM染色方法染色，在同一时间，同一环境

下进行染色，染色结果由经验丰富的病理医师采用双盲进行评价。 1.2 染液配置方法 1.2.1 传统六氨银溶液配制方法3%六次甲基四胺水溶液25 ml，加入5%硝酸银水溶液2.5 ml，震荡至乳白色悬浊液变为清亮透明，加入5%四硼酸钠5 ml，加入22.5 ml蒸馏水，最后加入4%硼酸7滴，混匀后过滤立即使用，如果不立即使用放入4℃冰箱避光储存。 1.2.2 改良六氨银溶液配制方法3%六次甲基四胺水溶液25 ml，加入2%四硼酸钠5 ml，加入5%硝酸银水溶液2.5 ml，震荡至乳白色悬浊液变为清亮透明，加入30 ml蒸馏水，最后加入4%硼酸5滴，混匀后过滤立即使用，如果不立即使用放入4℃冰箱避光储存。 1.2.3 Masson染液配制方法 3.2 g磷钨酸、4 ml冰醋酸、2.4 g变色酸2R及1.5 g亮绿，依次逐一加入400 ml的蒸馏水中，混匀后备用。 1.3 PASM染色方法1μm组织切片脱蜡至水；1%过碘酸氧化5 min；蒸馏水冲洗2 min；置切片于新鲜配制的六氨银作液中，于65℃温箱中加温20-30 min 肉眼见切片呈褐黄色，镜下见肾小球基底膜呈黑色为止；根据银染情况选择性的用0.1%氯化金分化，3%硫代硫酸钠定影15 s，蒸馏水洗2 min；经苏木精染核5-6 min，蒸馏水冲洗2 min；1%盐酸酒精水溶液分化数秒，自来水洗2min；弱氨水返兰数秒；Masson染液套染数秒，镜下观察染色情况适时终止；高浓度梯度酒精脱水；二甲苯透明，中性树胶封片。 1.4 统计学方法采用SPSS16.0统计软件，计数资料采用χ2检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。 2.1 两组PASM染色制片质量情况评价128例标本经改良PASM染色，其中2例染色过度，3例染色过浅，1例多余银颗粒杂质沉积，共计6例制片质量不合格，制片质量合格率为95.31%。128例标本经传统PASM染色，33例染色过度，1

肾活检病理标本的制作方法

肾活检病理标本的制作方法一光镜标本的制作与染色肾活检组织光镜标本的制作包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤，各部依次进行，前一步是后一步的基础。（一）固定将供光镜检查的肾穿刺组织尽快浸入固定液内，迅速凝固，防止自溶和腐败，使其尽可能地保持与生活状态相似的结构，有利于切片和观察，这是组织固定的目的。常用固定液有甲醛和乙醇。 1.甲醛应配制成中性甲醛为好，具有穿透力强、固定均匀、被固定组织不收缩而且柔韧的特点，常用10%的溶液。 2.乙醇具有固定和脱水的双重作用。可以保存组织内的糖类物质和尿酸结晶，但易使组织收缩且不能保存脂类物质，常用其95%的溶液。 3.有时为保存两者的优点，可用FAA混合固定液，其中包括10%甲醛10ml、冰醋酸 5ml和95%乙醇85ml，其中冰醋酸具有渗透性强和使组织膨胀的特点，借以抵消乙醇的缺点。固定液内的组织可置于室温或4℃的环境中保存，绝不可冷冻结冰。（二）脱水脱水的目的是将经过固定的组织内的水分去除，以便使切片时的支撑物（石蜡）充分进入组织。最常用的脱水剂是乙醇，为避免脱水过程中组织收缩，必须用逐级升高浓度的乙醇依次浸泡脱水：70%乙醇-80%乙醇-90%乙醇-95%乙醇-无水乙醇。（三）透明透明的目的是将能与石蜡结合的媒介剂浸入组织，并将不能与石蜡结合的脱水剂（乙醇）置换出来，并使组织透明，为包埋做准备。 1.常用的透明剂是二甲苯。组织在二甲苯中的时间不宜过长，否则可使组织松脆收缩。 2.氯仿也可用作透明剂，其透明性能较弱，但不会致使组织松脆。（四）浸蜡浸蜡的目的是是组织内有一定的支撑物，使之具备一定的硬度和韧度，便于切出满意的切片。常用石蜡的熔点是60-62%，有时为保存组织内的抗原，可用48-50%的低熔点石蜡。（五）包埋

肾穿刺的定义及治疗

肾穿刺肾穿刺renopuncture即肾活检，也称肾穿刺活检术。由于肾脏疾病的种类繁多，病因及发病机制复杂，许多肾脏疾病的临床表现与肾脏的组织学改变并不完全一致。比如，临床表现为肾病综合征，病理可以呈现为微小病变、轻微病变、轻度系膜增生、膜性肾病、膜增生性肾炎、局灶节段硬化等多种改变，其治疗方案及病情的发展结果也差别极大。临床意义：另外，肾脏病的不同发展时期其组织病理的改变也不一致。比如，同样为IgA肾病，可以在病理上表现为从接近正常的肾组织到多数肾小球硬化的几乎所有发展阶段。所以了解肾脏组织形态学的改变对临床医生判断病情、治疗疾病和估计预后方面提供了重要的依据。可以说，肾脏病理检查的开展是肾脏病学发展过程中的一个飞跃。目前，肾脏病理检查结果已经成为肾脏疾病诊断的金指标。概括起来，肾穿刺检查的临床意义主要有以下几点：⑴明确诊断：通过肾穿刺活检术可以使超过三分之一患者的临床诊断得到修正。 ⑵指导治疗：通过肾穿刺活检术可以使将近三分之一患者的临床治疗方案得到修改。 ⑶估计预后：通过肾穿刺活检术可以更为准确的评价肾脏病患者的预后。另外，有时为了了解治疗的效果或了解病理进展情况（如新月体肾炎、狼疮性肾炎及IgA 肾病等）还需要进行重复肾脏病理检查。为明确诊断，指导治疗或判断预后，而又无穿刺禁忌证时，内科各种原发、继发及遗传性肾实质疾病（尤其是弥漫性病变）皆可肾穿刺。 ⑴原发性肾脏疾病：①急性肾炎综合征，肾功能急剧坏转、疑急进性肾炎时，应尽早穿刺；按急性肾炎治疗2～3月病情无好转应做肾穿。②原发性肾病综合征，先治疗，激素规则治疗8周无效时肾穿刺；或先穿刺，根据病理类型有区别的治疗。③无症状性血尿，变形红细胞血尿临床诊断不清时，无症状性蛋白尿，蛋白尿持续>1g/d诊断不清时应做肾穿刺检查。 ⑵继发性或遗传性肾脏病：临床怀疑无法确诊时，临床已确诊，但肾脏病理资料对指导治疗或判断预后有重要意义时应做肾穿刺。 ⑶急性肾功能衰竭：临床及实验室检查无法确定其病因时应及时穿刺（包括慢性肾脏病人肾功能急剧坏转）。 ⑷移植肾：①肾功能明显减退原因不清时，②严重排异反应决定是否切除移植肾；③怀疑原有肾脏病在移植肾中复发。禁忌症：肾穿刺是一种创伤性检查，选择穿刺病例时不但需掌握好适应征，还要认真排除禁忌征。 ⑴绝对禁忌证：①明显出血倾向，②重度高血压，③精神病或不配合操作者，④孤立肾，⑤小肾。 ⑵相对禁忌证：①活动性肾盂肾炎、肾结核、肾盂积水或积脓，肾脓肿或肾周围脓肿。②肾肿瘤或肾动脉瘤。③多囊肾或肾脏大囊肿。④肾脏位置过高（深吸气肾下极也不达十二肋下）或游走肾。⑤慢性肾功能衰竭。⑥过度肥胖。⑦重度腹水。⑧心功能衰竭、严重贫血、低血容量、妊娠或年迈者。适应症： ⑴各种类型的肾小球肾炎，肾小球肾病，肾病综合征，全身疾病引起的肾脏病如系统性红斑狼疮、淀粉样变性、糖尿病、过敏性紫癜、尿酸性肾病、结节性动脉周围炎等。 ⑵原因不明的持续性无症状蛋白尿和血尿，以及病因不明的高血压。 ⑶急性肾小管及间质性病变。不典型的慢性肾盂肾炎，特别是与慢性肾炎鉴别有困难时，需要做肾活检，以明确诊断。 ⑷原因不明的急性肾功能衰竭，在诊断和治疗上有困难时，或慢性肾脏病的原因不明，病情突然加重者，做肾活检可从帮助明确诊断和指导治疗。 ⑸肾脏移植后，肾活检可帮助诊断排斥反应或者药物如环孢素A毒性反应，指导调整治疗。

组织切片特殊染色中的防脱片处理黎家华

组织切片特殊染色中的防脱片处理黎家华在组织切片特殊染色制作的过程中,因受很多不确定因素的影响，容易导致组织片从载玻片上脱落，而致染色失败,尤其是嗜银染色过程中,因组织要经过不同试剂的处理,再用蒸馏水或缓冲液反复冲洗,组织脱片的概率就更大。从而造成材料和工时的浪费，笔者总结多年嗜银染色的实践经验，就嗜银染色过程中的防脱片处理做一下介绍。 1 材料和方法 1.1 材料临床肾穿刺活检采取的活体肾组织、实验动物的肝、肾组织等，网状纤维染色银氨液和肾小球基膜六胺银染色液等系列染色试剂、载玻片、清洁液(浓硫酸:蒸馏水:重铬酸钾=5:5:1)、防脱片剂(APES；氨醛三已氧基硅烷，福洲迈新生物技术开发有限公司提供)、蛋白甘油、树脂胶即白色乳胶、甘油明胶液等。 1.2 方法 1.2.1 载玻片的防脱片处理载玻片放入加有洗衣粉的清水中煮沸,认真擦洗,用超声波清洗机超声30分钟，清水冲洗干净，清洁液浸泡24小时，清水彻底冲洗，蒸馏水洗3次,95%酒精浸泡24小时,蒸馏水洗30分钟×3次,150℃烘干,涂防脱片剂(APES,用丙酮1:50稀释),将洁净的载玻片放入其中30秒取出，片刻后入丙酮洗2次,再蒸馏水洗2次,洗去多余的APES,晾干备用。 1.2.2 肝、肾组织处理中性甲醛液固定24小时,常规石蜡包埋切片,厚度3um，60～75℃烤片 4小时。 1.2.3 嗜银染色切片常规脱蜡至水,分别作（1）网状纤维嗜银染色：高锰酸钾液氧化5分钟, 水洗,1%草酸水溶液漂白1～2分钟,蒸馏水洗，2.5%硫酸铁铵水溶液媒染15分钟,蒸馏水洗2次,银氨溶液10～20分钟,蒸馏水洗3次,10%福尔马林液还原1分钟,流水冲洗5～10分钟,蒸馏水洗,0.2%氯化金调色5分钟,蒸馏水洗,5%硫代硫酸钠固定3分钟,蒸馏水洗,核固红染色液染色10分钟,蒸馏水洗,常规酒精脱水、透明、封固；（2）肾小球基膜六胺银染色：0.5%高碘酸氧化20分钟,蒸馏水洗3次后,入六胺银工作液中1～2小时、恒温58℃,蒸馏水中洗2 次,0.2%氯化金调色1分钟,蒸馏水洗,核固红染色15分钟,马休黄染色1分钟左右,无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。 2 结果在嗜银染色过程中,没有出现脱片现象。网状纤维染色和肾小球基膜六胺银染色清晰。 3 讨论为防止嗜银染色过程中脱片，我们先后使用过蛋白甘油、树脂胶即白色乳胶、甘油明胶液等作粘片剂[1],均匀涂抹于载玻片上,虽然具有一定防脱片效果,但还是不能完全避免脱片。蛋白甘油是实验室常用的一种粘片剂：用鸡蛋清和甘油1:1混合配制,适用于常规染色和一般的特染；树脂胶即白色乳胶是用白色乳胶与水以1%～2%的比例配制使用；甘油明胶液是用1%明胶100ml加甘油12ml,在常规的制片中都很常用。由于粘片剂中含有的甘油、明胶、乳胶是水溶性的,切片经氧化剂处理、草酸漂白、高温染色等过程,易被水溶解而减轻或失去了粘附作用,组织容易脱片。在网状纤维嗜银染色过程中，有以下步骤易脱片：切片经过高锰酸钾氧化、1%草酸漂白后水洗、铁明矾媒染、浸氨银液后水洗易脱片[2]；在肾小球基膜嗜银染色过程中,经过高碘酸氧化、高温六胺银染色时和蒸馏水洗时切片易脱片。 APES(氨醛三已氧基硅烷)是被用于免疫组化染色的防脱片剂,其防脱片效果明显,我们将这一技术用于嗜银染色中,其防脱片结果令人非常满意,没有发生脱片。要达到这一目的,载玻片的防

肾活检在诊断中的必要性

肾活检在诊断中的必要性肾活体组织检查简称为肾活检，就是用穿刺针或外科手术的方法从肾脏取出少许肾组织以进行病理学检查。肾活检是一项非常重要的检查手段，能对许多肾脏病的诊断、治疗以及预后评估提供重要的依据，其价值是其他血、尿化验所不能替代的。一些研究表明，肾活检后临床诊断的修正率达34-63%，治疗方案的修正率达19-36%。可见，肾活检确实对临床诊断与治疗提供了很大的帮助。近十几年来，肾活检操作技术取得了非凡的进步。这一方面是由于穿刺针的改进，另一方面是由于超声技术的应用。在超声指导下，医生们可以更清晰地了解肾脏的大小与结构，从而显著提高了手术的安全性和取材的成功率。也正因为如此，肾活检已成为国内外普遍开展的一项检查手段。在糖尿病出现肾脏损害的患者中典型的糖尿病肾病占60%，另有13%更符合缺血性肾脏病，其余27%合并其它肾脏病（膜性肾病、IgA肾病等）。因此，对表现为显著镜下血尿或肉眼血尿、大量蛋白尿、肾功能快速恶化的患者应及时进行肾活检，明确病因，对症治疗。临床观察也表明，把握好肾活检的指征，做好术前准备，糖尿病肾病患者肾活检后并发症的发生率并不比其它肾脏疾病的患者高。需要指出的是，2型糖尿病出现糖尿病肾病时其视网膜病变的发生率远比1型糖尿病低，而且与病程密切相关。我们自己的观察，微量白蛋白尿期、蛋白尿期和肾功能不全期，视网膜病变的发生率依次为29.3％、46.0％和77.4％。因此，应该客观地评价视网膜病变与糖尿病肾病之间的关系。虽然，1型和2型糖尿病肾病的肾脏病理组织学改变非常相似，但是1型患者的病变更为典型，而2型患者的病变就较为多样，往往受高血压、动脉硬化和肾缺血等因素的影响。当然，肾活检组织切片发现较具特征性的病变（KW结节、微血管瘤、渗出性病变）有助于作出诊断，但不要疏漏一些早期病理改变［肾小球和(或)肾小管肥大，GBM和(或)肾小管基膜均匀增厚，出、入球动脉透明变性］，尤其是在合并其它肾脏病的情况下。微量白蛋白尿检测无法对一些“正常白蛋白尿”的早期病例做出诊断，有必要结合GFR 测定和动态监测血压对这些患者的诊断进行进一步的研究。糖尿病肾病不同于一般的慢性肾小球疾病，应该对其特殊性有所认识，要正确理解糖尿病肾脏损害病因的多元性，借助肾穿刺活检和病理检查，提高糖尿病肾病诊断和治疗水平。肾穿刺肾穿刺肾穿刺的临床意义：肾穿刺renopuncture即肾活检，也称肾穿刺活检术。由于肾脏疾病的种类繁多，病因及发病机制复杂，许多肾脏疾病的临床表现与肾脏的组织学改变并不完全一致。

肾穿刺活检技术

前言肾活检组织学检查（简称肾活检）的创立及其临床应用为肾脏病学成为独立学科和发展作出了重要贡献。肾活检对各类肾脏疾病的病理诊断、指导治疗和判断预后有重要意义。操作方法包括经皮肾活检、开放式肾活检、经腹腔镜下肾活检及经血管内肾活检等，其中经皮肾穿刺活检是目前最主要的肾活检方法。近20年来，肾活检技术更加成熟，穿刺成功率接近100%，取材合格率大大提高，且并发症的发生率大大减少[1~4]。一、经皮肾活检发展史 1923年，Gwyn[5]进行了首例开放式肾活检。1934年，Ball[6]采用穿刺针经皮穿刺肾组织成功诊断肾肿瘤，此后陆续有人用此方法进行肾肿瘤的诊断。直到1952年，瑞典医师Alwall[7]，丹麦医师Iversen和Brun[8,9]借鉴肝穿刺活检技术，使用静脉肾盂造影定位，采用坐位方式，首次以经皮肾穿刺的方法获取到足够用于诊断肾脏病的肾组织。但采用该方法仅有40%的成功率。随后，Kark和Muchrake[10]对穿刺方法作了改进：采用Franklin-Vim-Silverman型穿刺针，患者俯卧位接受手术，并在腹部垫硬枕固定肾脏，穿刺成功率达到96%，并且无严重并发症发生，随后这一方法逐渐成为肾穿刺活检的主要方法。早期的肾活检主要根据肾脏所对映体表解剖位置进行盲穿或静脉肾盂造影进行定位。至1985年，B超肾脏实时定位[11]（real time scanning）问世后，肾活检定位及引导更加准确。自动穿刺枪的问世肾活检技术更易于掌握，肾活检相关并发症明显下降，威胁生命的并发症发生率降至<0.1%，肾活检穿刺成功率达到95%以上[1, 2, 12, 13]。国内，赵魁丹等[14]于1958年最先开展经皮肾穿刺活检并取得成功。20世纪60至70年代，已有少数医院尝试了肾活检，直至80年代后肾活检才广泛应用于临床[15]。在1983年召开的“肾小球疾病肾活检诊断”专题座谈会上，全国已有多家单位进行病例报告，但肾活检例数仅1011例（南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所281例）[16]。此后肾活检术在全国广泛推广，并常规用于肾脏疾病的诊断，同时肾活检技术也不断发展。从20世纪60至70年代“按体表解剖针下定位法”发展至如今的“实时B超定位与引导”[3]。自1979年，南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所开展经皮肾活检，并大胆探索，不断创新，在国内创造性地建立了“1秒钟快速经皮肾活检术”，肾活检成功率达到99.3%[17, 18]。1992年，在原有垂直进针的基础上，通过反复实践探索，改为“斜角进针经皮肾活检术”[4]。从经典的垂直进针改进斜角进针穿刺，大幅度减少了肾活检出血性并发症，并增加了肾活检取材质量，在2万多例肾活检中无1例需手术处理或死亡，并使肉眼血尿和临床血肿并发症发生率逐渐下降至1%左右。为我国推广肾活检技术，提高安全性等方面奠定了坚实的基础（表3-9-1）。表3-9-1经皮肾活检发展史二、其他肾穿刺活检方法（一）开放式肾穿刺活检即在外科手术下暴露肾脏，直接切取、穿刺或活检钳取得肾组织。开放式肾活检取材成功率高，止血方便。Nomoto等[19]对因各种原因而无法行经皮肾活检的患者进行开放式肾活检，成功率达100%，严重并发症并不多见。但由于开放式肾活检损伤大，费时，费力，难以被患者接受，临床开展并不多。只有在经皮肾活检失败或有禁忌症，而又必须行肾活检时才考虑。（二）经腹腔镜肾穿刺活检近年来，随着腹腔镜技术的成熟，有研究采用腹腔镜经腹膜后进行肾活检。Shetye等[20]报道活检成功率达96%，多数患者在穿刺当天或次日出院，出血并

2023年-2024年检验类之临床医学检验技术(师)题库及精品答案

2023年-2024年检验类之临床医学检验技术（师）题库及精品答案单选题（共45题） 1、关于含铁血黄素尿错误的是 A.尿含铁血黄素试验阳性提示慢性血管内溶血 B.尿中有铁排出 C.只要存在慢性血管内溶血，本试验阳性结果可持续数周 D.慢性血管内溶血全过程本试验都是阳性 E.含铁血黄素尿由血红蛋白在肾小管上皮细胞内分解而成【答案】 D 2、触酶阳性，对新生霉素敏感的是 A.金黄色葡萄球菌 B.淋病奈瑟菌 C.表皮葡萄球菌 D.肺炎链球菌 E.肠球菌属【答案】 C 3、NK细胞表面标志为 A.CD15，CD16 B.CD19，CD20 C.CD16，CD56 D.CD15，CD56

E.CD20，CD23 【答案】 C 4、下列哪项符合恶性组织细胞病骨髓象特点 A.淋巴样组织细胞、单核样组织细胞可增多 B.中性粒细胞碱性磷酸酶积分常增加 C.一次骨髓穿刺未找到异常组织细胞可排除恶性组织细胞病 D.多数患者骨髓有核细胞增生极度活跃 E.吞噬性组织细胞对诊断恶性组织细胞病具有重要意义【答案】 A 5、下列能够产硫化氢的细菌是 A.大肠埃希菌 B.普通变形杆菌 C.肺炎克雷伯杆菌 D.黏质沙雷菌 E.痢疾志贺菌【答案】 B 6、粒红比例 A.脾功能亢进 B.急性化脓性感染 C.真性红细胞增多症 D.放射病早期

E.以上都不是【答案】 B 7、不需要进行血药浓度监测的药物是（）。 A.苯妥英钠 B.青霉素 C.氨茶碱 D.地高辛 E.环孢素【答案】 B 8、关于钙的叙述不正确的是（）。 A.血钙几乎全部存在于血浆中 B.离子钙可采用选择性电极进行测定 C.肠道pH值明显影响钙的吸收 D.甲状旁腺功能低下可使血清钙升高 E.骨骼肌中的钙可引起肌肉收缩【答案】 D 9、不属于骨髓活检适应证的是 A.低增生性白血病 B.全血细胞减少，反复骨穿为"骨髓稀释" C.怀疑骨髓转移癌 D.怀疑巨幼细胞贫血

三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较

三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较韩福兰;汪家文;刘靖;刘应时;刘芳【摘要】目的：探讨肾穿刺组织最合适的脱水程序。方法随机选取新鲜肾穿刺标本80例，每例取材3份，固定后按不同脱水程序分为3组：A组为新型超声结合水浴加温组、B组为常规大体标本脱水组、C组为小标本单独脱水组。3组所做的切片均进行HE染色和特殊染色。结果小标本单独脱水组，HE染色切片厚薄均匀平整，细胞染色鲜艳，无皱缩现象，对比度清晰，各项特殊染色着色鲜艳、定位准确，优于其余两组。结论应用小标本快速脱水组制作的切片质量优良，完全满足肾组织临床病理诊断的需要，既缩短了制片时间，又提高了制片质量。%To investigate the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues.Methods 80 renal biopsy specimens had been selected. Three small pickling tissues were cut from each case and were divided into three groups:Group A for fast ultrasonic processing technology, which combined with the water bath method. Group B for routine dehydration of large samples. Group C for dehydration program of small specimen. The three groups of sections were observed by HE staining and special staining.Results Rapid dehydration program of small specimen was better than the other two groups. In this group, all the HE and special staining slices were uniform and smooth, with bright staining, clear contrast and accurate positioning.Conclusion Rapid dehydration program of small specimens was the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues, which not only shortened the production time, but also improved the sample quality.

XX医院肾组织标本处理临床技术操作规范

XX医院肾组织标本处理临床技术操作规范一、肾活检标本的初步处理为了保证迅速、及时、合适的分切组织，技术员必须到肾活检现场，并做好充分的准备工作。【准备工作】 1．取一块纱布用生理盐水浸透，以拧不出水而又潮湿为宜。纱布内放一块编好号的胶布(因胶布潮湿后不易写字)，置人培养器皿内备用，每个肾穿刺患者，需分别准备一块这样的纱布。纱布不能太湿，否则肾组织浸在水中容易造成组织自溶；也不能太干，以免组织干涸，影响抗原性。两者均会影响染色效果。 2．用一个清洁的5ml标本瓶，加入光镜固定液3ml(FAA固定液：甲醛溶液10ml，冰醋酸5ml，95％乙醇85 ml混匀)，盖塞紧后备用(以防乙醇挥发)。 3．用一个清洁的5ml标本瓶，加入冷电镜固定液3ml[2．5％戊二醛10ml，双蒸馏水40 ml，混匀后再加pH为7．4的磷酸缓冲液(PBS)50ml，冰箱内保存]，置冰箱内备用。 4．解剖显微镜一架，冰瓶一个。眼科手术平镊一把，直尺一把，双面刀片一把，蜡板一块。 5．上述光镜固定液小瓶、电镜固定液小瓶及培养皿均应在肾穿刺术数小时前准备完毕，并将其置于冰箱内备用。【取材判断】经皮肾活检术所获取的肾组织一般包括以下几种成分：皮质组织、皮髓交界组织以及皮质一髓质一皮质组织。穿刺取得肾组织后，立即用生理盐水冲洗数次以除血迹。 1．迅速判断所取组织是否为肾组织，还是其他类型的组织，如

肌肉组织、结缔组织、脂肪组织等。 2．当确定为肾组织后，立即将组织置于蜡板上，迅速测量其长度(mm)，并记录。 3．用解剖显微镜或放大镜进行观察，以区别皮质和髓质，并仔细观察标本是否有肾小球。在解剖显微镜下，肾皮质色较淡，皮质区可见一些分布不规则，朦胧的红色小点，此即肾小球。使用解剖显微镜可大大帮助区别组织，作出正确的判断。但随着经验的积累，也可用肉眼判定。 4．要使肾活检诊断的可靠，所取标本的量是至关重要的。如无肾小球或皮质部分少于1 ml，要考虑再次穿刺，取得的组织要迅速分切后固定。【标本分切】用国产18号Menghini型穿刺针(针长15cm，内径1．4mm)取得的肾组织粗细适中，一次取得组织以1．5～2．Ocm为最佳。组织取出后用小镊子将组织轻轻地夹到蜡板上，镜下观察，量出长度，用锐利的刀片将组织间隔切成1mm、2mm及4mm长的数段，分别供电子显微镜、免疫荧光、免疫酶标、光学显微镜检查用。首先分取电镜标本，要求组织少而精，取皮质区lmm长度即可，要求肾小球至少1个；其次分配免疫病理检查所需组织，约2mm，要求肾小球至少3～5个；其余组织留作光镜检查用，要求肾小球至少10个。【标本处理】 1．免疫荧光及免疫酶标将分切后的组织迅速放人事先冷藏的培养皿内的湿纱布中，置人冰瓶立即送至恒温冷冻切片机内(<一30℃)进行包埋、切片。如果不能马上切片，标本必须立即保存于一40～一70~c低温冰箱内，以保持抗原活性，防止抗原移位或流失，但在低温冰箱内放置时间不宜超过2d。 2．光镜将分切后的组织平放在蜡板上，勿使其扭曲，用小镊