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(收稿:2004-12-10)
(校对:郭顺明)
肝癌动物模型的建立
徐 静 综述 李 旭 审校
作者单位:230022 合肥市 安徽医科大学附属医院感染科
自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来,人们对肝癌动物模型的研究不断深入,逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。
一、自发性肝癌动物模型 是指实验动物未经任何有意识的人工处置,在自然情况下所发生的肿瘤。实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。14月龄以上的C3Hf 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3He 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。
自发性肝癌动物模型最大的优点是,系完全在自然条件下发生的疾病,排除了人为因素,肝癌的发生、发展与人类肝癌相似,反映了动物的肿瘤易感性和环境致癌物质、促癌物质的积聚程度,但其发生率低且不稳定,发生时间较长、难预测且参差不齐,荷瘤动物个体在动物(性别、体重、肿瘤发生时间等)和肿瘤(大小、数目、部位等)两方面差异较大,造模有一定的困难。该模型主要用于病理学研究和作为移植性肿瘤的瘤源。
二、诱发性肝癌动物模型 诱发性肝癌模型是指用化学、物理、生物的致癌因素在实验条件下诱发动物发生肝癌,它是
进行实验肿瘤学研究的常用方法。其中化学性致癌物最常见,如亚硝胺类(DEN )、黄曲霉素类(AFB1)、氨基偶氨燃料类(3′-Me -DAB )、芳香胺类化合物(2-AAF )等。最常用的实验动物为大鼠,多选用敏感性高的纯系大鼠。目前常用的品系有:Wistar 、Spraque -Dawley 和Fischer344,前两者在国内应用更为广泛。大鼠的年龄和性别均对致癌性有影响。一般认为幼年雄性大鼠对致癌的敏感性较高,但有时也可出现幼年雌性大鼠诱癌成功。鼠龄以3个月以内、体重120克以下的大鼠诱癌启动率高于月龄大的大鼠,而体重200克以上或1岁以上的大鼠的肝癌启动率低,很难诱发肝癌。这与其组织中的肝细胞或幼稚细胞的状态以及细胞的增殖水平有关。
诱发性大鼠肝癌的给药途径主要有经口给药法和注射给药法。经口给药法又分为自动口服给药和强制灌胃两种,前者是将水溶性致癌物溶于水中或将非水溶性致癌物混于饲料中让大鼠自动摄取,此法简单方便,但由于动物饮水和饲料的摄取量不同,不能保证给准确药量;后者是将溶于水或悬浮于载体的诱癌剂通过特制的灌胃针头给大鼠灌胃,此法能准确掌握给药量,但强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤和心理上的影响。注射法也是一种常用的方法,可将
诱癌剂溶于可溶性液体中或悬浮于载体中,通过各种部位注射
给药,其中腹腔注射最常见,可根据诱癌剂的不同选择单次大剂量注射或多次小剂量注射。诱发性大鼠肝癌的诱癌方法很多,致癌化合物可单一应用也可联合应用。
该模型特点为起病隐匿、病程较长,肿瘤多为弥漫结节型,诱导周期长,常需3～5月甚至1～2年。在诱癌过程中动物的死亡率相对较高。但由于诱发因素和条件可人为控制,诱发率远高于自然发病率,故在肝癌实验研究中优于自发瘤,多用于肝癌病因学、发生学、发病机理、遗传及生物学方面的研究。张嘉宁[2]报道用DENA诱导大鼠肝癌模型具有与人肝癌相似的影响学表现,适合肝癌影像学研究。应用DENA诱发的大鼠肝癌,其在经历肝炎、肝硬化的基础上形成,与人肝癌的发生过程相似,对人类临床治疗将起到指导作用,也是较理想的适合影像学和分子生物学研究的动物模型。
三、移植性肝癌动物模型 移植性肝癌模型是指用肝癌组织或细胞(源于动物或人)移植到动物体内(肝脏、肝外组织或器官)或非肝脏来源的恶性肿瘤如乳腺癌等移植到动物的肝脏所形成的肝癌动物模型。瘤源可以是自发的、诱发的、切除的人肝癌标本或肝病细胞株。根据受体动物不同移植性肝癌模型可分为正常动物移植性肝癌模型和免疫缺陷动物移植性肝癌模型。前者受体动物多为小鼠和大鼠,后者受体动物多为裸鼠、裸大鼠。可将肿瘤移植于肝脏内,也可植入皮下、腹腔等部位。
对于正常动物移植性肝癌模型,目前应用较多的为自发性肝外-肝同种移植性大鼠肝癌模型。该模型采用Walker-256瘤株(来源于大鼠自发性乳腺癌,AFP阴性,具有部分肉瘤性质,将其植入肝内能较好地模拟人肝癌的膨胀性和浸润性生长方式),通过不同途径移植入大鼠的肝脏,从而形成大鼠移植性肝癌模型。实验动物一般选用雄性Wistar大鼠,也有用SD雄性大鼠[3]。国内研究已经证实,将Walker-256瘤株移植肝脏后,在瘤体直径小于3mm时主要由门静脉供血,直径大于3mm时主要由肝动脉供血,由于其血供特点和生长行为与人类肝癌相似,故该模型广泛应用于肝癌介入等实验室治疗、影像学诊断及侵袭和转移等方面的研究。目前国内多采用瘤块肝包膜下移植的方法制作该模型,但操作相对复杂。李琦等[4]和邵成伟等[5]采用Walker-256细胞浆肝内注射建立大鼠移植型肝癌模型,简便、周期短、成功率高。
常用的免疫缺陷动物移植性肝癌模型有人—裸小鼠异种移植肝癌模型、人—裸大鼠异种移植肝癌模型、人肝癌裸鼠皮下-肝原位移值瘤模型。裸小鼠、裸大鼠为无胸腺、缺乏T淋巴细胞的无毛鼠。不同的鼠龄对移植性肿瘤及其转移的影响不同,主要与不同龄鼠NK细胞活性不同有关。移植在年幼或新生裸鼠体内的肿瘤比移植在成年的裸鼠更易生长和形成转移。不少学者报道,在幼年裸鼠(3周龄)体内表现为明显侵袭和高度自发性或实验性转移的肿瘤,在成年鼠(6～8周龄)体内,往往呈局限性生长或低转移。利用裸鼠进行异种移植有较高的移植成功率,潜伏期短,但大部分转移率低。根据原位移植理论建立起来的人癌瘤原位移植模型克服了这一缺陷,它不仅维持了原有瘤组织的结构,而且还保持了人体瘤的绝大部分生物学特性,特别是转移特性,在宿主体内能以类似于患者体内的方式显示其恶性行为[6]。Sun等[7]建立的裸小鼠人肝癌原位转移模型LCI-D20,自发转移率达100%且转移早。郑建明等[8]建立的人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型也具有高存活率、高侵袭率和高转移率。李军等[9]采用皮下注射Hep G2细胞株(1.2×106)建立裸鼠肝癌模型,运用瘤细胞活体种植法,不同于以往的反复进行瘤细胞体内外交替培养再种植的方法,周期短,成功率达100%。瘤细胞多数有完整的包膜,肿瘤直径大于1cm时,中间多有干酪样坏死,其生长行为与肝癌相似,适于行肝癌的实验性研究。
用移植方法制作的肝癌模型周期一般较短,肿瘤的大小和位置较易控制,但肿瘤是生长正常肝组织背景下,与人肝癌多发生在肝炎、肝硬化背景下有所不同,且操作相对复杂。裸鼠人肝癌移植模型技术要求高,且饲养困难、价格昂贵。
四、转基因动物肝癌模型 是指借助基因工程手段将特定的外源基因导入动物的染色体内,使其发生整合、遗传繁殖,并由此培养出携带外源基因的转基动物所形成的肝癌模型。导入基因的方法常有显微注射、逆转录病毒感染、胚胎干细胞植入等方法。自1974年美国学者Jeanisch应用显微注射法获得SV40DNA转基因小鼠以来,这种方法为目前最广泛和最成功应用的方法。实验动物多为CD1、C57BL/6×DBA、C57BL/6×SJL等品系小鼠。转入动物体内的外源性基因可为单基因(如HBx、c-myc、SV40等),也可为双基因(如c-myc/TGF-α、c-myc/ TGF-β1、HBx/c-myc等)。转入单基因建立的肝癌动物模型比转入双基建立的动物型成功率高,方法步骤简单,但转入双基因建立的动物模型形成所需时间明显缩短,利于实验研究。
目前,国外已较多应用转基因肝癌动物模型来研究癌基因活性和肝癌发生等情况。Deane等[10]将LFABP-cyclin D1转基因小鼠和A1b-TGF-β1转基因小鼠杂交产生了cyclin D1/TGF-β1双转基因小鼠肝癌模型。结果显示cyclin D1/TGF-β1双转基因小鼠比同年龄匹配的LFABP-cy clin D1单转基因小鼠肝癌发病率明显提高,肿瘤的多样性、负荷量、异质性也明显增高,并证明TGF-β1在cyclin D1过度表达的肝脏中启动了干细胞的活化和促进了肿瘤发展的进程。Dupuy等[11]利用人抗凝血酶Ⅲ(AT Ⅲ)基因和SV40T抗原(SV40-Tags)序列构建的外源DNA,注入C57B/6J雄性小鼠胚胎中,建立了SV40转基因小鼠肝癌模型来研究肿瘤血管生成和组织因子表达情况。研究发现,肝癌中有明显异常的血管生成,在腺瘤阶段,即有肝窦状隙的增殖、改造和动脉化(arterialization);在有些窦状隙,可发现具有内皮细胞显型的肝细胞植入内皮细胞中,提示了局部血管生成的模式。通过这个转基因模型发现这些异常的血管生成主要与血小板活化有关,并发现这种血小板的活化是被内皮细胞和侵袭性巨噬细胞产生的组织因子(TF)所激活,HIF-1a、VEGF、TF在肝癌血管生成中均起关键性作用。此模型可作为抗肿瘤药物如抗肿瘤血管生成或抗肿瘤血栓生成药物的筛选。
转基因肝癌动物模型不仅是研究癌基因活性和肝癌发生的一种极为重要的新方法,同时也为肝炎病毒相关性肝癌的研究提供了新的途径。由于HBV一般不感染培养的细胞,也不
感染常用的实验动物,因而在一定程度上限制了对其致肝癌机制的研究。目前国外建立肝炎病毒转基因肝癌动物模型对HBV相关性肝癌做了较多的研究。Yu等[12]应用C57BL/6×DBA小鼠建立了HBx转基因小鼠肝癌模发现HBx启动了肝癌的形成,并在转基因肝癌鼠中有高度的HBx蛋白表达,说明HBx抗原作为HB V编码的病毒反式激活因子,与肝癌的发生有明显的相关性。Kojima等[13]应用CD1小鼠也建立了HBx转基小鼠模型,结果提示HBx的表达降低了肝细胞增殖过程中端粒酶的活性,从而在肝癌发生中起重要作用。但在其他的转基因研究中[14,15],HBx基因并未引起动物肝癌。然而,当以同样的转基因小鼠与WHV/c-myc转基因小鼠杂交获得的HBx/c-myc 转基因小鼠可发展为肝癌。Terradillos等[16]建立的HBx/c-myc 转基因小鼠肝癌模型证明HBx基因在WHV/c-myc小鼠肿瘤发生过程中可起加强作用。Lakhtakia等[17]也通过HBx/c-myc转基因小鼠肝癌模型证明HBx和c-myc基因的协同作用导致了肝癌的发生。由于使用传统的显微注射法的外源基因是随机整合的,整合率不能控制,且不同的转基因小鼠具有不同的基因遗传背景,有些HBV转基因小鼠以很高的比例发展为肝癌,另一些却未出现肝脏损伤。Youliang等[18]利用基因打靶技术,通过定点同源重组将HBs Ag和HBx基因分别敲入小鼠的p21位点,建立了两个转基因小鼠肝癌模型。结果发现,雄性p21-HBs Ag转基因小鼠在15-24月发展为肝癌;雄性和雌性p21-HBx转基因小鼠自18个月后均发展为肝癌。更说明HBx基因与肝癌发生有明显的相关性,HBsAg也在HBV相关肝癌的形成中发挥了重要作用。而同年龄p21-HBsAg转基因雌鼠未发展为肝癌,这与人类慢性HBV感染中男性肝癌发病率高于女性的流行病学资料是一致的,同时在雄性p21-HbsAg转基因小鼠肝癌中发现ER-β的转录水平极度升高,提示ER-β在HBs Ag相关肝癌中起重要作用。
转基因动物肝癌模型制作技术要求极高,价格昂贵,国内开展的尚较少。但其为肝癌的基础理论和临床应用研究开辟更理想的研究途径,具有广阔的前景,是肝癌动物模型未来发展的方向。
总之,理想的肝癌模型应符合以下条件:(1)肿瘤生长与血供特征与人类肝癌相似;(2)简单而易于复制;(3)价廉。上述各类动物模型均有其优缺点,每位研究者应根据各自研究的目的、实验室的条件等来建立合适的肝癌动物模型。
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(收稿:2004-07-27)
(校对:郭顺明)
给动物建个“家”活动方案
给动物建个“家”活动方案 (总3页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
《给动物建个“家”》活动方案 北京市海淀区东北旺中心小学张嘉媛 一、活动目标 1．知道蜗牛生活在适宜的栖息地中，并在栖息地进行各种生命活动。 2．能够较长时间饲养一种动物，并持续观察动物的生活。尝试用不同的方法观察蜗牛的生活。 3．能够对蜗牛进行细致的观察，并获取更多信息。 4．体会动物的生存与环境息息相关，我们要保护环境。 二、活动重难点 知道动物需要生活在适宜的环境中，并进行各种生命活动。 三、活动资源 蜗牛图片、玻璃或塑料透明的盒子（方便学生观察）、泥土、水、菜叶等。 四、注意事项 1．由于地域和环境的差异，可用蚂蚁或一些方便获取的小动物代替蜗牛。 2．本活动设计难度较大。（1）可以先全班讨论形成记录后，再让学生将自己的想法画下来。（2）也可以在全班讨论后，让学生用准备好的材料为蜗牛建个“家”。课下再思考自己的建造方案，并画在学生活动手册上。 3．小动物极容易吸引学生的注意力，为了方便控制课堂，最好在需要观察时再出示小动物，以免影响后续的课堂观察。 五、活动过程 （一）回顾蜗牛的身体外形和运动特点 1．同学们，上节课我们已经认识了蜗牛，谁能说说蜗牛的身体外形有哪些特点 教师用纸卡写上身体各部分名称，让学生在蜗牛图上相应位置贴好。
【提示】此活动让学生在黑板上对应蜗牛图片，将已经写好名称的身体部分贴在蜗牛图片上。这样用时短又达到了复习的目的。 2．我们在上节课还观察了蜗牛的运动。谁能来说说蜗牛是怎样运动的？ 【教学意图】带领学生复习了上节课对蜗牛外形和运动特点的观察认识，为本节课“家”的建造做铺垫。 3．为了更好地继续观察蜗牛，我们来给蜗牛建个“家”吧！（板书课题：给动物建个“家”） （二）明确任务，创建蜗牛的“家” 1．讨论交流：蜗牛需要一个什么样的“家” 【预设1】学生可能会说：有土、有水的地方。 【预设2】学生可能会说：阴暗、潮湿的水边或者土里。 2．讨论交流：我们用什么材料来模拟或者直接搭建蜗牛的“家” 【预设】找个方便观察的盒子（最好是透明的），放适量的土并喷些水，创造潮湿的环境，放在阴暗背光的地方或者在盒子上方搁一块遮光板。 【教学意图】首先，通过让学生思考蜗牛的“家”是什么样的，学生会不自觉地将动物的家和人类的家进行对比，从而形成正确的认知，比如：是个房子、挺温暖的、适合爬行等。然后，引导学生回忆，从哪里找到蜗牛，进而加深对“家”的认识。（阴暗、潮湿、有土的地方）在考虑可以用什么材料来模拟或者直接搭建蜗牛的“家”时，学生把思考如何绘制蜗牛的“家”与实际建造情况联系起来，选取方便易得的材料。 【提示】如果学生回答有困难，可以适当放一段蜗牛活动的视频，以帮助学生回忆。本课可以不出示真实蜗牛，避免蜗牛吸引学生注意力而影响了对”家”的思考、绘制和创建。 3．画设计图。 【预设1】放一些菜叶或者挖个小坑，不要放在特别冷的地方以免蜗牛不愿意活动等。
二十种常见实验动物模型
二十种常见实验动物模型 一、缺铁性贫血动物模型 缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。 IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下： 实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB≥130g/L。 建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC 配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量<15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂
含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。 模型指标：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10μmol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60μmol/L。 需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研究。根据具体的研究需要，也可以适当调整建模方法。 二、白血病动物模型 用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCID－hu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCID－hu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCID－hu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类器官移植物。 造模方法：
原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型
World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/459758451.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/459758451.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/459758451.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/459758451.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞 移植瘤小鼠模型 韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。
人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用
人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用 王全凯1，杨全会2，郭静2，谢广云1，崔涛1，许荣焜2，许建宁1* 1. 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 100050 2. 中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005 摘要：目的建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物制剂疗效的观察。方法将人原发肝癌手术新鲜组织移植于BALB/c裸鼠皮下，建立人肝癌组织裸鼠移植瘤动物模型；于同体移植后第15 天连续ig给予长科制剂（CKBM），通过观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，测定瘤体体积和质量、抑瘤率以及进行组织病理学观察，初步评价CKBM的抗肿瘤疗效。结果人肝癌组织裸鼠移植瘤保持了人肝癌组织特性，并能通过同体移植传代；观察发现CKBM对人肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤率达45.71%，对癌细胞生长有一定的抑制作用。结论在成功建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型基础上，观察发现CKBM具有一定的抗肿瘤疗效。 关键词：肝癌；裸鼠；移植瘤；动物模型；抑瘤率 中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)03 - 0398 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.03.018 Establishment and application of implantation model of human hepatocellular carcinoma in nude mice WANG Quan-kai1, YANG Quan-hui2, GUO Jing2, XIE Guang-yun1, CUI Tao1, XU Rong-kun2, XU Jian-ning1 1. National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China 2. Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China Abstract:Objective The human hepatocellular carcinoma model was established by implantation in BALB/c nude mice. Its characteristics were certified in the model which was used for the observation of antitumor efficacy. Methods Human hepatocellular carcinoma were sc implanted to BALB/c nude mice for the establishment of the implantation model of the human hepatocellular carcinoma in BALB/c nude mice. The nude mice were exposed to the pharmaceuticals from CK Life Sciences Limited by ig on day 15 after the implantation to find out its healing efficacy through the animal reflecting, the occurring time, volume, weight of tumors, the rate of tumor inhibited, and pathological histology. Results The characteristics of human hepatocellular carcinoma could be kept with passaging by autograft. The tumor inhibiting rate of the pharmaceuticals was 45.71%, showing the certain inhibitory effect on growth of tumor cells. Conclusion A certain antitumor efficacy of the pharmaceuticals made by CK Life Sciences Limited is found out on the basis on the human hepatocellular carcinoma model in nude mice established successfully. Key words: hepatocellular carcinoma; nude mice; implanted tumor; animal model; tumor inhibitory rate 人类肝癌的基础和临床实验研究多数都借助于实验动物模型。目前，以人肝癌组织移植裸鼠建立的动物移植瘤模型是最接近人类肝癌的整体实验模型，是肝癌基础和临床实验研究理想的动物模型。人肝癌组织裸鼠移植瘤模型是指把人肝癌组织块接种于裸鼠皮下建立的实验动物模型，常用于筛选抗肿瘤药物和制剂、实验性治疗和抗肿瘤机制研究[1]。基于为肝癌实验和临床研究以及药物筛选提供体内实验系统的目的，本研究建立了人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物长科制剂（CKBM）疗效的观察。 1材料与方法 1.1实验动物 BALB/c（nu/nu）裸小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供）。饲养于中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学部 收稿日期：2013-06-03 作者简介：王全凯（1977—），男，北京人，主管技师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132199 E-mail: kylewang@https://www.360docs.net/doc/459758451.html, *通信作者许建宁，硕士生导师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132592 E-mail: jnx999@https://www.360docs.net/doc/459758451.html,
肝癌动物模型的建立_徐静
共识.中华肝脏病杂志,2004,12∶425～428 11 Perrillo RP ,Lai CL ,Liaw YF ,et al .Predictors of HBeAg loss after lamivudine treatment for chronic hepatitis B .Hepatotogy ,2002,36∶186～194 12 Rizzetto M ,Tassopoulos NC ,Goldin RD ,et al .Extended lamivu -dine treatment in patients with HBeAg -negative chronic hepatitis B .J Hepatol ,2004,41∶1070～1076 13 Ryu SH ,Chung YH ,Choi MH ,et al .Long -term additional lamivu -dine therapy enhances durability of lamivudine -induced HBeAg loss :a prospective study .J Hepatol ,2003,39∶641～619 14 Chien RN ,Yeh CT ,Tsai SL ,et al .Determinants for sustained HBeAg response to lamivudine therapy .Hepatology ,2003,38∶1267～1273 15 党红星,何瑞,马跃东.拉米夫定致小儿锥体外系反应二 例.中华儿科杂志,2004,42∶436 16 Lok ASF ,Zoulim F ,Locarnini S ,et al .Monitoring drug resistance in chronic hepatitis B virus (HB V )-infected patients durin g lamivud ine therapy :evaluation of performance of INNO -LiPA HBV DR assay .J Clin Microbio ,2002,40∶3729～3734 17 Suzuki F ,Suzuki Y ,Tsubota A ,et al .Mutations of polymerase , precore and core promoter gene in hepatitis B virus during 5-year lamivudine therapy .J Hepatol ,2002,37∶824～830 18 Qaq ish RB ,Pharm D ,Mattes KA ,et al .Ad fovir dipivoxil :A new antiviral agent for the treatment of hepatitis B virus infection .Clin Therapeut ,2003,25∶3084～3099 19 Bozdayi AM ,E yigun CP ,Turkyilmaz AR ,et al .A novel pattern (sW195a )in surface gene of HBV DNA due to YSDD (L180M plus M204S )mutation selected during lamivudine therapy and success -ful treatment with adefovir dipivoxil .J Clin Virol ,2004,31∶76～77 20 Qarugan RB ,Gomez LC ,Serrano PL .Use of adefovir in the treat -ment of the chronic hepatitis B virus infection with res istance to lamivudine .Transplant Proc ,2003,35∶1841～1843 21 Villeneuve JP ,Durantel D ,Durantel S ,et al .Selection of a hepati -tis B virus strain resistant to adefovir in a liver transplantation pa -tient .J Hepatol ,2003,39∶1085～1089 22 梁扩寰,主编.肝脏病学.第1版,北京:人民卫生出版社, 1995.520 23 张瑞琪,缪晓辉,倪武.膦甲酸钠治疗慢性乙型肝炎47例. 中华传染病杂志,2002,20∶180～181 (收稿:2004-12-10) (校对:郭顺明) 肝癌动物模型的建立 徐 静 综述 李 旭 审校 作者单位:230022 合肥市 安徽医科大学附属医院感染科 自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来,人们对肝癌动物模型的研究不断深入,逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。 一、自发性肝癌动物模型 是指实验动物未经任何有意识的人工处置,在自然情况下所发生的肿瘤。实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。14月龄以上的C3Hf 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3He 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。 自发性肝癌动物模型最大的优点是,系完全在自然条件下发生的疾病,排除了人为因素,肝癌的发生、发展与人类肝癌相似,反映了动物的肿瘤易感性和环境致癌物质、促癌物质的积聚程度,但其发生率低且不稳定,发生时间较长、难预测且参差不齐,荷瘤动物个体在动物(性别、体重、肿瘤发生时间等)和肿瘤(大小、数目、部位等)两方面差异较大,造模有一定的困难。该模型主要用于病理学研究和作为移植性肿瘤的瘤源。 二、诱发性肝癌动物模型 诱发性肝癌模型是指用化学、物理、生物的致癌因素在实验条件下诱发动物发生肝癌,它是 进行实验肿瘤学研究的常用方法。其中化学性致癌物最常见,如亚硝胺类(DEN )、黄曲霉素类(AFB1)、氨基偶氨燃料类(3′-Me -DAB )、芳香胺类化合物(2-AAF )等。最常用的实验动物为大鼠,多选用敏感性高的纯系大鼠。目前常用的品系有:Wistar 、Spraque -Dawley 和Fischer344,前两者在国内应用更为广泛。大鼠的年龄和性别均对致癌性有影响。一般认为幼年雄性大鼠对致癌的敏感性较高,但有时也可出现幼年雌性大鼠诱癌成功。鼠龄以3个月以内、体重120克以下的大鼠诱癌启动率高于月龄大的大鼠,而体重200克以上或1岁以上的大鼠的肝癌启动率低,很难诱发肝癌。这与其组织中的肝细胞或幼稚细胞的状态以及细胞的增殖水平有关。 诱发性大鼠肝癌的给药途径主要有经口给药法和注射给药法。经口给药法又分为自动口服给药和强制灌胃两种,前者是将水溶性致癌物溶于水中或将非水溶性致癌物混于饲料中让大鼠自动摄取,此法简单方便,但由于动物饮水和饲料的摄取量不同,不能保证给准确药量;后者是将溶于水或悬浮于载体的诱癌剂通过特制的灌胃针头给大鼠灌胃,此法能准确掌握给药量,但强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤和心理上的影响。注射法也是一种常用的方法,可将 诱癌剂溶于可溶性液体中或悬浮于载体中,通过各种部位注射
肿瘤动物模型的构建——白血病篇
肿瘤动物模型的构建——白血病篇 导读白血病( Leukemia )是一种常见的恶性血液疾病，俗称血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及35 岁以下成人中发病率位居第一[1] 。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方法和应用。 第一章：白血病基本常识白血病是常见液体瘤白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血细胞，如红细胞、血小板和白细胞：造血干细胞分化成各类血细胞(图片来自https://www.360docs.net/doc/459758451.html, 网站) 白血病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、电离辐射、药物、毒物、病毒、遗传因素等有关。 白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性
和慢性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白 血病（AML ）、急性淋巴细胞白血病（ALL ）、慢性髓系白血病（CML ）和慢性淋巴细胞白血病（CLL ）。儿童白血病90% 以上是急性的，其中急性白血病中70% ～80%是ALL。第二章：实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用 的细胞株白血病中常用的小鼠品系用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示：最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形成肿瘤或 腹腔内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该 类模型与白血病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白 血病模型异种移植示意图[2] 尾静脉注射接种模型，可形成全身性扩散的白血病模型。符 合白血病临床过程规律，此模型以动物生存期作为评价药效 的主要指标，并对采血样本进行血细胞的形态学检测。下面以尾静脉注射模型实验步骤为例： 根据实验目的选择实验小鼠和细胞（如NOD-SCID 小鼠和人急性早幼粒细胞白血病细胞株）；荷瘤细胞量一般1-2 ×
【CN110004109A】一种肝癌类器官模型的体外构建方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910255261.0 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人 南通大学附属医院 地址 226001 江苏省南通市西寺路20号 (72)发明人 郑文杰 姚登福 张捷 金云峰 倪温恺 徐育青 (74)专利代理机构 南通市永通专利事务所(普 通合伙) 32100 代理人 葛雷 (51)Int.Cl. C12N 5/071(2010.01) C12N 5/09(2010.01) (54)发明名称 一种肝癌类器官模型的体外构建方法 (57)摘要 本发明公开了一种肝癌类器官模型的体外 构建方法，将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮 细胞，按特定比例混悬于培养基A；培养至第4天， 半量换液维持培养；第7天开始，换为培养基B，连 续培养7天；第14天传代扩增培养。本发明基于肿 瘤微环境中复杂的细胞构成，快速构建大小均 一、结构稳定、可检测抗癌药物有效性，并可扩增 培养的3D肝癌类器官体外模型。本发明构建的肝 癌类器官模型方法简易，构建迅速，可操作性强， 适用于研究肝癌发生发展机制、以及肝癌药物高 通量筛选等， 具有产业化意义。权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 110004109 A 2019.07.12 C N 110004109 A
1.一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：包括下列步骤： （1）将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A，静置培养；（2）第4天使用培养基A半量换液，维持培养；（3）第7天换为培养基B培养7天；（4）第14天取肝癌类器官消化传代，消化后的细胞按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养；所述培养基A包括：青霉素、链霉素、I型鼠尾胶原蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基； 所述培养基B包括：青霉素、链霉素、转铁蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、Wnt3a、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。 2.根据权利要求1所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，使用计数仪计数，按7:2:1的特定比例，混悬于培养基A。 3.根据权利要求书2所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混匀于培养基A后，计数并按每孔2000个细胞使用排枪均匀地接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，每孔接种细胞混悬液体积为100μL。 4.根据权利要求书3的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按比例混悬于培养基A，接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，然后放入37℃二氧化碳培养箱，静置培养，尽量避免移动。 5.根据权利要求书4所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：第4天半量换液一次，使用微量移液枪紧贴培养基液面，吸弃孔中50μL培养基，并加入等量培养基A。 6.根据权利要求书5所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第7天，使用微量移液枪，紧贴培养基液面，吸出旧培养基；再沿孔壁缓慢加入100μL培养基B，隔日吸弃50μL培养基，加入等量培养基B，持续培养7天。 7. 根据权利要求书6所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第14天，使用1000μL移液枪，吸出96孔板中所有类器官置离心管，吸弃上清，加入500μL Accutase放入37℃二氧化碳培养箱孵育30min，离心去上清后使用培养基A计数、重悬并稀释，按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养。8. 根据权利要求书1、2、3或4所述的一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养基A包括：100U/mL青霉素、100μg/mL 链霉素、2~10μg/mL I型鼠尾胶原蛋白，1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol/mL谷氨酰胺、4~8%胎牛血清、10~50ng/mL表皮生长因子、10~50ng/mL碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基；培养基B包括：100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2~10μg/mL转铁蛋白、1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol /mL谷氨酰胺、8-12% 胎牛血清、2~50ng/mL Wnt3a、10~50 ng/mL表皮生长因子、10~50 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、10~100 ng/mL肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。 权 利 要 求 书1/1页2CN 110004109 A
给动物建个家活动方案
给动物建个家活动方案 Final approval draft on November 22, 2020
《给动物建个“家”》活动方案 北京市海淀区东北旺中心小学张嘉媛 一、活动目标 1．知道蜗牛生活在适宜的栖息地中，并在栖息地进行各种生命活动。 2．能够较长时间饲养一种动物，并持续观察动物的生活。尝试用不同的方法观察蜗牛的生活。 3．能够对蜗牛进行细致的观察，并获取更多信息。 4．体会动物的生存与环境息息相关，我们要保护环境。 二、活动重难点 知道动物需要生活在适宜的环境中，并进行各种生命活动。 三、活动资源 蜗牛图片、玻璃或塑料透明的盒子（方便学生观察）、泥土、水、菜叶等。 四、注意事项 1．由于地域和环境的差异，可用蚂蚁或一些方便获取的小动物代替蜗牛。 2．本活动设计难度较大。（1）可以先全班讨论形成记录后，再让学生将自己的想法画下来。（2）也可以在全班讨论后，让学生用准备好的材料为蜗牛建个“家”。课下再思考自己的建造方案，并画在学生活动手册上。 3．小动物极容易吸引学生的注意力，为了方便控制课堂，最好在需要观察时再出示小动物，以免影响后续的课堂观察。 五、活动过程 （一）回顾蜗牛的身体外形和运动特点 1．同学们，上节课我们已经认识了蜗牛，谁能说说蜗牛的身体外形有哪些特点 教师用纸卡写上身体各部分名称，让学生在蜗牛图上相应位置贴好。 【提示】此活动让学生在黑板上对应蜗牛图片，将已经写好名称的身体部分贴在蜗牛图片上。这样用时短又达到了复习的目的。 2．我们在上节课还观察了蜗牛的运动。谁能来说说蜗牛是怎样运动的 【教学意图】带领学生复习了上节课对蜗牛外形和运动特点的观察认识，为
常用疾病动物模型
常用疾病动物模型 上海丰核可以为广大客户提供各种疾病动物模型定制服务，同时提供相关疾病模型的药物敏感性实验分析服务。 客户只需要提供疾病模型的用途及建模方法的选择，我们会根据客户的具体要求量身定做各种动物模型服务。
小鼠或裸 鼠 加贴近实际（八）心血管疾病模型 1. 动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+维生素D喂养）兔高脂、高胆固醇饲喂兔造模，成 膜后血脂变化显著，为伴高血脂 症的动脉粥样硬化 4月血管组织病 理切片染色 2. 主动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+主动脉球囊损伤）兔此模型用大球囊损伤加高脂饲 养方法成功建立兔主动脉粥样 硬化狭窄的动物模型，为相关基 础研究提供可靠模型。 2月动物实验模型病理切片展示 一、CCl4诱导的肝脏纤维化 简介：肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应，是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。CCl4为一种选择性肝毒性药物，其进入机体后在肝内活化成自由基，如三氯甲基自由基，后者可直接损伤质膜，启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞的模型结构等，造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。 动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模，小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化，中央静脉之间形成了纤维桥接。（Masson染色） 二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型
简述：CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一，其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢，产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，引起肝细胞膜的通透性增加，可溶性酶的大量渗出，最终导致肝细胞死亡，并引发肝脏衰竭。根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型，其中给药剂量和给药方法是其技术关键。对于复制急性肝衰竭动物模型，往往采用大剂量一次性灌胃或腹腔注射给药。 图. (A) CCl4注射后0.5 d的HE染色表明CXCL14过表达增加了肝脏组织的嗜酸性变性面积(在照片中用虚线标记)(p < 0.05)。 (B) 1.5天组织样本的HE染色表明CXCL14过表达造成了比对照组更大面积的细胞坏死(p < 0.05)。 (C)同时还造成了中央静脉周围肝细胞中明显的脂肪滴积累。图中P和C分别表示动物模型的门静脉和中央静脉。KU指凯氏活性单位。 细胞凋亡检测结果 TUNEL标记没有显示CXCL14免疫中和小鼠和对照小鼠在凋亡细胞数量上的差异。C0, C1和C2分别是对照组0 d，1 d,和2 d样本，T1
给动物建个家活动方案
给动物建个家活动方案 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
《给动物建个“家”》活动方案 北京市海淀区东北旺中心小学张嘉媛 一、活动目标 1．知道蜗牛生活在适宜的栖息地中，并在栖息地进行各种生命活动。 2．能够较长时间饲养一种动物，并持续观察动物的生活。尝试用不同的方法观察蜗牛的生活。 3．能够对蜗牛进行细致的观察，并获取更多信息。 4．体会动物的生存与环境息息相关，我们要保护环境。 二、活动重难点 知道动物需要生活在适宜的环境中，并进行各种生命活动。 三、活动资源 蜗牛图片、玻璃或塑料透明的盒子（方便学生观察）、泥土、水、菜叶等。 四、注意事项 1．由于地域和环境的差异，可用蚂蚁或一些方便获取的小动物代替蜗牛。 2．本活动设计难度较大。（1）可以先全班讨论形成记录后，再让学生将自己的想法画下来。（2）也可以在全班讨论后，让学生用准备好的材料为蜗牛建个“家”。课下再思考自己的建造方案，并画在学生活动手册上。 3．小动物极容易吸引学生的注意力，为了方便控制课堂，最好在需要观察时再出示小动物，以免影响后续的课堂观察。 五、活动过程 （一）回顾蜗牛的身体外形和运动特点 1．同学们，上节课我们已经认识了蜗牛，谁能说说蜗牛的身体外形有哪些特点教师用纸卡写上身体各部分名称，让学生在蜗牛图上相应位置贴好。
【提示】此活动让学生在黑板上对应蜗牛图片，将已经写好名称的身体部分贴在蜗牛图片上。这样用时短又达到了复习的目的。 2．我们在上节课还观察了蜗牛的运动。谁能来说说蜗牛是怎样运动的 【教学意图】带领学生复习了上节课对蜗牛外形和运动特点的观察认识，为本节课“家”的建造做铺垫。 3．为了更好地继续观察蜗牛，我们来给蜗牛建个“家”吧！（板书课题：给动物建个“家”） （二）明确任务，创建蜗牛的“家” 1．讨论交流：蜗牛需要一个什么样的“家” 【预设1】学生可能会说：有土、有水的地方。 【预设2】学生可能会说：阴暗、潮湿的水边或者土里。 2．讨论交流：我们用什么材料来模拟或者直接搭建蜗牛的“家” 【预设】找个方便观察的盒子（最好是透明的），放适量的土并喷些水，创造潮湿的环境，放在阴暗背光的地方或者在盒子上方搁一块遮光板。 【教学意图】首先，通过让学生思考蜗牛的“家”是什么样的，学生会不自觉地将动物的家和人类的家进行对比，从而形成正确的认知，比如：是个房子、挺温暖的、适合爬行等。然后，引导学生回忆，从哪里找到蜗牛，进而加深对“家”的认识。（阴暗、潮湿、有土的地方）在考虑可以用什么材料来模拟或者直接搭建蜗牛的“家”时，学生把思考如何绘制蜗牛的“家”与实际建造情况联系起来，选取方便易得的材料。 【提示】如果学生回答有困难，可以适当放一段蜗牛活动的视频，以帮助学生回忆。本课可以不出示真实蜗牛，避免蜗牛吸引学生注意力而影响了对”家”的思考、绘制和创建。 3．画设计图。
肿瘤动物模型构建实验技术
肿瘤动物模型的建立可以： （1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效； （2）作为抗肿瘤药物筛选模型； （3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台； （4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。 实验方法：诱发性肿瘤动物模型 实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。 实验材料：肿瘤细胞小鼠 试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊 仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺 实验步骤 一、肝癌 1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌 （1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘； （2）按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌； （4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。 2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌 （1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2 mg/kg； （2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。 3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌 （1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料； （2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。 4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌： （1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予； （2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。 5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌 （1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。 （2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。 （3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。 6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌 （1）每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。 二、胃癌 1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌 （1）取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。（2）含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在
实验动物模型
第章实验动物模型 第一节实验动物选择的原则 第二节生物科学研究中的动物模型
实验动物模型 选择什么样的实验动物作实验是生物医学研究工作中一个重要环节，不能随便选用一种实验动物来作科学研究，因为在不适当的动物身上进行实验，常可导致实验结果的不可靠，甚至使整个实验徒劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。事实上，每一项科学实验都有其最适宜的实验动物。
第一节实验动物选择的原则 ?科学研究工作中实验动物的选择，首先应根据实验目的和要求来选择，其次再参考是否容易获得、是否经济，是否容易饲养和管理等情况。 ?在实验动物选择上必须注意三点，即实验动物的种类（Species）；品种（Breed）或品系（Strain）；质量和实验动物的健康状态。
尽量选择与研究对象的机能、代谢、结构及疾病特点相似的实验动物； ?生物医学研究的根本目的是要解决人类疾病的预防和治疗问题。因此，在选择实验动物时应优先考虑的问题是动物的种系发展阶段。在可能的条件下，尽量选择那些机能、代谢、结构和人类相似的实验动物作实验。一般来说，实验动物愈高等，进化愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类，猴、狒狒、猩猩、长臂猿等灵长类动物是最近似于人类的理想动物。
第二节生物科学研究中的动物模型 一、动物模型的意义和优越性 ?生物科学研究的进展常常依赖于使用动物模型作为实验假说和临床假说二者的试验基础。人类各种疾病的发生发展是十分复杂的，要深入探讨其疾病的发病机理及疗效机理不能也不应该在病人身上进行。可以通过对动物各种疾病和生命现象的研究，进而推用到人类，探索人类生命的奥秘，以控制人类的疾病的衰老，延长人类的寿命。