原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20

Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/journal/wjcr

https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/10.12677/wjcr.2015.51003

Orthotropic Transplantation to Establish

H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice

Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3

1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan

2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan

3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan

Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/132614932.html,

Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014

This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).

https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/licenses/by/4.0/

Abstract

Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer.

Keywords

Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞

移植瘤小鼠模型

韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3

*通讯作者。

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

1山东省医学科学院基础医学研究所免疫室，济南

2济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院，济南

3山东省医学科学院基础医学研究所病理室，济南

Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/132614932.html,

收稿日期：2014年11月24日；修回日期：2014年12月22日；录用日期：2014年12月30日

摘要

目的：建立H22肝癌细胞小鼠肝脏原位移植瘤模型，为进一步开展相关实验研究做准备。方法：直接注射一定数量的H22肝癌细胞于C57BL/6小鼠肝脏左叶，构建肝癌原位移植瘤模型。结果：术后7天小鼠肝脏表面出现大小不一结节散在分布，随着时间延长结节增多增大，后期腹腔脏器出现浸润、粘连，腹水增多。肝脏瘤组织及癌旁组织进行组织病理学检查，肝脏原位成瘤率100%，无自发消退。结论：原位注射H22肝癌细胞株能在肝脏局部形成原位移植瘤，且成瘤时间相对较短，成瘤过程中伴有脏器转移、腹水形成等，较好的模拟了机体原发性肝癌的病理生理学过程，能满足对肝癌相关研究的要求。

关键词

肝细胞癌，原位移植，实验动物模型

1. 引言

建立肿瘤动物模型是研究肿瘤发病机制及开展肿瘤治疗相关研究的重要手段，动物模型应该尽可能的接近人类肿瘤的自然生物学过程，包括肿瘤的发生、发展、浸润和转移[1]。目前在肝癌研究中多采用异体移植法将肿瘤细胞株注射到动物皮下形成局部瘤块来构建移植瘤模型，相比机体原发性肝癌的形成及病理生理学变化仍有一定不同。本研究通过将一定数量的H22肝癌细胞直接注射入具有完全免疫能力的C57BL/6小鼠肝脏实质，观察其原位移植瘤成瘤的过程及状态，能较好的模拟人体肝癌生长过程，为进一步抗肝癌免疫研究提供实验动物模型。

2. 材料与方法

2.1. 材料

2.1.1. 实验动物

雄性C57BL/6小鼠3 0只，6~8周龄，体重（20±2）g，购自山东大学实验动物中心，实验动物生产许可证号SCXK(鲁)20090001，饲养于山东省医学科学院基础研究所实验动物房IVC(智能型独立送回风净化笼具)中，动物在室温(22±2)℃、相对湿度50%条件下自由摄取食水，两周后开始试验。鼠源性H22腹水型肝癌细胞株由本室在液氮中长期保存。

2.1.2. 主要试剂

无菌生理盐水，磷酸盐缓冲液(PBS)，水合氯醛，10%中性甲醛。

2.2. 方法

2.2.1. 复苏细胞株腹腔接种

自液氮罐中取出冻存管，在38℃温水中快速摇动使细胞融化，吸取细胞悬液至无菌生理盐水中混匀，

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

1000 rpm/min，离心5分钟，弃去上清，用无菌生理盐水重悬细胞，调节细胞浓度至1 × 107/mL。碘伏消毒C57BL/6小鼠腹部皮肤，采用1 ml BD注射器抽取0.2 ml细胞悬液腹腔注射小鼠，约一周后形成腹水。无菌抽取腹水进行传代，采用第3代传代细胞进行肝脏注射。

2.2.2. 小鼠肝癌原位移植瘤模型的建立

无菌抽取腹腔接种H22肝癌细胞株的小鼠腹水，加入PBS液混匀，1000 rpm/min，离心5分钟，弃去上清，反复PBS洗涤、离心2次。无菌生理盐水重悬细胞，显微镜下细胞计数，经台盼蓝染色法检测细胞存活率>95%，调节细胞浓度至1.2 × 107/mL，置于冰上待用。采用5%水合氯醛(0.6 ml/100 g)小鼠腹腔注射进行麻醉，取仰卧位，固定于实验板上，碘伏消毒皮肤，剑突下沿腹中线纵行切口，逐层剪开皮肤和腹膜，充分暴露肝左叶。用50 μL微量注射器抽取50 μL H22细胞悬液(含细胞数6 × 106个)，20?角刺入肝脏实质约0.5cm缓慢注入细胞悬液，停留片刻，注射完毕拔出针头，立即用无菌纱布轻压针孔至肝脏表面不再渗血，逐层关腹。术后继续饲养，自由进食、进水。

2.3. 观察指标及方法

2.3.1. 肿瘤移植的观察

分别于术后7天、14天、21天处死7只小鼠，肉眼观察移植瘤的大体形态及与周围器官粘连、腹水形成情况。

2.3.2. 组织病理学检查

肝脏肿瘤组织经10%中性甲醛固定，酒精梯度脱水，石蜡包埋，4μm连续切片，HE染色，在光学显微镜下进行病理检查。

2.3.3. 荷瘤小鼠的自然生存期观察

9只荷瘤小鼠未进行任何干预处理，观察自然生存期及肿瘤的自发消退率。

2.4. 统计学处理

实验数据以均数±标准差表示，利用SPSS17.0统计软件进行数据处理，P < 0.05认为具有显著性差异。

3. 结果

3.1. 小鼠原位移植瘤模型建立

术后7天、14天、21天处死小鼠，观察均形成肝原位瘤，肝原位成瘤率为100%(30/30)，肿瘤自发消退率为0 (0/30)，无手术相关死亡。荷瘤小鼠自然生存期为21~28天。

3.2. 组织病理分析

术后7天处死7只小鼠，取出肝脏进行观察，肉眼可见7只小鼠肝左叶均出现散在0.5~2.5 mm乳白色点状结节。术后14天处死7只小鼠，未见肿瘤自发消退，乳白色结节增多，散在分布，且体积明显增大，可见有2只出现少量淡黄色腹水，肿瘤结节部分与腹腔脏器有轻微粘连。术后21天处死7只小鼠，肿瘤组织呈鱼肉状，连接成片，与正常肝组织分界不清，肝脏质地轻度变硬，与腹腔胃、肠管等脏器粘连严重，4只形成大量腹水，占57.1%，颜色呈乳白色或血色(图1所示)。原位移植瘤在术后第14天左右进入快速增殖期，至21天后肿瘤体积增长速度明显加快。

光镜下观察，正常肝小叶结构消失，瘤细胞异型性明显，大小不等，形状各异，可见瘤巨细胞，染色质明显增多，细胞核深染，呈现分叶、多核等病理性核分裂，肿瘤细胞排列紧密，呈浸润性生长(图2所示)。

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

Figure 1. The liver on the 14 days after surgery with C57BL/6 mice

orthotropic transplantation tumor

图1. C57BL/6小鼠肝癌原位移植术后14天肝脏

Figure 2. The tissue of C57BL/6 mice orthotropic transplantation tu-

mor (HE × 200)

图2.C57BL/6小鼠肝脏原位移植瘤组织切片(HE × 200)

4. 讨论

原发性肝细胞癌是临床常见的恶性肿瘤之一，每年我国发病约36万例，死亡约35万例，且呈上升趋势，是仅次于胃癌和肺癌的第三大恶性肿瘤，严重影响人类健康和生活质量[2]。原发性肝癌在肿瘤形成早期因没有明显的症状而常易被忽视，患者就医时多已经处于中晚期，其治疗仍以手术切除为主，但术后易复发，各种综合治疗效果不佳[3]。肝脏被认为是机体最大的免疫器官，含大量的免疫淋巴细胞，

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

如NK细胞、NKT细胞、T细胞，是天然免疫反应的重要组成部分，在抗感染免疫、抗肿瘤免疫中发挥重要作用[4] [5]。通过中西医药物联合，调节机体自身免疫应答，增强抗肿瘤免疫也成为目前肝癌治疗的研究热点及临床用药靶点。

建立良好的肝癌动物模型对于模拟人体肝癌形成及抗肿瘤免疫应答研究中具有很好的替代作用。目前实验室中常用的是采用移植型肝癌模型，是指用肝癌组织或细胞移植到动物体内(肝脏、肝外组织或器官)或非肝脏来源的恶性肿瘤移植到动物的肝脏所形成的肝癌动物模型[6]。移植型模型根据移植瘤所在部位可分为原位型和异位型。异位型多见于在实验动物背部皮下注射一定量的肝癌细胞形成肿瘤，皮下瘤操作简单容易掌握，成功率高，且肿瘤体积变化易于测量，容易给予局部干预[7]。但瘤块生长过程中因肿瘤新生血管的形成不能满足瘤块组织的营养供给，在后期容易形成破溃及中心组织坏死。皮下移植瘤模型忽略了肿瘤与周围正常组织器官的相互关系[8]，局限在皮下局部，被膜相对完整，缺乏周围组织浸润及远处淋巴结转移，不能较好的模拟肝癌后期肿瘤浸润及转移的病理生理学过程，且不能完全反应机体整体免疫变化，因此具有一定的局限性[9] [10]。

原位移植法是将一定浓度的肿瘤细胞悬液或微小肿瘤组织直接接种或包埋于肝脏实质中，形成原位移植瘤。从理论上讲，原位移植模型能够更理想地模拟人体的状态，更客观地再现肿瘤发生发展和转移的过称[11]。直接注射法常用于SD大鼠、裸鼠等动物，对于裸小鼠文献报道选用具有先天性T淋巴细胞免疫缺陷的裸小鼠肝脏注射肿瘤细胞构建原位移植瘤模型易于成功[12]，但因裸小鼠免疫能力不完全，不能有效的模拟人体肝癌对机体免疫应答的影响变化。

本研究采用具有完全免疫能力的C57BL/6小鼠接种H22细胞株，弥补了裸小鼠免疫功能缺陷的不足，更好的反映了机体在发生肿瘤过程中免疫应答的过程，利于开展相关免疫功能性的研究。在本实验过程中，麻醉后暴露肝脏，注射部位明确，且注意增加按压时间，有效地避免了肝脏出血及肝癌细胞的腹腔外漏。通过术后观察发现肝脏成瘤时间相对较短，7天即可肉眼观察到肝脏表面形成白色结节，随着时间延长，原发性肝癌的特性表现更充分，白色结节增多，在肝脏形成占位性病变，炎性细胞大量浸润，与正常肝脏组织分界不清，与腹腔其他脏器、腹膜发生粘连，形成腹水等，这些均是人体原发性肝癌发生过程中普遍存在的病理生理学过程，实验表明此模型能较好的模拟并呈现，与皮下移植瘤相比具有较大的优势，有利于开展进一步的肿瘤实验研究。

该模型在构建时熟练的外科手术操作技术是成功的关键，注意麻醉和手术无菌操作，同时还应注意以下几点：1) 细胞悬液调节合适浓度，过少则成瘤较少，过多易注射渗漏；2) 选用合适注射器，针孔过细可能发生细胞悬液堵塞影响注射，针孔过大易造成肝脏表面渗血增多；3) 肝脏质地柔软易出血，操作时动作轻柔，进针角度约为20?进入肝实质后轻推注射器，注射完毕后缓慢拔针，并轻轻按压至无血渗出，避免细胞悬液漏入腹腔形成广泛种植转移。

基金项目

本文受国家自然科学基金青年基金资助项目(81303077)，山东省医药卫生科技发展计划项目(2013WS 0369)资助。特此感谢。

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肝癌项目学习答案

项目学习：普外科肝癌总共4套题答案的选A 第一套题 1、在肝癌的TNM分期中，T代表的是（c ） A、肿瘤大小 B、远处转移 C、原发灶 D、区域淋巴结 2、下列哪项不属于原发性肝癌（a ） A、肝脏继发性肿瘤 B、肝细胞癌 C、肝内胆管细胞癌 D、肝细胞-胆管细胞混合型癌 3、肝细胞癌的特点不包括（a ） A、进展缓慢 B、起病隐匿 C、治疗困难 D、预后很差 4、若肝癌病变位于左肝，一般疼痛部位是（c） A、右腰部 B、右肋区 C、剑突下 D、右背部 5、肝癌诊断的金标准是（b） A、慢性肝病背景 B、病理学诊断 C、影像学检查结果 D、血清甲胎蛋白水平 6、肝细胞癌多见，占到肝癌的（d）以上 A、60% B、70% C、80% D、90% 7、肝性脑病常发生在肝病（d ） A、早期 B、中期 C、晚期 D、终末期 8、在我国引起肝细胞癌的因素主要是肝炎病毒感染导致的（b ） A、甲肝 B、乙肝 C、丙肝 D、戊肝 9、下列哪项是肝硬化门脉高压引起的肝癌并发症（a） A、消化道出血

B、肝肾综合征 C、肝性脑病 D、肝癌破裂出血 10、（b）是肝细胞癌的重要症状，常为间歇性或者持续性 A、持续低热 B、肝区疼痛 C、食欲减退 D、消瘦乏力第二套题 1、2.Okuda分期的不足不包括（d ） A、对肿瘤累及范围的确定过大 B、血清胆红素的界值定义过高 C、未纳入早期肝癌预后因素 D、唯一未加干预措施评估生存期 2、下列哪项是碱性磷酸酶的主要分布位置（b ） A、脾脏 B、肾脏 C、胰腺 D、心脏 3、在肝癌的TNM分期中，T3代表的是（a） A、肿瘤多发，最大径>5cm；侵及门脉或肝静脉主要属支 B、肿瘤单发，有血管浸润；多发，最大径≤5cm C、肿瘤单发，无血管浸润 D、无原发肿瘤证据 4、在BCLC分期中，早期患者可行根治性治疗措施指的是（a ）期 A、A B、B C、C D、D 5、CLIP分期是1998年（b ）肝癌研究组提出的 A、奥地利 B、意大利 C、加拿大 D、美国 6、（d ）是良好的肝脏储备功能评价指标 A、天门冬氨酸氨基转移酶 B、碱性磷酸酶 C、3.白蛋白 D、前白蛋白 7、Kampala分期是（a）年乌干达首都坎帕拉举行的国际肝癌讨论会上制定 A、1971 B、1981 C、1991 D、2001

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/132614932.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/132614932.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 [摘要] 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种，定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹

股沟淋巴结肿大情况，并于接种后 21 天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结称重并测量大小，同时观察肿瘤的形态特点，生长方式，肺、肝、肾等脏器，并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。结果:21 天观察，实验使用 10 只小鼠，最终存活 8只，其中形成肿块 7 只（3只形成的肿块较大），成瘤率 70%，淋巴结转移率 70%。肉眼观察，较大肿瘤 2*1.5*1.3cm，灰白色，质地较硬，从中间切开，发现肿块大部分坏死，中心部分出现腔，腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察，坏死组织粉染，轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性：瘤细胞大小和形态不一致，细胞核体积增大并呈现多形性，核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多，核浆比失调，胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移，无器官转移，且具有高转移力。 [关键词]HCa-F（高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移 [前言]研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大，在亚非国家较常见，我国的发病率较高，属于常见的肿瘤之一。近年来，我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩，一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效[1]。随着临床治疗经验的积累，逐渐

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用王全凯1，杨全会2，郭静2，谢广云1，崔涛1，许荣焜2，许建宁1* 1. 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 100050 2. 中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005 摘要：目的建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物制剂疗效的观察。方法将人原发肝癌手术新鲜组织移植于BALB/c裸鼠皮下，建立人肝癌组织裸鼠移植瘤动物模型；于同体移植后第15 天连续ig给予长科制剂（CKBM），通过观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，测定瘤体体积和质量、抑瘤率以及进行组织病理学观察，初步评价CKBM的抗肿瘤疗效。结果人肝癌组织裸鼠移植瘤保持了人肝癌组织特性，并能通过同体移植传代；观察发现CKBM对人肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤率达45.71%，对癌细胞生长有一定的抑制作用。结论在成功建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型基础上，观察发现CKBM具有一定的抗肿瘤疗效。关键词：肝癌；裸鼠；移植瘤；动物模型；抑瘤率中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)03 - 0398 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.03.018 Establishment and application of implantation model of human hepatocellular carcinoma in nude mice WANG Quan-kai1, YANG Quan-hui2, GUO Jing2, XIE Guang-yun1, CUI Tao1, XU Rong-kun2, XU Jian-ning1 1. National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China 2. Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China Abstract:Objective The human hepatocellular carcinoma model was established by implantation in BALB/c nude mice. Its characteristics were certified in the model which was used for the observation of antitumor efficacy. Methods Human hepatocellular carcinoma were sc implanted to BALB/c nude mice for the establishment of the implantation model of the human hepatocellular carcinoma in BALB/c nude mice. The nude mice were exposed to the pharmaceuticals from CK Life Sciences Limited by ig on day 15 after the implantation to find out its healing efficacy through the animal reflecting, the occurring time, volume, weight of tumors, the rate of tumor inhibited, and pathological histology. Results The characteristics of human hepatocellular carcinoma could be kept with passaging by autograft. The tumor inhibiting rate of the pharmaceuticals was 45.71%, showing the certain inhibitory effect on growth of tumor cells. Conclusion A certain antitumor efficacy of the pharmaceuticals made by CK Life Sciences Limited is found out on the basis on the human hepatocellular carcinoma model in nude mice established successfully. Key words: hepatocellular carcinoma; nude mice; implanted tumor; animal model; tumor inhibitory rate 人类肝癌的基础和临床实验研究多数都借助于实验动物模型。目前，以人肝癌组织移植裸鼠建立的动物移植瘤模型是最接近人类肝癌的整体实验模型，是肝癌基础和临床实验研究理想的动物模型。人肝癌组织裸鼠移植瘤模型是指把人肝癌组织块接种于裸鼠皮下建立的实验动物模型，常用于筛选抗肿瘤药物和制剂、实验性治疗和抗肿瘤机制研究[1]。基于为肝癌实验和临床研究以及药物筛选提供体内实验系统的目的，本研究建立了人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物长科制剂（CKBM）疗效的观察。 1材料与方法 1.1实验动物 BALB/c（nu/nu）裸小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供）。饲养于中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学部收稿日期：2013-06-03 作者简介：王全凯（1977—），男，北京人，主管技师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132199 E-mail: kylewang@https://www.360docs.net/doc/132614932.html, *通信作者许建宁，硕士生导师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132592 E-mail: jnx999@https://www.360docs.net/doc/132614932.html,

建立小鼠肿瘤模型的研究进展

建立小鼠肿瘤模型的研究进展摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。关键字：肿瘤，动物模型，小鼠肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件（1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。（2）制作模型的方法简单易行。（3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。（4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分

血糖浓度对荷瘤小鼠~(18)F-FDG体内分布的影响

收稿日期:2002212228;修回日期:2003201224 作者简介:付占立(1967～),男(汉族),河北省保定人,主治医师(硕士),临床核医学专业第16卷第2期 2003年5月同　位　素 Jou rnal of Iso topes V o l .16　N o .2M ay 2003 血糖浓度对荷瘤小鼠18F -FD G 体内分布的影响付占立,林景辉,王荣福,朱绍莉,张春丽,潘中允 (北京大学第一医院核医学科,北京　100034) 摘要:为探讨血糖浓度对荷瘤小鼠18F 2FD G 体内分布的影响,取35只皮下接种艾氏腹水癌(EA C )一周后的小鼠禁食20h ,随机分为对照组(n =11)与糖负荷组(n =12),分别给予蒸馏水和50%葡萄糖0.5mL 灌胃,另有两组分别给予10%葡萄糖(5只)和30%葡萄糖(7只)0.5mL 灌胃,1h 后测血糖并尾静脉注射18F 2FD G ,再1h 后放血处死,计算各组织SUV 及肿瘤SUV c 。糖负荷组荷瘤小鼠血糖浓度(11.98±3.01mmo l L )较对照组(3.95±1.11mmo l L )显著升高(P <0.01);糖负荷组小鼠的肿瘤、脑、脾、血SUV 及肿瘤与肌肉摄取比(1.34,0.86,0.48,0.09,1.38)显著低于对照组(3.02,2.62,0.80,0.16,5.38)(P <0.01),心、肌肉SUV 及肿瘤与脑、心与血摄取比(8.31,1.05,1.58,103.00)显著高于对照组(1.57,0.64,1.20,9.73)(P <0.01);肺、肝、肾SUV 及肿瘤SUV c 在两组间无显著差异(P >0.05)。肿瘤、脑、脾、血SUV 及肿瘤与肌肉摄取比与血糖浓度呈显著性负相关,r 分别为:-0.76,-0.92,-0.78,-0.48,-0.63(P <0.01);心、肌肉SUV 及肿瘤与脑、心与血摄取比、肿瘤SUV c 与血糖浓度呈显著性正相关,r 分别为:0.85,0.43,0.51,0.85,0.45(P <0.01)。结果表明,血糖浓度变化显著影响荷瘤小鼠肿瘤及正常组织对18F 2FD G 的摄取。关键词:18F 2FD G ;血糖浓度;荷瘤小鼠;体内分布中图分类号:R 817193 文献标识码:A 文章编号:100027512(2003)022******* 18F 2氟代脱氧葡萄糖(18F 2FD G )显像在肿瘤、心肌存活以及中枢神经系统疾患的诊断与研究中有着重要价值。目前,18F 2FD G 作为正电子显像剂承担着近80%的PET 临床显像工作[1]。组织对18F 2FD G 的摄取不仅决定于其功能状态及细胞学特性,还可能受到体内葡萄糖浓度的影响,从而影响临床18F 2FD G 影像的分析[2]。本研究拟观察血糖浓度变化对荷瘤小鼠18F 2FD G 体内分布的影响,以便为临床18F 2FD G 显像时合理控制血糖浓度提供依据。 1　材料与方法 111　主要材料昆明种小鼠:35只,体重20～30g ,二级动物,由中国医学科学院实验动物研究所提供;艾氏腹水癌(EA C )种鼠(腹腔接种0.2mL 细胞浓度为3×107 mL 的EA C 细胞,接种一周后使用)由北京市肿瘤研究所提供;18F 2FD G 由中国原子能科学研究院同位素研究所生产,放化纯度>95%,使用时稀释至3.7GB q L ;井型Χ计数器:配备FH 2408自动定标器,由国营二六一厂生产。 112　实验方法 1.2.1　荷瘤鼠模型的建立抽取艾氏腹水癌种鼠腹水,用生理盐水按体积比1∶3稀释后(肿瘤细胞数约3×107 mL )接种于35只昆明种小鼠右前腋下皮下组织,每只接种0.2mL ,接种后一周(肿瘤直径约1c m )将小鼠禁食20h ,称重后进行随机分组。1.2.2　分布实验 (1)对照组荷瘤鼠11只,给予蒸馏水0.5mL 灌胃,糖负荷组12只,给予015mL 50%葡

小鼠皮下移植性肝癌模型的热消融研究

第21卷第8期 2012年8月中国普通外科杂志 Chinese Journal of General Surgery Vol.21　No.8Aug. 2012小鼠皮下移植性肝癌模型的热消融研究吴浩1，沈顺利２，匡铭２，彭宝岗２（1. 广东省广州市第十二人民医院普通外科，广东广州 510620；2. 中山大学第一附属医院肝胆外科，广东广州 510080）摘要目的：探讨建立适合微波消融研究的肝癌小鼠模型。方法：将C57BL/6J 小鼠随机分为4组（n =10），分别皮下注射不同数量（5×105，1×106， 2×106，5×106）的Hepa1-6细胞，比较各组成瘤率；选择成瘤率理想的细胞数再次造模，待瘤体长径达8~10 mm 时将模型小鼠随机分为4组（n =10），对瘤体行微波热消融处理，瘤体边缘温度分别控制在60 ℃，55 ℃，50 ℃和45 ℃，消融时间为3 min，比较各组完全消融率及消融前后的瘤体病理变化。结果：2×106 的Hepa1-6细胞皮下注射组成瘤率高且适合消融操作；60 ℃消融组出现组织碳化，其余各组比较，55 ℃消融组完全消融率最高，复发率最低（P <0.01）。结论：对小鼠Hepa1-6细胞皮下移植性肝癌模型行55 ℃×3 min 的微波热消融有效、可行。关键词肝肿瘤，实验性；热消融；疾病模型，动物；小鼠中图分类号：R735.7 文献标识码：A [中国普通外科杂志，2012，21(8):973-977] Thermal ablation for subcutaneously implanted hepatocellular carcinoma in mice WU Hao 1, SHEN Shunli 2, KUANG Ming 2, PENG Baogang 2 (1. Department of General Surgery, the Twelfth Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510620, China; 2. Department of Hepatobiliary Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China) ABSTRACT Objective: To establish a mice model of liver cancer suitable for microwave ablation. Methods: C57BL/6J mice were randomly divided into 4 groups (n =10 in each group) and subcutaneously injected with Hepa1-6 cells of diff erent numbers (5×105, 1×106, 2×106 and 5×106) respectively, and then the tumor formation rates in the 4 groups were compared. Next, the ideal cell number for tumor formation was selected to establish the mouse models once again. When mean tumor diameter reached 8–10 mm, the tumor-bearing mice were randomly divided into 4 groups (n =10 in each group) to undergo microwave thermal tumor ablation. The temperature at the edge of the tumor was maintained at 60, 55, 50, and 45℃ respectively, and the ablation time was 3 min. Th e complete ablation rate and pathological changes of tumor among the 4 groups were compared. ?基础研究?文章编号：1005-6947(2012)08-0973-05 基金项目：国家自然科学基金资助项目（81071892）；广州市医药卫生科技项目（20121A010012）；高等高校博士学科点专科专项科研基金（新教师类，201000171120072）；高校基本科研业务费中山大学青年教师培育项目（09ykpy30）。收稿日期：2012-02-16；修订日期：2012-07-05。作者简介：吴浩，广东省广州市第十二人民医院主治医师，主要从事普外科肿瘤治疗方面的研究。通讯作者：彭宝岗， Email: pengbaogang@https://www.360docs.net/doc/132614932.html,

肝癌动物模型的建立_徐静

共识.中华肝脏病杂志,2004,12∶425～428 11　Perrillo RP ,Lai CL ,Liaw YF ,et al .Predictors of HBeAg loss after lamivudine treatment for chronic hepatitis B .Hepatotogy ,2002,36∶186～194 12　Rizzetto M ,Tassopoulos NC ,Goldin RD ,et al .Extended lamivu -dine treatment in patients with HBeAg -negative chronic hepatitis B .J Hepatol ,2004,41∶1070～1076 13　Ryu SH ,Chung YH ,Choi MH ,et al .Long -term additional lamivu -dine therapy enhances durability of lamivudine -induced HBeAg loss :a prospective study .J Hepatol ,2003,39∶641～619 14　Chien RN ,Yeh CT ,Tsai SL ,et al .Determinants for sustained HBeAg response to lamivudine therapy .Hepatology ,2003,38∶1267～1273 15　党红星,何瑞,马跃东.拉米夫定致小儿锥体外系反应二例.中华儿科杂志,2004,42∶436 16　Lok ASF ,Zoulim F ,Locarnini S ,et al .Monitoring drug resistance in chronic hepatitis B virus (HB V )-infected patients durin g lamivud ine therapy :evaluation of performance of INNO -LiPA HBV DR assay .J Clin Microbio ,2002,40∶3729～3734 17　Suzuki F ,Suzuki Y ,Tsubota A ,et al .Mutations of polymerase , precore and core promoter gene in hepatitis B virus during 5-year lamivudine therapy .J Hepatol ,2002,37∶824～830 18　Qaq ish RB ,Pharm D ,Mattes KA ,et al .Ad fovir dipivoxil :A new antiviral agent for the treatment of hepatitis B virus infection .Clin Therapeut ,2003,25∶3084～3099 19　Bozdayi AM ,E yigun CP ,Turkyilmaz AR ,et al .A novel pattern (sW195a )in surface gene of HBV DNA due to YSDD (L180M plus M204S )mutation selected during lamivudine therapy and success -ful treatment with adefovir dipivoxil .J Clin Virol ,2004,31∶76～77 20　Qarugan RB ,Gomez LC ,Serrano PL .Use of adefovir in the treat -ment of the chronic hepatitis B virus infection with res istance to lamivudine .Transplant Proc ,2003,35∶1841～1843 21　Villeneuve JP ,Durantel D ,Durantel S ,et al .Selection of a hepati -tis B virus strain resistant to adefovir in a liver transplantation pa -tient .J Hepatol ,2003,39∶1085～1089 22　梁扩寰,主编.肝脏病学.第1版,北京:人民卫生出版社, 1995.520 23　张瑞琪,缪晓辉,倪武.膦甲酸钠治疗慢性乙型肝炎47例. 中华传染病杂志,2002,20∶180～181 (收稿:2004-12-10) (校对:郭顺明) 肝癌动物模型的建立徐　静　综述　李　旭　审校作者单位:230022　合肥市　安徽医科大学附属医院感染科自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来,人们对肝癌动物模型的研究不断深入,逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。一、自发性肝癌动物模型　是指实验动物未经任何有意识的人工处置,在自然情况下所发生的肿瘤。实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。14月龄以上的C3Hf 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3He 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。自发性肝癌动物模型最大的优点是,系完全在自然条件下发生的疾病,排除了人为因素,肝癌的发生、发展与人类肝癌相似,反映了动物的肿瘤易感性和环境致癌物质、促癌物质的积聚程度,但其发生率低且不稳定,发生时间较长、难预测且参差不齐,荷瘤动物个体在动物(性别、体重、肿瘤发生时间等)和肿瘤(大小、数目、部位等)两方面差异较大,造模有一定的困难。该模型主要用于病理学研究和作为移植性肿瘤的瘤源。二、诱发性肝癌动物模型　诱发性肝癌模型是指用化学、物理、生物的致癌因素在实验条件下诱发动物发生肝癌,它是进行实验肿瘤学研究的常用方法。其中化学性致癌物最常见,如亚硝胺类(DEN )、黄曲霉素类(AFB1)、氨基偶氨燃料类(3′-Me -DAB )、芳香胺类化合物(2-AAF )等。最常用的实验动物为大鼠,多选用敏感性高的纯系大鼠。目前常用的品系有:Wistar 、Spraque -Dawley 和Fischer344,前两者在国内应用更为广泛。大鼠的年龄和性别均对致癌性有影响。一般认为幼年雄性大鼠对致癌的敏感性较高,但有时也可出现幼年雌性大鼠诱癌成功。鼠龄以3个月以内、体重120克以下的大鼠诱癌启动率高于月龄大的大鼠,而体重200克以上或1岁以上的大鼠的肝癌启动率低,很难诱发肝癌。这与其组织中的肝细胞或幼稚细胞的状态以及细胞的增殖水平有关。诱发性大鼠肝癌的给药途径主要有经口给药法和注射给药法。经口给药法又分为自动口服给药和强制灌胃两种,前者是将水溶性致癌物溶于水中或将非水溶性致癌物混于饲料中让大鼠自动摄取,此法简单方便,但由于动物饮水和饲料的摄取量不同,不能保证给准确药量;后者是将溶于水或悬浮于载体的诱癌剂通过特制的灌胃针头给大鼠灌胃,此法能准确掌握给药量,但强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤和心理上的影响。注射法也是一种常用的方法,可将诱癌剂溶于可溶性液体中或悬浮于载体中,通过各种部位注射

原发性肝癌肝移植随访表格

随访登记表姓名：性别：年龄：住院病历号：移植日期：年月日通信地址：邮政编码：联系电话：主管医师：随访医生：我们的联系地址：北京大学人民医院肝胆外科中心邮政编码：100044 电话：-3500,3503 传真号：68318386 首先祝贺您在经历了漫长的住院时间后，终于能顺利地出院了，从此以后一个健康的肝脏将陪伴您度过美好的时光，肝脏具有很多的功能，您要小心爱护，除了与普通肝移植患者相同的治疗方案以外，您还应该特别注意，就是切除的肿瘤有可能潜伏一段时间后会再次出现，这恐怕是威胁您健康的最大敌人，肝移植术后化疗的目的在于能够控制可能存在的微小转移灶的生长，杀灭血液中散在的肿瘤细胞，提高治愈率，延长无瘤生存时间，所以您一定要严格按照此表所建议的内容复诊和接受化疗等辅助治疗，安然度过肿瘤复发的危险期，成为抗肿瘤的明星，与您的家人共同分享天伦之乐。一般您在住院期间常常要接受第1次化疗，开始时间根据您术后恢复情况而定，您的主管医师会告诉您接受化疗药物的剂量和用法，请您记录清楚。

常用化疗方案（化疗药物及剂量）表阿霉素mg 健择mg 顺铂mg 草酸铂mg 5-氟尿嘧啶mg 其他化疗药物辅助治疗药物化疗副作用其他开始时间年月日结束时间年月日化疗期间可能出现的副作用有以下几种，常见的有白细胞减少，肝、肾功能异常，胃肠道反应如食欲减退，恶心、呕吐、腹泻，还可能出现发热、全身无力、脱发、心律失常等，不过一般不会严重影响您的健康。在您出院以后，请您一定记住下次就诊的时间，记住定期化验，定期化疗，与您的主管医师和随访医师保持联系，让我们共同维护您的健康。一、术后第2周的检查项目术后第2周，您一般还在住院，检查项目包括抽血化验：血常规、生化20项、电解质、凝血全项、甲胎球蛋白(AFP)、CEA、CA19-9等，还有影像学检查：胸部X光片、腹部B超、腹部CT等，您的主管医师会根据您的病情酌情增减。

【CN110004109A】一种肝癌类器官模型的体外构建方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910255261.0 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人南通大学附属医院地址 226001 江苏省南通市西寺路20号 (72)发明人郑文杰　姚登福　张捷　金云峰　倪温恺　徐育青　 (74)专利代理机构南通市永通专利事务所(普通合伙) 32100 代理人葛雷 (51)Int.Cl. C12N 5/071(2010.01) C12N 5/09(2010.01) (54)发明名称一种肝癌类器官模型的体外构建方法 (57)摘要本发明公开了一种肝癌类器官模型的体外构建方法，将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混悬于培养基A；培养至第4天，半量换液维持培养；第7天开始，换为培养基B，连续培养7天；第14天传代扩增培养。本发明基于肿瘤微环境中复杂的细胞构成，快速构建大小均一、结构稳定、可检测抗癌药物有效性，并可扩增培养的3D肝癌类器官体外模型。本发明构建的肝癌类器官模型方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于研究肝癌发生发展机制、以及肝癌药物高通量筛选等，具有产业化意义。权利要求书1页说明书4页附图3页CN 110004109 A 2019.07.12 C N 110004109 A

1.一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：包括下列步骤：（1）将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A，静置培养；（2）第4天使用培养基A半量换液，维持培养；（3）第7天换为培养基B培养7天；（4）第14天取肝癌类器官消化传代，消化后的细胞按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养；所述培养基A包括：青霉素、链霉素、I型鼠尾胶原蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基；所述培养基B包括：青霉素、链霉素、转铁蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、Wnt3a、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。 2.根据权利要求1所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，使用计数仪计数，按7:2:1的特定比例，混悬于培养基A。 3.根据权利要求书2所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混匀于培养基A后，计数并按每孔2000个细胞使用排枪均匀地接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，每孔接种细胞混悬液体积为100μL。 4.根据权利要求书3的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按比例混悬于培养基A，接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，然后放入37℃二氧化碳培养箱，静置培养，尽量避免移动。 5.根据权利要求书4所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：第4天半量换液一次，使用微量移液枪紧贴培养基液面，吸弃孔中50μL培养基，并加入等量培养基A。 6.根据权利要求书5所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第7天，使用微量移液枪，紧贴培养基液面，吸出旧培养基；再沿孔壁缓慢加入100μL培养基B，隔日吸弃50μL培养基，加入等量培养基B，持续培养7天。 7. 根据权利要求书6所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第14天，使用1000μL移液枪，吸出96孔板中所有类器官置离心管，吸弃上清，加入500μL Accutase放入37℃二氧化碳培养箱孵育30min，离心去上清后使用培养基A计数、重悬并稀释，按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养。8. 根据权利要求书1、2、3或4所述的一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养基A包括：100U/mL青霉素、100μg/mL 链霉素、2~10μg/mL I型鼠尾胶原蛋白，1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol/mL谷氨酰胺、4~8%胎牛血清、10~50ng/mL表皮生长因子、10~50ng/mL碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基；培养基B包括：100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2~10μg/mL转铁蛋白、1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol /mL谷氨酰胺、8-12% 胎牛血清、2~50ng/mL Wnt3a、10~50 ng/mL表皮生长因子、10~50 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、10~100 ng/mL肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。权　利　要　求　书1/1页2CN 110004109 A

稳定大鼠原位肝移植模型的建立

万方数据

２００９年５月第６卷第１３期图１腹主动脉灌注图２修肝及套管圈３肝脏血管系统吻合完成当延长供肝的冷缺血时间并不明显增加术后死亡率及并发症的发生。而术中过多地牵动供肝则会明显影响供肝的质量嗍。手术分离时尽可能去除血管壁周围的筋膜、结缔组织等。防止再通后造成套管腔狭窄及血栓形成。３．２供肝灌注先松开门静脉夹，再松开肝下下腔静脉夹，均缓慢松开。灌洗压力过大容易引起供肝的细胞器肿胀、细胞坏死和淋巴细胞浸润，导致细胞内钙超载和能量代谢障碍．从而影响移植肝的质量。本研究采用的是经腹主动脉的灌注法。以１￣２ＩｌｉＯｎ的速度灌注腹主动脉，灌注液体经过肝动脉和门静脉系统回流入肝脏，从而保证肝脏得到充分、缓慢而均匀的灌注，提高供肝的质量。３．３袖套管放置套管必须保证硬度适中、内壁光滑。由于不重建肝动脉，而胆道血供多由肝动脉供应．故供肝胆总管不应保留过长．有利于减少胆道并发症。在脾静脉水平安放门静脉袖套较为方便。在左肾静脉水平剪断ⅣＣ。有利于袖套的翻转。３．４受体手术笔者在进腹时习惯取中上腹横切口，而此过程中笔者建议结扎左右腹壁下静脉，首先该血管相对较粗大，出血会影响术野，其次该血管的出血量相对于只有１２一１３“血容量的大鼠来讲会是术后出血性休克死亡的重要原因。受体术前１５ｒｎｉｎ常规给予阿托品对于预防术后肺炎、肺不张有较好的效果ｆＩｑ。供肝恢复血供后对于肝门部的处理，使用血供较好的大网膜覆盖，既有加压防止出血、使胆漏和胆道感染局限化的作用，同时可以适当供给胆道血供，可以预防胆道并发症的发生【ｌｌｌ。受体阻断门静脉后，经门静脉注入羟乙基淀粉 ?论著? 注射液可将肝内残存的血液及时推人体循环。起到“自身输血”的作用。在ＳＶＣ的吻合过程中，缝线不宜过紧。防止血管狭窄。供肝门静脉及ＩＶＣ“套管法”吻合前，必须排出阻断夹后方的一段积血。以防止血栓栓塞。Ｐａｅｈｅｃｏ等旧研究表明，随门静脉淤血时间的延长。再灌注后闲肠道内菌群移位而使内毒素骤升。如此可激活肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，产生大量的ＴＮＦ—Ｏｔ及一系列的级联反应。从而对供肝及受者的肺脏产生损伤１７．Ｌａ－ｌ川。同时．ＩＶＣ阻断时间的延长会导致血钾浓度显著升高。在供肝恢复血供的过程中．应缓慢放开无创血管夹，而且应按顺序先放开门静脉。后放开肝上上腔静脉，尽量使心脏逐渐适应血容量的增加。４结论重复是技巧之母．所以大量的练习是提高手术技巧的关键。认真、耐心、仔细的手术是成功的关键。对于供肝的提早冷缺血处理及对供肝植入后的细心操作。使得手术成功的机会大大增加。【参考文献】【１】ＫａｍａｄａＮ，ＣａＭｅＢＹ．ＡｓｕｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｉｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒＩｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔ【Ｊ】．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（Ｐｔｌ）：６４－６９．【２】宇汝胜，汪泳，钱海鑫．大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨阴．肝胆胰外科杂志．２００８．２０（１）：７－９．【３】权毅，付华。徐亮．大鼠原位肝移植模型的建立和术式改进阴．中国现代医学杂志．２００６．１６（２）：２２６－２２９．【４】ＷａｎＣＤ，ＣｈｅｎｇＲ，ＷａｎｇＨＢ。ｅｌａ１．１ｒａｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｅｔａｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ陬ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（１）：２９—３３．【５】汪根树。陈规划，朱晓峰．大鼠小体积原位肝移植模型的建立田．中国实验诊断学，２００６，（１０）：儿１９－１１２２．【６】贾凯，徐钧．二袖套法大鼠原位肝移植术的改进们．山西医科大学学报，２００６，３７（４）：３５６－３５８．【７】ＴｉａｎＹ，ＪｏｅｈｕｍＷ，Ｇ∞晒ｅｖＰ，ｅｔａ１．Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＴＮＦ－Ｍｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅａｒｔｅｒｉａｌｉｚｅｄｓｍａｌｌ—ｆ打一ｓｉ∞ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩｎｏｕｏｅ叽ＰｌｏｃＮａｉｌＡｃａｄＳｃｉ．２００６，１０３（１２）：４５９８－舢奶．【８】ＵｍｔａＫＮａｎｙｅｎＢ，Ｂｍｕｈ＆ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｒａｒｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｌｌｅｘｔｅｎｄｅｄｃｏｌｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｒｏｌｅ０ｆｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｃｌａｍｐｉｎｇｔｉｍｅＩＪ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２８（２）：３６６－３７３．【９】邵堂雷，蔡伟耀，张明钧，等．影响肝移植鼠近期存活的术中因素分析叨．上海第－－ｇｇ科大学学报，２００１，２１（３）：２２３—２２５．【１０】彭勇，龚建平，刘长安，等．大鼠原位肝移植模型制作过程中麻醉方法的选择【Ｊ】．中华普通外科杂志，２００３，１２０）：６７３－－６７６．【１ｌ】常顺伍，郑树森，梁廷波，等．大鼠原位肝移植术中胆道重建方法的改进【Ｊ】．中华器官移植杂志２００７，（１）：１３—１６．【１２】ＰａｅｈｅｅｏＥＧ，ＧｏｒａｅａＭＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｓＧ凡ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｖｅｒｉａｅｈａｅｍｉｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｈｅｐａｔｉｃｉｓｅｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ【Ｊ】．ＡｅｔａＣｉｒＢｒａｓ，２００６，２１：２４－２８．【１３】ＯｌｌｕｏｇｌｕＥ，ＫｅｒｅｍＭ，ＰａｓａｏｇｌｕＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｌａｙｅｄｅｎｅｒｇｙｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ０ｆｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎｈｅｐａｔｉｃｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ仞．ＥｕｒＳｕｒｇＢｅｓ，２００６，３８：１１４－１２１．【１４］Ｋａｓｈｔｉ气Ｍｅｈｒａｂｉ气ＰａｈｌａｖａｎＩＳ，ｅｔａ１．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ呲忉．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｅｔ２００５，３７：１８５－１８８．（收稿日期：２００９－０２—１７）ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬＨＥＲＡＬＤ中目医琦导囊３５　万方数据