培养基的灵敏度检查操作规程
培养基的灵敏度检查操作规程
1 目的建立培养基灵敏度试验的操作规程，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行。
2 适用范围本标准适用于培养基灵敏度检查。
3 责任者QC检验人员。
4 内容
4.1 试验设备及用具：
无菌培养皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯等。
4.2 使用的菌株：
EP检测用ATCC的菌株：
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 6538
大肠埃希菌Escherichia coli ATCC 8739
沙门氏菌Salmonella enterica subsp ATCC 14028
黑曲霉Aspergillus niger ATCC 16404
培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。
4.3 检测频率
每批新买的培养基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。
4.4 操作方法
4.4.1 对照标准培养基
用已经过试验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基。
4.4.2 试验培养基
将琼脂类的试验培养基加热融化后，冷却至45℃左右，以无菌的方式在无菌培养皿中注入15～20mL，备用。液体类的培养基直接使用。
4.4.3 菌悬液的制备
4.4.3.1 细菌菌悬液的制备
取细菌的斜面培养物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤培养基中30-35℃培养18-24h，取上述培养物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-7-10-8的菌悬液备用。
4.4.3.2 霉菌菌悬液的制备
取黑曲霉的斜面培养物加入无菌水4mL制成孢子悬液，取上述孢子悬液按10倍系列稀释，分别制成10-6-10-7的菌悬液备用。
4.4.4 培养基的生长促进实验
4.4.4.1 琼脂类培养基的生长促进试验
每株菌用2个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。试验培养基上的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的70%-150%范围内。（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录1）
4.4.4.2 液体类培养基的生长促进实验
每株菌用2管（或瓶）试验培养基，接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。
4.4.5 培养基的生长促进和抑制特性试验
4.4.
5.1 液体培养基的生长促进特性试验
接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）于一定量适合的培养基。在特定温度下培养，培养时间不超过试验中规定的最短期限。与对照标准的培养基获得的微生物生长相比，接种微生物的生长应明显。
4.4.
5.2 固体培养基的生长促进特性试验
采用表面涂布法，在每一块平皿上接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间不长于试验中规定的最短期限。接种微生物的生长与对照标准的培养基获得的微生物生长相当。
4.4.
5.3 液体或固体培养基的抑制特性试验
用适当培养基接种至少100 CFU适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间至少为试验中规定的最长期限。无受试微生物生长。
培养基的灵敏度测试
培养基的灵敏度测试 培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。方法如下： 1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。 2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。 原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。 如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。。 建议在正式使用前即应完成对培养基的质量检查。如果在进行灵敏度试验的同时，也使用该培养基进行样品检查，那么，一旦培养基的无菌性或灵明度不符合规定，则检验结果应无效。无论这些质量控制检查试验何时完成，实验室都必须在相关产品放行之前或检验报告发出之前，对所用培养基的无菌性及灵敏度试验资料的完整性和合格予以确认。 灵敏度（促生长）检查试验用菌悬液，可用标准菌种制得，也可向具备适当资质的供应商购买。目前市场上的商用产品，如microball公司的培养基质量检查用的定量质控菌株，小瓶内一个小球上含有10~100CFU。此类产品使用简单，但操作者需严格遵守供应商的使用要求。另外，尽管所购试菌种均附有质量证书，正式使用前，仍必须用倾注平皿法或铺表面法等标准检测方法对菌悬液的微生物数量进行复核确认。
培养基适用性检查规程
培养基适用性检查规程 目的：建立一个培养基的灵敏度检查，确保培养基性能可靠。 范围：适用于微生物检验。 责任：微生物检验员。 依据：《中国药典》2010年版一部附录、2010版GMP实施指南 规程： 1.不应在同一无菌室内同时操作2个或2个以上菌株。 2.菌株传代次数不得超过5代（以菌种保存中心获及的冷冻干燥菌种为第0代）。 一、计数培养基的适用性检查 1、菌液制备 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
2、适用性检查 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50-100cfu）,分别注入无菌平皿中，立刻注入待检查营养琼脂培养基和对照营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备4个平皿（其中2个注入待检查营养琼脂培养基，另两个注入对照营养琼脂培养基）。30-35℃培养48h，计数。 取白色念珠菌1ml（50-100cfu）,注入无菌平皿中，立刻注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基和对照玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备4个平皿（其中2个注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基，另两个注入对照玫瑰红钠琼脂培养基）。23-28℃培养72h，计数。 3、结果判断 若被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落数的70%，且菌落大小、形态两者一致，判断该培养基的适用性检查符合规定。 二、控制菌检查用培养基的适用性检查 1.菌液制备 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10-100cfu、每1ml50-100cfu和每1ml大于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。 2、适用性检查 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。 (1)、液体培养基促生长能力检查，分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短
培养基适用性检查记录
培养基适用性检查记录 质量部
培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含 菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照沙 氏葡萄糖琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，20-25℃培养5天计数。被检培养基同 法操作。 四、结果判断 五、结论 本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符合规定□不符合规定。
培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]第代 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]第代 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]第代 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml 的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取11个无菌平皿，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌皿30-35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉20-25℃培养5天计数。被检培养基同法操作。 四、结果判断
无菌培养基灵敏度验证
××公司 无菌检查用培养基适用性验证资料 文件编号：YZ-GC -004
1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，特制定本验证方案。 2.参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。 3.验证项目： 硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。 4.验证小组 4.试验材料： 4.1. 被验证培养基： 品名：硫乙醇酸盐流体培养基 规格：批号：生产厂家： 品名：营养肉汤培养基 规格：批号：生产厂家： 品名：改良马丁培养基 规格：批号：生产厂家： 4.2. 仪器设备： 4.2.1. YM50立式压力蒸汽灭菌器 4.2.2. SW-CJ-2F双人净化工作台 4.2.3. JC101型电热鼓风干燥箱 4.2.4.JY-B型生化培养箱(23～28℃) 4.2. 5.PHX-DHS-40x50恒温培养箱(35～37℃) 4.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液 4.4. 验证用培养基：
4.5. 验证用菌株： 5.菌液制备： 5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。 5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。 6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿） 分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml，置23～28℃培养箱培养三天。 7.无菌培养基的无菌性检查 7.1培养基的配制 硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。 营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。 改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全
实验用培养基适用性检查标准操作规程
" 起草人Prepared by: 起草日期 Date: ` _____________________ QC 审核人Reviewed by:>审核日期 Date:_____________________ QC？ 审核人Reviewed by:审核日期Date: ： QA 批准人Approved by: 批准日期 ^ Date: 质量部QD
目的 Purpose 为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。 范围 Scope 本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。 职责 Responsibility ！ 分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。 内容procedure 1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 2试验用菌种及培养基 2.1菌种: 2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633] 2.1.3~ 2.1.4大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739] 2.1.5金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538] 2.1.6白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231] 2.1.7黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404] 2.1.8伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028] 2.1.9铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027] 2.2培养基 2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。 2.2.2| 2.2.3大豆酪蛋白消化肉汤 Soybean-Casein Digest Broth 2.2.4大豆酪蛋白消化琼脂 Soybean-Casein Digest Agar 2.2.5沙氏葡萄糖琼脂 Sabouraud Dextrose Agar
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。 范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。 依据：中国药典》2015年版 《药品生产质量管理规范》2010年修订 《中国药品检验标准操作规程》2010年版 责任：QC化验员对实施本规程负责。 内容: 1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。 2、材料及设备 2.1 生化培养箱 2.2 生物安全柜 2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供） 2.4 灭菌试管、灭菌注射器 2.5 0.9%无菌氯化钠溶液 2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。3、无菌检查培养基的适用性检查 3.1无菌性检查 取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。 3.2灵敏度检查 3.2.1菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），
并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501] 生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001] 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003] 3.2.2菌液制备 3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备 3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。 3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。 3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。 3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。 3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备 3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入
新版GMP培养基适用性检查验证方案课件.doc
培养基适用性检查 验证方案 文件编号：VMP-VV-501-00 起草人： 审核人： 批准人： 批准日期：年月日
验证立项申请表
验证方案审批表
1.概述 通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 2.验证目的及范围 为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 3.验证风险评估 对于本次验证的执行进行了如下的风险分析： 4.验证前准备 4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
无菌移液管。 5.验证内容 5.1测试环境条件要求 所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。 5.2计数培养基 5.2.1验证用菌种及培养基： 5.2.1.1来源：食品药品检验所 5.2.1.2菌落计数用菌种 注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。 5.2.2培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。 5.2.3菌液制备 5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。5.2.3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。
生产用培养基制备岗位标准操作规程
黑龙江正康生物技术股份有限公司GMP管理文件 一、目的：为保证培养基能够满足生产要求，特定培养基制备岗位操作规程。 二、适用范围：适用于培养基制备岗位的操作。 三、责任者：分发部门负责人，质量监督员，工艺员，操作人员。 四、正文： 1 操作前准备： 1.1 接收指令，根据指令情况填写生产状态标识牌，标明当日生产产品的品名、规格、批号、批量、岗位名称、生产日期。 1.2 检查上批次清场情况，有上一批次生产“清场合格证”，并确认无上次生产遗留物。 1.3 检查生产现场卫生状况，有厂房“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.4 检查设备、设施及状态情况，有设备“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.5 检查容器具卫生状况，有容器具“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.6 检查生产用衡器是否处于水平状态，是否归零，是否有检定合格证，并在有效期内。 1.7 检查确认批生产记录及相应的配套记录已准备齐全。 2 生产操作： 2.1 领料： 2.1.1 根据生产指令开出限额领料单，领取所需用的原辅材料，并有质量管理部的检验合格报告
单。检查报告单上的物料编码、品名、数量、规格及外观质量，合格后才能使用；如不符合要求应拒绝收料； 2.1.2 按照《物料进入生产区标准操作规程》清除原辅料外包装物表面的异物灰尘，并清洁消毒，再复核物料编码、品名，规格、检查外观、数量，避免差错，放入物料暂存间中待用。 2.2 称量： 2.2.1 称量前应核对原辅料物料编码、品名、批号、生产厂家、规格等，应与检验报告单相符。 2.2.2 原辅料的使用量应根据原料的实际含量、含水量等因素进行换算，按检验用培养基制配法或各产品的工艺规程所规定的量进行100%的投料。 2.2.3 称量时所用的取料铲必须专用，不能混用，数量应有复核人，操作人和复核人均应在称量原始记录上签名。 2.2.4 液体药品临用前单独称量，称量完毕要立即清理称量台和台秤。 2.2.5 剩余的原辅料应密封贮存，并在容器外标明物料编码、品名、批号、日期、剩余量及使用人。 2.3 配制： 2.3.1 注意事项： 2.3.1.1 根据规程，核对所用原辅料的物料编码、品名、批号、生产厂、规格等； 2.3.1.2 每一个配制器皿必须标明所配培养基的品名、规格、批号和配制量； 2.3.1.3 配制时，每一种原辅料的加入和调制必须由核对人确认并作好记录； 2.3.1.4 配制过程中的温度调节和配制的最后定量均要有复核人确认，并有操作人和复核人签字。 2.3.2 配制过程 2.3.2.1 使用市售的成品培养基的配制过程按使用说明书配制即可。 2.3.2.2 使用各种原材料配制的配制过程见附注。
实验用培养基适用性检查标准操作规程
起草人Prepared by: 起草日期 Date: _____________________ QC 审核人Reviewed by: 审核日期 Date: _____________________ QC 审核人Reviewed by: 审核日期 Date: QA 批准人Approved by: 批准日期 Date: 质量部QD
目的Purpose 为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。 范围Scope 本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。 职责Responsibility 分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。 内容procedure 1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 2试验用菌种及培养基 2.1菌种: 2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633] 2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739] 2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538] 2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231] 2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404] 2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028] 2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027] 2.2培养基 2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。 2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth 2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar 2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar 2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel
培养基的灵敏度检查操作SOP
培养基的灵敏度检查操作SOP 1 目的建立培养基灵敏度试验的操作规程，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行。 2 适用范围本标准适用于2015版中国药典培养基灵的敏度检查。 3 责任者QC检验人员。 4 内容 4.1 试验设备及用具： 无菌培养皿、移液枪或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、培养箱等。 4.2 使用的菌株： 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003, 铜绿假单胞菌CMCC(B)10104， 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501， 生孢梭菌CMCC(B)64941， 白色念珠菌CMCC(F)98001， 黑曲霉CMCC(F)98003， 培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。 4.3 检测频率 每批新买的培养基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。 4.4 操作方法 4.4.1 对照标准培养基 用已经过试验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基。 4.4.2 试验培养基 将琼脂类的试验培养基加热融化后，冷却至45℃左右，以无菌的方式在无菌培养皿中注入15～20mL，备用。液体类的培养基直接使用。 4.4.3 菌悬液的制备 购买对应的商业化定量菌株。使用时直接稀释成规定菌含量的菌悬液。目前有进口的bioball和国产的microball等。使用方便，定量精确。
4.4.4 培养基的生长促进实验 4.4.4.1 琼脂类培养基的生长促进试验 每株菌用2个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。试验培养基上的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的70%-150%范围内。（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录1） 4.4.4.2 液体类培养基的生长促进实验 每株菌用2管（或瓶）试验培养基，接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。 4.4.5 培养基的生长促进和抑制特性试验 4.4. 5.1 液体培养基的生长促进特性试验 接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）于一定量适合的培养基。在特定温度下培养，培养时间不超过试验中规定的最短期限。与对照标准的培养基获得的微生物生长相比，接种微生物的生长应明显。 4.4. 5.2 固体培养基的生长促进特性试验 采用表面涂布法，在每一块平皿上接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间不长于试验中规定的最短期限。接种微生物的生长与对照标准的培养基获得的微生物生长相当。 4.4. 5.3 液体或固体培养基的抑制特性试验 用适当培养基接种至少100 CFU适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间至少为试验中规定的最长期限。无受试微生物生长。
培养基配制及适用性检查标准操作规程
培养基配制及适用性检查标准操作规程 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
建立培 养基配 制及适 用性检 查的标 准操作 规程， 规范实验人员的操作流程。 范围： 适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。 依据： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部 职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。 内容 1 培养基的申购 根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。 2 培养基的验收 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商， 应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。
验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏 未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制 培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01） 培养基配制方法 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸馏水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。 称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 pH 值的测定和调整
培养基的灵敏度检查操作规程
培养基的灵敏度检查操作规程 1 目的建立培养基灵敏度试验的操作规程，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行。 2 适用范围本标准适用于培养基灵敏度检查。 3 责任者 QC 检验人员。 4 内容 4.1 试验设备及用具：无菌培养皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯 等。 4.2 使用的菌株： EP 检测用 ATCC 的菌株： 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC 6538 大肠埃希菌 Escherichia coli ATCC 8739 沙门氏菌 Salmonella enterica subsp ATCC 14028 黑曲霉 Aspergillus niger ATCC 16404 培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。 4.3 检测频率 每批新买的培养基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。 4.4 操作方法 4.4.1 对照标准培养基 用已经过试验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基。 4.4.2 试验培养基 将琼脂类的试验培养基加热融化后，冷却至45 C左右，以无菌的方式在无菌培养皿 中注入15?20mL,备用。液体类的培养基直接使用。 4.4.3 菌悬液的制备 4.4.3.1 细菌菌悬液的制备
取细菌的斜面培养物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤培养基中30-35C培养18-24h,取上述培养物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-7-10-8的菌悬液备用。 4.4.3.2 霉菌菌悬液的制备 取黑曲霉的斜面培养物加入无菌水 4mL 制成孢子悬液，取上述孢子悬液按 10 倍系列稀释，分别制成 10-6-10-7的菌悬液备用。 4.4.4 培养基的生长促进实验 4.4.4.1 琼脂类培养基的生长促进试验 每株菌用 2 个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种 0.1-0.5mL 的菌悬液（约10-100CFU 试验菌），同时用 2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。试验培养基上的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的 70%-150%范围内。（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录 1） 4.4.4.2 液体类培养基的生长促进实验 每株菌用2管（或瓶）试验培养基，接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用 2 个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。 4.4.5 培养基的生长促进和抑制特性试验 4.4. 5.1 液体培养基的生长促进特性试验 接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）于一定量适合的培养基。在特定温度下培养，培养时间不超过试验中规定的最短期限。与对照标准的培养基获得的微生物生长相比，接种微生物的生长应明显。 4.4. 5.2 固体培养基的生长促进特性试验 采用表面涂布法，在每一块平皿上接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌）适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间不长于试验中规定的最短期限。接种微生物的生长与对照标准的培养基获得的微生物生长相当。 4.4. 5.3 液体或固体培养基的抑制特性试验 用适当培养基接种至少 100 CFU 适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间至少为试验中规定的最长期限。无受试微生物生长
培养基配制标准操作规程
1.目的： 建立本规程旨在为培养基配制提供操作标准。 2.范围： 公司培养基配制 3.责任： 质量管理科、菌检员对实施本SOP负责。 4.检验依据： 《中国药典》2015年版四部。 5.内容： 5.1 营养琼脂 ◆称本品34g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。 5.2 玫瑰红钠琼脂培养基 ◆用于霉菌总数测定。 称本品30g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为6.4±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。
5.3 普通琼脂斜面培养基 ◆称本品33g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为8.0～8.2），放入冰箱内保存、备用。 5.4 胆盐乳糖培养基 ◆称本品36g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好后高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2～7.4），放入冰箱内保存、备用。 5.5 营养肉汤培养基 ◆适用于一般细菌的培养。 称取本品19g，加纯化水1000ml，煮沸到完全溶解后分装，高压灭菌121℃ 30分钟备用。 5.6 伊红美兰琼脂培养基 ◆用于大肠杆菌及肠道致病菌的分离鉴别。 称取本品36g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，煮沸至完全溶解，高压灭菌115℃30分钟，冷至55℃左右，振摇培养基，倾注灭菌平皿备用。 5.7 室温菌种保存培养基 ◆用于常用菌种的保存。 称取本品28g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，加热煮沸，高压灭菌121℃30分钟,备用。 6.文件变更历史：
SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471
SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471 GMP标准文件分发号: 流水号:471 编码: SOP-QC-03000 共2页第1页题目: 培养基灵敏度检查标准操作规程 制定人 QA审核批准人制定日期审核日期批准日期颁发部门质量技术部 颁发日期生效日期 质量技术部分发部门 目的:建立培养基灵敏度检查标准操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可 靠性。范围:适用于培养基灵敏度检查。 职责:QC无菌检验员。 规程: 1 实验设备及用具: 高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪 瓷托盘、时钟、75,酒精棉球、无菌服。 2 培养基:需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐液体培养基)、真菌培养基，培 养基的配制详见《培养基配制标准操作规程》。 3 测试用菌种 3.1 藤黄微球菌[CMCC (B) 28 001] 3.2 生孢梭菌[CMCC (B) 64 941] 3.3 白色念珠菌[CMCC (F) 98 001] 4 操作 4.1 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜 培养物，分别用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液;将生孢梭菌不含琼脂的需 气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸至无菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用
0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。分别取上述菌悬液,用0.9,无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。 4.2 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10—100个菌并计数。 4.3 将藤黄微球菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别 GMP标准文件接种至每管装量为12ml需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。 5 结果判定:以每珠菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。 题目: 培养基灵敏度检查标准操作规程共2页第2页
培养基适用性验证方案
培养基适用性验证方案
培养基适用性验证第 2 页共 9 页 培养基适用性 验证 方案起草人：日期：年月日方案审核人：日期：年月日方案批准人：日期：年月日
目录 1. 验证目的 (3) 2. 参照标准 (3) 3. 验证项目 (3) 4. 验证小组人员及职责……………………………………………………………3-4 5. 验证可接受的标准 (4) 6. 验证材料…………………………………………………………………………4-5 7. 菌液制备 (5) 8. 适用性检查………………………………………………………………………5-6 9. 控制菌检查 (7)
1. 验证目的： 需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基、麦康凯液体培养基和麦康凯琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌、大肠埃希菌的测定和控制菌适用性检查。 2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。 3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基、麦康凯液体培养基和麦康凯琼脂培养基的适用性检查 4.验证小组人员及职责： 4.1验证小组人员: 小组人员职务姓名所在部门职务 组长刘秀质量管理部经理 组员郝枝桃质量管理部QC主任 组员王和霞质量管理部检验员 组员兰丹质量管理部检验员 4.2验证人员职责及要求 4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。 4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。 4.3验证中各部门的职责 4.3.1验证领导组职责 4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。 4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 4.3.1.3负责验证方案的批准工作。 4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 4.3.1.5负责验证报告的批准工作。 4.3.2验证工作小组职责 4.3.2.1负责验证方案的起草工作。 4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 4.3.2.3负责验证方案的实施。 4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。 4.3.2.5参与验证结果的评价工作。 4.3.3质量部职责 4.3.3.1负责验证方案的审核工作。 4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。 4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。 4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。 5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6. 试验材料： 6.1. 被验证培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、麦康凯液体培养基 6.2. 仪器设备： 6.2.1.YX280B手提式不锈钢蒸锅
血琼脂培养基配制标准操作规程
血琼脂培养基配制标准操作规程 1．目的 规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。 2．原理 羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35℃培养18～24小时后色泽仍然新鲜。 3．用途 供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。 4．配方 特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～10%，pH7.1～7.5。 5.操作步骤
将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟。冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。血琼脂层厚4mm。 6.储存条件 2～8℃冰箱。 7.有效期 实验室自行规定，确保培养基质量。 8. 质量控制 8.1 质控频度每次新配制时做质控 8.2 质控方法及结果见表5-18. 表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果 试验方法结果 无菌试验<100块抽检5%，>100块随机取10 块，35℃培养，观察有无细菌生长 化脓性链球菌ATCC19615，35℃，培 无细菌生长
生长试验 平行试 验 养18～24小时 肺炎链球菌ATCC6305，35℃，培养 18～24小时 金黄色葡萄球菌ATCC25923， 35℃，培养18～24小时 大肠埃希菌ATCC25922，35℃，培养 18～24小时 做质控时，取新旧批号的培养基同时 做 生长良好，β溶血 生长良好，a溶血 生长良好，β溶血 生长良好， 9.注意事项 倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若 温度过低，琼脂易凝固。 参考文献 [1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海： 上海科学技术出版社，2007