雷公藤根化学成分的分离与鉴定
雷公藤生物碱的化学性状及药理作用研究
天然产物化学小论文 论文题目：雷公藤生物碱的化学性状及药理作用研究论文作者： 指导老师： 班级： 学号： 日期：二0一0年五月二十一日
目录 摘要关键词 1 化学成分 1.1 倍半菇大环内醋类生物碱 1.2 精眯类生物碱 1.3 卫矛碱、翅卫矛辛宁 2 雷公藤生物碱的免疫抑制作用 2.1 疫抑制作用 2.2 淋巴细胞免疫抑制作用 3 抗生育作用 4 抗肿瘤作用 5 杀虫活性
摘要目的：对中药雷公藤生物碱的有效成分的化学性状和药理作用进行研究。方法：查阅相关的期刊、文献及论文。结果：雷公藤生物碱主要包括倍半菇类生物碱、睛眯类生物碱、卫矛城、翘卫矛辛宁等化合物；药理研究证明其具有杭炎、免疲抑制、杭肿瘤、抑制雄性生育、杭艾滋病、杀虫等作用。结论：雷公藤生物碱具有广泛的药理活性，而且毒性较小，对进行进一步的研究和开发具有重要意义。 关键词雷公藤；生物碱；单体；药理作用；植物杀虫剂
雷公藤(Tripterygium wilfordiiHook.f.),属卫矛科雷公藤属植物,为著名的中药植物和杀虫植物。临床用于治疗类风湿性关节炎，疗效显著，可作为治疗该类疾病的二线首选药物。雷公藤的化学和药理结果表明，其有效成分有二赌类、三砧类和生物碱类化合物等，二菇类有效成分即毒性成分，治疗浓度与中毒浓度相近，其毒性大于生物碱类，临床证明生物碱类治疗类风湿性关节炎的总有效率为100%、显效率为80%，生物碱制剂对关节的消肿、止痛作用明显、见效快，降血沉作用也较大，同时还发现有抗肿瘤，抗雄性生育作用，是有希望的男性避孕药。近几年来人们对生物碱的化学成分和药理等方面进行了大量的研究，又发现了多种单体，其中有些单体具有明显的免疫抑制、抗肿瘤作用和较小的毒性[z]，充分显示了生物碱很好的应用前景，对生物碱的化学成分及药理等方面的最新研究进展未见有人进行过较为全面的综述报道。 1化学成分 国内外就雷公藤生物碱的化学成分进行了大量的研究，不同的研究者对同一单体命名不同，同一种单体有几种中文名称，一定程度上给其他研究工作者带来了混淆和麻烦，本文对已发现的所有生物碱单体进行了系统整理和归类，报道如下。 1.1 倍半菇大环内醋类生物碱 wilfordine(雷公藤定碱，雷公藤碱，wilforine(雷公藤灵碱，雷公藤次碱，wilforidine(雷公藤碱戊，wilforgine (雷公藤晋硷，雷公藤碱乙，雷公藤吉碱wilfortrine(雷公藤春碱，雷公藤特碱I，雷公藤碱T，wilfordinin。(雷公藤定宁)，wilforzine(雷公藤增碱，雷公藤辛碱、雷公藤庚碱)，wilfordsuine(雷公藤植碱)，wilfoeonine(雷公藤康碱)，wilfrdsine(雷公藤明碱)，wilfordmine(euonine一雷公藤新碱，雷公藤碱已[s])isowilfortrine(异雷公膝春碱)，isowilfordine(异雷公藤碱)，euonymine，「4]，PedtassinesA。 1.2 精眯类生物碱 eelaeinnine(苯乙稀南蛇碱)。elafurine(峡喃南蛇碱)，eelabazine(苯代南蛇碱)，eelalloeinnine(南蛇藤别内桂酞胺碱)。 1.3卫矛碱、翅卫矛辛宁 表1 雷公藤生物碱及其理化常数
几种真菌的分离与鉴定教学文案
常见真菌的分离与鉴定 病原真菌的一般特性 真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。 一、基本性状 （一）形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha）真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。 2．孢子生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。 （1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。
青蒿的化学成分研究
青蒿的化学成分研究 发表时间：2016-11-02T15:36:35.307Z 来源：《系统医学》2016年13期作者：付新张洪财阎雪莹刘永武张洋[导读] 研究青蒿Artemisia annuaL .的化学成分。 黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨 150040 【摘要】目的研究青蒿Artemisia annuaL .的化学成分。方法采用正向硅胶柱色谱、ODS柱色谱等方法对其化学成分进行分离、纯化，根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。结果从青蒿95%乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位分离并鉴定了4个化合物，分别为β-Sitosterol(1)，Apigenin(2)，4-O-glycosyloxy-2-hydroxy-6-methoxy-acetophenone (3)，7-methoxy-coumarin-6-O-β-D-glucopyranoside (4)。结论所得化合物在该植物中均已发现，但未进行活性研究，将进一步进行细胞活性筛选，寻找先导化合物。 【关键词】青蒿；化学成分 【中图分类号】R282.2 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）13-221-01青蒿为一年生草本植物黄花蒿Artemisia annuaL .的全草。广布于全国，夏秋两季采收。主要功效为清虚热、除骨蒸、解暑、截疟。青蒿与黄花蒿都含有化学成分—青蒿素，可直接杀死疟原虫，既有抗疟特性，并获得诺贝尔奖的殊荣。青蒿具有将强的抗病毒抗菌作用，被开发成多种新药，其主要功效成分为香豆素、萜类、黄酮类、挥发油类等化合物[1-3]。本实验从青蒿中分离得到6个化合物，鉴定了4个化合物的结构，分别为β-Sitosterol(1)，Apigenin(2)，4-O-glycosyloxy- 2-hydroxy-6-methoxy-acetophenone (3)，7-methoxy- coumarin-6-O-β-D-glucopyranoside (4)。下一步将进行细胞活性筛选，寻找先导化合物。 1 仪器与材料 Burker-500型超导核磁共振光谱仪（TMS为内标，瑞士Burker公司）；Micro TOF-Q 质谱仪（美国Burker公司）；Waters 2695-2996型分析型HPLC（美国waters公司）；C18 反相色谱柱（250× 4.6 mm，5 μm,德国Marsh 公司）；柱色谱用硅胶和薄层色谱用硅胶G（100～200目、200～300目）青岛海洋化工厂有限公司；反向ODS（250× 10mm, 10μm，美国thermo公司）；R-3HB小型旋转蒸发仪（印度BUCHI 有限公司）；试剂均为分析纯。 青蒿药材购于黑龙江中医药大学附属第一医院，经黑龙江中医药大学中药鉴定学教研室鉴定为菊科植物黄花蒿Artemisia annuaL .的全草。标本（20150402）保存于黑龙江中医药大学中医药研究院。 2 提取与分离 青蒿全草(7 kg)，加6倍量的95%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并药液，减压浓缩回收溶剂得稠膏。将稠膏用4L水（低于60℃）分散后，制成水悬液。分别用等体积的石油醚(60-90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取4次，减压回收溶剂。 二氯甲烷部位(42.6g)经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脱，得到7个组分Fr. Ⅰ(2.3 g)、Fr. Ⅱ (5.1 g)、Fr. Ⅲ (6.7 g)、Fr. Ⅳ (5.4 g)、Fr. Ⅴ (4.7g)、Fr. Ⅵ (3.8 g)、Fr. Ⅶ(2.9 g)。将Fr. Ⅱ段样品，经正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(20∶1)等度洗脱，分离得到化合物1。将Fr. Ⅲ段样品，经正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，分离得到化合物2。将Fr. Ⅳ段样品，经正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(10∶1)等度洗脱得到Fr.A、Fr.B、Fr.C。 将Fr.B段样品经ODS柱色谱，以甲醇-水(10：90～90：10)和甲醇梯度洗脱得化合物3和4。 3 结构鉴定 化合物1：无色针状结晶，易溶于氯仿。HR-ESI-MS m/z：413.2641 [M-H]-，分子式为C29H50O，计算其不饱和度为5。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)高场区6个甲基信号分别归属为δ0.65 ( s, H-18)、0.81 (s, H-19)、0.82 (d,6.3, H-21)、0.84(d,6.4, H-26)、0.92(d,6.4,H-27)、1.03 (d,6.7, H-28)；δ 5.16(d,4.4,H-7)、5.38(m,H-23)处氢质子归属于双键上质子信号。在13C-NMR(125 MHz, CDCl3)中碳信号归属如下：δ36.7(C-1)、30.8(C-2)、70.9(C-3)、41.8(C-4)、139.7(C-5)、120.1(C-6)、30.2(C-7)、28.5(C-8)、49.6 (C-9)、35.8(C-10）、20.6(C-11）、38.1(C-12)、41.7 (C-13)、55.6(C-14)、25.5 (C-15)、23.8 (C-16)、55.1 (C-17)、11.7 (C-18)、18.8(C-19)、35.6(C-20)、18.1 (C-21)、32.2(C-22)、27.7 (C-23)、44.1(C-24)、28.6(C-25)、17.2(C-26)、18.6 (C-27)、22.6( C-28)、10.2(C-29)。综合以上数据与文献[4]对照鉴定该化合物为β-谷甾醇(β-Sitosterol)。 化合物2：淡黄色粉末，易溶于甲醇。盐酸-镁粉反应阳性。HR-ESI-MS m/z：269.4382[M-H]-，分子式为C15H10O5，计算其不饱和度为11。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)，δ：6.15(d,1.5,H-6)，6.43(d,1.5,H-8)，6.72(s,H-3)，6.96(d,8.5,H-3',5')，7.94 (d,8.5,H-4',6')。13C-NMR(125 MHz, CDCl3)中碳信号归属如下：δ163.2(C-2)、102.1 (C-3)、180.9(C-4)、161.6(C-5)、98.6(C-6)、163.8(C-7)、94.5(C-8)、153.6 (C-9)、102.9(C-10)、121.7(C-1')、128.1(C-2')、115.3(C-3')、161.5(C-4')、115.1(C-5')、128.2(C-6')。结合以上数据与文献[4]比对鉴定该化合物为Apigenin。 化合物3：白色无定形粉末，易溶于甲醇。Molish反应呈阳性。HR-ESI-MS m/z：343.3047[M-H]-，分子式为C15H20O9，计算其不饱和度为6。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)，δ：6.26(d,2.2,H-3)，6.19(d,2.2,H-5)，4.98(d,7.2,H-1')，3.89(s,-OCH3)，3.90(m,H-6a')，3.67(dd,6.1,12.2,H-6b')，3.63-3.69(m,H-2',3',4',5')。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)中碳信号归属如下：δ107.8(C-1)、164.7(C-2)、97.9(C-3)、165.5(C-4)、92.8(C-5)、167.6(C-6)、101.4(C-1')、74.7(C-2')、78.5(C-3')、71.3(C-4')、78.4(C-5')、62.5(C-6')、204.9(-C=O)、33.2(-COCH3)、56.3(-OCH3)。结合以上与文献[5]比对鉴定该化合物为4-O-glycosyloxy-2-hydroxy-6-methoxy-acetophenone。 化合物4：白色无定形粉末，易溶于甲醇等有机溶剂。异羟肟酸铁反应呈阳性。HR-ESI-MS m/z：353.2957[M-H]-，分子式为C16H18O9，计算其不饱和度为8。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)，δ：7.88(d,9.5,H-4)，7.20(s,H-8)，7.17(s,H-5)，6.29(d,9.5,H-3)，5.05(d,7.5,H-1')，3.90(s,-OCH3)，3.91(m,H-6a') ，3.69(dd,5.7,12.2, H-6b')，3.38-3.55(m,H-2',3',4',5')。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)中碳信号归属如下：163.5(C-2)、114.5 (C-3)、145.6(C-4)、110.8(C-5)、148.2(C-6)、151.7(C-7)、102.0(C-8)、150.7 (C-9)、110.8(C-10)、105.2(C-1')、74.7(C-2')、78.4(C-3')、71.2(C-4')、78.4(C-5')、62.4(C-6')、57.0(-OCH3)。结合以上与文献[6]比对鉴定该化合物为7-methoxy-coumarin-6-O-β-D-glucopyranoside。
雷公藤和昆明山海棠化学成分相似性分析
雷公藤和昆明山海棠化学成分相似性分析 黄耀峰,沈雪松,顾生玖,朱开梅,李芳耀 (桂林医学院,广西桂林541004) 摘要 [目的]研究雷公藤和昆明山海棠化学成分的相似性。[方法]采用乙醚、氯仿和乙酸乙酯等有机溶剂对雷公藤和昆明山海棠植物根茎进行顺序热提取。其提取液经浓缩后对相对应部位进行薄层层析检查、化学成分的预测和熔点的测定来判别2种植物的差异。[结果]结果表明,2种植物含有很多相似的化学成分。其薄层层析法的检查结果可作为雷公藤和昆明山海棠植物的生药鉴定,以及判断质量的指标。[结论]该研究结果对进一步分离、提纯雷公藤及昆明山海棠所含的化学成分及研究各化学成分的结构有一定的参考作用。关键词 雷公藤;昆明山海棠;化学成分鉴别;薄层层析法中图分类号 S661.4 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)13-05961-03A nalysis on Similarity of Chemical Compositions of betw een T ripterygium wilfordii H ook.f.and T ripterygium hypoglaucum (L évl.)H utchins HUANG Yao 2feng et al (G uilin M edical University ,G uilin ,G uangxi 541004 )Abstract [Objective]T he purpose of this research was to study the sim ilarity of chem ical com position of T ripterygium wilfordii H ook.f.and T riptery 2gium hypoglaucum (L évl.)Hutchins.[M eth od]T he chloroform ,ethyl acetate and other organic s olvents were used for root extraction under heat sequence in this essay.A fter concerntration of the extract ,T LC exam ination ,prediction of chem ical com position and m elting point determ ination were applied for judgem ent between the tw o plants ’differences.[Result ]T he results sh owed that the tw o species contained a lot of sim ilar chem ical com position.T he ex 2perim ental results of T LC exam ination could be regarded as pharm acogn ostic identification ,quality standard of tripterygium and THH.[C onclusion]T his research w ill give s om e references in the further separation ,purification ,com positions and chem ical structure study of T ripterygium wilfordii H ook.f.and T ripterygium hypoglaucum (L évl.)Hutchins. K ey w ords T ripterygium wilfordii H ook.f.;T ripterygium hypoglaucum (L é vl.)Hutchins ;Identification of chem ical com position ;T hin layer chrom atog 2raphy 基金项目 广西教育厅课题(200809MS179)。 作者简介 黄耀峰(1954-),男,广西百色人,副教授,从事天然药物 的研究。 收稿日期 2009202216 雷公藤[T riptergium wilfordii H ook.f.]和昆明山海棠[T. hypoglaucum (Levi.)Hutchins.]属于卫茅科、雷公藤属植物, 在植物分类学上定为2个品种[1]。其药用部位为根,临床作用有:清热解毒、活血化瘀、祛风通络和消坚消肿,原是民间治疗“风湿”的草药。据文献报道,雷公藤根中含有生物碱、卫茅醇、二萜内酯和三萜类化合物等[2]。从昆明山海棠中可以测得生物碱、萜甾类、卫茅醇、鞣质、不饱和化合物、醛酮化合物、酚类和糖类等,两者从植物的种源、临床的用途以及副作用等方面有许多相似点[3-9]。针对雷公藤和昆明山海棠植物在临床疗效上具有相似性的特性,笔者采用乙醚、氯仿和乙酸乙酯等有机溶剂对雷公藤和昆明山海棠植物根茎进行顺序热提取,其提取液经浓缩后对相对应部位进行薄层层析检查、化学成分的预测和熔点的测定来判别两种植物的差异,为雷公藤及昆明山海棠在临床上的合理应用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料 雷公藤根由桂林市药材站提供,昆明山海棠根 由桂林市药检所提供。2种药品均按照文献方法做生药学鉴定。乙醚为广州化学试剂二厂生产,批号081014;氯仿由上海试剂一厂生产,规格G B 2682265,批号081216;乙酸乙酯由上海试剂一厂生产,批号080916。高速粉碎机:上海中药机械厂,型号SF 21703;烘箱:上海市实验仪器厂,型号10122型;干燥器:上海玻璃仪器一厂生产。 1.2 方法 1.2.1 薄层层析板的制备。取E.meick 硅胶27.5g ,加0.5%(W/V )羧甲基纤维素钠的上清液80m l ,充分拌匀,加数滴乙 醇,倒入清洁的2块3mm 厚的玻璃中间,另取一块边缘光滑 的玻片,从一端刮向另一端而成,室温空气干燥后,置105℃烘箱活化30m in ,然后放入干燥器中备用。 1.2.2 试验样品的制备。取雷公藤根粉(或昆明山海棠根 粉)分别置于连续提取器中,顺次以乙醚、氯仿、乙酸乙酯连续提取,每种溶剂在更换之前,使提取液呈无色透明为止。提取液过滤浓缩,浸膏干燥除去溶剂,分别得到相应的乙醚、氯仿、乙酸乙酯等3个提取部分,供分离、鉴别。 2 结果与分析 2.1 乙醚提取液的薄层对照 雷公藤根(或昆明山海棠根) 粉经乙醚连续提取后,乙醚液过滤,浓缩至浆状物,分别称取 0.1g 加入乙醚至10m l ,用血色素管点样30μl ,薄层对照,点好样的薄层板①置于盛有石油醚∶乙酸乙酯=8∶2的展开缸内饱和1h ,然后展开,展距14cm ,展毕除去展开剂,于紫外灯下观察萤光(图1)。由图1可知,采用乙醚提取液,石油醚和乙酸乙酯为展开剂的薄层对照,雷公藤有8个斑点,昆明山海棠有10个斑点,表明雷公藤从1～8的斑点与昆明山海棠的1～8斑点相同,这说明含有相同的化学成分。②置于盛有环己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=20.0∶2.5∶0.7的展开缸内直接展开,展距14cm ,展毕除去展开剂后于紫外灯下观察萤光,(图2)。由图2可知,采用乙醚为提取液,环己烷、乙酸乙酯及冰醋酸为展开剂的薄层对照,雷公藤及昆明山海棠均有 11个斑点,说明化学成分相同。 2.2 氯仿提取液的薄层对照 雷公藤根(或昆明山海棠根) 经乙醚提取后的根粉继续用氯仿连续提取,提取液过滤,浓缩呈浆状物,分别称取0.1g 加入氯仿至10m l ,用血色素管点样20μl ,薄层对照,点好样的薄层板①置于盛石油醚∶乙酸乙酯=8∶2的展开缸内饱和1h ,然后展开,展距14cm ,展毕除去展开剂后于紫外灯光下观察萤光(图3)。由图3可知,采用氯仿提取液,石油醚和乙酸乙酯为展开剂的薄层对照,雷公藤含有8个斑点,昆明山海棠含有6个斑点,表明雷公藤 1～6的斑点与昆明山海棠1～6的斑点相同,这说明含化学 安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.Sci.2009,37(13):5961-5963 责任编辑 李玮 责任校对 况玲玲
人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定.
人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定 作者：秦明春，王若光，秦莉花，刘小丽，李春梅，刘惠萍，叶赞 【摘要】目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法，提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型，为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带（至少20 cm）冲净淤血，采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液, 一根用0.2％胶原酶Ⅱ，另一根用0.1％胶原酶Ⅰ和0.25％胰酶等比混合消化液，比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养，观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞，胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶，且比较理想的消化时间均为13 min，细胞接种后4～5 h开始贴壁生长，1周左右可生长成单层，光镜下呈多角形，“铺路石”样排列，免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法，而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，成功率高，可靠性大，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。 【关键词】人脐静脉内皮细胞；细胞培养；流式细胞术；细胞周期；分离；鉴定 Cultivation and in vitro identification of endothelial cells from human umbilical vein 〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕Ｏｂｊｅｃｔｉｖ ｅTo explore the primary culture method of human vascular endothelial cells(ECs) from umbilical vein, enhance the succes s rate of separating and culturing ECs in vitro, establish the model of human vascular ECs, and provide an experimental method for research of ECs. Methods The umbilical veins in human umbilical cords, 20 cm long, were fixed and filled the digestive fluids, 0.2% collagenenaseⅡin one cord and t he complex enzyme of 0.25% trypsin and 0.1% collagenaseⅠin an other, and the digestive results were compared. All the cells were collected and cultured in fluid with 10 mg/mL VE GF, their procreation and generation were observed, the morph ologic characteristics of ECs were observed with light micros copy and immunohistochemistry under inverted microscope, and t he cell cycle was observed by flow cytometer. Results Enough
细胞核的分离与鉴定设计型实验设计报告_(2)
实验项目：细胞核的分离与鉴定 实验原理： 分离细胞核的可用方法有吸出法、原生质体破裂法、差速离心法排和排除法。差速离心法是根据细胞内各种细胞结构的比重和大小不同，因而在同一离心场内的沉降速率不同从而将细胞内的结构分级分离出来。本实验就采用差速离心法。 细胞核的鉴定，因为细胞核中主要含DNA，而DNA是碱性蛋白，可用甲苯胺蓝染液可使细胞核内碱性蛋白呈现出来。 实验器材：显微镜，普通离心机，离心管，滴管，玻璃漏斗，纱布，烧杯，解剖剪，镊子，玻璃匀浆器，载玻片/盖玻片，染色盘架，小白鼠肝脏。 实验试剂：甲苯胺蓝染液，蒸馏水，0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，生理盐水 实验步骤： （1）、用颈椎脱臼法处死小白鼠，迅速解开其腹腔取出肝脏，去出结缔组织，剪成小块，尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中。反复洗涤尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。 （2）、将湿重为1g的肝组织放入烧杯中，用量筒取8ml预冷的0.25mol/L 蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，先加少量溶液于烧杯中，尽量剪碎肝组织后全部加入。 （3）、将剪碎的肝组织导入匀浆管中，使匀浆器下端侵入盛有冰块的器血
中，左手持，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3-5次。用3层纱布过滤于匀浆管中，然后制备一张涂片①，自然干燥。 （4）、将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机以2500r/min离心15min,弃去上清液。 （5）、用6mol 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液悬浮沉淀物，以2500r/min离心15min 弃去上清液，将残留液体用气管吹成悬液，滴一滴于干净的载盖玻片上，制成涂片②，自然干燥。 （6）在①·②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5-7min，洗涤干燥后镜检。 ⑺记录观察结果 注意事项： （1）尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。 （2）将匀浆液置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，同时及时离心，以防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离心分层效果。 （3）涂片制作过程中把握好涂片的力度，不可太厚。 （4）染色后的洗涤要注意时间，不可过长，避免将染色洗去，观察不到细胞核。 （5）开腹取出肝后，用生理盐水反复冲洗，避免血细胞对食盐的影响。 预期结果： 在低、高倍镜下，可以观察到经.0.1%碱性固绿染色的小白鼠肝细胞的细胞核体被染成绿色。说明这是碱性蛋白，即细胞核已游离出来。 涂片在高倍镜下可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色、圆形、中央有
青蒿挥发油化学成分的气相色谱
作者：徐新建宋海薛国庆付如钢王文芳 【摘要】目的分析青蒿挥发油的主要化学成分。方法采用水蒸气蒸馏法从青蒿中提取挥发油。用气相色谱-质谱联用法对其化学成分进行鉴定，用归一法计算各组分的相对百分含量。结果分离得51个化学组分峰，并确定出其中43个化学成分，占挥发油总数的98.9%。结论青蒿挥发油主要成分为甜没药萜醇 (bisabolol,23.47%)、甜没药萜醇氧化物b (bisabolol oxide b,11.31%)、甜没药萜醇氧化物 a (bisabolol oxide a,6.27%)、反-橙花叔醇(trans-nerolidol,10.04%)等。 【关键词】青蒿挥发油气相色谱-质谱联用 中草药青蒿，学名黄花蒿artemisia annua l.，属菊科春黄菊族蒿属植物，为一年生草本植物，临床上常以全草入药，有清热解暑、除蒸截疟等功效，用于治疗暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，骨蒸劳热，湿热黄疸等疾病。原产于中国，现澳大利亚、阿根廷、保加利亚、法国、美国等许多国家均有栽培［1］。 青蒿中化学成分分为四类：挥发油、倍半萜、黄酮和香豆素［2］。其中倍半萜类化合物研究较多，从中可以分离出多种倍半萜内酯，其中之一青蒿素(artemisinin)是一种倍半萜内酯类化合物，在救治凶险的脑型疟疾方面具有高效、速效、低毒、使用安全等特点，是国内外公认的抗疟药物，但其中挥发油少有研究。河西走廊生长大量的野生青蒿，该地区有独特的生态环境和气候特征，气候干燥，气温日差较大，光照充足，对植物生长极为有利［3］。为了进一步研究河西走廊产青蒿的化学成分，开发利用野生自然资源，笔者对该属植物青蒿的挥发油进行了研究，从其干燥地上部分的挥发油中分离鉴定出了43种成分，发现其中甜没药萜醇 (bisabolol)及其氧化物的含量较高，具有开发和应用价值。本实验采用水蒸气蒸馏法，提取河西走廊野生青蒿挥发油成分，然后采用气相色谱-质谱-计算机系统进行定性分析，再以峰面积归一化法计算了各组分在挥发油中的相对百分含量［4］。 1 仪器与试药 gc-ms（trace gc2000气相，dsq质谱，thermo tr-35ms 毛细管柱，30 m × 0.25 mm，0.25 μm film。xcalibur处理软件）；实验用青蒿采自甘肃省河西走廊祁连山脚，经笔者鉴定为野生青蒿，凭证标本存化学成分研究室植物标本室。本实验取秋季花盛开后割取地上部分，阴凉处自然风干待用。 2 方法与结果 2.1 挥发油的提取将干燥的青蒿粉碎后，取粉末500 g，按2005年版《中国药典》ⅰ部附录方法提取，得到有特殊浓香气味的挥发油，无水硫酸钠干燥，收率约0.70%。 2.2 gc-ms分析条件 2.2.1 气相色谱条件载气为氦气（99.99%），流速为1 ml/min，进样量为1 μl。进样口温度220℃；程序升温，45℃保持1 min，再以15℃/min升至280℃稳定5 min；传输线温度250℃。
雷公藤化学成分研究.d
雷公藤化学成分研究 严振1，田洋2 ，马跃平3，傅晓春1，张振学2，王金辉3 （1．广东食品药品职业学院，广东，广州510520； 2．沈阳化工学院化学工程学院，辽宁，沈阳 110142 ； 3．沈阳药科大学中药学院，辽宁，沈阳110016 ） [摘要]目的：研究雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f .）根的化学成分。方法：利用各种色谱方法进行分离纯化，根据理化性质和谱学数据对分离得到的化合物进行结构研究。结果：从雷公藤根乙醇提取物中分离得到6个化合物，分别鉴定为5α-豆甾烷-3,6-二酮(5α-stigmast-3,6-dione,1)，6β-羟基-豆甾-4-烯-3- 酮(6β-hydroxystigmast-4-en-3-one,2)，邻苯二甲酸二丁酯(phthalic acid dibutyl ester,3)，秦皮素(fraxetin,4)，β-谷甾醇（β-sitosterol,5），胡萝卜苷（daucosterol,6）。结论：化合物1、3、4为首次从卫矛科植物中分离得到；化合物2为首次从本属植物中分离得到。 [关键词] 雷公藤；化学成分；结构鉴定 雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）系卫矛科雷公藤属植物。广泛分布于浙江、江西、安徽、湖南、广东、福建、台湾等地。其性苦、寒，有大毒，具有杀虫、消炎、活血通络、解毒的功效。现代临床广泛用于多种免疫系统异常而致的疾病，获得了良好的疗效。大量药理及临床已证明其提取物和某些成分具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤和男性抗生育作用[1]。通过对雷公藤根的化学成分的研究，得到6个化合物并分别鉴定，为其药用资源的开发利用提供有益参考。 1 材料与仪器 Bruker ARX-300和Bruker AV-600型核磁共振波谱仪（TMS内标，瑞士Bruker公司）；N2000型日立高效液相色谱仪；制备型色谱柱为YWC C18反相柱（5μm,10 mm×250mm）；MP-S3型显微熔点测定仪（温度计未校正，日本Yanaco公司）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia 公司），柱色谱和薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂有限公司）；所用试剂为色谱纯和分析纯。 雷公藤（市售）经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为Tripterygium wilfordii Hook. f .的根。 2 提取与分离方法 取雷公藤根20 kg，用体积分数为90%乙醇煮沸提取，合并滤液，减压浓缩后得浸膏900 g，将浸膏加适量水稀释，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚层和氯仿层提取物（71.5 g）进行硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮系统（100：1～1：1）梯度洗脱。得到的流份（Fr.37～63）经重结晶处理后得化合物5；流份（Fr.88～96）经重结晶处理后得到化合物1；流份（Fr.143～169）经重结晶处理
川芎内生真菌的分离与鉴定
川芎内生真菌的分离与鉴定 汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光 成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075） E-mail：wangyangli27@https://www.360docs.net/doc/542370937.html, 摘要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法：采用平板分离法分离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果：从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论：不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和川芎内生真菌种群有关。 关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定 川芎为伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。四川都江、彭州为川芎的主要产区。此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎”、“西芎”、“抚芎”[1～3]。有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多[4]，但至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。根据内生真菌和植物互惠共生的关系[5，6]，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎在特定生境中的微生物群落结构的特征。 1. 材料与方法 1.1材料 1.1.1植物来源（见表1） 1.1.2 培养基 PDA培养基[7]（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液[8]（用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH2PO41g、KNO31g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、淀粉0.2g、葡萄糖 0.2g、蔗糖 0.2g、琼脂15～20g、蒸馏水 1000ml、PH自然)。 表1 各种川芎的样品情况 药材名原植物部位采集地采集时间 川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 根茎四川彭州敖平2006.5.20 川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川都江堰石羊2006.5.22 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川彭州小鱼2006.7.24 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川汶川水磨2006.8.10 西芎L. sinense Oliv. 根茎甘肃平凉市华亭马峡2006.9.14 云芎L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong根茎云南丽江泸沽湖2006.8.17注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定 1.2方法 1.2.1. 内生真菌的分离先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个样品6个培养皿，置28℃恒温箱中培养3～15d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围
青蒿素的提取工艺及含量测定开题报告
四川农业大学本科毕业论文 开题报告 青蒿素的提取工艺及含量测定 姓名：何禹 院（系）：资源与环境系 学科专业：生物技术 研究方向：药用植物 指导老师：蒲尚饶教授 2006年10月26日 一、选题依据
1.论文题目及研究领域 （1）论文题目：药用植物青蒿的青蒿素含量测定 （2）研究领域：药用植物 2.论文研究的理论意义和应用价值 目前青蒿素的售价是225美元/g。近年的统计资料表明世界每年有近300万人死于疟疾，尤其是非洲的发病率极高。世界每年青蒿素的需求量为150吨左右，而产量仅为15吨左右，明显供不应求。因此本实验拟测定青蒿中青蒿素的含量为最大程度的获得有效药用成份提供依据。 3.目前研究的概况和发展趋势 由于在抗疟中的重要作用，国际市场对青蒿素的需求量日益提高。目前青蒿素的来源主要是三个方面。一是人工合成。但因其技术难度大，成本高，难以规模生产。二是用基因工程，细胞工程等技术手段，提高青蒿素含量。但用组织培养技术达到产业生产规模还有许多难题需要克服，且也难满足巨大的市场需求。三是从青蒿素植株中提取有效的抗疟成分青蒿素。目前在实验室中有微波辅助提取法、索氏提取法、超临界二氧化碳提取法、水蒸汽蒸馏提取法。微波辅助提取成本太高，索氏提取法不利于工业生产，超临界二氧化碳提取一次性投入成本太高，水蒸汽蒸馏提取法的周期太长、不利于工业化生产。 二、论文研究的内容
1.论文重点解决的问题： 提取方法的选择 2.论文拟开展的大方面 定性定量测定 3.论文拟得出的主要结论 降低成本，提高青蒿素的提取效率，优化工艺流程，防止污染。 三、论文拟采用的研究方法 1.拟采用的主要研究方法是热提取法： 拟采用的工艺流程： 拟采用的实验步骤： (1)将原料粉碎，过60目的筛，后称取100g ,放于有600 ml石油醚的反应器中。 (2) 加热提取3次，每次5h。温度为50度。合并提取液。 (3)过硅胶柱，用苯洗脱，收集含青蒿素段，浓缩回收石油醚后结晶。 2、论文进度计划： 2006年8月~2006年9月——查阅资料 2006年10月~2006年12月——青蒿素含量的测定
雷公藤中药材详细说明书
雷公藤 药材名称： 雷公藤[毒] 拼音名称： LEIGONGTENG 别名： 黄藤、黄腊藤、菜虫药、红药、水莽草、断肠草、震龙根、,蒸龙草、莽草、水莽子、水莽兜、大茶叶、水莽、黄藤草、红柴根、菜虫药、断肠草、黄藤根、黄药、水脑子根、南蛇根、三棱花、早禾花、红紫根、黄腊藤、山砒霜、黄藤木。 科属： 卫矛科植物雷公藤的根。 产地： 主产于福建、浙江、安徽、河南等地 性味： [性味、归经]苦、辛，寒。有大毒。归肝、肾经。 功效： 祛风湿，活血通络，消肿止痛，杀虫解毒。 中成药： 共有5种中成药使用雷公藤:雷公藤内酯软膏雷公藤多甙片雷公藤多苷片雷 公藤双层片雷公藤多甙金关片雷公藤片雷公藤双层片
应用： 1、风湿顽痹，本品有较强的祛风湿、活血通络之功，为治疗风湿顽痹要药，苦寒清热力强，消肿止痛功效显著，尤宜于关节红肿热痛、肿胀难消、晨僵， 甚至关节变形。可单用内服或外敷，或者与威灵仙、独活、防风同用，亦可与 黄芪、党参、当归、鸡血藤等补气药同用。 2、麻风，顽廯，湿疹、疥疮。本品枯燥除湿，杀虫攻毒，对多种皮肤病皆 有良效。治麻风病，可单用煎服，或配伍金银花、黄柏、当归等；治疗顽廯可 单用，或随证配伍防风、荆芥、白蒺藜等药同用。 3、疔疮肿毒。本品苦寒清热解毒，并能以毒攻毒，消肿止痛，治热毒痈肿 疔疮，常与蟾酥配伍应用。 用法用量： 煎汤，10～25G（带根皮者减量），文火煎1～2小时；研粉，每日1.5～4.5 G。外用适量。 注意事项： 内脏有器质性病变及白细胞减少者慎服，孕妇忌服。 采收加工： 秋季采挖，去净二层皮，晒干，生用。 现代研究： 1、化学成分：根含雷公藤定碱、雷公藤扔碱、雷公藤晋碱、雷公藤春碱和 雷公藤增碱等生物碱。此外，雷公藤还含南蛇藤醇、卫矛醇、雷公藤甲素及葡 萄糖、鞣质等。 2、药理作用： （1）免疫调节作用：红斑狼疮是一种自身免疫性疾病，患者存在着多种免 疫学方面的异常。经雷公藤治疗后，常有显著的疗效。验血发现，随着红斑狼 疮病情的好转，血液中原先存在的免疫学异常都能发生不同程度的改善。在实 验室进行的体外试验，也证实雷公藤的生物碱能够抑制抗体的形成。 （2）抗肿瘤作用：动物试验和一些临床研究证明，雷公藤能抑制过快分裂 增殖的肿瘤细胞，因此具有抗癌的作用。
一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定
一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定 摘要:从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,编号为WS-23883,其发酵提取物对多种植物病原真菌具有很强的抑制活性?对其产物进行提取精制及制备液相纯化,获得了纯度达90%以上的化合物?生测表明,在20 μg/mL浓度下该抗生素对多种植物病原真菌的抑制率达100%?根据活性产物紫外吸收光谱,可判断其为一多烯大环内酯类抗生素?质谱分析表明,活性化合物分子质量约667 u,据此判断其为一四烯大环内酯类抗生素? 关键词:多烯大环内酯;抗生素;化合物;纯化;鉴定 Isolation, Purification and Preliminary Identification of A Kind of Antibiotic with High Antifungal Activity Abstract: One actinomyces strain WS-23883 was isolated from soil sample collected in Wuzhishan Mountain area, Hainan province. The extraction of the fermentation broth was bioassayed with some plant disease pathogens; and it exhibited high antifungal activity. The compound with purity above 90% was obtained through macroporus resin column absorbtion method and preparative HPLC. The bioassay showed that the inhitition ratio was 100% at the concentrition of 20 μg/mL. The UV absorption spectrum and mass spectrum showed that the compound was atetraene macrolide antibiotic. Key words: polyene macrolide; antibiotic; compound; purification; characterization 从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,其发酵提取物对多种供试植物 病原真菌及某些腐生真菌具有很强的抑制活性?采用常规方法对该菌的发酵产物进行了提取精制,得到了纯度在90%以上的样品,从目标产物的紫外吸收光谱可判断其为一多烯类抗生素?HPLC-MS检测表明,活性产物分子离子峰为667,可以确定其分子质量约为667 u,综合分析后确定其为一四烯大环内酯类抗生素? 1材料与方法 1.1菌株 1.1.1抗生素产生菌编号为WS-23883,从海南五指山采集的土样中分离得到,由湖北省生物农药工程研究中心保存? 1.1.2生测指示菌番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)?小麦颖枯病菌(Septoria nodorum)?小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)?水稻纹枯病菌(Rhizoctonia