反应性星形胶质细胞增生在脑缺血中的作用
星形胶质细胞在脑缺血中的双重作用
星形胶质细胞在脑缺血中的双重作用 2013-03-29 18:09 来源：国际脑血管病杂志 作者：吴政政等 脑缺血可诱发从细胞能量耗竭到细胞死亡的一系列级联事件，包括兴奋性氨基酸过度释放、自由基形成、炎症反应等。以往研究多局限于脑缺血对神经元的损伤，但由于人大脑中的星形胶质细胞数量是神经元的数倍，因此，在脑缺血后保护与维持星形胶质细胞功能同样重要。目前，由神经元、胶质细胞和毛细血管构成的“神经血管单元”（neurovascularunit，NVU）日益得到认可和关注，其在包括缺血性卒中在内的多种神经系统疾病中发挥重要作用。缺血性卒中的治疗策略应致力于挽救整个NVU的功能，而星形胶质细胞正是NVU的重要组成部分。大量证据表明，星形胶质细胞在脑缺血中具有多方面的复杂作用，一方面可促进神经元存活，另一方面也可加重缺血性损伤。现对星形胶质细胞在脑缺血中的保护与损害作用做一综述，探讨其调控机制，旨在为缺血性卒中的治疗提供新的思路。 1 星形胶质细胞的生物学特性 星形胶质细胞是胶质细胞的一类，其数量为神经元的5倍，是整个中枢神经系统（central nervous system，CNS）的主要组成部分之一，在CNS的生理和病理学中发挥着关键作用。星形胶质细胞终足同时包绕着血管壁和神经突触，参与调控细胞代谢、血流、离子平衡、神经递质水平、神经传输和突触可塑性以及血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）。星形胶质细胞和神经元通过缝隙连接相互作用，对神经元的存活至关重要。神经元、胶质细胞和毛细血管构成的NVU在缺血性卒中的病程进展中具有重要作用，其中，星形胶质细胞作为NVU 的重要成分，一方面伸出大量终足参与BBB，另一方面参与形成神经元突触，被看作是继突触前和突触后成分之后的突触第三成分。脑缺血时，由于缺血核心区葡萄糖和氧供应完全终止，致使包括神经元和星形胶质细胞在内的所有神经细胞发生不可逆性损伤。但是，缺血半暗带内的葡萄糖和氧供应尚部分维持，使星形胶质细胞可存活较长时间。利用氧一葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation，OGD）模型进行的研究显示，星形胶质细胞对OGD 的耐受性好于神经元；进一步的研究表明，星形胶质细胞在OGD时能利用糖酵解产生ATP 供能，从而发挥神经保护作用。然而，缺血性卒中时由于持续和严重的缺氧缺糖，星形胶质细胞的调控功能受损，严重影响着脑组织功能，如谷氨酸动态平衡、水平衡、BBB稳定、脑血流量调节、细胞外离子平衡、神经保护因子分泌等。 2 脑缺血与星形胶质细胞的活化 CNS发生的多种病理学变化，如卒中、外伤、肿瘤、变性性疾病等，均会导致星形胶质细胞活化。这种活化具有特征性的结构和功能变化，然而具体过程尚不清楚。星形胶质细胞是CNS的重要组成部分，在脑缺血时，缺血程度、血脑屏障破坏、炎症反应、代谢失衡、细胞兴奋毒性以及氧化应激均会影响星形胶质细胞活化程度。 虽然普遍认为星形胶质细胞活化是CNS疾病的病理学标志，但对星形胶质细胞活化的定义却并未能达成共识。目前认为，星形胶质细胞活化包括4个特征：（1）由任何形式及程度的CNS损伤和病变引起的一系列分子、细胞和功能水平的变化；（2）随着损伤程度的加重，其分子表达进行性变化，细胞进行性肥大，严重时发生细胞增生和癍痕形成；（3）其变化
脑胶质瘤诊疗规范2018年版
脑胶质瘤诊疗规范（2018年版） 一、概述 脑胶质瘤是指起源于脑神经胶质细胞的肿瘤，是最常见的原发性颅内肿瘤，世界卫生组织（WHO）中枢神经系统肿瘤分类将脑胶质瘤分为Ⅰ-Ⅳ级，Ⅰ、Ⅱ级为低级别脑胶质瘤，Ⅲ、Ⅳ级为高级别脑胶质瘤。本规范主要涉及星形细胞、少突胶质细胞和室管膜细胞来源的高、低级别脑胶质瘤的诊治。 我国脑胶质瘤年发病率为5-8/10万，5年病死率在全身肿瘤中仅次于胰腺癌和肺癌。脑胶质瘤发病机制尚不明了，目前确定的两个危险因素是：暴露于高剂量电离辐射和与罕见综合征相关的高外显率基因遗传突变。此外，亚硝酸盐食品、病毒或细菌感染等致癌因素也可能参与脑胶质瘤的发生。 脑胶质瘤临床表现主要包括颅内压增高、神经功能及认知功能障碍和癫痫发作三大类。目前，临床诊断主要依靠计算机断层扫描（CT）及磁共振成像（MRI）检查等影像学诊断，磁共振弥散加权成像（DWI）、磁共振弥散张量成像（DTI）、磁共振灌注成像（PWI）、磁共振波谱成像（MRS）、功能磁共振成像（fMRI）、正电子发射计算机断层显像（PET）等对脑胶质瘤的鉴别诊断及治疗效果评价有重要意义。 脑胶质瘤确诊需要通过肿瘤切除或活检获取标本，进行组织和分子病理学检查，确定病理分级和分子亚型。目前主要的分子病理标记物包括：异柠檬酸脱氢酶（IDH）突变、染色体1p/19q联合缺失状态（co-deletion）、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）启动子区甲基化、α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁基因（ATRX）突变、端粒酶逆转录酶（TERT）启动子突变、人组蛋白H3.3（H3F3A）
K27M突变、BRAF基因突变、PTPRZ1-MET基因融合、miR-181d、室管膜瘤RELA基因融合等1，2。这些分子标志物对脑胶质瘤的个体化治疗及临床预后判断具有重要意义。 脑胶质瘤治疗以手术切除为主，结合放疗、化疗等综合治疗方法。手术可以缓解临床症状，延长生存期，并获得足够肿瘤标本用以明确病理学诊断和进行分子遗传学检测。手术治疗原则是最大范围安全切除肿瘤，而常规神经导航、功能神经导航、术中神经电生理监测和术中MRI实时影像等新技术有助于实现最大范围安全切除肿瘤。放疗可杀灭或抑制肿瘤细胞，延长患者生存期，常规分割外照射是脑胶质瘤放疗的标准治疗。胶质母细胞瘤（GBM）术后放疗联合替莫唑胺（TMZ）同步并辅助化疗，已成为成人新诊断GBM的标准治疗方案。 脑胶质瘤治疗需要神经外科、神经影像科、放射治疗科、神经肿瘤科、病理科和神经康复科等多学科合作，遵循循证医学原则，采取个体化综合治疗，优化和规范治疗方案，以期达到最大治疗效益，尽可能延长患者的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS），提高生存质量。为使患者获得最优化的综合治疗，医师需要对患者进行密切随访观察，定期影像学复查，兼顾考虑患者的日常生活、社会和家庭活动、营养支持、疼痛控制、康复治疗和心理调控等诸多问题。 二、影像学诊断 （一）脑胶质瘤常规影像学特 神经影像常规检查目前主要包括CT和MRI。这两种成像方法可以相对清晰精确地显示脑解剖结构特征及脑肿瘤病变形态学特征，如部位、大小、周边水肿状态、病变区域内组织均匀性、占位效应、血脑屏障破坏程度及病变造成的其他合并征象等。在图像信息上MRI 优于CT。CT主要显示脑胶质瘤病变组织与正常脑组织的密度差值，
小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案
小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方 案 经过相关文献阅读，参考了众多对于小胶质细胞培养方案，对比了不同方案的利弊优缺，整合了相对符合本实验室条件和实验要求的方法，如有其他变更方案，以修改后为准。 1.实验材料与试剂 剪刀、小镊子、小毛刷、DMEM/F12培养液、胎牛血清、马血清、0.25%，0.05%胰蛋白酶、PBS液、青霉素、链霉素、培养皿离心管、50 mL 细胞培 恒温细胞培养箱、倒置相差显微镜、细胞板、荧光标记二抗、0.4% 养瓶、CO 2 Trypan Blue染色液、抗小鼠OX42单克隆抗体和新生SD小鼠等 试剂配比： (1)DMEM 10:10:1 DMEM, 10%FBS, 10%Horse Serum, 1% Penicillin/Streptomycin (P/S)? (2)DMEM 5:5:1 DMEM, 5% FBS, 5% of Horse Serum, 1% P/S? (3)SERUM FREE MEDIUM + GROWTH FACTORS （DMEM/F12无血清培养基+生长因子） 25μg/ml转铁蛋白，10nM生物素，30 nM亚硒酸钠，1μg/ml putrescine（腐胺），5μg/ml胰岛素， 20 nM hydrocortisone（氢化可的松），20 nM progesterone（孕激素），1％P / S+生长因子（5ng/ ml的血小板衍生生长
因子PDGF-AA和5ng / ml碱性成纤维细胞生长因子bFGF）胰蛋白酶/ EDTA溶液0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA在W / O内Ca2+ / Mg2 +的HBSS DMEM/F12 containing 25 μg/ml transferrin, 10 nM biotin, 30 nM sodium selenite, 1 μg/ml putrescine, 5 μg/ml insulin, 20 nM hydrocortisone, 20 nM progesterone, 1% P/S + Growth Factors (5 ng/ml PDGF-AA and 5 ng/ml bFGF)?Trypsin/EDTA solution 0.05% Trypsin + 0,02% EDTA in HBSS w/o Ca2+/Mg2+ Laminar flow hood Dissecting magnifying glass Water bath at 37oC Humidified tissue culture incubator (37oC, 5% CO2) Sterilized microdissecting instruments: large dissecting scissors, mouse-teeth forceps, curved forceps and fine Dumont forceps Orbital Shaker (Boeco OS 20) Tabletop centrifuge 50 ml plastic conical tubes (Sarstedt, 62.547.004) T75 cm2 tissue culture flasks with plug-seal (BD Falcon, 137787) Tissue culture plates (Falcon) Petri dishes (Sterilin) 30 μm sterile nylon mesh (Saatilene, Hitech) 2.实验步骤 2.1星形胶质细胞的混合培养
星形胶质细胞瘤病理变化介绍
星形胶质细胞瘤病理变化介绍 星形胶质细胞瘤是常见的胶质瘤，尤其好发于30到40岁的年龄阶段，所以对它的病理特征必须注重了解，可以用右眼观察了解是否有结节或者具它的状况，或者是在光镜下检查。 1，肉眼观察：肿瘤大小可为数厘米大的结节至巨大肿块不等，一般境界不清，在肿瘤组织出现坏死出血时，似与周边组织境界分明，但边界外仍有瘤组织浸润。瘤体灰白色，质地视瘤内胶质纤维多少而异，或硬、或软、或呈胶冻状外观，并可形成大小不等的囊腔。由于肿瘤的生长，占位和邻近脑组织的肿胀，脑的原有结构因受挤压而扭曲变形。 2，光镜下：肿瘤细胞形态多种多样，肿瘤细胞核的多形性，核分裂像，瘤细胞密度，血管内皮增生程度以及瘤组织坏死。
3，星形细胞瘤预后较好，按瘤细胞形态又分为纤维型、原浆型、肥胖型和混合细胞型等亚型。其中以纤维型星形细胞瘤（fibrillary astrocytome）最常见，瘤细胞分化好，但呈浸润性生长，瘤细胞之间可见红染的原纤维性背景。原浆型星形细胞瘤（protoplasmic astrocytoma）较少见，瘤细胞体积小，形态较一致，胞突少而短。肥胖细胞型星形细胞瘤（gemistocytic astrocytoma）瘤细胞体积较大，胞浆丰富，半透明，核偏位。电镜下在瘤细胞胞浆中可见成束排列的中间丝。星形细胞瘤胞浆均表达胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）、S-100蛋白和波形蛋白（Vimentin）。 4，间变性星形细胞瘤（anaplastic astrocytoma）预后较差，光镜下表现为瘤细胞密度增加，核异型性明显，核深染可见核分裂像，血管内皮细胞增生等，为恶性肿瘤的征象。 5，胶质母细胞瘤（glioblastoma）又分为多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform, GBM）和巨细胞型胶质母细胞
星形胶质细胞
星形胶质细胞 *导读：星形胶质细胞是哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞，也是胶质细胞中体积最大的一种。…… 星形胶质细胞是哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞，也是胶质细胞中体积最大的一种。用经典的金属浸镀技术(银染色)显示此类胶质细胞呈星形，从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用。细胞突起的末端常膨大形成脚板(footplate)或称终足(endfoot)，有些脚板贴附在邻近的毛细血管壁上(图1-2)，因 此这些脚板又被称为血管足或血管周足，靠近脑脊髓表面的脚板则附着在软膜内表面，彼此连接构成胶质界膜(glia limitans)。在用尼氏法等一般染色组织切片中，星形胶质细胞的核比其他胶质细胞的核大，呈圆形或卵圆形，常染色质多，异染色质少而分散，故染色浅，核仁不明显。胞质中没有尼氏体，但具有一般的细胞器。胞质中含有大量交错排列的原纤维，伸人到胞突中并与胞突平行行走，是构成细胞骨架的主要成分。原纤维的超微结构是一种中间丝，称为胶质丝(glial filament)，其直径介于微管(25μm)和微丝(6μm)之间，由相对分子质量为47000—50000的蛋白质组成，此类蛋白质被称作为胶原原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein，GFAP)。利用细胞免疫法证明GFAP 仅存在于星形胶质细胞的胞体中，因此可利用GFAP的特异性抗
体来检测星形胶质细胞。 根据胶质丝的含量以及胞突的形状可将星形胶质细胞分为两种：纤维性星形胶质细胞(fibrous astrocyte)多分布在脑脊髓的皮质，突起细长，分支较少，胞质中含大量胶质丝，又称蜘蛛细胞(spider cell);原浆性星形胶质细胞(protoplasmic astrocyte)，多分布在灰质，细胞突起粗短，分支多。胞质内胶质丝较少，又称苔状细胞(mossycell)。电镜下星形胶质细胞的胞核有缺刻， 胞质较清亮，游离核糖核蛋白体和粗面内质网均很少，糖原颗粒丰富，有大量的胶质丝。纤维形星形胶质细胞的突起呈长圆柱形，而原浆性星形胶质细胞的突起呈薄片状，并常包裹着神经细胞及其突触(不伸人突触间隙)。星形胶质细胞的脚板与血管内皮细胞之间相隔一层基板，脚板质膜与基板接触处有半桥粒结构。 相邻星形细胞之间以及相邻脚板之间有缝隙连接。星形胶质细胞之间的细胞间隙狭窄，仅约3nm，内含组织液。缝隙连接又称缝管连接或接合膜(nexus)，是由大量连接小体(connexon)有规律 地成平板状排列的连接。每个连接小体又由6个亚单位镶嵌蛋白组成，这种蛋白被称为连接蛋白或接合素(connexin)。连接小体的中央有一中央小管(centralcanaliculum)通连相邻细胞。星形胶质细胞之间的缝隙连接主要由接合素43(CX43)构成。而少突 胶质细胞的缝隙连接由CX32构成。 星形胶质细胞比脑内其他任何类型的细胞具有更广泛的缝隙连接，由此使得星形胶质细胞类似于合胞体样结构。这种缝隙连接
星形胶质细胞
目录一、星形胶质细胞的生物学特性 (一) 星形胶质细胞的异质性 (二) 胶质网络二、星形胶质细胞的功能 (一)分泌功能 (二)星形胶质细胞与神经的发育及再生 (三)星形胶质细胞具有对神经元微环境调控的能力 (四)免疫功能与血脑屏障调控三、星形胶质细胞功能的新近进展 (一)星形胶质细胞也具有可兴奋性 (二)星形胶质细胞与神经元的通讯或对话 (三)在突触形成和突触可塑性中的作用 (四)星形胶质细胞与神经发生胶质细胞是神经系统内数量众多的一大类细胞群体,约占中枢神经系统(CNS)细胞总数的90%,星形胶质细胞(astrocyte)是其中主要的组成成分 目的从新生鼠皮层中分离、培养并鉴定原浆型星形胶质细胞(protoplasmic astrocyte,PAS)和纤维型星形胶质细胞(fibrous astrocyte,FAS).方法新生大鼠皮层分离的混合星形胶质细胞,经差速振荡法得到纯化的PAS和FAS;用免疫组化法分别对两种细胞进行鉴定.结果观察到两种细胞均特异性的标记为阳性.PAS外观扁平似圆盘状,细胞体 较大,突起宽而扁,分支少,均匀排列生长;FAS细胞体较小,呈圆形、卵圆形或多角形,突起较多,细长并有分支,呈交错生长.结论采用差速振荡法体外纯化培养两种AS,方法可行、有效,同时纯度达95%以上. 脑星形胶质细胞是中枢神经系统(CNS)内在数目占绝对优势的一类大胶质细胞,被认为在神经元的整个发育过程中起重要作用.本文主要就参与星形胶质细胞调节神经元活动的主要功能分子,星形胶质细胞在中枢神经系统的生物学功能,及其与疾病的关系作一简要回顾. 目的观察星形胶质细胞(AST)分泌雌激素的规律,研究AST对大脑皮层神经元突触形成的影响及可能的分子机制.方法取新生大鼠大脑皮层进行AST原代及传代培养,分别于传代培养的第0 d、7 d、14 d、21 d进行细胞计数,同时用ELISA方法测定AST条件培养液(ACM)中雌二醇(E2)的浓度.以新生大鼠皮层神经元纯培养为模型,实验分成6组:神经元纯培养 组;ACM培养组;AST和神经元混合培养组;雌激素培养 组;ACM+Tamoxifen(雌激素受体阻断剂)培养组;Tamoxifen培养组.应用 免疫荧光技术和突触计数方法观察各组突触形成数量的差别.结果AST数量分别为1×104/ml、1.1×106/ml、1.4×106/ml、1.5×106/mi;ACM中雌二醇浓度分别为(ng/L):0、117±22、266±22、252±27.第0 d培养液中未检测出雌二醇,随着培养时间的延长雌激素浓度迅速增加,14 d左右达高峰,以后逐渐降低,但21 d时培养液中雌二醇仍保持较高浓度.各实验组突触荧光颗粒数分别为(个/细胞,培养第9 d):14±3;79±5;83±8;80±6;32±3;29±3.显示ACM能增加培养神经元突触形成的数目近6倍,外源性雌激素可基本模拟ACM的效应.Tamoxifen 能阻断ACM促突触形成效应的75%左右.结论体外培养新生大鼠大脑皮层AST能合成并分泌雌激素,分泌的雌激素可能参与了胶质细胞调节神经元突触形成的过程,而胶质源性的雌激素可能通过雌激素受体发挥促突触形成的作用. 星形胶质细胞(AS)是神经系统的重要组成部分,目前认为AS是构成突触结构的第三种成分.AS对突触的数量、形态结构、成熟过程以及突触传递都有影响.AS能够以多种方式和神经元相互作用,如通过谷氨酸-谷氨酰 胺循环、细胞内Ca2+浓度的改变等环节影响神经元的生物活性,进而发挥对神经突触可塑性的影响.最新研究表明,AS亦能够通过分泌多种介质,
星形胶质细胞在调节突触可塑性中的作用
星形胶质细胞在调节突触可塑性中的作用 【摘要】突触传递的可塑性被认为是学习和记忆的神经生物学基础，其取决于不同的神经元突触前和突触后机制。然而，最近有越来越多的研究涉及可塑性的第三个要素——突触周围的胶质细胞。传统观念一直认为星形胶质细胞(astrocyte，AS)仅是被动的辅助角色, 起支持和营养等作用。近年的研究发现，无论在中枢还是外周神经系统，星形胶质细胞都主动参与了信息的传递与整合，并通过其释放的神经胶质递质等直接影响突触的可塑性。本文结合近年来的研究结果，对AS在突触可塑性中的研究进展作一综述。 【关键词】AS；突触可塑性；神经递质；突触传递 在由神经元和胶质细胞构成的神经系统中，胶质细胞数量占90%，其中星形胶质细胞(astrocyte，AS)是体积最大，也是分布最为广泛的胶质细胞。过去认为AS主要是对神经元起支持和营养作用。然而，近年来越来越多的证据表明AS 在维持神经系统的正常生理活动、脑的发育和神经病理等过程中发挥着重要作用［1］。突触是神经元之间信息传递过程中的重要结构。最新观点认为，AS与突触前和突触后神经元共同构成三重突触(tripartite synapses)结构，参与信号的传导和整合［2］。 1 突触可塑性 突触可塑性是指突触在一定时期，一定条件下突触数目、结构和功能的改变，既包括突触传递效能的变化，又包括突触形态结构以及亚微结构的变化，来调节神经传导和神经分泌等［3］。 根据作用时间，突触可塑性可分为短时效的和长时效的。根据接收条件刺激的突触前纤维与传递效应改变的突触之间的对应关系，可分为同突触型，即条件刺激和可塑性改变发生在同一条突触通路上；和异突触型，指条件刺激作用于传入神经，而可塑性改变发生在没有接受刺激的突触通路上［4］。 2 AS与突触可塑性 AS与突触前、后神经元的位置关系密切，在神经系统内与突触结构紧密相连。早在1997年，Barres等［5］就报道，胶质细胞可以促进突触间的联系。与胶质细胞共同生长的神经元突触的活跃程度是独自生长的神经元突触的10 倍。后来，Barres 实验室又发现，去除视网膜神经节细胞(RGCs)中的AS后，电生理记录反映突触的活性很小；将AS加入后, 即使没有与胶质细胞接触, 神经元对多种刺激的反应程度也比那些独自生长的高出7倍, 且很少出现突触传递障碍。为解释上述现象,Mauch等［6］使用层析、2 d电泳和质谱分析等方法进行了细致的研究。结果表明，AS在突触囊泡的释放和再循环过程中也有重要作用。AS 释放的载脂蛋白/ 胆固醇被神经元内吞入胞内, 使RGCs的自身突触(autapse) 数目增加了8倍, 量子含量(quantal content)增加了10倍。近年来，使用细胞培
小鼠脊髓原代星形胶质细胞培养方法的建立
万方数据
１８４ 物中心提供；ＤＭＥＭ干粉购自Ｇｉｂｃｏ公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所；胰蛋白酶（Ｔｒｙｐ－ｓｉｎ）、青霉素一链霉素均为Ｓｉｇｍａ公司产品；Ｄ—Ｈａｎｋｇ液为实验室自配；ＭｏｕｓｅＡｎｔｉ－ＧＦＡＰ单克隆抗体及ＣＹ５Ａｎｔｉ．Ｍｏｕｓｅ荧光二抗购自Ｃｈｅｍｉｃｏｎ公司；Ｈｏｅｃｈｓｔ为Ｓｉｇｍａ公司产品。 ２．原代培养①取１—３ｄ的新生ＩＣＲ小鼠，将其断头处死，在无菌条件下由腹侧取出脊髓，置盛有Ｄ—Ｈａｎｋｇ液的小皿中，在解剖显微镜下剔除脊膜，随后换到另一干净的小皿中。②在小皿内剪碎脊髓，大小为１×１×１，再将其移人尖底离心管中，加２～３倍体积的０．２５％胰蛋白酶，在３７℃下消化１５ｍｉｎ，加入等体积的含血清培养基（不含抗生素）终止消化；轻吹２０次左右，静置片刻，将上清吸人另一离心管中，原离心管中加入１ｍｌＤ—Ｈａｎｋｇ轻吹洗脊髓后将上清移入另一离心管中，在原离心管中加入ｌ～２ｍｌ的０．２５％胰蛋白酶再次消化１５ｍｉｎ，终止后连同上次消化的上清液一起１５００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，弃上清液，再加入含１０％血清的ＤＭＥＭ培养基，机械吹打使细胞分散，制成单细胞悬液。③血细胞计数板计数后调整密度到ｌ×１０５接种于无底物黏附的２５ｃｍ２玻璃培养瓶，在３７℃，５％ＣＯ：培养箱中培养。④每天倒置显微镜下对细胞进行观察，接种２４～４８ｈ后细胞第一次换液，以后每周换液两次。 ３．星形胶质细胞的纯化细胞培养７～１０ｄ待细胞分层生长后，置于３７。Ｃ摇床中２００ｒ／ｍｉｎ振荡６ｈ，弃含脱落细胞的细胞悬液，Ｄ－Ｈａｎｋｇ液洗３次，加入含１０％血清的ＤＭＥＭ培养基，放入３７℃，５％ＣＯ：培养箱中继续培养。为提高星形胶质细胞的纯度，可在传代后约５—７ｄ细胞融合时，再次放人摇床中振荡，重复上述操作。 ４．传代培养①取已培养１５ｄ左右的原代培养物，吸去旧培养基，用Ｄ—Ｈａｎｋ童液洗２次，然后滴加 ４００１ｚｌ０．１２５％胰酶一ＥＤＴＡ，倒置显微镜下观察，待细胞回缩，细胞间隙增加时用不含抗生素的培养基终止消 化，并轻轻左右摇动培养瓶，随后用弯吸管轻轻吹打制成细胞悬液，分别接种于另两个２５ｃｍ２的培养瓶，在３７℃，５％Ｃ０２条件下培养。②每天进行倒置显微镜下观察，根据细胞的生长情况及液体颜色改变加补液体或换液。 ５．星形胶质细胞的鉴定取第三代培养物接种于 六孔板内，２４ｈ后待细胞恢复后取出，吸去培养液，用ＰＢ快速洗两次，每孔分别加入少许４％多聚甲醛，室温下固定３０ｍｉｎ，去除固定液，用０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗三遍，以含１０％马血清的０．Ｏｌｍｏｌ／ＬＰＢＳ液在３７℃条件下封闭２０ｍｉｎ。加鼠抗ＧＦＡＰ的一抗（１：５００），放入４。Ｃ冰箱过夜，次日用０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ清洗三遍后同时加入ＣＹ５标记的抗小鼠二抗（１：１００）和Ｈｏｅｃｈｓｔ（１：４００），避光放人３７。Ｃ水浴孵箱ｌｈ，再用０．０１ｍｏＬ／ＬＰＢＳ洗三遍后晾干，用抗荧光衰减的封片剂封片，Ｏ．１ｙｍｐｕｓＦＶｌ０００激光共聚焦显微镜下观察。 结果 倒置相差显微镜下活体观察见星形胶质细胞的分离纯化过程中细胞生长情况良好。分离的小鼠脊髓细胞在培养（种植）４ｈ后，部分细胞即可长出细小的胞突；３６ｈ后，所有细胞均已贴壁，光晕明显，并长出突起，培养４—５ｄ后，细胞数量增多，约ｌＯｄ左右细胞达到８０—９０％会合，可进行摇床纯化。随着培养时间的延长，培养物中的星形胶质细胞的比例越来越大，而神经元、少突胶质细胞的比例越来越少。 传代后细胞生长更活跃，培养５～７ｄ便可长满瓶壁，星形胶质细胞的比例增多，形态结构更加突出。相差显微镜下形态学特征：胞体较大而扁，形状不规则，胞质较丰富，细胞核圆形或卵圆形，常偏于胞体的一侧，内有１—２个核仁，星形胶质细胞的胞突尤其是初级胞突较多较长，呈放射状（图１，２），经ＧＦＡＰ特异性抗体的免疫荧光染色证实９８％为星形胶质细胞（图３）。 圈１．２倒置显微镜下传代培养８ｄ的胶质细胞（×１００，ｘ２００） 图３ｇ玳ｄｇ，养星形胶质细胞ｘ１０（激光共聚焦显微镜图象ｂａｒ＝４０ｔｔｍ）ｇＧＦＡＰ免疫荧光染色ｂＨｏ∞ｈｓｌ染色ｃ Ｃ，ＦＡＰ和Ｈｏｅｅｈｓｔ共定位图象 万方数据
炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨_刘杰波
[收稿日期]2002-09-10;[修回日期]2003-04-30 [作者简介]刘杰波(1968-),男,博士,主治医师。主攻方向:小儿神经系统疾病。[通讯作者]刘杰波,深圳市罗湖区人民医院儿科,邮编:518000。#论著# 炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨 刘杰波 (深圳市罗湖区人民医院儿科,广东深圳518000) [摘要]目的探讨L PS,I L-1B,T N F-A所致星形胶质细胞(AC)凋亡的机制及途径。方法原代培养的新 生SD大鼠前脑AC分为正常对照组、炎症组(L PS+I L-1B+T N F-A)与预处理组(L-N M M A预处理30min后加入 L PS+T N F-A+I L-1B)。培养72h后,M T T测定AC活力;分光光度仪测定细胞培养上清中N O2-/N O3-含量;电 镜、流式细胞术检测细胞凋亡;Wester n Blot检测胞浆内细胞色素C的表达;原位杂交检测A C Caspase-3mRNA表 达。结果预处理组细胞活力明显高于炎症组(0.81?0.29vs0.46?0.15),差异有显著性(P<0.01)。炎症组 AC活力与其分泌的一氧化氮(NO)呈负相关(r=-0.604,P<0.05)。预处理组凋亡率[(15.2?7.9)%]低于炎 症组[(29.7?10.4)%],P<0.05。预处理组胞浆内细胞色素C的含量较炎症组明显减少(14784?2096vs 31049?3784),P<0.01。炎症组的Caspase-3mRNA表达强于预处理组。结论1L PS,I L-1B,T N F-A可导致细 胞活力下降。其细胞活力的下降与其分泌的NO增多有关。o增多的N O可导致AC凋亡;NO导致的A C凋亡可 能与细胞色素C凋亡途径有关。[中国当代儿科杂志,2003,5(4):339-342] [关键词]星形胶质细胞;凋亡;一氧化氮 [中图分类号]Q813[文献标识码]A[文章编号]1008-8830(2003)04-0339-04 Mechanism of Cytokine-Induced Apoptosis of Astrocytes in Rats Jie-Bo LI U.Dep ar tment of Pediatr ics,L uohu District H osp ital of Shenz hen,S henz hen,G uangdong518000,China (Email:j ieboliu@https://www.360docs.net/doc/6417491613.html,) Abstract:Objective T o study the mechanism of L PS,I L-1B and T NF-A-induced apoptosis of astro cytes in r ats. Methods T he astrocytes of the neonatal rat were cultur ed in vitr o and randomely assigned into the inflammation group (tr eated w ith L PS,IL-1B and T N F-A),pre-treatment group(L-NM M A was administr ated half an hour before treatment with L PS,IL-1B and T N F-A)and normal control group.T he cell viability was assayed by M T T;apoptosis was evaluated by electr on micr oscope and flow cytometry;nitric ox ide(N O)content was measured by spectrophotometer;cytochrome C co ntent in cy toplasm was measured by Western Blot and Caspase-3mRN A ex pression was detected by hybridization in situ.Results T he cell v iability in the pr e-tr eatment gr oup was significantly hig her than t hat of the inflammation group (0.81?0.29vs0.46?0.15),P<0.01.T here w as a neg at ive co rrelation between the cell v iability and NO content produced by astr ocytes in the inflammation g roup(r=-0.604,P<0.05).T he apoptosis rate of the pr e-treatment group was lower t han that of the inflammation g roup[(15.2?7.9)%vs(29.7?10.4)%;P<0.05].T he cytochrome C content in cytoplasm of astrocytes of the pre-treatment g roup(14784?2096)decreased compared wit h that of the inflammation group(31049?3784)(P<0.01).T he expression of Caspase-3mRNA in the inflammatio n group was intensified compared with that of the pr e-treatment group.C onclusions Cytokines may lead to decrease of viability of astrocytes through increasing N O content produced by astrocytes.T he incr ease of N O content can induce astrocyte apoptosis,w hich is related to the r elease of the cytochrome C from mitochondria to cell plasma,and activating the ex pression of Caspase-3mRNA.[C hin J Contemp Pediatr,2003,5(4):339-342] Key words:Astrocyte;A poptosi s;N itric ox ide 星形胶质细胞(astrocyte,AC)在中枢神经系统中占有非常重要的地位。它通过对各种神经生长因
星形胶质细胞瘤的组织分类有哪些
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 星形胶质细胞瘤的组织分类有哪些 导语：星形胶质瘤的最常见并发人群，是儿童和青少年，他们的体质比较虚弱，正处在一个发育的状况当中，所以容易受到恶性细胞的攻击，星形胶质细胞 星形胶质瘤的最常见并发人群，是儿童和青少年，他们的体质比较虚弱，正处在一个发育的状况当中，所以容易受到恶性细胞的攻击，星形胶质细胞瘤，可以分为多种类型，下面我们就看一下，主要分为哪几种组织类型？ 1，星形细胞瘤预后较好，按瘤细胞形态又分为纤维型、原浆型、肥胖型和混合细胞型等亚型。其中以纤维型星形细胞瘤（fibrillary astrocytome）最常见，瘤细胞分化好，但呈浸润性生长，瘤细胞之间可见红染的原纤维性背景。原浆型星形细胞瘤（protoplasmic astrocytoma）较少见，瘤细胞体积小，形态较一致，胞突少而短。肥胖细胞型星形细胞瘤（gemistocytic astrocytoma）瘤细胞体积较大，胞浆丰富，半透明，核偏位。电镜下在瘤细胞胞浆中可见成束排列的中间丝。星形细胞瘤胞浆均表达胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein， GFAP）、S-100蛋白和波形蛋白（Vimentin）。 2，间变性星形细胞瘤（anaplastic astrocytoma）预后较差，光镜下表现为瘤细胞密度增加，核异型性明显，核深染可见核分裂像，血管内皮细胞增生等，为恶性肿瘤的征象。 3，胶质母细胞瘤（glioblastoma）又分为多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和巨细胞型胶质母细胞瘤（giant cell glioblastoma），为高度恶性的星形胶质细胞瘤，多见于成人。肿瘤常发于额叶、颞叶、浸润范围广，常可穿过胼胝体到对侧，或挤压周围组织）。瘤体常因出血坏死而呈红褐色。镜下，瘤细胞密集，有明显异型 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代培养及传代
大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代培养及传代 、试剂 Poly-L-lysine (Sigma,P2636) DMEM (Invitrogen,11995-065) 二、器械 手术器械：眼科剪x2、眼科镊直、弯各x2、显微镊x2 （金钟，WA3050）、显微剪 x1 3ml 移液管( Biologix, 30-0138A1) 南京军区总院神经内科实验室 许丽丽 2012-12-01 1) 2) 3) FBS (Invitroge,10099-141) 4) HBSS, no Calcium, no Magnesium (Invitrogen, 14170-112) 5) 0.25% Trypsin-EDTA ( Invitrogen, 25200-056) 6) DPBS (HyClone ，SH30028.01B ) 7) dd H 2O 8) 75％酒精 1) 2) 100 ml 小烧杯 3) 200 目不锈钢筛 4) 细胞计数器（求精） 5) 50ml 离心管( Corning ， 430828)、 15ml 离心管( Corning ， 430790) 6) 25ml 培养瓶( Corning ， 430639)或 75ml 培养瓶( Corning ， 430641) 7) 100ml 玻璃瓶（蜀牛） 8) 直径为 60mm 的培养皿 LabServ,310109010) 9)
10) 过滤器( Millex-GP, SLGP033R)B 11) 注射器：50ml、5ml 各1 12) Pipette and pipette tips 13) 冰袋、手套、口罩
星形胶质细胞在中枢神经系统非感染性炎症与免疫反应中的作用_张伟
·综述· 星形胶质细胞在中枢神经系统非感染性炎症 与免疫反应中的作用 张伟 杨少华 袁芳 DOI ：10.3877/cma．j．issn．1674-0785．2012．23．024作者单位：100050首都医科大学北京市神经外科研究所病理生理 室（张伟、杨少华、袁芳）；北德克萨斯大学健康科学中心药理学与神经科 学系（杨少华） 通讯作者：袁芳， Email ：florayuan@vip．sina．com 星形胶质细胞是中枢神经系统（central nervous system ， CNS ）中数量最多且分布最广泛的一种胶质细胞，参与多种生理或病理过程， 主要包括形成和维持血脑屏障、引导神经元发育和参与突触重塑、促进谷氨酸代谢、维持细胞外K + 稳定、产生神经元及 其他胶质细胞所需的营养因子等［1］ 。此外，星形胶质细胞在CNS 炎症和免疫反应中的作用越来越受到人们的重视。首先， 星形胶质细胞参与血脑屏障（blood-brain barrier ，BBB ）的形成，这使其成为CNS 细胞中最有位置优势首先感知和抵抗外来异物入侵的“哨兵”。其次，星形胶质细胞表达模式识别受体（pattern recognition receptor ，PＲＲs ）、人类主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex ，MHC ）分子和共刺激分子，提示星形胶质细胞在CNS 固有免疫识别和适应性免疫应答激活中发挥作用。最后，星形胶质细胞分泌多种炎性细胞因子和趋化因子，调 节其他细胞功能， 促进或抑制CNS 炎症和免疫反应。虽然目前上述这些作用尚未完全清楚，甚至一些研究结果仍存在争议，但 是由于机体星形胶质细胞数目庞大，单个细胞的微弱变化在体内可能产生显著的影响，所以星形胶质细胞在CNS 炎症和免疫反应中的调控作用是不容忽视的。炎症和免疫反应在多种CNS 非感染性疾病的发生和发展中发挥着关键作用，已有研究发现 星形胶质细胞与这些疾病中炎症免疫反应有关， 为探索这些疾病的治疗靶点提供了新的思路，本文就近些年来该领域的研究 进展进行综述。 一、星形胶质细胞通过影响BBB 的功能参与CNS 炎症和免疫反应 BBB 是位于脑组织和血液之间的一道保护性屏障，由脑毛细血管内皮细胞、基底膜和星形胶质细胞血管周足（astrocyte perivascular end-feet ）共同构成，限制某些血源性分子和细胞进入脑组织， 对于维持CNS 稳态非常重要。在多种CNS 疾病中可以观察到BBB 功能障碍及炎性细胞浸润，星形胶质细胞参与BBB 的形成与维持，并通过影响BBB 功能参与CNS 炎症和免疫反应。 一方面，星形胶质细胞可以增加BBB 的通透性，从而有利于CNS 白细胞浸润。最近有研究发现，单独给予IFN-γ（interferon γ）刺激后，BBB 中内皮细胞的屏障作用增强，但是在星形胶质细 胞同时存在的情况下，内皮细胞屏障的增强效应却明显减弱［2］ ，提示星形胶质细胞可能在CNS 炎症时BBB 的功能失调中发挥了重要作用。基质金属蛋白激酶（matrix metalloproteinases ，MMP ）是一种降解细胞外基质的酶。研究发现在大鼠星形胶质 细胞培养中，缺氧导致MMP-13的表达和释放增加［3］。并且在体外，这种缺氧条件下星形胶质细胞培养后的培养基可以增加成年大鼠内皮细胞的通透性，而MMP-13中和抗体可以拮抗这一内皮细胞通透性的增加效应［3］ 。这提示星形胶质细胞可能通过释放MMP 引起BBB 功能障碍，从而促进脑缺氧时炎症的发生与发展。实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis ，EAE ）是一种CNS 炎性脱髓鞘疾病，是常用的 多发性硬化症（multiple sclerosis ， MS ）动物模型。水通道蛋白4（Aquaporin-4，AQP4）是CNS 中主要的水通道蛋白，表达于星形 胶质细胞足突细胞膜上， 特别是在BBB 和血脊髓屏障处表达最强。在EAE 中，AQP4表达显著增加，而且与BBB 和血脊髓屏障 通透性升高相一致，提示水通道蛋白的上调可能参与EAE 急性期炎症进展 ［4］ 。 另一方面，星形胶质细胞在CNS 炎症时可以增强BBB 或血脊髓屏障的屏障功能，有利于限制白细胞入侵和扩散，从而发挥抑制炎症的效应。研究发现在EAE 中，激活的星形胶质细胞形 成瘢痕样血管周围屏障，抑制CNS 白细胞浸润［5］ ；给予瘢痕形成星形胶质细胞靶向消融处理的小鼠在EAE 过程中表现出比野 生型小鼠更严重的EAE 临床体征和更强烈的CNS 炎症反应［5］ ；这提示星形胶质细胞可能在MS 发病过程中发挥神经保护性抑炎效应。视神经脊髓炎是一种与MS 相似的CNS 炎症性疾病，曾多年被认为是MS 的一种亚型。但是近几年发现视神经脊髓 炎患者的血清中可以检测到自身免疫性AQP4抗体［6］ ，并且AQP4抗体水平的高低与视神经脊髓炎患者的临床体征和脊髓 病变的严重程度相一致［7］ 。最近有研究发现AQP4特异性T 细胞的激活也参与了视神经脊髓炎的病变过程 ［8-9］ 。由此可以推测，由于星形胶质细胞足突表达AQP4，所以AQP4特异性抗体或T 细胞可以靶向攻击星形胶质细胞足突，从而可能通过抑制星形胶质细胞形成瘢痕样血管周围屏障而使BBB 或血脊髓屏障通透性增加，加重CNS 炎症性病变。 由此可见，星形胶质细胞对BBB 的影响非常复杂，这些不同可能与疾病的不同阶段和程度有关。炎症早期机体需要炎性细胞和免疫细胞进入CNS 清除异物，所以会增加BBB 的通透性，而随着疾病的进展，大量浸润的炎细胞和免疫细胞成为加重病变的因素，机体就会调动限制白细胞入侵的反应。 二、星形胶质细胞表达PＲＲs ，参与CNS 固有免疫应答 机体固有免疫细胞通过表达种系编码的PＲＲs 识别相应病原相关分子模式（pathogen-associated molecule pattern ，PAMPs ）和损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns ，DAMPs ），激活细胞内信号转导通路，引起各种炎性细胞因子、趋 化因子、 抗菌蛋白及PＲＲ信号通路调控蛋白的产生和释放，调控炎症反应和免疫应答［10］ 。目前，已有四种PＲＲs 家族被确定， 包括Toll 样受体（Toll-like receptors ，TLＲs ）、C 型凝集素受体（C-type lectin receptors ，CLＲs ）、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体（retinoic