P物质对星形胶质细胞的活化作用及机制研究

中文摘要....................................................................................................................................................I 英文摘要..................................................................................................................................................V 前言.. (1)

第一部分P物质活化星形胶质细胞的作用观察 (4)

1材料与方法 (4)

1.1药品与试剂 (4)

1.2仪器与设备 (4)

1.3动物 (5)

1.4实验分组 (5)

1.5实验方法 (5)

1.6统计学方法 (6)

2结果 (8)

2.1原代培养星形胶质细胞的鉴定 (8)

2.2P物质活化星形胶质细胞的形态学观察 (8)

2.3P物质孵育后星形胶质细胞功能的改变 (10)

3讨论 (14)

4结论 (18)

第二部分P物质活化星形胶质细胞的机制研究 (19)

1材料与方法 (19)

1.1药品与试剂 (19)

1.2仪器与设备 (19)

1.3动物 (19)

1.4实验分组 (19)

1.5实验方法 (20)

1.6统计学方法 (20)

2结果 (21)

2.1原代培养星形胶质细胞的鉴定 (21)

2.2P物质作用后星形胶质细胞内钙离子浓度增加 (21)

3讨论 (23)

4结论 (26)

参考文献 (27)

综述 (32)

致谢 (47)

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 (48)

个人简历 (49)

山西医科大学硕士学位论文

P物质对星形胶质细胞的活化作用及机制研究

摘要

目的：

1.通过离体培养大鼠星形胶质细胞，观察P物质对星形胶质细胞的活化作用，包括细胞形态学观察和对IL-1β和IL-10释放量的检测。

2.通过P物质作用于离体培养的星形胶质细胞，观察星形胶质细胞胞内Ca2+浓度的变化，探讨活化可能的机制。

方法：

1.取出生24h以内的SD乳鼠原代培养星形胶质细胞。将培养的星形胶质细胞分为5组：(1)对照组，细胞孵育全培液；(2)全培液+P物质30nM组；(3)全培液+P物质100nM组；(4)全培液+P物质300nM组；(5)全培液+P物质1000nM 组。各组细胞分别在孵育2h、6h、12h、24h后收集细胞上清液同时保留细胞，以便进行后续实验。

2.采用免疫细胞荧光法鉴定GFAP阳性的星形胶质细胞，并观察P物质孵育后星形胶质细胞在各浓度以及各时间点的形态变化。

3.采用ELISA的方法检测P物质孵育后星形胶质细胞在各浓度及各时间点释放IL-1β和IL-10的情况。

4.利用比例高内涵成像系统的胞内钙离子成像技术观察P物质作用于星形胶质细胞后，其胞内Ca2+浓度的变化。

结果：

1.培养的星形胶质细胞的鉴定：经免疫细胞荧光法鉴定，培养的细胞为GFAP 阳性的星形胶质细胞。用DAPI复染后，证实细胞的纯度达95%以上。

2.P物质孵育星形胶质细胞后的形态学改变：以细胞孵育全培液作为对照组。30nM的P物质孵育星形胶质细胞后的2h、6h、12h、24h分别与之比较，其形态几乎无变化。100nM的P物质孵育星形胶质细胞后的6h，部分细胞的胞体开始变大变圆，突起回缩，呈现出活化的形态学表现，且随着时间的延长，至