抗氧化体内的评价方法

张丽楠

天津科技大学生物工程学院，天津300457

摘要：抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，目前准确评价生物活性物质的抗氧化能力已经成了氧化与抗氧化研究领域的热点问题，为了更好地评价样品的抗氧化性，常用的评价方法分为体内和体外评价方法，本文主要介绍几种体内的评价方法。

关键词：抗氧化性；体内测定方法

Evaluation of the antioxidant in the body

Zhanglinan

Biological Engineering, Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457

Abstract:Anti-oxidation is the process of collective resistance to oxidation, antioxidant capacity currently accurate evaluation of bioactive substances have become oxidized and antioxidant research in the field of hot issues, in order to better evaluate the antioxidant activity of the sample, the commonly used evaluation methods into in vivo and in vitro evaluation methods, this paper describes several methods evaluated in vivo.

Key words:antioxidant activity:Determination of in vivo methods

抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，也是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能。因此，当生物体内产生了大量的自由基，平衡被破坏时，生物体就会生病，这样需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统。

基于不同原理的各种抗氧化活性检测方法已广泛用于抗氧化活性物质，这些方法虽然能够在不同的条件下反映抗氧化活性物质的多种功能特性，但也各有其局限性，目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理：（1）样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制能力反映被测物的抗氧化活性；（2）样品对检测体系中自由基的清除能力反映被测物的抗氧化活性；（3）测定样品的还原能力反映被测物的抗氧化活性。[1]

很据以上机理，抗氧化活性物质的检测方法分为体内评价方法和体外评价方法，本文针对当前该领域的发出状况，在总结前人的科研成果的基础上，简单的介绍几种体内评价方法。

1体内抗氧化防御系统

需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统，包括预防性的、阻断性的和修复性的，也即一级和二级抗氧化防御系统；分别在不同水平发挥着防御作用。一级抗氧化防御系统也称为初级抗氧化防御系统，分为抗氧化酶和非酶性抗氧化剂。能够是自由基失效的化学物质称为“抗氧化剂或抗氧化酶”。抗氧化剂或抗氧化酶是清除氧自由基或阻止、抑制氧自由基产生过氧化物的物质。抗氧化酶系统包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽转硫酶、髓过氧化物酶、细胞色素C过氧化物抗坏血酸过氧化物酶等。抗氧化非酶系统，也即抗氧化剂，包括两大类，一类是人体必需的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、类胡萝卜素、锌、硒、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、铜蓝蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等；另一类是人类非必需的抗氧化剂，如生物类黄酮、花色素、番茄红素和叶黄素等。

脂质、蛋白质和核酸是氧自由基攻击的主要靶点。在正常情况下，虽然初级抗氧化防御系统通过各种抗氧化剂和抗氧化酶能有效地防止活性氧对靶

分子的作用，但是由于细胞能不断地生成氧自由基，特别是在病理条件下以及衰老时活性氧的生成量大大增加，生成的活性氧特别是活性羰基超过了细胞抗氧化防御能力，由此引起蛋白质和DNA的氧化损伤。为了对受损的蛋白质和DNA进行修复，机体形成了二级抗氧化防御系统，即所谓的抗氧化修复系统。抗氧化修复酶如谷胱甘肽还原酶、蛋氨酸硫氧化物还原酶A等，在机体抗氧化损伤方面也起着重要作用，二级抗氧化防御系统的作用机制。

2体内抗氧化能力检测方法

体内抗氧化能力评价主要借助氧化应激生物标志物的测定来判断生物活性物质对DNA氧化损伤、脂质过氧化、蛋白质氧化损伤、线粒体氧化损伤的保护程度，以及直接测定抗氧化防御系统抗氧化水平。

2.1DNA氧化损伤检测方法

DNA氧化损伤是细胞凋亡的开始。通过细胞以外的因素或细胞内的新陈代谢都可以产生活性氧ROS，活性氧（ROS）能损伤多糖类、脂质、蛋白质、DNA等多种生物大分子，会引发心血管疾病或神经系统疾病，至少两种老年疾病和癌症被证明是由活性氧ROS损伤DNA诱发的。活性氧ROS损伤DNA，破坏机体正常的生理过程。

目前对DNA氧化损伤的检测可分为直接和间接两方面的检测，直接检测DNA损伤比较常用的方法是测量DNA单链断裂，即单细胞凝胶电泳法（SCGE）与质粒氧化损伤。间接检测DNA氧化损伤较常用的指标是测定血清与尿中8-羟基脱氧鸟苷，正常情况下，8-羟基脱氧鸟苷在DNA修复机制的作用下被及时切除，形成8-羟基脱氧鸟苷随尿液排出体外。所以血清与尿中8-OH-dG可作为DNA氧化性损伤的分子生物学标记物。另外使用电化学法研究抗氧化剂与DNA之间的作用也很重要，可以从另一个角度解释抗氧化剂的作用机理。[2]

2.2蛋白质氧化损伤

蛋白质的氧化损伤不仅包括对酶、受体和载体蛋白的损伤,而且还包括一些二次损伤,如:DNA 修复酶的损伤。目前,蛋白质氧化使用最广的生物标志物是蛋白质羰基含量( Protein Carbonyl Content ,PCC) ,其传统的检测技术是使用二硝基苯肼的比色法,使用分光光度法或者酶联免疫吸附法(ELISA) 测定2 ,4 - 二硝基苯肼与蛋白质羰基反应生成的腙,来衡量蛋白质的损伤情况。

PCC 法是快速的检测方法,不需要特殊、昂贵的设备。然而,蛋白质羰基含量并不是氧化应激的特异性生物标志物,而只是总体的粗略衡量。蛋白质特异性的氧化应激标志物是3 - 硝基络氨酸,但是,3 - 硝基络氨酸的测定方法耗费时间,而且与PCC 相比它需要比较精密的分析设备。[2]

2.3线粒体氧化损伤

在细胞内绝大多数氧分子是被线粒体内膜呼吸链蛋白酶消耗的，在呼吸链上产生的过氧化物，在一定条件下，会转变为过氧化氢，进而成为羟基自由基，使超氧歧化酶功能紊乱或者使线粒体的呼吸链紊乱。会导致线粒体DNA（mtDNA）基因突变或者染色体端粒加速变短，从而影响人的寿命。自由基可以产生于线粒体内并经常释放到胞浆。线粒体中A TP的生产涉及到通过电子传递链上的质子在内膜运输。最后的电子受体会消耗氧气分子，通常是生成了水分子，但在一个小又意义重大的百分比之内（1% ～2%），超氧阴离子会产生。超氧阴离子会从线粒体带走额外电子，这会对mtDNA、线粒体膜、蛋白质造成损害。如果造成太大的损失，细胞会发生凋亡。细胞凋亡和线粒体外膜的表面蛋白Bcl-2有关。自由基衰老学说指出，当线粒体由于自由基损伤，造成能量损失，细胞就会进入凋亡阶段。由于线粒体膜易受过氧化物的攻击，所以针对保护线粒体的抗氧化活性检测可以采用脂质过氧化检测方法。实验中必须精确分离线粒体膜，保证膜功能完整，尽量模拟出在细胞内的真实情况[2]

2.4脂质氧化损伤

硫代巴比妥酸法(TBARS) ,是最早用于人类与动物抗氧化研究,反映脂质氧化损伤的方法。最初的TBARS 法相对简单,缺乏特异性,相对陈旧。而改进后的TBARS 法由于使用了高效液相色谱法(HPLC) ,敏感度、特异度和重复性都明显提高了。呼吸烃类的测定,也是一种被广泛使用的、非侵入性的体内评价脂质过氧化的方法。只是由于在呼气收集、处理和分析中缺乏标准化方法,导致了结果的不稳定性。氧化型的低密度脂蛋白(LDL) ,已被公认是氧化应激防御的生物标志物; F - 异前列烷是由自由基诱发花生四烯酸反应,之后在磷脂中生成的又一新的氧化应激生物标志物。

3讨论

体内实验法接近生物体实际体系,而且比较灵敏,但周期长、成本大且实验繁琐，因此有其自身的局限性。因此,在进行生物活性物质抗氧化能力评价的时候,为了保证评价结果的真实性与可靠性,应该遵从由体外到体内,由化学环境到生物环境逐级深入的原则。在保证体外评价结果可靠的基础上,进行体内

评价的动物实验,并在保证动物实验从设计到干预、最后结果科学性的基础上,再进一步人群实验,这是评价的最终阶段。但是,在开展体内评价的时候,一定要注意到所评价物质的毒性和剂量反应。[3] 实验以动物为模型，对其饲喂受试物，利用生化手段对其各项相关的生理指标进行测定，通过实验组与空白组各项指标的比较评价受试物在生物体内的抗氧化活性。常见实验方法如下：选用清洁级大鼠或小鼠为对象，用受试物按实验研究计量及时间连续饲喂，完成后处死动物，根据实验目的取其血液或组织器官，测定其中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及过氧化氢酶（CAT）等指标，同空白对照组比较，从而得出受试物在生物体内的抗氧化能力。

除采用健康动物测试外，体内实验还多采用人为制造的疾病动物为模型，研究天然产物对某一靶向疾病或组织的作用。[4]

总之，理想的抗氧化活性评价方法应具有以下特点：①原理明确；②操作简单；③可反映物质对绝大多数自由基的抑制或清除能力；④生物相关性良好

参考文献

[1]刘志东，郭本恒，王荫榆.抗氧化活性检测方法的研究进展[J].天然药物研究与开发，2008,20:563-567.

[2]张明，冯璐璐.抗氧化活性评价标准与发展[J].安徽农学通报，2010,16（08）:33-34.

[3]刘小兵，朴建华.营养与食品安全[J].中国食品卫生杂志，2008,20(5):440-443.

[4]曾维才，石碧.天然药物抗氧化活性的评价的常见评价方法[J].2013,32（6）:1205-1213.

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 产品编号产品名称包装 S0116 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 100次产品简介：总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。 FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。 Antioxidant Fe3+-TPTZ ——————> Fe2+-TPTZ (蓝色) 提供了抗氧化物Trolox作为对照。Trolox是一种维生素E的类似物，水溶性较好，抗氧化能力和维生素E相近。本试剂盒方便快捷，加入待测样品后3-5分钟即可进行吸光度测定，通常10-20个样品可以在十多分钟内检测完毕。本试剂盒可以检测100个样品。包装清单：产品编号产品名称包装 S0116-1 TPTZ稀释液 15ml S0116-2 TPTZ溶液 1.5ml S0116-3 检测缓冲液 1.5ml S0116-4 FeSO4·7H2O 200mg S0116-5 Trolox溶液 (10mM) 0.1ml —说明书1份保存条件： -20℃保存，一年有效。其中S0116-2 TPTZ溶液，S0116-3 检测缓冲液和S0116-5 Trolox溶液 (10mM)需避光保存。注意事项：在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂会对本试剂盒的检测产生干扰，需尽量避免。如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定。但血浆、血清、细胞或组织裂解液等样品中含有的微量的铁盐或亚铁盐不会干扰测定。样品中不能添加DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂。测定时需可以测定A593的酶标仪一台(测585-605nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。 TPTZ对人体有刺激性，请注意适当防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

抗氧化功能评价方法

附件1：抗氧化功能评价方法试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.1.3 蛋白质氧化产物：蛋白质羰基 1.1.4 抗氧化酶：超氧化物歧化酶或谷胱甘肽过氧化物酶 1.1.5 抗氧化物质：还原性谷胱甘肽 1.2 人体试食试验 1.2.1 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.2.2 超氧化物歧化酶 1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必测项目。 2.2 脂质氧化产物指标中丙二醛和血清8-表氢氧异前列腺素任选其一进行指标测定，动物实验抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶任选其一进行指标测定。 2.3 氧化损伤模型动物和老龄动物任选其一进行生化指标测定。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：脂质氧化产物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项指标中二项阳性，且对机体健康无影响，可判定该受试样品具有抗氧化功能的作用。

抗氧化功能检验方法 Method for the Assessment of Antioxidative Function 1 动物实验 1.1 实验动物选用10月龄以上老龄大鼠或8月龄以上老龄小鼠，也可用氧化损伤模型鼠。单一性别，小鼠每组10－15只，大鼠8－12只。 1.2 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设阳性对照组、空白对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.3 实验方法 1.3.1 老龄动物选用10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组。3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验结束时处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.2 D－半乳糖氧化损伤模型 1.3. 2.1原理 D-半乳糖供给过量，超常产生活性氧，打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态，引起过氧化效应。 1.3. 2.2造模方法选25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖40mg－1.2g/kg BW 颈背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组经口给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射，实验结束处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.3 乙醇氧化损伤模型 1.3.3.1原理

活性污泥评价指标实验

活性污泥评价指标实验 1. 实验目的：（1）了解活性污泥的培养、驯化完成的污泥性状；、MLSS、SVI）的测定方法。（2）掌握常规污泥性质（SV 30 2. 实验原理：活性污泥是人工培养的生物絮凝体，它是由好氧微生物及其吸附的有机物组成的。活性污泥具有吸附和分解废水中的有机物（也有些可利用无机物质）的能力，显示出生物化学活性。在生物处理废水的设备运转管理中，除用显微镜观察外，下面几项污泥性质是经常要测定的。这些指标反映了污泥的活性，它们与剩余污泥排放量及处理效果等都有密切关系。 SV 通常是描述污泥的沉降性能。SVI值能较好地反映出活性污泥的松散程30 度(活性)和凝聚、沉淀性能，一般在100左右有为宜。MLSS描述污泥浓度，跟活性污泥生长状况和活性有关。参考污水厂活性污泥培养驯化过程，驯化完结的判断一般以有机物去除率、活性污泥浓度、污泥沉降比及微型动物情况综合判断。当有机物(COD)去除率达 >30％, SVI在100左右。到85％以上，MLSS达到3000mg/L，SV 30 3. 实验设备和试剂（1）电子天平；（2）烘箱和干燥皿；（3）真空过滤装置（布氏漏斗）；（4）定量滤纸；（5）100mL量筒； 4. 实验步骤 (1) 污泥沉降比SV(％)：取混合均匀的泥水混合液100mL置于100mL量筒中，静置30min后，观察沉降的污泥占整个混合液的比例，记下结果。 (2) 污泥浓度MLSS：就是单位体积的曝气池混合液中所含污泥的干重，实际上是指混合液悬浮固体的数量，单位为mg/L。 ①测定方法

a ．将滤纸放在105℃烘箱中干燥至恒重。 b ．将该滤纸剪好平铺在布氏漏斗上，称量并记录(W 1)。 c ．将测定过沉降比的100mL 量筒内的污泥全部倒入漏斗，过滤(用水冲净量筒，水也倒入漏斗)。 d ．将载有污泥的滤纸移入烘箱(105℃)中烘干恒重，称量并记录（W 2）。 ②计算计算污泥浓度： mg/L)1 2（V W W MLSS -= 式中 W 1——滤纸的净重，mg ； W 2——滤纸及截留悬浮物固体的质量之和，mg 。 V ——水样体积，本实验为100mL 。 (3)污泥指数SVI 污泥指数全称污泥容积指数，是指曝气池混合液经30min 静沉后，1g 干污泥所占的容积(单位为mL/g)。计算式如下 )g/L () mL/L (10(%)MLSS SV SVI ?= 5. 实验结果记录表1 6、数据整理与结果分析通过实验得到的数据（SV 30、MLSS 、SVI ），描述实验活性污泥的性质（沉降性能，生长状况等），并判断活性污泥培养、驯化的情况。

小鼠总抗氧化能力的测定

小鼠总抗氧化能力的测定刘小美宋菊敏（2006-10-24）一、原理机体中有许多抗氧化物质，能使Fe3＋还原成Fe2＋，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。二、目的 1．掌握总抗氧化能力的测定方法。 2．观察血虚小鼠模型总抗氧化能力的变化。 3．观察中药对血虚小鼠模型总抗氧化能力的影响。三、材料和方法 1．试剂：总抗氧化能力测定试剂盒（南京建成生物工程研究所） 2．材料：EF管（1.5ml）120支，一次性试管（10ml）60支，移液器（P20ul、P100ul 、P1000ul）各2把及配套枪头各200支，玻璃比色皿（3ml，1cm光径）4只，温浴箱，分光光度计，漩涡混匀器1台，普通离心机大管、小管各1台，试剂瓶（125ml）1个，烧杯（150ml）2个，吸管（10ml）2支，吸球1支，量筒（200ml）1个，标签纸2张。 3．测定方法（1）样本处理：取全血3500转/分离心15分钟得血清待测。（2）试剂盒组成及配制：（50T）试剂一：液体60ml×2瓶，40C保存。试剂二：粉剂×2支，用时每支加双蒸水至120ml，室温保存。试剂三：黄色贮备液10ml×1瓶，避光冷藏保存。贮备液得稀释液60ml×1瓶。试剂三应用液的配制：临用前取贮备液以稀释液稀释，比例为1：19。需多少配制多少。试剂四：溶液24ml×1瓶试剂五：溶液24ml×1瓶，室温保存（天冷时会凝固，每次测试前适当加温以加速溶解，直至透明方可使用）。——测组织中总抗氧化能力时用到，测血清时不用。处测各管吸光度。（370C时，每分钟每毫升血清使反应体系的吸光度（OD）值每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位）。 4）计算：总抗氧化能力（单位/毫升血清）＝（测定管OD-对照管OD）÷0.01÷30×19 四、注意事项 1．室温放置10分钟后必须立即测定吸光度，否则吸光度会增加。 2．实验试剂用量较少，所以加量一定要仔细、准确。 3．每次加样后都必须在漩涡器上充分混匀。 4．难吸难打的试剂必须做到慢吸慢打。五．思考题 1．小鼠血虚模型总抗氧化能力会出现什么样的变化？为什么会出现这样的变化？ 2．怎样用本实验的结果解释模型动物的某些主要症状？ 1

香菇多糖的提取及其抗氧化性和保湿性评价

万方数据

香菇多糖的提取及其抗氧化性和保湿性评价作者：王玢，任清，李奇，董银卯，赵云云作者单位：王玢,赵云云(首都师范大学生命科学学院,北京,100037)，任清,李奇,董银卯(北京工商大学植物资源研究开发北京市重点实验室,北京,100037) 刊名：食用菌英文刊名：EDIBLE FUNGI 年，卷(期)：2008,30(5) 被引用次数：4次参考文献(11条) 1.李宝良;李书剑香菇多糖苯酚试剂测定研究[期刊论文]-中国卫生检验杂志 2005(11) 2.杨娟;吴谋成;张声华香菇蛋白多糖抗疲劳作用研究[期刊论文]-营养学报 2001(04) 3.周之国;周谟炯;程灵香菇多糖对大鼠血小板聚集功能的影响[期刊论文]-时珍国医国药 1999(04) 4.金道山;韩志涛;王士雯香菇多糖抗衰老作用的实验研究 1994(01) 5.张海岚;周建平;边洪荣香菇有效成分研究综述[期刊论文]-华北煤炭医学院学报 2004(01) 6.刘春如;易诚香菇的营养价值和药用价值[期刊论文]-中国林副特产 2002(01) 7.盛剑秋;杨淑英香菇多糖的免疫调节作用研究进展 1998(01) 8.芮菁香菇多糖的药理作用和临床应用概况 2000(01) 9.杜小豪;徐卫;杜雪洁护肤产品的保湿功能评价[期刊论文]-日用化学工业 2000(03) 10.刘骏结晶紫分光光度法测定Featon反应产生的羟自由基[期刊论文]-武汉工业学院学报 2005(02) 11.卯晓岚中国大型真菌 2000 引证文献(4条) 1.张智.焦春伟.胡惠萍.潘鸿辉食用菌抗衰老研究进展[期刊论文]-微生物学杂志 2010(3) 2.谢瑶.石萌萌.庞欣高效液相色谱及液相色谱-质谱联用技术在保健食品检测中的应用[期刊论文]-化学通报（印刷版） 2010(8) 3.陆娟.武哲斌.屈长青超声波辅助提取香菇多糖的研究[期刊论文]-安徽农业科学 2010(33) 4.郑永飞活性多糖的保健功能及其应用[期刊论文]-粮食与食品工业 2009(4) 本文链接：https://www.360docs.net/doc/6b999166.html,/Periodical_syj200805044.aspx

污泥浓度测定实验

实验一活性污泥性质的测定实验1 实验目的 (1)加深对活性污泥性能，特别是污泥活性的理解。 (2)掌握几项污泥性质的测定方法。 (3)掌握水分快速测定仪的使用。 2实验原理活性污泥是人工培养的生物絮凝体，它是由好氧微生物及其吸附的有机物组成的。活性污泥具有吸附和分解废水中的有机物（也有些可利用无机物质）的能力，显示出生物化学活性。在生物处理废水的设备运转管理中，除用显微镜观察外，下面几项污泥性质是经常要测定的。这些指标反映了污泥的活性，它们与剩余污泥排放量及处理效果等都有密切关系。3实验设备与试剂 (1)水分快速测定仪1台 (2)真空过滤装置1套。 (3)秒表l块。 (4)分析天平1台。 (5)马弗炉1台。 (6)坩埚数个。 (7)定量滤纸数张。 (8)100mL量筒4个。 (9)500mL烧杯2个。 (10)玻璃棒2根。 (11)烘箱1台。 4实验方法与操作步骤(1)污泥沉降比SV(％)它是指曝气池中取混合均匀的泥水混合液100mL置于100mL量筒中，静置30min后，观察沉降的污泥占整个混合液的比例，记下结果(表6-1)。(2)污泥浓度MLSS就是单位体积的曝气池混合液中所含污泥的干重，实际上是指混合液悬浮固体的数量，单位为g/L ①测定方法a．将滤纸放在105℃烘箱或水分快速测定仪中干燥至恒重，称量并记录(W1)(见表4-5)b．将该滤纸剪好平铺在布氏漏斗上(剪掉的部分滤纸不要丢掉)。c．将测定过沉降比的100mL量筒内的污泥全部倒人漏斗，过滤(用水冲净量筒，水也倒人漏斗)。d．将载有污泥的滤纸移入烘箱(105℃)或快速水分测定仪中烘干恒重，称量并记录（W2）。②计算污泥浓度(g/L)＝[(滤纸质量+污泥干重)一滤纸质量]×10(3)污泥指数SVI污泥指数全称污泥容积指数，是指曝气池混合液经30min静沉后，1g干污泥所占的容积(单位为mL/g)。计算式如下SVI值能较好地反映出活性污泥的松散程度(活性)和凝聚、沉淀性能。一般在100左右有为宜。(4)污泥灰分和挥发性污泥浓度MLVSS挥发性污泥就是挥发性悬浮固体，它包括微生物和有机物，干污泥经灼烧后(600℃)剩下的灰分称为污泥灰分。 ①测定方法先将已知恒重的磁坩埚称量并记录(W3)(表4-8-1)，再将测定过污泥干重的滤纸和干污泥一并故入磁坩埚中，先在普通电炉上加热碳化，然后放入马弗炉内(600℃)烧40min，取出故人干燥器内冷却，称量(Wd)。②计算在一般情况下，MLVSS/MLSS 的比值较固定，对于生活污水处理池的活性污泥混合液，其比值常在0.75左右。5实验报告记载及数据处理式中W1——滤纸的净重，mg；W2——滤纸及截留悬浮物固体的质量之和，mg。V——水样体积，L

抗氧化活性测定方法的比较

抗氧化活性测定方法的比较人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS 法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在

着较大差异。β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。分光光度法缺点是会受到样本自身颜色和浑浊度的影响和限制，颜色深的样品测得的数据误差大，甚至得到错误的结果；不同物质组成和结构存在差异，与各种自由基的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断。外界环境因素对实验结果也存在一定程度的影响，有些抗氧化活性实验在冬天低温时不易成功，测得的数据往往没有规律。我觉得在测定样品的抗氧化活性时，各种方法都有自己的优缺点，要根据需测物质来决定用什么方法，比如DPPH 法的自由基选择性强，不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应，这类物质需用其他方法测定。若对检测结果

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料 ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。b5E2RGbCb5E2RGbC
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾（potassium persulfate）氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基或者消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。p1EanqFDp1EanqFD
产品内容
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0 保健食品功能评价规范

保健食品功能评价规范第一部分功能学评价程序一、主题内容和适用范围 1、本程序规定了评价食品保健作用的统一程序。 2、本程序适用于评价保健食品的增强免疫力功能，辅助降血脂功能功能，辅助降血糖功能，抗氧化功能，辅助改善记忆功能，缓解视疲劳功能，促进排铅功能，清咽功能，辅助降血压功能，改善睡眠功能，促进泌乳功能，缓解体力疲劳功能，提高缺氧耐受力功能，对辐射危害有辅助保护功能，减肥功能，改善生长发育功能，增加骨密度功能，改善营养性贫血功能，对化学性肝损伤有辅助保护功能，祛痤疮功能，祛黄褐斑功能，改善皮肤水份功能，改善皮肤油份功能，调节肠道菌群功能，促进消化功能，通便功能，对胃粘膜有辅助保护功能。 3、本程序规定了评价食品保健作用的人体试食试验规程。二、保健食品功能评价的基本要求 1 对受试样品的要求 1.1应提供受试样品的原料组成或/和尽可能提供受试样品的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)有关资料。 1.2 受试样品必须是规格化的定型产品，即符合既定的配方、生产工艺及质量标准。 1.3 提供受试样品安全性毒理学评价的资料以及卫生学检验报告，受试样品必须是已经过食品安全性毒理学评价确认为安全的食品。功能学评价的样品与毒理学评价、卫生学检验的样品必须为同一批次（安全性毒理学评价和功能学评价实验周期超过受试样品保质期的除外）。 1.4 应提供功效成分或特征成分、营养成分的名称及含量。 1.5 如需提供受试样品违禁药物检测报告时，应提交与功能学实验同一批次样品的违禁药物检测报告。 2 对实验动物的要求 2.1 根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。 2.2 动物的性别、年龄依实验需要进行选择。实验动物的数量要求为小鼠每组10－15只（单一性别），大鼠每组8－12只（单一性别）。 2.3 动物应符合国家对实验动物的有关规定。 3 对给受试样品剂量及时间的要求 3.1 各种动物实验至少应设3个剂量组，另设空白对照组，必要时可设阳性对照组。剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍（特殊情况除外），受试样品的功能实验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。 3.2 给受试样品的时间应根据具体实验而定，一般为30天。当给予受试样品的时间已达30天而实验结果仍为阴性时，则可终止实验。 4 对受试样品处理的要求 4.1 受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。 4.2 对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。 4.3 液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60-70℃减压进行浓

抗氧化剂抗氧化活性的测定方法

1.抗氧化剂是指在低浓度下能有效延缓或阻止底物氧化的物质。被氧化的底物包括蛋白质、脂质、糖和DNA。 2.初始型抗氧化剂(AH)可通过与脂质自由基L.、过氧自由基LOO.或烷氧自由基LO.反应抑制脂质氧化链反应。 L.+ AH--- LH + A. LOO.+ AH--- LOOH + A. LO.+ AH--- LOH + A. 抗氧化剂自由基A.也能与过氧自由基、烷氧自由基反应从而终止脂质氧化反应。 LOO.+ A.---LOOA LO.+ A.---LOA 次级型抗氧化剂可通过各种机理延缓脂质氧化,如螯合过渡金属、给初始型抗氧化剂补充氢、清除氧以及使活性物质失活等。抗氧化剂的活性分为在生物体外(如食品中)的活性和在生物体内的活性。本文综述了体外测定抗氧化剂抗氧化活性的方法,不包括在生物体中测定生物活性的方法。 3.评价或表征抗氧化活性的方法为了说明在特定条件下被测物抑制底物氧化的效力或清除自由基的能力实际测定时至少要说明在测试条件下被测物是抗氧化剂还是促氧化剂;在指定浓度下比较不同测试材料(如被测物与标准抗氧化剂或添加有被测物的测试体系与空白体系)对底物的作用。评价或表征抗氧化活性的方法有: (1)在指定的时间测量氧化产物或官能团的浓度或吸光度值;( 2)测量反应的速率;

( 3)测量诱导期(延滞期)或氧化达到一定程度所需的时间;( 4)测量速度的积分(即动力学曲线下的面积) ; ( 5)测量被测物产生与标准抗氧化剂相当作用的浓度。4.参数 4.1诱导期( induction period) 诱导期tIND(也叫延滞期, lag period)常定义为化学反应的速度。诱导期是一个相当不确定的值,受检测方法、使用仪器的灵敏性以及一些其他因素的影响。对于脂质氧化,诱导期通常是指链增长阶段动力学曲线的切线和时间轴的交点。 4.2抑制率( percentag e of inhibition)和IC50 抑制率和IC50 (抗氧化剂提供50%抑制作用时的浓度,也可用EC50表示的)常用来表征抗氧化能力。它们不仅与被测抗氧化剂的反应性能和氧化的底物有关,而且受其他因素的影响,如脂质氧化链反应的长度和抑制速率等。此外,用IC50表征抗氧化剂的活性与比较活性的时间点有关。只有在其他参数相同的情况下,在某一研究中测得的抑制率和IC50才可以与另一研究中测得的值进行直接比较。TEC50是指抗氧化剂提供50%抑制作用所需的时间,也常用来表征抗氧化活性 5.对测定方法的要求测定抗氧化剂抗氧化活性的方法应满足如下要求: ( 1)能说明测试体系中发生的反应,并能用明确的动力学图解描述;( 2)测试要有再现性; ( 3)测试效率要足够高; ( 4)方法要相对简单; ( 5)能连续检测; ( 6)应使用与体内或食品有关的活性自由基;

活性污泥的评价指标

活性污泥的评价指标（1）污泥浓度指单位体积混合液含有的悬浮固体量或挥发性悬浮固体量，单位为 mg/L或 g/L。活性污泥法中适宜的污泥浓度一般为 2500～4000mg/L。（2）污泥沉降比SV 污泥沉降比（SV）是指将 1000mL混匀的曝气池活性污泥混合液倒入1000mL量筒中，静置沉淀30min。沉淀污泥所占混合液体积之比为污泥沉降比（%），又称污泥沉降体积（SV30），以"mL/L"表示。因为污泥沉降 30min 后，一般可达到或接近最大密度，所以普遍以此时间作为测定该指标的标准时间。也可以污泥沉降 15min 为准。污泥沉降比是一个很重要的指标，通过观察污泥沉降比可以发现污泥性状的很多问题，如上清液是否清澈、是否含有难沉悬浮絮体、絮体粒径大小及紧凑程度等。（3）污泥体积指数SVI 污泥体积指数（Sludge Volume Index，SVI）是表示污泥沉降性能的参数。污泥指数反映活性污泥的松散程度和凝聚、沉降性能。污泥指数过低，说明泥粒细小、紧密，无机物多，缺乏活性和吸附能力;指数过高，说明污泥将要膨胀，或已膨胀，污泥不易沉淀，影响对污

水的处理效果。对一般城市污水，在正常情况下，污泥指数一般控制在 50～150为宜。对有机物含量高的废水，污泥指数可能远超过以上数值。（4）容积负荷每立方米池容积每日负担的有机物量，一般指单位时间负担的五日生化需氧量千克数（曝气池、生物接触氧化池和生物滤池）或挥发性悬浮固体千克数（污泥消化池）。其计量单位通常以kg/（m3·d）表示。用容积负荷来评价生化装置的实际处理负荷及在相同条件下操作管理的优劣是比较简便而直观的。（5）水力停留时间水力停留时间是指待处理污水在反应器内的平均停留时间，也就是污水与生物反应器内微生物作用的平均反应时间。因此，如果反应器的有效容积为V（m3），则∶HRT=V/Q（其中 V 是曝气池池容积，Q 是曝气池进水流量）。

几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究解读

第38卷第3期2802009年5月卫生研究 JO U R N A L O F H Y G I E N E R ES EA R C H V01.38N o.3 M ay2009 文章编号:1000-8020(200903.02∞.04 几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究刘小兵朴建华1田园中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050 论著摘要:目的研究生物活性物质体外抗氧化能力评价方法,应用体外理化环境下建立起来的评价方法对受试物进行初步抗氧化能力评估。方法联合应用2,2’.连氮.双.(3.乙基苯并噻唑.6.磺酸二铵盐(AB T S 法与铁离子还原/抗氧化能力测定法(r aA P法用于生物活性物质体外抗氧化能力研究。在A B T S法中。使用紫外可见分光光度计734nm波长下测定以槲皮素、姜黄素、D L-a.生育酚和原花青素等为代表的生物活性物质;在FR A P法中,运用酶标仪,595nm波长处测定同样受试物的抗氧化能力。结果A B TS法:槲皮素和姜黄素的抗氧化活性T E A C值分别约为2.02和0.50;而l g D L-a.生育酚、原花青素清除自由基的能力相当于

2.06m m ol、2.897m m ol的Trol ox清除自由基的能力;F RA P法:抗氧化活性以1.O m m ol/L FeS04为参考标准,槲皮素、姜黄素和Tr ol ox摩尔当量约为5.73、1.18和2.09;而D L-a.生育酚和原花青素抗氧化活性分别是207.7m g、 156.36r ag。结论A B TS法与FR A P法联合应用,操作简便、结果可靠,尤其适宜作为生物活性物质体外抗氧化能力的评价方法。关键词:生物活性物质氧化应激中图分类号:R151.2Q591A B T S法FR A P法抗氧化能力文献标识码:A R ese a r ch on t he eval uat i on m et hods f or ant i oxi dant capaci t y of s ever al bi oact i ve s ubs t ances/n vi t r o LI U X i aobi ng,P I A O Ji anhua,TI A N Y ua n I nst i t ut e of N u t r i ti on a nd F oo d Saf et y,C hi nes e C ent er f or D i seas e C ont r ol a nd Pr event i on,B eij i ng100050,C h i na A bst r act:O bj ect t ve T o s t udy t he eval u at i on m e t h ods f or ant ioxi dant capaci t y of bioacti ve s ubs t B nce i n础阳,an d t O appl y t he m e t h ods w h i ch i s es t abl i s hed i n physi eochem i ea l envi r onm ent i n or der t o g i v e t he pr eli m i nar y as se韶,m ent of t e st subj e ct s.M et hods7r he co m bi ne d appli cat i on of A B T S and F R A P m e t h ods i n t he as s es s m ent https://www.360docs.net/doc/6b999166.html, i ng t he U V—V I S

活性污泥法的各种指标及相互关系

活性污泥法的各种指标及相互关系：MLVSS /MLSS一般0.75左右，SVI =混合液30min 静沉后污泥溶积/污泥干重=SV%×10/MLSS（100ML 量筒）影响活性污泥处理效果的因素：①溶解氧2mg/l左右为宜②营养物BOD：N：P=100：5：1③PH值6.5-9.0④水温：20-30度⑤有毒物质：重金属、H2S等无机物质和氰、酚等有机物质。会破坏细菌细胞某些必要的生理结构，或抑制细菌的代谢过程。衡量曝气效果的指标及适用围：动力效率（Ep）、氧转移效率（EA）对鼓风曝气而言即氧利用率、充氧能力（对机械曝气而言）活性污泥法常见的问题及处理方法：①污泥膨胀：防止办法：加强操作管理，经常检测污水水质、溶解氧、污泥沉降比、污泥指数等。解决办法：缺氧、水温高可加大曝气量或降低进水量以减轻负荷或适当降低MLSS，使需氧量减少。如污泥负荷率过高，可适当提高MLSS值，以调整负荷。如PH值过低，可投加石灰调整PH。若污泥大量流失，则可投氯化铁，帮助凝聚。②污泥解体：污水中存在有毒物质，鉴别是运行方面的问题则对污水量、回流污泥量、空气量和排泥状态以及SV%、MLSS、DO、Ns等进行检查，加以调整；如是混入有毒物质，需查明来源，采取相应对策。③污泥脱氮：呈块状上浮，由于硝化进程较高，在沉淀池产生反硝化，氮脱出附于污泥上，从而使污泥比重降低，整块上浮。解决办法：增加污泥回流量或及时排除剩余污泥，在脱氮之前将污泥排除；或降低混合液污泥浓度，缩短污泥岭和降低溶解氧等，使之不进行到硝化阶段。④污泥腐化：污泥长期滞留而进行厌氧发酵生成气体，从而大块污泥上浮的现象。防止措施：a、安设不使污泥外溢的浮渣清除设备；b、消除沉淀池的死角区；c、加大池底坡度或改进池底刮泥设备，不使污泥滞留于池底。⑤泡沫：原因污水中存在大量合成洗涤剂或其他起泡物质。措施：分段注水以提高混合液浓度；进行喷水或投加除泡剂等。生物滤池：是以土壤自净原理为依据，有过滤田和灌溉田逐步发展来的。废水长期以滴

用清除有机自由基DPPH法评价竹叶提取物抗氧化能力

第28卷,第7期光谱学与光谱分析Vol 128,No 17,pp157821582 2008年7月 Spectroscopy and Spectral Analysis J uly ,2008　用清除有机自由基DPPH 法评价竹叶提取物抗氧化能力郭雪峰,岳永德3,汤　锋,王　进,姚　曦国际竹藤网络中心,国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室,北京　100102 摘　要　通过对1,12二苯基苦基苯肼(DPP H )溶液吸收光谱、DPP H 溶液反应体系的研究,得出以下结论, 分光光度法测定DPP H 溶液反应体系的测定波长为51814nm ,反应体系为4100mL 25717mg ?L -1的DP 2P H 溶液中加1mL 不同浓度的抗氧化剂,反应体系加入抗氧化剂后反应时间为40min ;用上述方法研究评价合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚(TB HQ )和2,62二叔丁基对甲酚(B H T )对DPP H 自由基清除率和浓度的关系,以IC 50值(清除率为50%时,抗氧化剂的浓度值)作为评价指标,测得合成抗氧化剂和效果最好竹叶提取物样品IC 50值分别为,TB HQ (21114mg ?L -1),B H T (42109mg ?L -1),M40(108140mg ?L -1),M40等竹叶提取物可以作为天然抗氧化剂进行开发。关键词　竹叶提取物;1,12二苯基苦基苯肼;清除率;IC 50值中图分类号:TS20112 文献标识码:A 文章编号:100020593(2008)0721578205 　收稿日期:2007209208,修订日期:2007212218 　基金项目:国家“十一五”科技支撑项目(2006BAD19B08)和国际竹藤网络中心基本科研业务费专项资金(06/072B14)资助　作者简介:郭雪峰,1972年生,国际竹藤网络中心讲师 3通讯联系人 e 2mail :yueyd @https://www.360docs.net/doc/6b999166.html, 引　言竹叶作为一种“药食两用的天然植物”已被广大消费者所接受,竹叶提取物主要功能性成分为竹叶黄酮糖苷,具有抗氧化和抑菌活性,可以作为一种生物黄酮类保健营养素进行开发,前景广阔。迄今为止,国内外用于评价植物抗氧化能力的方法已有很多,如硫氰酸盐(thiocyanate )法[1]、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid ,TBA )法[2]、抗氧化能力指数法(oxygen radicalabsorbance capacity ,ORAC )[3]、化学发光法[4]等,还有很多清除自由基的检测评价方法[528],这些方法都有各自的不足之处。1,12二苯基苦基苯肼(1,12Diphenyl 222picrylhydrazyl ,DPP H )检测法是通过分子中1个稳定的DPP H 自由基与抗氧化剂提供的1个电子配对结合,使DP 2P H 的特征紫色消失,因此可用于抗氧化剂清除自由基能力的评价。近年来,国内外已有人初步利用DPP H 溶液的紫红色吸光度变化作为清除自由基能力的分光光度测定[9212],但其准确性、灵敏度和可行性还需进一步系统的探讨。 1　材料和方法 111　仪器和试剂 Ultrospec 3300pro 分光光度计,英国Biochrom 公司;1,12二苯基苦基苯肼(DPP H ),Fluka 公司;叔丁基对苯二酚 (TB HQ ),北京科华特种试剂朕合开发中心;2,62二叔丁基对甲酚(B H T ),国药集团化学试剂有限公司;乙醇、AB 28大孔树脂等均为国产分析纯试剂。112　竹叶材料及前处理方法毛竹(phy llostachys edulis )叶于2006年9月采自江苏南京林业大学竹种园。取6000g 毛竹叶粉,95%乙醇,温度60℃,回流提取4次,提取液过滤浓缩得竹叶提取物浸膏。竹叶提取物浸膏溶解于95%乙醇后过AB 28大孔树脂柱,分别用纯水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、丙酮洗脱,水洗脱组分弃用,其他洗脱组分浓缩得干膏,备用。各洗脱组分分别简称如下:M20,毛竹叶提取物浸膏过AB 28大孔树脂柱,水洗脱后,20%乙醇洗脱下组分;M40,20%乙醇洗脱后,40%乙醇洗脱下组分;M60,40%乙醇洗脱后,60%乙醇洗脱下组分;M80,60%乙醇洗脱后,80%乙醇洗脱下组分;MA ,80%乙醇洗脱后,丙酮洗脱下组分。113　溶液配制11311　样品试液的配制分别称取合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚(TB HQ )012669g ,2,62二叔丁基对甲酚(B H T )013186g ;再分别称取样品M20013207g ,M40013073g ,M60013200g ,M80012952g ,MA 012974g ,用95%乙醇定容到100mL ,得到溶液质量浓度值分别为,TB HQ 21669mg ?mL -1,B H T 31186mg ?mL -1,M2031207mg ?mL -1,M4031073mg ?mL -1,M6031200mg ?mL -1,M8021952mg ?mL -1,MA 21974

DPPH抗氧化能力测定

DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力 2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C 和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL 的无水乙醇溶液。 2.1.1 绿原酸母液的配制称取 9.0 mg 绿原酸，定容到50ml ，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL 。然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。 2.1.2 Vc 母液的配制称取 mg VC ，定容到100ml ，即可得到VC 的母液。然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。 2.1.3 没食子酸母液的配制称取 mg 没食子酸，定容到100ml ，即可得到没食子酸的母液。然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。 2.1.4 DPPH 母液的配制称取 mg DPPH ，用无水乙醇定容到100ml ，即可得到DPPH 的母液。然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。C DPPH = mg/ml 。（建议用0.025mg/mL ） 2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm 下扫描。A max = nm 2.3 抗氧化活性测定 DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为 nm 。当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm 处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强 [4.5]。具体实验步骤及方法：精确吸取的DPPH.溶液2mL 与2ml 无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL 无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A 0)。 A 0= 2.3.1 绿原酸样品溶液的抗氧化能力测定精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与浓度 mg/ml 的DPPH.溶液2mL 混合，摇匀后放置30min 。以相对应的溶剂(无水乙醇)为对照调零，用分光光度计分别测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A i )，分别测得A i 值。 A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与2mL 无水乙醇混合均匀后，以无水乙醇为对照，用分光光度计分别测定各混合液在波长 nm 处的吸光度值(A j )，分别测得A j 值。 A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。将以上数据代入下列公式计算其清除率。清除率SR(％)=%100A A A 10j i ???? ? ?? -- 其中， A i ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸与 2mL 的DPPH.溶液混合后在波长 nm 处的吸光度值； A j ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸分别与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的光值； A 0：2mLDPPH.溶液与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的吸光度值。