Hepa 1-6小鼠肝癌细胞株使用说明

Hepa1-6小鼠肝癌细胞株使用说明

细胞名称：Hepa1-6

中文名称：小鼠肝癌细胞

动物种别：小鼠

组织来源：肝癌

细胞形态：上皮样

生长特性：贴壁

传代方式：0.25%胰酶消化（可以含EDTA）

冻存方法：常规培养基+20%FBS+5%DMSO

供应限制：仅供研究之用。

细胞特性：

Hepa1-6小鼠肝癌细胞株源自C57/L小鼠中引发的BW7756肝癌。Hepa1-6小鼠肝癌细胞株可以在无血清的培养基中繁殖，培养基成分是：DMEM,75%;Waymouth’s MAB87/3培养基，25%。添加3x10-8M硒。测试发现肢骨发育畸形畸形病毒(鼠痘)阴性。

培养条件：

DMEM培养基，90%；胎牛血清，10%。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。

温度：37摄氏度。

运输方法：

常温发货，收到细胞后，将瓶身消毒，弃掉旧培养基，添加新鲜培养基，确认细胞无异后，80-100%汇合度传代培养。

REFERENCE

Darlington GJ.Liver cell lines.Methods Enzymol.151:19-38,1987.PubMed:3431441 Darlington GJ,et al.Expression of liver phenotypes in cultured mouse hepatoma cells.J.Natl.Cancer Inst.64:809-819,1980.PubMed:6102619

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/7110855335.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/7110855335.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/7110855335.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/7110855335.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。

Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达

龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/7110855335.html, Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达作者：刘鼎刘建生来源：《中国当代医药》2015年第16期 [摘要] 目的检测Rab27A与Rab27B在3种人肝癌细胞系及1种永生化肝细胞系中的表达情况，初步研究Rab27A与Rab27B表达对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用RT-PCR及Western blot技术，检测Rab27A与Rab27B mRNA在3种人肝癌癌细胞HepG2、Huh-7、Li-7及1种永生化肝细胞系HL-7702中的表达。结果 Rab27A与Rab27B在肝癌细胞系及原发性肝癌组织中存在差异性表达。Rab27A mRNA在3种人肝癌细胞系中表达明显强于1种人永生化肝细胞系；Rab27B mRNA在3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中均明显表达但无显著差异。结论 Rab27A与Rab27B与原发性肝癌密切相关，可以为临床采取合理诊断措施提供有效的参考依据。 [关键词] Rab27A；Rab27B；肝细胞癌；RT-PCR；Western blot [中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（a）-0004-04 Expression of Rab27A and Rab27B in the four different hepatocellular carcinoma LIU Ding LIU Jian-sheng▲ The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China [Abstract] Objective To investigate the expression of Rab27A and Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line and its effect on biology characteristics of the cells. Methods The mRNA expression of Rab27A and Rab27B was detected by RT-PCR，and Western-blot in 3 human HCC lines of HepG2，Huh-7，Li-7 and the immortalized hepatic cell line of HL-7702. Results Rab27A and Rab27B were differentially expressed in cell lines and primary HCC tumors.The expression of Rab27A in 3 human HCC line was significantly better than that expressed in the immortalized hepatic cell line；the mRNA of Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line were significantly expression but there was no significantly difference. Conclusion Rab27A and Rab27B expression are closely correlated HCC，it can provide the clinical reasonable diagnostic measures as valuable effective reference basis. [Key words] Rab27A；Rab27B；Hepatocellular carcinoma；RT-PCR；Western blot 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，具有极高的侵袭性和转移性，出现典型症状时，往往已经为晚期。目前与HCC进展相关的因子包括癌

肝癌小鼠造模实验方法

肝癌小鼠造模实验方法 (1)肿瘤细胞悬液的制备小鼠肿瘤细胞用小鼠腹腔培养，然后抽取腹水，是取得大量肿瘤细胞最便捷的方法。具体操作如下：将肿瘤细胞株复苏后，接种于babl/c （昆明小鼠）腹腔，培养8-10天后，接种小鼠的腹腔内长出含肿瘤细胞的腹水，选择腹水饱满的小鼠，在超净台内于无菌条件下消毒小鼠腹部，用注射器抽取淡腹水为瘤源，放入无菌容器内，加入无菌生理盐水稀释瘤液，小心摇匀，并置冰水上保存。若用多只动物做瘤源时，则应混合腹水。(腹水应为淡黄色浓稠液体，若为深黄色或红色则应弃去不用。) (2)肿瘤细胞计数取少量腹水，放置于干试管内，用生理盐水稀释100倍，用枪头吸取少许腹水，滴于载玻片上，推片，镜下观察细胞形态：细胞为圆形，胞浆均匀，透明，折光性好，分布均匀。并于镜下进行细胞分类计数，其中肿瘤细胞数应≥95％。 (3)肿瘤细胞接种腹水用无菌生理盐水调整细胞浓度为1*107mL ，在小鼠右侧腋下(右侧腋窝皮下？)常规接种H22瘤液0．2mL ／只(含2*106个瘤细胞)（5*106）？。全程严格无菌操作， 40min 内完成。 (4)分组与给药昆明小鼠用上法造模，造模后再将腹水瘤小鼠按体重分层，随机分为阳性对照组(CTX)、青蒿素各剂量组(150mg ／kg 、300mg ／kg)、青蒿琥酯P0组(60mg ／kg)、青蒿琥酯ip 组(60mg ／kg)、青蒿醇提物和青蒿水提物各剂量组 (1000mg ／kg 、4000mg ／kg)和模型对照组(Model)，每组各lO 只小鼠。造模24h 后，阳性对照组(CTX)20mg ／kg 和青蒿琥酯ip 组(60mg ／kg)，腹腔注射0．2mL ／只，每天1次，连续lOd ：其它组灌胃给药，灌服溶液0．4mL ／只，每天1次，连续lOd 。模型对照组仅予等量CMC-Na 溶液，连续lOd 。平均每只小鼠每天给等量鼠料，每周换垫料2次，每日换新鲜水1次。记录各小鼠死亡的时间。其他问题：检测药物对肿瘤的抑制作用，给药时间怎么确定？ 1、造模后第二天给药 2、肿瘤长出一定体积后在给药

小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定

小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定【摘要】目的建立一种小鼠腹腔巨噬细胞分离培养的简便方法。方法以无血清的DMEM培养液灌洗小鼠腹腔，分离获取小鼠腹腔巨噬细胞，在含有10%成牛血清的DMEM培养液中培养。采用倒置显微镜观察细胞形态，台盼蓝染色计算存活率，瑞氏染色计算纯度。结果获得高纯度的巨噬细胞，具备巨噬细胞的形态特征。结论该方法是一种简单可行的分离巨噬细胞的方法。【关键词】小鼠；巨噬细胞；分离；培养；鉴定 0.引言巨噬细胞是动物机体内重要的免疫细胞，具有抗肿瘤和免疫调节等重要作用[1，2] ，被广泛应用于体外免疫增强药物的非特异性免疫功能评价[3] 。有很多文献报到已能从多种组织和器官中分离纯化巨噬细胞，但这些方法大多都是繁琐、复杂，所需时间长且耗资较大。本实验以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，探索建立一种巨噬细胞体外分离培养与鉴定简便的方法。 1.材料与方法 1.1实验对象清洁级巴贝斯小鼠，体重在（30-32g），由兰州大学实验动物中心提供。 1.2实验方法 1.2.1小鼠腹腔单核巨噬细胞的分离培养随机选取巴贝斯小鼠，腹腔注射不含小牛血清的RPMI-1640培养液5ml。轻柔小鼠腹部2-3min，静置5-7min后将小鼠颈椎脱臼处死，至于解剖板上，无菌条件下打开腹腔，用注射器抽取腹腔液，离心5min （1000r/min），弃上清，用PBS洗涤2遍。再用含10%成牛血清的RPMI-1640培养液（0.1%双抗溶液）调节至2×106ml-1，接种于培养瓶及6孔板，置37℃，5%CO2培养箱培养2h，弃上清。用不含小牛血清的RPMI-1640培养液洗涤2遍，然后加含有10%小牛血清的RPMI-1640培养液在37℃CO2培养箱中继续培养[4]。倒置显微镜观察细胞形态。 1.2.2巨噬细胞的观察与鉴定（1）台盼蓝染色计算存活率。 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）；

Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义

第32卷第1期 2012年2月健康研究Health Research Vol．32No．1Feb．2012收稿日期：2011－10－16 作者简介：邱丽香（1982－），女，浙江龙泉人，本科，护师。DOI ：10．3969/j．issn．1674-6449．2012．01．002基础医学 Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义邱丽香1，翟淑亭2，秦建芬 1（1．浙江大学医学院附属邵逸夫医院护理部，浙江杭州310016；2．杭州市下沙医院普外科，浙江杭州310006）摘要：目的研究Notch3在大鼠肝癌发生发展中的动态变化。方法二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌的发生，于4周、8周、12周、16周时取肝脏标本，免疫组化和Western blot 法检测标本中Notch3的表达。结果随着肝组织损伤加剧，Notch3表达逐渐升高。与正常组相比，肝损伤组、肝硬化组和肝癌组的 Notch3蛋白明显表达增加（P ＜0．05）。结论Notch3参与了大鼠肝癌发生的全过程，并且随着肝损伤的不断加剧，其表达也逐渐上升。Notch3信号的激活可能是肝癌发生的一项重要机制。关键词：Notch3蛋白；肝癌中图分类号：R735．7文献标识码：A 文章编号：1674－6449（2012）01－0004－03 Expression of Notch 3in Rat Liver Cancer and Its Effect QIU Li-xiang 1，ZHAI Shu-ting 2，QIN Jian-fen 1 （1．Department of Nursing ，The Sir Run Run Shaw Hospital ，School of Medicine ，Zhejiang University ，Hangzhou ，Zhejiang 310016，China ；2．Department of General Surgery ，Hangzhou Xiasha Hospital ，Hangzhou ，Zhejiang 310006，China ）Abstract ：Objective Objective To investigate the dynamic changes of Notch 3in the development and progression of hepatic carcinoma in rats．Methods Hepatocarcinoma was induced by diethylinitrosamine．Liver specimens were taken at week 4，8，12and 16for detection of Notch3expression using immunohistochemical and Western blot methods．Results Notch3expression increased gradually with the worsening of hepatic injury．There were statistically significant increases of Notch3protein expression in hepatic injury group ，hepatic cirrhosis group and hepatocarcinoma group as compared to the normal control group （P ＜0．05）．Conclusions Notch3participates in the whole process of hepatocarcima development and progression in rats．Increased expression of Notch3is associated with the worse of hepatic injury．The activation of Notch3may be an important mechanism for the development of hepatocarcinoma． Key words ：Notch3protein ；hepatocarcinoma

shRNA抑制CLIC1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca-F生物学行为的影响

大连医科大学博士学位论文 shRNA抑制CLIC1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca-F生物学行为的景程姓名：李荣宽申请学位级别：博士专业：病理与病理生理学指导教师：唐建武 201006

shRNA抑制CLIC 1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca．F生物学行为的影响博士研究生：李荣宽指导教师：唐建武教授专业名称：病理学与病理生理学摘要背景：转移潜能是恶性肿瘤最重要的生物学特征之一，也是肿瘤患者死亡率高、预后差的主要原因。对于上皮来源的恶性肿瘤，淋巴道转移是其早期转移的主要方式，但确切机制目前仍不清楚。原发性肝癌 (primary carcinoma of the liver)是最常见恶性肿瘤之一，包括肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma，HCC)、肝内胆管上皮癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，IHCC)、肝细胞及胆管上皮细胞混合癌三种细胞类型，其中90％以上为肝细胞癌。全世界每年新发约62．6万例HCC患者，其中的半数以上病例发生在我国。同时，它也是恶性程度最高、致死率最高的肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤死因第三位、我国恶性肿瘤死因第二位。即便是经过根治性切除手术治疗，5年的复发转移率仍高达60％，因此，揭示肝癌转移的分子机制及其关键调控环节，进而采取相应的干预措施，将有助于减少、甚至避免病人术后发生复发转移，从而达到降低死亡率的目的。 Hca．F和Hca．P是将小鼠肝癌细胞株H22在61 5小鼠体内反复接种和筛选后得到的一对来源于同一亲本细胞、但是淋巴道转移潜能显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株。其中Hca．F具有高淋巴道转移潜能，接种到6l 5小鼠体内后其淋巴结转移率超过70％，Hca．P是低转移潜能的细胞株，其淋巴结转移率低于30％。通过对比研究二者的差异，可以为我们揭示小鼠肝癌的淋巴道转移机制提供有益的参考。本课题组在前期工作中已经应用不同的方法，对Hca．F和Hca．P这一对具有高低不通淋巴道转移潜能的细胞株进行了一系列系统的研究。首先，利用抑制性消减杂交技术(suppression substractive hybridization，SSH)及基因芯片 (Genechip)高通量筛选(high throughput screen，HTS)技术得出了Hca．F 细胞和Hca．P细胞之间一系列差异表达基因，继而采用定量蛋白质组学技术建立了高低淋巴道转移潜能小鼠肝癌细胞的荧光差异蛋白表达图

常见细胞株中文名称及缩写

人类组织正常及永生化细胞英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞

小鼠腹腔巨噬细胞制备及提取

小鼠腹腔巨噬细胞制备及提取实验动物： 6-8周的SPF级雄性BALB/C小鼠，小鼠取细胞前三天每天腹腔注射0.5-1mL淀粉肉汤，或者取细胞前一小时注射1mL淀粉肉汤。试剂：75% 乙醇、RPMI 1640 （Gibcol/BRL，美国）、含10%小牛血清RPMI-1640液(10%牛胎血清、青霉素100U/ml、链霉素10μg/ml)步骤： 1、取6周左右的小鼠，剃去腹部的毛并消毒。 2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入75%酒精中3～5秒。 3、倒立小鼠，置动物于解剖台上，固定四肢，75%酒精擦洗腹膜壁后，用9号针头5ml注射器沿腹中线将预冷的不含小牛血清的PBS5mL注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。轻轻按摩腹部2-3分钟，静置5-7分钟。 4、无菌条件下，剪开腹壁，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。再用75%酒精擦洗腹壁。 5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸入注射器内。小心拔出针头。把液体注入50ml离心管中。再用同样容量的PBS冲洗腹腔2～4次。合并渗出液于50 mL离心管中。直至冲洗液变澄清。 6、4℃ 250×g（1000 rpm/min）离心10min，去上清。 7、用PBS培养液洗涤细胞3次，每次4℃ 250×g（1000 rpm/min）离心10min，去上清。 8、用含10%小牛血清RPMI-1640液(10%牛胎血清、青霉素100U/ml、链霉素10μg/ml)悬浮细胞。将调整细胞浓度调整至 5×106cells/mL 加入培养皿中培养9、将培养皿置于5% CO2、37℃培养箱中培养3 h，然用37℃预温的RPMI-1640培养液清洗培养皿2-3次，去除未贴壁的细胞，即得到纯化的贴壁巨噬细胞。种96孔板。2h细胞贴壁。换液。墨汁（时间短，可以不灭菌）染色。观察。

医学实验肝癌动物模型的研究进展

万方数据

医学实验肝癌动物模型的研究进展作者：陈谦，孙慧，李强作者单位：陈谦(天津医科大学附属肿瘤医院肝胆科,300060)，孙慧,李强(300060,天津市环湖医院肿瘤科) 刊名：中华实验外科杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY 年，卷(期)：2006,23(3) 被引用次数：11次参考文献(13条) 1.张伟俈动物模型与实验外科[期刊论文]-中华实验外科杂志 2003(4) 2.叶燕丽;周昕熙;王莲桂裸小鼠的繁殖及在肿瘤学中的应用[期刊论文]-实验动物科学与管理 2005(1) 3.Roy J;Couillard S;Gutman M A novel pure SERM achieves complete regression of the majority of human breast[外文期刊] 2003 4.Celinski SA;Fisher WE;Amaya F Somatostatin receptor gene transfer inhibits established pancreatic cancer xenografts[外文期刊] 2003(1) 5.Frydman B;Blokhin AV;Brummel S Cyclopropane-containing polyamine analogues are efficient growth inhibitors of a human prostate tumor xenograft in nude mice[外文期刊] 2003(21) 6.She Y;Lee F;Chen J The epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor ZD1839selectively potentiates radiation response of human tumors in node mice,with amarked improvement in therapeutic index[外文期刊] 2003 7.Katz MH;Takimoto S;Spivack D A novel red fluorescent protein orthotopic pancreatic cancer model for thepreclinical evaluation of chemotherapeutics[外文期刊] 2003(1) 8.Yao X;Hu JF;Daniels M A novel orthotopic tumor model to study growth factors and oncogenes in hepatocarcinogenesis[外文期刊] 2003 9.Shoji T;Konno H;Tanaka Sakaguchi T Orthotopic implantation of a colon cancer xenograft induces high expression of cyclooxygenase-2[外文期刊] 2003(2) 10.Lennder P A new liposomal contrast medium for CT of the liver.An imaging study in a rabbit tumour model[外文期刊] 1996 11.李雁;汤钊猷我国肝癌模型研究的历史和现状[期刊论文]-中华实验外科杂志 2001(5) 12.Niemann H;Kuse W Application of transgenesis in livestock for agriculture and biomedicine[外文期刊] 2003(3/4) 13.Wang BJZ Specific genetic modifications of domestic animals by gene targeting and animal cloning [外文期刊] 2003 本文读者也读过(6条) 1.彭方兴.严律南肝癌动物模型的研究进展[期刊论文]-中华实验外科杂志2000,17(5) 2.李翠云.段小娴肝癌动物模型研究进展[期刊论文]-医学研究杂志2006,35(10) 3.陈华.赵德明.CHEN Hua.ZHAO De-ming肝癌动物模型[期刊论文]-实验动物科学与管理2005,22(4) 4.胡卫.陈涛鼠移植性肝癌模型研究进展[期刊论文]-河南肿瘤学杂志2003,16(6) 5.徐静.李旭肝癌动物模型的建立[期刊论文]-实用肝脏病杂志2005,8(2)

人肝癌细胞株中FOXM1及NF_B的表达及意义_王琦1_柴磊2_蒋少青3_马丽4

网络出版时间：2014-02-17 09:02 网络出版地址：https://www.360docs.net/doc/7110855335.html,/kcms/detail/64.1008.R.20140217.0902.004.html 人肝癌细胞株中FOXM1 及NF-κB的表达及意义王琦1，柴磊2，蒋少青3，马丽4 ，金栋5 ，殷利军5，张桂香5，谢岩青5 （1.宁夏医科大学总医院肝胆外科，银川 750004；2.宁夏回族自治区第三人民外科，银川750004；3.宁夏医科大学总医院药剂科，银川 750004；4.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院药剂科，银川 750004；5.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院血管外/普外科，银川750004）1 [摘要] 目的探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（nuclear factor kappa B）的表达强度及意义。方法采用Western blot、RT-PCR法，检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κ B 在蛋白及mRNA 水平的表达情况。结果在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平均存在显著差异，细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721。结论肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致，提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关。 [关键词] FOXM1；NF-κB；肝细胞肝癌 [中图分类号]R735.7 [文献标识码]A Expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells WANG Qi1，CHAI Lei2，JIANG Shao-qing 3，MA Li4，JIN Dong5，YIN Li-jun5 ,ZHANG Gui-xiang5，XIE Yan-qing5，（1. Dept.of Hepatobiliarysurgery，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；2. Dept.of Surgical， the Third People′s Hospital of Ningxia. Yinchuan 750004；3. Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；4. Dept.of Pharmacy，the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；5. Dept.of Vascular/General Surgery， the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ.Yinchuan 750004） ABSTRACT Objective（1）To investigate the expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells. Methods The expression of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B protein and micro-RNA in hepatocellular carcinoma cell lines(QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721)were detected with the application of Western blot analysis and RT-PCR analysis，respectively. Results The expression 基金项目：宁夏自然科学基金（项目编号：NZ1236）作者简介：王琦(1983-),硕士，主任医师，肝癌复发相关分子机制的研究。通作者：谢岩青，Email：xie-yanqing@https://www.360docs.net/doc/7110855335.html,

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影作者：张志培，施新猷，李六金，刘雪松，江逊，彭磊，赵佐庆【关键词】肝癌细胞关键词: 肝癌细胞;接种;免疫缺陷小鼠;T细胞;细胞毒;流式细胞仪摘要:目的探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力. 方法将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB/c，B缺陷的CBA/N，T缺陷的BALB/c nude及T，B缺陷的C.B-17SICD小鼠）右后臀皮下，观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验. 结果 BALB/c和CBA/N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B-17SCID 小鼠100%成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID （BALB/c-PBL-SCID）的不成瘤，用CBA/N外周淋巴细胞重建的SCID （CBA/N-PBL-SCID）成瘤，接种过瘤的BALB/c和CBA/N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀伤作用，对照组和nude，SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用. 结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用，这种排斥是异种特异性的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用.

Keywords:hepatocarcinoma cell;vaccination;immunodefi-cient mice;T lymphocytes;cytotoxicity;flow cytometry Abstract:AIM To explore the effect of immune cells in var-ious mice with different immune on growth of human hepato-carcinoma cells in these mice and xenospecific cytotoxicity of these mice to hepatocarcinoma cells.METHODS The hu-man hepatocarcinoma cells cultured were inoculated subcuta-neous into the posterior limbs in various mice with different immune（including normal immune mice-BALB/c，B lympho-cyte deficient mice-CBA/N，T lymphocyte deficient mice-BALB/c nude and T，B lymphocytes combined deficient mice-C.B-17SCID）and their growth in the mice.Were surveyed And the spleen cells were harvested from both experiment groups in5weeks after being inoculated and from control groups a to examine direct cytotoxicity to the hepatocarci-noma cells.RESULTS There were no carcinoma growth in BALB/c，CBA/N mice and immunoreconstructed SCID mice with BALB/c mice peripheral blood lymphocytes（BALB/c-PBL-SCID）but100%carcinoma growth in SICD，nude and immunoreconstructed SCID mice with CBA/N

小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养2013

细胞工程综合实验报告小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养班级 xxxx 姓名 xxxx 学号 xxxxxxxxxx 指导教师 xxxx 实验时间 xxxx 成绩

小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养姓名学号班级一、实验目的 1.了解细胞原代培养培养的基本方法和操作过程。 2.初步掌握培养过程中的无菌技术。 3.了解在相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。巨噬细胞属天然免疫细胞，具有趋化运动、吞噬、分泌和参与免疫调节等功能，是科学工作者研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周多用做原代培养，不易长期生存。巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。目前，单核巨噬细胞株也有，比如RAW264.7，但价格比较贵，且保存也不方便。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，目前以小鼠腹腔取材法最为实用，而目前获取小鼠巨噬细胞的方法有两种，一种是直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞，还有一种方法向动物腹腔中注射刺激物（如牛血清，淀粉，糖原，脂多糖，矿物油，PRMI1640培养液等），这样使机体产生大量巨噬细胞后再腹腔灌洗，但由于许多刺激物能激活巨噬细胞，而被激活的巨噬细胞大量吞噬刺激物，有此得到的巨噬细胞培养用于培养时，细胞中的刺激物不能很快被消化而残留在细胞中，影响细胞代谢，同时也不能很好的模拟体内环境，所以我们直接用培

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 [摘要] 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种，定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟淋巴结肿大情况，并于接种后 21 天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结称重并测量大小，同时观察肿瘤的形态特点，生长方式，肺、肝、肾等脏器，并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。结果:21 天观察，实验使用 10 只小鼠，最终存活 8只，其中形成肿块 7 只（3只形成的肿块较大），成瘤率 70%，淋巴结转移率 70%。肉眼观察，较大肿瘤 2*1.5*1.3cm，灰白色，质地较硬，从中间切开，发现肿块大部分坏死，中心部分出现腔，腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察，坏死组织粉染，轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性：瘤细胞大小和形态不一致，细胞核体积增大并呈现多形性，核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多，核浆比失调，胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移，无器官转移，且具有高转移力。 [关键词]HCa-F（高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移[前言]研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大，在亚非国家较常

见，我国的发病率较高，属于常见的肿瘤之一。近年来，我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩，一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效[1]。随着临床治疗经验的积累，逐渐意识到即使是小肝癌根治性切除，转移复发仍然是一个十分严峻的问题，术后 5 年复发率可高达 50% 。存在的问题:本次试验采用的方法是将瘤细胞移植于615小鼠右腋中线皮下，观察肿瘤生长及转移状态[2]。所以移植瘤没有展现自发性肿瘤从正常组织转变成肿瘤、随后出现转移的全过程,没有了解疾病完整的自然史。实验的意义:为了探究肝癌的实质性问题，即肿瘤本身的生物学特性，尤其是其转移的生物学特性，本次试验对肝癌转移的生物学行为进行实验性研究。即将肿瘤细胞直接接种到小鼠的皮下组织然后观察肿瘤细胞在小鼠体内的生长及转移情况。它基本上模拟了从肿瘤生长到转移瘤形成的一系列步骤，又涉及宿主的反应性，因此结果可靠，近似于临床病人的实际情况，对提高恶性肿瘤患者的生存率和预后有重要的意义[3]。 [正文] 一、材料 1、细胞系：高转移力小鼠腹水型肝癌细胞，由大连医科大学病理教研室建株并保存。 2、实验动物：近交系615小鼠，雌雄兼用，6-8周龄，体重18-22g，由大连医科大学实验动物中心提供。