H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性

H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的

肺水肿实验报告

篇一：肺水肿实验报告实验性肺血容量增高性肺水肿一、实验目的 1.复制家兔实验性肺水肿 2.观察肺水肿的表现，并探讨其有关的发病机理。二、实验药品与器材生理盐水、乌拉坦、气管插管和与之配套的呼吸描记装置（二道生理记录仪）或生物信号采集系统、血气分析仪。静脉导管和静脉输液装置，颈部小手术器械，婴儿秤，天平，听诊器，兔固定台，1ml、2ml注射器各2具，丝线，纱布，滤纸，烧杯等。三、实验步骤本实验分为实验组和对照组。 1、将实验组家兔准确称重后，麻醉、仰卧固定于兔台上，剪去颈前部手术视野被毛，切开颈部前部皮肤，然后分离气管及一侧颈外静脉和二侧颈总动脉并穿线备用。切开气管，插入气管插管，用丝线结扎固定后将呼吸描记装置与之相连，以描记呼吸。结扎颈外静脉远心端，在近心端靠近结扎处剪一小口，插入静脉导管，结扎固定后将输液装置与之相接并试行滴注，通畅后暂停输液。 2、由颈总动脉插入动脉插管以描记血压，由颈外静脉插入静脉插管并连接输液装置缓慢滴人0．9％的生理盐水以保持管道通畅 3、描记一段正常呼吸，用听诊器听肺的呼吸音。 4、用lml肝素化注射器从耳朵动脉抽血0．5m1，立即将针头插入橡皮塞中以防空气进入。经血气分析仪测定血液的ph、pac02、pa02、k+、na+、cl-等，作为实验前对照。 5、然后输入37℃(摄氏度)生理盐水，输入量按100ml/㎏（体重）计算，输液速度180-200滴/min。 6、输药液过程中密切观察机体的变化： ①呼吸曲线有否变化，有否呼吸急促，困难。 ②肺部是否出现罗音。 7、对照组除不使用肾上腺素外，其余实验步骤和条件与实验组相同。8、上述各组实验完成以后，分别夹住气管，剪开胸前壁，在气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。在结扎处上方剪断气管，然后分离心脏及其血管，将肺取出。用滤纸吸干肺表面的水份后，准确称取肺重量，以计算肺系数肺系数= 肺重量（g）体重(kg) 正常肺系数约为4~5 g。此后观察肺大体改变，切开肺，注意切面的变化，是否有粉红色泡沫液体溢出（注意其量，性质，颜色）。还可在显微镜下对比观察肺水肿和正常肺的组织切片。四、实验结果 1.家兔呼吸的变化曲线图像 2.本组肺的重量为8.2g，兔子重量为1.6kg，本组所测得的肺系数为5.13（正常肺系数约为4~5）。 3.呼吸变浅变慢，心率加快，皮肤黏膜发绀，听诊肺部出现轻度湿罗音。 4.家兔肺水肿前后血气指标指标肺水肿前肺水肿后ph pco2 mmhg po2 mmhg hco3 k-7.397 39.1 92.8 23.6 7.0 102

实验性肺血容量增高性肺水肿

实验性肺血容量增高性肺水肿一、实验目的 1.复制家兔实验性肺水肿 2.观察肺水肿的表现，并探讨其有关的发病机理。二、实验药品与器材生理盐水、乌拉坦、气管插管和与之配套的呼吸描记装置（二道生理记录仪）或生物信号采集系统、血气分析仪。静脉导管和静脉输液装置，颈部小手术器械，婴儿秤，天平，听诊器，兔固定台，1ml2ml注射器各2具，丝线，纱布，滤纸，烧杯等。三、实验步骤本实验分为实验组和对照组。

1、将实验组家兔准确称重后，麻醉、仰卧固定于兔台上，剪去颈前部手术视野被毛，切开颈部前部皮肤，然后分离气管及一侧颈外静脉和二侧颈总动脉并穿线备用。切开气管，插入气管插管，用丝线结扎固定后将呼吸描记装置与之相连，以描记呼吸。结扎颈外静脉远心端，在近心端靠近结扎处剪一小口，插入静脉导管，结扎固定后将输液装置与之相接并试行滴注，通畅后暂停输液。 2、由颈总动脉插入动脉插管以描记血压，由颈外静脉插入静脉插管并连接输液装置缓慢滴人0．9％的生理盐水以保持管道通畅 3、描记一段正常呼吸，用听诊器听肺的呼吸音。 4、用1m l肝素化注射器从耳朵动脉抽血0．5m1，立即将针头插入橡皮塞中以防空气进入。经血气分析仪测定血液的p H、P a C02、P a02、K+、N a+、C l-等，作为实验前对照。

5、然后输入37℃(摄氏度)生理盐水，输入量按100ml/㎏（体重）计算，输液速度180-200滴/min。 6、输药液过程中密切观察机体的变化： ①呼吸曲线有否变化，有否呼吸急促，困难。 ②肺部是否出现罗音。 ③气管插管口是否有粉红色泡沫液体溢出。如果上述情况变化不明显可重复使用肾上腺素，用法及剂量同上，直至出现明显的肺水肿表现。并迅速从耳朵动脉抽血0．5m1，方法同上，测定血气指标的变化。 7、对照组除不使用肾上腺素外，其余实验步骤和条件与实验组相同。 8、上述各组实验完成以后，分别夹住气管，剪开胸前壁，在气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。在结扎处上方剪断气管，然后分离心脏及其血管，将肺取出。用滤纸吸干肺表面的水份后，准确称取肺重量，以计算肺系数肺系数= 肺重量（g）\体重（kg）正常肺系数约为4~5 g。

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 [摘要] 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种，定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹

股沟淋巴结肿大情况，并于接种后 21 天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结称重并测量大小，同时观察肿瘤的形态特点，生长方式，肺、肝、肾等脏器，并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。结果:21 天观察，实验使用 10 只小鼠，最终存活 8只，其中形成肿块 7 只（3只形成的肿块较大），成瘤率 70%，淋巴结转移率 70%。肉眼观察，较大肿瘤 2*1.5*1.3cm，灰白色，质地较硬，从中间切开，发现肿块大部分坏死，中心部分出现腔，腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察，坏死组织粉染，轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性：瘤细胞大小和形态不一致，细胞核体积增大并呈现多形性，核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多，核浆比失调，胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移，无器官转移，且具有高转移力。 [关键词]HCa-F（高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移 [前言]研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大，在亚非国家较常见，我国的发病率较高，属于常见的肿瘤之一。近年来，我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩，一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效[1]。随着临床治疗经验的积累，逐渐

转移性肝癌治疗方法的研究

转移性肝癌治疗方法的研究原发肿瘤的恶性程度、部位、有无肝外部位转移灶、肝受累范围和患者全身情况是决定转移性肝癌预后的因素。通常情况下，肝癌转移后，患者多在1年内死亡，针对结直肠肿瘤的转移病例，预后相对理想。对晚期肿瘤已发生肝转移的病例，在对原发灶尽可能切除的情况下，应用手术为主的综合方案干预，才可使病情最大程度的缓解，延长患者生存时间，保障生存质量，手术切除是转移性肝癌唯一有可能治愈的治疗措施。标签：转移性肝癌；外科；治疗方法；研究进展近年来，受环境污染程度加重、公众不良生活方式增多、遗传等多因素影响，恶性肿瘤发病率明显上升，晚期易继发转移，而肝脏是转移性癌常见的器官，仅次于淋巴系统居第二位。转移性肝癌常为诱导恶性肿瘤患者死亡的主要死因，使原发肿瘤治疗更为棘手，在肝脏外科技术和肿瘤诊断治疗技术取得显著成就的今天，对治疗转移性肝癌的方法展开探讨，依据病情选择合适的应对方案，是延长患者生存期，保障生存质量的关键。本文就相关内容展开综述，现分析如下。 1转移性肝癌病发途径与手术治疗的关系身体各部位恶性肿瘤向肝脏转移途径包括直接蔓延、经门静脉转移、经淋巴转移及经肝动脉转移等，转移性肝癌以多发病灶最为多见，但也有单发病灶的情况存在，盆腔部位及消化道部位恶性肿瘤向肝脏转移的途径多为门静脉，在转移性肝癌中约占30%～50%[1]，依据转移途径，合理选择治疗方案，对挽救患者生命意义重大。直接蔓延和区域性转移的肿瘤，如从胆囊、胃、结肠肝曲、肾上腺等的肿瘤直接侵袭肝脏和经区域淋巴结向肝转移的胆囊癌，可行原发病变和转移癌整块扩大根治切除；经门静脉转移者预后较好，如消化道肿瘤特别是结直肠癌肝转移瘤，手术治疗效果较好，应尽可能施行根治性的切肝方案；经肝动脉转移的肿瘤是全身扩散的表现，手术治疗效果很差。 2手术治疗转移性肝癌概括 2.1适应症掌握转移性肝癌应用手术切除方案治疗，是可能延长患者生命的有效方案，多数研究者认为完成手术切除所需具备的条件包括：患者肾脏、心脏、肝脏、肺功能等需基本正常，机体一般情况良好；原发灶已切除或可切除；为单发转移病灶，或虽为多发病灶类型，但仅在半肝发生；虽为双侧病灶但可切除；无肝外转移或肝外转移可获得有效治疗[2]。有研究显示[3]，目前肝癌总切除率在国内大型肝胆外科中心可达30%～40%，且由手术诱导的死亡率较低，可控制在5%以下。总结肝癌切除术实施后的5年生存率，据欧美报道[4]，为25%～49%。縱观所有治疗方案，手术切除为效果最为理想的手段，但术后转移或复发的病例占70%～80%，在对再次复发病例处理时，与手术条件符合，仍可行再次手术切除。有研究显示积极手术切除残肝复发癌，效果可与肝初次切除相近。再次肝切除与初次手术比较，出血量可能增多、手术时间延长，但在死亡率及并发症发生

建立小鼠肿瘤模型的研究进展

建立小鼠肿瘤模型的研究进展摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。关键字：肿瘤，动物模型，小鼠肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件（1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。（2）制作模型的方法简单易行。（3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。（4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分

家兔实验性肺水肿

家兔急性肺水肿目的：复制家兔急性肺水肿模型；了解急性肺水肿表现及其发生机制。肺水肿是指肺血管内液体渗入肺间质和肺泡，使肺血管外液量增多的病理状态。用生理盐水扩充血容量，静注大剂量肾上腺素复制家兔肺水肿模型，肾上腺素可引起交感活性加强，导致体循环外周阻力增高，大量血液从体循环转移到肺循环，而左心未能及时适应，引起肺毛细血管静水压明显上升，肺血管内液体渗入肺间质和肺泡，发生肺水肿。快速滴注生理盐水，使循环血容量急剧增多（静脉回心血量增加，血浆胶体渗透压降低）；大剂量的给予肾上腺素，一方面可激活肾上腺素α受体，使体循环血管剧烈收缩（A外周阻力增大，V回心血量增多）导致心脏前后负荷明显增加，而肺血管反应轻收缩弱，肺淤血水肿；另一方面中毒剂量的肾上腺素使心动速度加快，左心室不能把注入的血液充分排出，左心室舒张期末压力递增，可引起左心房的压力增高，亦使肺静脉回流受阻发生淤血。随快速输液，右心输出量加大，肺血流量增加，一旦超过血浆胶体渗透压，进入肺组织肺泡液体增多，引起急性心源性肺水肿。复制肺水肿模型 2.3.1输入37℃生理盐水，输入量100ml/kg，输入速度180-200滴/min。滴注接近完毕时，立即向输液瓶中加入肾上腺素生理盐水（1：9）10ml/kg继续输液。当家兔呼吸频率明显变化，用听诊器听到肺部出现湿性罗音，急性肺水肿发生时（有粉红色泡沫样液体溢出时），立即夹住气管停止输液，快速处死家兔。 2.3.5 打开家兔胸腔，支气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。在结扎处上方切断气管，将肺清理出（把心脏等清除），置于滤纸上，切勿挤压，准确称肺重量，并计算肺系数。【肺系数=肺重量（g）/体重（kg）】正常肺系数：4～5，肺系数超过此值，提示肺内有渗出物聚集，肺水肿形成。观察指标死亡动物记录死亡时间；观察家兔的呼吸频率变化；观察家兔肺部呼吸音的变化；

转移性肝癌

转移性肝癌转移性肝癌系由全身各脏器的癌肿转移至肝脏形成。由于肝脏接受肝动脉和门静脉双重血供，血流量异常丰富，全身各脏器的恶性肿瘤大都可转移至肝脏。在原发性肝癌发病率低的区域，如北美和西北欧等地，继发性肝癌的发病率相对较高，为原发性肝癌的13～64 倍，中国二者较为接近。继发性肝癌有时与原发性肝癌不易区别，当原发癌灶比较隐匿时亚临床期继发性肝癌的早期诊断较为困难。近年来的资料表明，继发性肝癌如能早期发现并治疗，采取外科手术切除可获得痊愈或延长生命的明显疗效，故对继发性肝癌的诊断、治疗应持积极态度。症状体征继发性肝癌的临床表现与原发性肝癌相似，但因无肝硬化，常较后者发展缓慢，症状也较轻。早期主要为原发灶的症状，肝脏本身的症状并不明显，大多在原发癌术前检查、术后随访或剖腹探查时发现。随着病情发展，肿瘤增大，肝脏的症状才逐渐表现出来，如肝区痛、闷胀不适、乏力、消瘦、发热、食欲不振及上腹肿块等。晚期则出现黄疸、腹水、恶病质。也有少数患者(主要是来源于胃肠、胰腺等)肝转移癌症状明显，而原发病灶隐匿不显。病因恶性肿瘤可以向周围组织直接浸润，或侵入淋巴管、血管及体腔，之后癌细胞随淋巴液、血液及各种腔道转移至远处。癌细胞的浸润及转移主要取决于其本身的恶性生物学特性及机体免疫状态。癌细胞具有阿米巴样活动能力，能自主地向周围组织浸润和运动；癌细胞之间黏着力下降使其具有易脱落倾向，增加了转移的机会；癌细胞高表达某些整合素可能赋予癌细胞迁移的动力，使其易于穿透基底膜；机体某些黏附分子(adhesive molecule)有助于癌细胞在转移脏器中的滞留；癌细胞表面蛋白水解酶活力的增高也有利于其浸润和转移。由于荷瘤宿主大多存在机体免疫功能低下，不能有效识别和杀伤转移的癌细胞，一旦癌细胞在远处脏器停留，可释放多种生长因子及其受体，如血管内皮细胞生长因子(VEGF)，使癌细胞自主性无限制生长。癌细胞的这种恶性生物学特性与其所携带的遗传信息，如DNA 倍体或干系水平有一定关系，异倍体的癌细胞较二倍体的癌细胞更易发生转移。肝脏由于本身解剖及血供的特点，可能更易给多种癌细胞提供

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/4d8369692.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/4d8369692.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/4d8369692.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/4d8369692.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。

肝癌肺部转移的CT诊断

—140—《现代医用影像学》2012年6月第21卷第3期肝癌肺部转移的CT诊断江苏省东海县人民医院影像科（东海222300）张少华王红【摘要】目的：分析总结原发性肝癌肺部转移的CT表现，为临床诊断提供可靠依据。材料与方法：回顾性分析近年来我院收治的52例肝癌肺部转移患者的临床资料。结果：肝癌肺部转移的CT表现为两侧肺内单发或多发结节状病灶，此表现最常见；肺内软组织团块影像，分叶状或有毛刺，约占15.4%；全肺的粟粒样结节影像，占 21.2%；肺纹理呈现网状改变，或纹理间沿淋巴管分布的呈细小的结节状影像；HRCT表现小叶间隔变厚，细小结节影沿肺纹理分布，约占21.2%；同一患者可出现多种形态的转移征象。结论：CT对肝癌肺部转移小病灶的检出较敏感，临床应用价值较大。关键词：原发性肝癌肺转移CT诊断 CT Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma with Pulmonary Metastases Zhang Shaohua Wang Hong Department of Radiography，The People’s Hospital of Donghai County，Jiangsu，Province222300 【Abstract】Purpose：To analyze and summarize the CT findings of pulmonary metastases of primary liver cancer and to provide reliable clues to clinical diagnosis．Materials and Methods：A retrospective analysis of our hospital in recent years，52cases of hepatocellular carcinoma with pulmonary metastases in patients with clinical data．Results：CT findings of hepatocellular carcinoma with pulmonary metastases on both sides of the lungs the performance of single or multiple nodular lesions，this performance is the most common；lungs performance soft tissue mass imaging，lobulated，or burr，accounting for 15.4%；lungs performance miliary nodules in whole lung image，accounting for21.2%；markings showing the mesh change or showed a small nodular image texture along the lymphatic distribution；HRCT findings of interlobular septal thickening，small nodules along the markings，distribution，accounting for21.2%；the same patient，there may be a variety of forms of transfer of signs．Conclusion：CT detection of hepatocellular carcinoma with pulmonary metastases of small lesions more sensitive clinical value． Key Words：Primary liver cancer Lung metastases CT diagnosis 原发性肝癌为最常见恶性肿瘤之一，每年因肝癌死亡人数大于40万［1］，其发生肺转移在得到确诊时，大多属中晚期，其治疗效果较差，生存时间明显缩短，该病的早期诊断与及时治疗是延长生存时间的关键，对肝癌患者的肺部情况做出及时明确诊断，对临床治疗的帮助很大。近年来，随着外科手术与化疗技术的进步、介入放射学诊疗方法的推广应用，肝癌的治疗效果也得到了一定的提高。现回顾性分析近年来我院收治的52例肝癌肺部转移患者的临床资料，结合相关文献对该病的CT表现及诊断等进行分析总结。1资料和方法 1.1临床资料原发性肝癌肺部转移病例52例，男31例，女21例，年龄22 83岁，平均52.4岁。50例有肝炎病史与典型临床表现。52例患者均经手术、病理、超声、CT证实。16例经手术病理确诊肝细胞性肝癌，20例为肝癌确诊后的随访过程中于不同时期发现的肺转移灶，10例为确诊肝癌同时发现的肺转移灶，6例为肺部CT检查中发现的转移灶，再行肝脏CT检查发现肝癌。

转移性肝癌的途径

转移性肝癌的途径 *导读：转移性肝癌是指全身各个器官的原发性癌细胞转移到肝脏的病症。在中国，原发性的肝癌与转移性肝癌的症状比较接近，而且发病率也相当，所以比较难以区别。如果原发性的癌细胞比较隐匿，在早期比较难以诊断。大多数病例是在原发癌症的术前检查时候发现的。…… 转移性肝癌是指全身各个器官的原发性癌细胞转移到肝脏的病症。在中国，原发性的肝癌与转移性肝癌的症状比较接近，而且发病率也相当，所以比较难以区别。如果原发性的癌细胞比较隐匿，在早期比较难以诊断。大多数病例是在原发癌症的术前检查时候发现的。几乎全身各个器官的癌细胞都有可能向肝脏转移，主要通过的途径有四种，分别是门静脉转移，肝动脉转移，淋巴路转移以及直接浸润。 *门静脉转移门静脉转移是原发性癌细胞散播到肝脏的重要途径。凡是血流入门静脉系统的器官，像胃、小肠、结直肠、胰腺等如果发生原发性癌症，都有可以进过门静脉转移到肝脏。也有可能原发性癌细胞有体静脉传至肺部，然后再通过肺扩散到肝部。 *肝动脉转移任何能够通过血液运行传播的癌细胞，都能够通过肝动脉将原发性的癌细胞转移到肝脏，像如果肺、肾、乳腺、睾丸、卵巢

等部位发生恶性肿瘤，肿瘤细胞就容易经由肝动脉散播到肝脏。而且肝脏是比较容易感染癌细胞的器官。 *淋巴路转移容易通过淋巴路转移的是盆腔或腹腔的癌症，会经淋巴管流至主动脉胖的腹膜后淋巴结，在倒流至肝脏。此外，消化道癌细胞也可以颈肝门淋巴结转移到肝脏。乳腺癌或肺癌也可以通过淋巴路转移，不过在临床上比较少见。在临床上，最常见的是胆囊癌严重胆囊的淋巴管，将原发性的癌细胞转移到肝脏。 *直接浸润如果肝脏附近的器官或组织发生癌变，如胃癌，横结肠癌，胆囊癌，胰腺癌等，癌细胞都可能通过与肝脏粘连直接浸润蔓延到肝脏。另外有责肾脏以及肾上腺癌症是可以直接侵犯肝脏，发生转移性肝癌的。

肝癌细胞培养(总结版)

BEL7402/hepG2/HCCLM等肝癌细胞培养过程器材：液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、离心机、倒置显微镜、超净工作台、一次性吸管若干个、带塞培养瓶（不定个）、试管架、酒精灯、G6型号细菌过滤漏斗、无菌冻存管、液氮瓶。试剂： RPMI l640培养液，胎牛血清（生长因子）, 胰蛋白酶液，70%乙醇（消毒）,冻存培养液（培养液7ml，胎牛血清2ml，DMSO 1ml)，PBS缓冲液等。器皿的消毒及准备：清洗灭菌（浓硫酸、蒸馏水）：（1）浸泡（酸浸）:新使用或重复使用的玻璃器皿须经浓硫酸溶液浸泡过夜，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。操作过程需戴防护用具。（2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后经行烘干。（3）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次，将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。（5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。实验前准备工作: 操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用酒精消毒。用紫外线消毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后，均应开灯照射30min进行消毒。紫外线照射60min可以消灭空气中大部分细菌。细胞复苏：冻存细胞保存管保存在液氮中（-196℃），取出保存管后必须快速冷冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，致使细胞死亡。在冻存细胞的保存管中含有对细胞有毒害的成分DMSO,故在解冻应马上将其去除。在冷冻活化前应在无菌台上将细胞培养液配好，然后将保存管从液氮中取出，放于37℃的温水中快速使细胞解冻。解冻后悬液快速移入培养液中混匀，离心去掉上清液，再加入细胞培养液。

复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响

复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响发表时间：2012-11-06T10:56:14.590Z 来源：《中外健康文摘》2012年第24期供稿作者：姜家康陈睿 [导读] 复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。姜家康陈睿(通讯作者)迟文成（黑龙江中医药大学附属第一医院 150040）【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0067-03 【摘要】目的复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠的抑制作用及其可能机制。方法建立H22原发性肝癌小鼠模型，随机分为空白对照组、荷瘤对照组、化疗组、中药低、中、高剂量（4.48、8.96、17.92g/kg·d）组进行治疗，检测各组肿瘤的生长情况；HE染色观察肿瘤组织和肝组织的病理变化；免疫组化法检测肿瘤组织MMP-9的表达。结果与荷瘤对照组比较，复原抗癌汤各剂量以及顺铂对原发性肝癌均有抑制作用，抑瘤率分别为53.12%、32.87%、37.51%、39.82%（P均＜0.05）；HE染色见化疗组、中药治疗组癌组织较荷瘤组生长局限，核仁固缩，核浆比较对照组小，形态较规则，核仁边移现象少见；免疫组化见中药治疗组与化疗组比较其MMP-9蛋白表达强阳性率高于后者（P ＜0.05）。结论复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。【关键词】复原抗癌汤原发性肝癌 mmP-9 原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，素有“癌中之王”之称，早期症状隐匿，发现时已属中晚期，病死率高，这与其具有高度侵袭与转移关系密切。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1免疫组化试剂：即用型SABC免疫组化染色试剂盒、浓缩型DAB显色试剂盒、小鼠用MMP-9蛋白免疫组化检测试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.1.2实验仪器：主要包括：日本OLYMPUS公司超薄切片机、日本日立公司透射电子显微镜H－600、中国光学仪器厂倒置式生物显微镜XSJ-D。 1.1.3实验药品（1）复原抗癌汤： 1.75g/装，江苏江阴天江药业特制提供。其主要成分如下：(西洋参、红豆杉、黄芪、白术、半枝莲、竹茹、薏苡仁、厚朴、柴胡、白花蛇舌草)复原抗癌汤由以上药味经特定的制备工艺和流程提纯制成。(2）顺铂（DDP）：20mg/支，山东齐鲁制药有限公司生产，批号：7050172DC。(3）生理盐水：500ml，哈尔滨制药六厂生产。 1.2方法 1.2.1动物分组选用BALB/C小鼠120只(雌雄各半)，体重18～20g，由哈尔滨医科大学肿瘤附属医院实验动物中心提供（合格证号：SCXK（黑）2006/008）。随机分组：A组（空白对照组）、B组（荷瘤对照组）、C组（化疗组）、D组（中药低剂量对照组）、E组（中药中剂量对照组）、F组（中药高剂量对照组）,每组10只。 1.2.2造模瘤株：H22原发性肝癌荷瘤小鼠购自长春生物试剂动物实验中心。将H22原发性肝癌荷瘤小鼠[1]后脱颈处死，在超净工作台上分离瘤体，将实体瘤部分放入75％酒精浸泡消毒10min后，取生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水洗净后剪碎加生理盐水研磨，过300目尼龙网制成单细胞悬液，台盼蓝（tryan-blue）染色试验计算后细胞数>95%，用吸管轻吹打待测细胞悬液，取少许在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，按白细胞计数法，于低倍镜下计数4角的4个大方格内活细胞总数，按下式计算：用生理盐水调整细胞浓度至1×107/ml，取1ml注射器吸取0.2mL瘤细胞悬液，按照下述方法接种于B组、C组、D组、E组、F组BALB/C 小鼠肝左叶内，制成原位原发性肝癌模型[2]。 1.2.3给药 A组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；B组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；C组：予顺铂3mg/kg·d，每只0.3ml 腹腔注射，隔日一次，共7次；D组：予复原抗癌汤按4.48g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；E组：予复原抗癌汤按8.96g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；F组：予复原抗癌汤按17.92g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次。各组于接种日起第3天开始给药，按上述方式给药达到治疗次数后停药，并于次日进行实验动物取材。 1.2.4取材停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开腹腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，随后以中性福尔马林固定12小时，备用。 1.3观察指标 1.3.1通过计算抑瘤率来观测复原抗癌汤对肿瘤生长的抑制作用停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开胸腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，按公式[3]: 抑瘤率=*100% 计算抑瘤率。 1.3.2观察小鼠肿瘤组织及肝组织形态学改变将已固定的肿瘤组织及肝组织取出；逐级酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，6μm厚切片；HE染色，中性树脂胶封片，观察并比较各组小鼠肝组织和肿瘤组织的形态学有无变化。 1.3.3免疫组化法检测肿瘤组织的MMP-9蛋白表达免疫组化法检测原发性肝癌组织中MMP-9蛋白的表达，参考试剂盒说明书。判断标准：经免疫组化法各步骤处理后MMP-9阳性细胞的胞浆和/或胞核呈淡黄色或棕黄色，采用二级计分法进行阳性细胞计数[4]，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5 个视野，每个视野计数100 个细胞，计算每张切片阳性细胞百分率，阳性细胞数＜ 5%，0 分;5%～25%，1 分; 25%～50%，2分; 50%～75%，3 分; ＞75%，4 分。染色强度: 淡黄色1 分; 棕黄色2 分; 棕褐色3分; 两者相加: 0～1 分为阴性

转移性肝癌治疗方法有哪些

转移性肝癌治疗方法有哪些 *导读：转移性肝癌较为常见，早期无明显症状。较常见的症状是肝区疼痛，但一般出现较晚。其它晚期表现有肝大、黄疸、腹水、体重减轻和恶液质等。根据转移性肝癌与原发癌临床表现之间的时间关系，把本病分为早发型、同步型和迟发型。转移性肝癌治疗方法有哪些？…… 转移性肝癌较为常见，早期无明显症状。较常见的症状是肝区疼痛，但一般出现较晚。其它晚期表现有肝大、黄疸、腹水、体重减轻和恶液质等。根据转移性肝癌与原发癌临床表现之间的时间关系，把本病分为早发型、同步型和迟发型。转移性肝癌治疗方法有哪些？手术切除是使患者有可能获得治愈的唯一方法。手术切除的适应症，除患者全身情况良好外，还应具有如下条件：1）原发癌能够切除或根治；2）无肝外转移；3）肝内转移癌的单发，或即使为多发，但转移癌结节局限在肝的一叶或半肝之内，有可能施行肝叶或半肝切除。经手术治疗后，患者生存时间差异很大。影响术后生存的因素是多方面的：1）切除原发肿瘤与切除转移性肝癌的时间间隔。转移癌出现距离切除原发癌的时间愈近，预后愈差。2）肝转移的数量与浸润范围。局限性肝转移者1和2年生存率分别为100%

和53%，非局限性肝转移者1年生存率仅为45%。3）手术类型。直肠癌肝转移行肝叶切除，手术死亡率为11%，5年生存率仅为13%；肝段切除无手术死亡，5年生存率为21%；肝切除手术死亡率为3%，5年生存率为24%。4）原发癌类型。转移性肝癌，原发癌为直肠癌、胃癌、胆囊癌、胆管癌，其中直肠癌肝转移患者预后最好，肝切除术后2年生存率为80%，而胃癌肝转移者预后较差，术后无生存2年者。转移性肝癌治疗方法有哪些？转移性肝癌治疗方法并不多，如果大家还有相关疑问，欢迎咨询专业医院的医生，医生会根据多年的临床经验为病人制定合理的治疗方案。祝早日治愈疾病，恢复健康。

肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选

*国家自然科学基金资助项目（编号：8106016），广西科学基金资助项目（编号：2010GXNSFD013048） △通信作者。E －mail ：gwongluo@yahoo．com 肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选 * 蒋日婷，晁耐霞，马平，李金平，罗国容△ 广西医科大学组织胚胎学教研室（南宁530021）【摘要】目的筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础。方法选择4种人肝癌细胞株（BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721和QGY －7703）及1种成人正常肝细胞株（HL －7702），培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后，采用免疫细胞染色技术和Western blot 的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果免疫细胞染色显示， GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL －7404、HepG2、SMMC －7721和QGY －7703的表达要强于正常肝细胞HL －7702，其中以BEL －7404的表达量最高。通过Western blot 检测，BEL －7404的GCF2相对表达量为0.875?0.134，较其他细胞株高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 BEL －7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高，可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。【关键词】肿瘤相关抗原；GCF2；肝癌；蛋白表达 GCF2（GC binding factor 2）是一个转录抑制因子，能够抑制多个下游基因，比如EGFR 、TNF －α、PDGF －A 链和Igf2等的转录，参与细胞增殖、周期和凋亡等进程［1－6］。本课题组前期用SEREX 技术筛选人肝癌组织构建的cDNA 文库，发现2个克隆与GCF2的片段同源，提示GCF2可能是肝癌相关抗原［7］。目前，尚未见文献报道GCF2基因在肝癌中的作用的研究，因此，2010年11月至2011年3月，本实验将采用免疫细胞化学技术检测4种人肝癌细胞和1种成人正常肝细胞中GCF2的表达情况，并且通过Western blot 筛选出GCF2高水平表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用奠定基础。1材料与方法 1．1 材料人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人肝细胞株HL －7702，均购于上海细胞生物学研究所。实验仪器均由广西医科大学基础实验中心提供：CO 2恒温培养箱（Thermo ）、倒置显微镜（OLYMPUS ）、台式高速冷冻离心机（SIGMA ）、紫外分光光度计（UV2000I Tanon ）、电泳仪（北京六一仪器厂）、半干式转膜仪（BIO －RAD ）。细胞培养基高糖DMEM 及RPMI 1640均购于HyClnoe 公司。磷酸缓冲液（PBS ）、 DAB 显色试剂购于福州迈新生物技术开发有限公司。蛋白提取试剂盒购于南京凯基生物技术有限公司。GCF2抗体购自美国Santa 公司。辣根过氧化物酶（HRP ）标记的山羊抗鼠IgG 购自上海长岛生物试剂有限公司。GAPDH 抗体、ECL 发光试剂购于碧云天生物技术研究所。 1．2 细胞培养将4种肝癌细胞分别培养在含10% 胎牛血清的高糖DMEM 培养液中，将成人正常肝细胞株HL －7702培养在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中，并置于37?、 5%CO 2及饱和湿度的恒温培养箱中培养，隔天更换培养液。1．3细胞爬片的制作及免疫组织化学检测将生长状态良好的人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人正常肝细胞株HL －7702接种于置有圆形盖玻片的12孔培养板内，接种密度为1?104个细胞/孔，用含10%胎牛血清的高糖DMEM 及RPMI 1640培养液在37?、5%CO 2条件下培养。待细胞长到60% 70%融合时，用0.01mol /L PBS 洗涤1次，加入4%多聚甲醛室温固定15min 。将盖玻片取出，粘贴在载玻片上，按照常规免疫组织化学方法，加入1?100稀释的GCF2抗体， 4?湿盒内温育过夜。PBS 洗片后滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG ，室温下孵育30min ， PBS 洗片后进行DAB 显色2 3min 。常规50% 100%梯度酒精脱水，二甲苯透明，香柏油封片，显微镜下观察并拍照记录结果。以PBS 替代一抗作为阴性对照。采用Image －Pro Plus version 6.0软件分析阳性着色光密度。1．4 总蛋白的提取及Western blot 的检测常规细胞培养，当细胞贴壁生长达90%时，按蛋白提取试剂盒操作方法提取细胞总蛋白，分装后置于－80?保存。取4个细胞株的蛋白20μg 与1/4体积的5?SDS 上样缓冲液混合，100?沸水浴5min ，冷却后点样进行 SDS －PAGE 电泳分离。电泳完毕，按照半干转移仪公司提供的说明进行印迹操作，将电泳分离蛋白转移到PVDF 膜上。转移膜用含50g /L 脱脂牛奶的PBST （0.01mol /L PBS +0.5%Tween －20）室温封闭5h 。GCF2抗体1?200稀释液4?孵育过夜；按1?5000稀 · 1551·广东医学2012年6月第33卷第11期Guangdong Medical Journal June．2012，Vol．33，No．11