马铃薯卷叶病毒基因功能的研究进展
马铃薯种薯质量的田间检验操作规程
附件21 甘肃省马铃薯脱毒种薯（种苗）病毒检测及安全性评价工程中心 马铃薯种薯质量的田间检验操作规程 马铃薯种薯质量田间检验的目的是尽可能的将病源的数量减到最少，生产合格的种薯。马铃薯种薯质量田间检验以目测为主，比实验室操作简单，易于执行，比收获后和库房检测范围大，能够实时掌握种薯生产整体情况，对质量控制作用效果显著。影响种薯质量最重要的是病毒和细菌病害，它们在植株上引发一系列症状，应用这些症状进行质量诊断很实用也很方便，在大田种薯繁育中，检测的灵敏性要求不像检测母株时那么高，此时观察症状就成为除去感染植株最迅捷的方法。 1田检种类 狭义的田间检验指的是由第三方监督检测单位进行的监督检验。广义的田间 检验根据针对不同群体需要，分为以生产为目的的检测（自检）和以质量评价为目的的检测（监督检验），前者执行单位为马铃薯种薯生产单位，后者为马铃薯种薯质量监督单位，二者并重。自检与监督检验依据相同的标准“马铃薯种薯GB 18133-2012 ”，先自检后监督检验，生产单位通过自检降低田间病害比率，以达到所生产级别种薯的最低要求，然后检测或监督管理单位通过田检评价种薯生产是否达到相关标准。 不同目的的田检其检测技术细节有很大差异，自检具有及时、全面、细致的 特点，即在整个生长季节不问断执行全田检测，每一个有异常的植株需要对全株进行详细观察。监督检验具有客观、准确、高效的特点，即抽查检测要有代表性，在规定的时间段仅有的几次检测结果能真实反应全田基本质量状况。无论自检还 是监督检测的田检员，都要在检测前详细掌握被检田块的基本信息。 1.1检测内容 马铃薯对许多的病虫害非常敏感，这在所有马铃薯生长的地区都是一样。有些病虫害通过土壤传播的，也有的可以通过种薯传播。许多传播广泛的病害被视 为质量病害，例如晚疫病、疮痂病、丝核菌溃疡病、黑胫病、镰刀菌病害以及一些病毒性病害。这些质量病害在种薯中只能允许非常低的感染率。除了质量病害
马铃薯脱毒苗组培快繁技术
马铃薯脱毒苗组培快繁技术 (酒泉职业技术学院秦晓萍甘肃?酒泉 730500) 摘要本论文主要从培养基的制作、脱毒苗的制取、继代培养、培养条件、瓶装苗污染控制等方面介绍了马铃薯脱毒苗快繁技术，为马铃薯快繁生产提供参考。关键词马铃薯脱毒苗快繁技术马铃薯是我国主要的粮食、蔬菜及工业原料作物，其国民经济意义十分重要，在保证粮食安全生产方面发挥了重大作用。随着农业产业结构的调整，我国马铃薯的种植面积和总产量也在不断的增加。但在连年的栽培过程中，病毒或类病毒不断的侵染和积累，从而导致马铃薯种性变劣，长势逐步减弱，产量逐年降低。马铃薯快繁是在短时间内利用组织培养技术获得大量高质量的试管苗，应用种薯脱毒技术， [1]培养无毒组培苗，在提高产量、保证品质、耐贮藏方面体现出了独特的优势。 1 培养基的制作 1.1培养基的配方 利用提供的母液和材料MS+0.01mg/L NAA+3%蔗糖+0.56%的琼脂，PH为5.8，配置培养基1000ml,并均匀分装到24个培养瓶，进行灭菌。 母液浓度/扩大倍数配置体积(ml) 母液吸取量(ml) 称取量(g) 大量元素 20 50 — 钙盐母液 20 50 — 磷酸盐溶液 20 50 — 铁盐 100 10 — 微量元素 100 10 — 1000 有机物 100 10 — 萘乙酸(NAA) 0.1mg/L 0.1 —
蔗糖 3% — 30 琼脂粉 0.56% — 5.6 1.2 培养基的配制 1.2.1仪器、用具与试剂 (1)仪器:PH试纸、电磁炉、高压灭菌锅 (2)用具:移液抢、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶、玻璃棒、洗瓶、烧杯、搪瓷缸、镊子、钥匙、称量纸、胶头滴管、抹布、卷纸、标签纸、 (3)试剂:配置MS培养基的各种母液、激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、 0.1mol/LHCL、0.1mol/LNaOH 1.2.2 培养基制作 (1)准备工作将配置好的MS培养基母液从冰箱中取出，检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。 (2)移取母液用移液管移取各种母液，在移取时冲洗移液管，移取出后加入事先准备好装有蒸馏水的烧杯中定容，然后加入熬好的培养基中。 (3)称取蔗糖、琼脂然后融化琼脂，边加热边搅拌防止糊底。直至琼脂全部融化及清撤见底，加入准备好的母液和蒸馏水。 (4)混合培养基各个成分并定容，调整PH值。用0.1mol/LNaOH或HCL液把PH 值调5.8左右后，连续调三次所测定的平均值作为最后的用量值。加后一定要搅拌均匀。 1.3 培养基的分装 培养基合成后要趁热分装，1000ml的培养基要分装到24个培养瓶中每瓶约30,40ml培养基。分装时要垂直向下，不要让培养基沾到杯壁上。然后快速的盖上盖子，盖子要拧紧。 1.4灭菌操作步骤
马铃薯病害及其防治汇总
马铃薯病虫害防治 第一节概述在人类栽培的农作物中, 大概再没有比马铃薯更难以归类的了。它既是大宗粮食作物，又是重要蔬菜和工业原料作物；既是救灾、扶贫作物、又是高产、高效作物；既是大众餐桌上的的寻常之物，又是价格不菲的休闲食品。马铃薯含有人体所需的足够能量和全部营养。 病虫害是影响马铃薯生产稳定发展和限制单产提高的重要因素。马铃薯病害多达百余种，一般因减产10—30%，严重的减产70%以上。国内常见的病害有15 种，其中晚疫病、环腐病和病毒病通称“三大病害”。马铃薯病害主要有： 一、真菌病害：晚疫病、早疫病、癌肿病、粉痂病、炭疽病、红腐病、白霉病、灰霉病、湿腐病、皮斑病、茎腐病、丝核菌溃疡病、干腐病、枯萎病、黄萎病。 二、细菌病害：黑胫病、环腐病、软腐病、褐腐病、普通疮痂病、粉红色芽眼病。 三、病毒病害：卷叶病毒病、丫病毒病、X病毒病、A病毒病、M病毒病、S 病毒病。 第二节真菌病害 一、马铃薯晚疫病 1、症状：主要侵害叶、茎和薯块。叶片染病先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢囊梗和孢子囊，尤以叶背最为明显；干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。茎部或叶柄染病现褐色条斑。发病严重的叶片萎垂、卷缩，终致全株黑腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。块茎染病初生褐色或紫褐色大块病斑，稍凹陷，病部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或烂掉。 2、病原：Phytophthora infestans (Mont.)de Bary 称致病疫霉属鞭毛茵亚门真菌。 3、传播途径和发病条件：病菌主要以菌丝体在薯块中越冬。播种带菌薯块，导致不发芽或发芽后出土即死去，有的出土后成为中心病株，病部产生孢子囊借气流传播进行再侵染，形成发病中心，致该病由点到面，迅速蔓延扩大。病叶上的孢子囊还可随雨水或灌溉水渗入土中侵染薯块，形成病薯，成为翌年主要侵染源。病菌喜日暖夜凉高湿条件，相对湿度95%以上、18—22C条件下，有利于 抱子囊的形成，冷凉(10 一13C，保持1-2小时)又有水滴存在，有利于抱子囊萌发产生游动抱子，温暖(24 —25C,持续5—8小时)有水滴存在，利于抱子囊直接产出芽管。因此多雨年份，空气潮湿或温暖多雾条件下发病重。种植感病品种，植株又处于开花阶段，只要出现白天22r左右，相对湿度高于95%持续8 小时以上，夜间10，13r，叶上有水滴持续11 —14小时的高湿条件，本病即可发生，发病后1 0—1 4天病害蔓延全田或引起大流行。 4、防治方法： (1) 选用抗病品种目前推广的抗病品种有：抗青9—1、合作88等。这些品种在晚疫病流行年，受害较轻，可因地制宜选用。(2) 选用无病种薯；减少初侵染源。做到秋收入窖、冬藏查窖、出窖、切块、春化等过程中，每次都要严格剔除病薯，有条件的要建立无病留种地，进行无病留种。(3) 加强栽培管理，适期早播，选土质疏松、排水良好的田块栽植，促进植株健壮生长，增强抗病力。(4)
马铃薯晚疫病的防治方法
马铃薯晚疫病的防治 马铃薯就是人们常说的土豆，马铃薯含有大量的淀粉可供食用，是重要的粮食、蔬菜兼用作物。据分析，马铃薯生命力指数为8.6，证明对生命力的提高有效；防病指数为126.67，属于高指数范围。但是马铃薯晚疫病却对马铃薯有着致命的伤害。 马铃薯晚疫病的发病症状： 叶片染病先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢囊梗和孢子囊，尤以叶背最为明显；干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。茎部或叶柄染病现褐色条斑。发病严重的叶片萎垂、卷缩，终致全株黑腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。块茎染病初生褐色或紫褐色大块病斑，稍凹陷，病部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或烂掉。 马铃薯发生晚疫病的形态特征： 孢囊梗分枝，每隔一段着生孢子囊处具膨大的节。孢子囊柠檬形，大小2～38×12～23（um），一端具乳突，另端有小柄，易脱落，在水中释放出5～9个肾形游动孢子。游动孢子具鞭毛2根，失去鞭毛后变成休止孢子，萌发出芽管，又生穿透钉侵入到寄主体内。菌丝生长适温20～23℃，孢子
囊形成适温19～22℃，10～13℃形成游动孢子，温度高于24℃，孢子囊多直接萌发，孢子囊形成要求相对湿度高。 马铃薯晚疫病的发病条件是什么： 病菌主要以菌丝体在薯块中越冬。播种带菌薯块，导致不发芽或发芽后出土即死去，有的出土后成为中心病株，病部产生孢子囊借气流传播进行再侵染，形成发病中心，致该病由点到面，迅速蔓延扩大。病叶上的孢子囊还可随雨水或灌溉水渗入土中侵染薯块，形成病薯，成为翌年主要侵染源。病菌喜日暖夜凉高湿条件，相对湿度95％以上、18～22℃条件下，有利于孢子囊的形成，冷凉（10～13℃，保持1～2 小时）又有水滴存在，有利于孢子囊萌发产生游动孢子，温暖（24～25℃，持续5～8小时）有水滴存在，利于孢子囊直接产出芽管。因此多雨年份，空气潮湿或温暖多雾条件下发病重。种植感病品种，植株又处于开花阶段，只要出现白天22℃左右，相对湿度高于95％持续8小时以上，夜间10～13℃，叶上有水滴持续11～14小时的高湿条件，本病即可发生，发病后10～14天病害蔓延全田或引起大流行。 马铃薯晚疫病的防治方法： 1.农药防治方法： 针对西红柿晚疫病可选用南京博士邦农药杀菌剂氟菌 霜霉威和咪鲜松脂铜来进行防治。 功能特点：咪鲜松脂铜为高效、广谱、低毒型杀菌剂，
马铃薯病害及其防治汇总
马铃薯病虫害防治 第一节概述 在人类栽培的农作物中,大概再没有比马铃薯更难以归类的了。它既是大宗粮食作物，又是重要蔬菜和工业原料作物；既是救灾、扶贫作物、又是高产、高效作物；既是大众餐桌上的的寻常之物，又是价格不菲的休闲食品。马铃薯含有人体所需的足够能量和全部营养。 病虫害是影响马铃薯生产稳定发展和限制单产提高的重要因素。马铃薯病害多达百余种，一般因减产10—30%，严重的减产70%以上。国内常见的病害有15种，其中晚疫病、环腐病和病毒病通称“三大病害”。马铃薯病害主要有： 一、真菌病害：晚疫病、早疫病、癌肿病、粉痂病、炭疽病、红腐病、白霉病、灰霉病、湿腐病、皮斑病、茎腐病、丝核菌溃疡病、干腐病、枯萎病、黄萎病。 二、细菌病害：黑胫病、环腐病、软腐病、褐腐病、普通疮痂病、粉红色芽眼病。 三、病毒病害：卷叶病毒病、Y病毒病、X病毒病、A病毒病、 M病毒病、S病毒病。 第二节真菌病害 一、马铃薯晚疫病 1、症状：主要侵害叶、茎和薯块。叶片染病先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢囊梗和孢子囊，尤以叶背最为明显；干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。茎部或叶柄染病现褐色条斑。发病严重的叶片萎垂、卷缩，终致全株黑腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。块茎染病初生褐色或紫褐色大块病斑，稍凹陷，病部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或烂掉。 2、病原： Phytophthora infestans (Mont.)de Bary称致病疫霉属鞭毛茵亚门真菌。 3、传播途径和发病条件：病菌主要以菌丝体在薯块中越冬。播种带菌薯块，导致不发芽或发芽后出土即死去，有的出土后成为中心病株，病部产生孢子囊借气流传播进行再侵染，形成发病中心，致该病由点到面，迅速蔓延扩大。病叶上的孢子囊还可随雨水或灌溉水渗入土中侵染薯块，形成病薯，成为翌年主要侵染源。病菌喜日暖夜凉高湿条件，相对湿度95％以上、18—22℃条件下，有利于孢子囊的形成，冷凉(10一13℃，保持1-2小时)又有水滴存在，有利于孢子囊萌发产生游动孢子，温暖(24—25℃，持续5—8小时)有水滴存在，利于孢子囊直接产出芽管。因此多雨年份，空气潮湿或温暖多雾条件下发病重。种植感病品种，植株又处于开花阶段，只要出现白天22℃左右，相对湿度高于95％持续8小时以上，夜间10，13℃，叶上有水滴持续11—14小时的高湿条件，本病即可发生，发病后10—14天病害蔓延全田或引起大流行。 4、防治方法： (1)选用抗病品种目前推广的抗病品种有：抗青9—1、合作88等。这些品种在晚疫病流行年，受害较轻，可因地制宜选用。(2)选用无病种薯；减少初侵染源。做到秋收入窖、冬藏查窖、出窖、切块、春化等过程中，每次都要严格剔除病薯，有条件的要建立无病留种地，进行无病留种。(3)加强栽培管理，适期早播，选土质疏松、排水良好的田块栽植，促进植株健壮生长，增强抗病力。(4)
马铃薯病毒检测试剂盒说明书 (1)
马铃薯病毒检测试剂盒说明书 (DAS-ELISA) 一、实验原理 马铃薯病毒检测试剂盒是应用血清学检测技术检测马铃薯病毒，利用抗原(病毒颗粒)与其特异性抗体在离体条件下产生专一性反应的原理。双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)是最为灵敏的血清学技术之一。 二、进行DAS-ELISA实验所需的材料 1. ELISA试剂盒中包括的材料(附录1) 2. 1000 ml烧杯和瓶子各2个(配制洗液PBST、样品提取缓冲液) 3. 10-15ml小烧杯6个(配制酶标溶液) 4. 100ml 烧杯1个(配制底物溶液) 5. 记号笔(标记样品、酶联板) 6. 移液器(最好同时有1道和8道移液器)，吸头 7. 冰箱(4℃和-20℃) 8. 37℃温箱 9. 蒸馏水 10. 吸水纸或高级卫生纸 11. 一个厚壁试管或平底小瓶子(用来研样) 12. 小塑料袋(孵育时用来装酶标板) 三、注意事项 1. 底物有剧毒，如果您的手接触了药片或溶液，用大量的流动水彻底冲洗。 2. 在实验过程中，不能将酶联板裸露在空气中。
3. 各种试剂都添加了NaN3，实验过程中，一定要带手套操作，不能用手直接接触。 4. IgG-AP保存于4℃。 四、试验步骤 1.配制溶液 1.1洗液：取出1包PBS缓冲液，溶于1000mL蒸馏水中，然后加入0.5mL Tween20，混合均匀，即为洗液(PBST)。 1.2 样品提取缓冲液：定溶至1000ml，加入0. 5ml Tween20，即为样品提取缓冲液。 1.3阳性对照：将冻干叶片放入取样袋中，加入1ml提取缓冲液，充分研磨，然后4000rpm，离心3min，将上清液分装成105ul/支,保存在-20℃。 1.4阴性对照：将冻干叶片放入取样袋中，加入1ml提取缓冲液，充分研磨，然后4000rpm，离心3min，将上清液分装成105ul/支,保存在-20℃。 2.制样 2.1 将样品(0.1～0.15g)放于塑料袋中，用记号笔标记好。检测叶片时，应选择有症状的，或从植株的顶部、中部和底部各取一片叶子合在一起。 2.2向样品袋中加入1.0～1.5mL提取缓冲液(样品重量：样品提取缓冲液=1：10)，将样品充分研磨。 2.3 将样品袋中的溶液挤到1.5ml的离心管中，4000rpm离心3min，取上清液备用。 2.4将已经包被好酶标板取出，用记号笔在酶标板上标记病毒名称。 2.5向每孔中加入100 uL样品上清液。注意：每个样品用一个Tip头(不能重复使用)。 2.6设置阴性对照孔，加入100 uL阴性对照溶液。 2.7 设置阳性对照孔，加入100 uL阳性对照溶液。
浅析马铃薯病毒检测技术
马铃薯是我国重要的粮食作物和经济作物,马铃薯在定西市种植也有200多年的历史,在保障全市粮食有效供给和繁荣城乡经济中发挥了十分重要的作用,已由过去的“救命粮”变成了现在的“致富薯”,是定西最具生产潜力、市场优势和开发前景的特色农产品,也是农业增效、农民增收的第一大优势产业。近年来,定西市委、市政府对马铃薯产业高度重视,作为全市农业和农村经济发展的战略性主导产业来扶持,制定了“全市马铃薯产业发展规划”,省上也制定下发了“关于进一步加快发展马铃薯产业的意见”,提出了工作思路和具体目标,促进了本市马铃薯产业的快速发展。2013年全市种植面积达到319.84万亩,总产量506万t,是全国三大马铃薯集中产区之一。但是由于定西经济条件落后,全市的马铃薯种薯的病毒检测并未随着种植面积的扩大而提高和普及,以至于马铃薯各种病每年在生长期发生,严重影响了全市马铃薯的产量和质量。马铃薯病毒已成为马铃薯生产中的重要制约因素,急需大力提高马铃薯种薯的病毒检测,为马铃薯产业的持续快速发展把好第一增长关。 马铃薯病毒检测包括：基础试管苗、马铃薯原原种、大田种薯的检测。严格的检测大大提高了种薯合格率,而种植合格的种薯,每亩可以提高产量500kg 以上。马铃薯的病毒有6种,分别是马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯A病毒（PVA）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）。目前最常用的马铃薯病毒检测是用双抗体夹心酶免疫吸附测定法（DAS-ELISA）检测,是用于快速、灵敏、准确的血清学技术,是国际通用的检测方法之一。下面就本市引进的“马铃薯病毒DAS-ELISA检测”全套生产技术进行浅述。 1马铃薯病毒的概况 1.1马铃薯X病毒（PVX） 也称普通花叶病毒,是一种长520～550nm的线状病毒,有时在电镜下能看到病毒颗粒的中心孔。在病毒外壳由亚基形成时,可看到它的横纹,这一点是与马铃薯重花叶病毒在形态结构上的主要区别。一般减产5%～10%,症状是叶片从轻型花叶到叶片有较轻的皱缩。马铃薯X病毒靠汁液传播,也是传播最广泛的一种病毒。 1.2马铃薯Y病毒（PVY） 也称重花叶病毒,是马铃薯第二个重要病毒性病害,是一种长680～900nm的线状病毒,在电镜下找不到它的中心孔和外壳蛋白亚基的横纹,它比PVX更细一些、更长一些。通过感染的块茎长期存在并由蚜虫非持续性地传播,产量损失可达80%。症状随着病毒株系、马铃薯品种及环境条件变化很大。1.3马铃薯A病毒（PVA） 又称轻花叶病毒,在许多方面类似于马铃薯Y病毒。在某些品种中出现时,一般比马铃薯Y病毒轻,产量损失可达40%。马铃薯A病毒引起花叶(有时很严重),同时也发生脉缩和卷曲,叶片可能出现闪光。 1.4马铃薯S病毒（PVS） 也称潜隐性花叶病毒,感病块茎变小,一般减产 浅析马铃薯病毒检测技术 景彩艳 （甘肃省定西市农产品质量安全监督管理站定西743000） 摘要：随着科学技术的不断发展,马铃薯病毒检测技术在日益的完善,DAS-ELISA法已经成为马 铃薯病毒检测的常规方法。容易侵染马铃薯的病毒类型主要有6种,分别是马铃薯的PVX、PVY、PLRV、PVS、PVM、PVA病毒。马铃薯在生长的过程中,因受到各种不同病害的侵染,容易造成减产 和退化。血清学技术是马铃薯病毒检测的主要手段。 关键词：马铃薯病毒；血清学技术；双抗体夹心酶联免疫吸附法 215 --
甘露醇抑制马铃薯脱毒瓶苗生长效果试验
甘露醇抑制马铃薯脱毒瓶苗生长效果试验 摘要:以MS全脱水培养基粉剂制备基本培养基,以庄薯3号脱毒试管苗为供试材料,研究甘露醇在马铃薯脱毒瓶苗生长及保存中的抑制作用。结果表明,在每升培养基中加入30g甘露醇,能有效抑制瓶苗生长,常温下可以保存2个月,如果给予较低温度(10℃±1),则可以保存3~4个月。 关键词:甘露醇;马铃薯脱毒瓶苗;保存 近年来,庄浪县生产的马铃薯各级脱毒种薯已在本县及周边县市得到广泛认可和应用,极大地推动了该县马铃薯产业的迅猛发展。随着农业综合开发农业部专项项目“庄浪县脱毒马铃薯良种繁育基地建设”在我县的实施和“庄浪县陇原薯业有限责任公司”的成立,马铃薯脱毒瓶苗的生产和研究也向纵深方向发展。根据我县生产实际,大量扩繁瓶苗时间为每年的2-7月份,至次年2月份,瓶苗陆续移栽出去,为瓶苗保存期,期间应转接1~2次,保持一定数量基础苗即可。为此,寻求一种保持瓶苗缓慢生长的方法,对我县马铃薯脱毒苗的生产具有非常重要的现实意义。 1材料与方法 1.1试验材料 庄薯3号脱毒苗;MS全脱水培养基粉剂;7cm高罐头瓶作为培养瓶。 1.2试验方法 试验设4个处理:处理①(CK),不加甘露醇;处理②,每升培养基加10g甘露醇;处理③,每升培养基加20g甘露醇;处理④,每升培养基加30g甘露醇。每升培养基称取40g MS全脱水培养基粉剂和相应的甘露醇,加1 000mL煮沸的开水,搅拌均匀分装于30个培养瓶中,常规灭菌后在超净工作台上接种,每瓶接20个单节茎段,置于温室内正常培养,每隔20d统计一次生长情况。各处理每次抽取5瓶掏出苗子洗净根部培养基,随机抽取10株统计生长情况。试验于8月25日进行。 2试验结果与分析
中国马铃薯卷叶病毒CP基因序列分析0901
30个马铃薯卷叶病毒CP基因序列分析 韩树鑫2白艳菊*1,2张威1,2 高艳玲1,2范国权1,2张抒 1 申宇1 1.黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨，150086 2.东北农业大学，哈尔滨，150030 摘要：通过对不同的含有PLRV的样品进行RT-PCR扩增，成功的克隆了PLRV CP基因，经比对样品的CP基因序列，核酸一致率为99.55%，仅发现了来自于广东的样品与其它样品有5 个碱基的差异。试验样品与国内以报道的PLRV CP基因进行进化分析，不同地区的PLRV CP 基因可分为A,B共2组，且有区域性特征，来自广东、云南及贵州的样品在两组中均有分布，但来自于内蒙古的样品仅聚类在A组。而中国样品与其他国家PLRV CP基因相比较，经进化树分组后，主要分为S1和S2 两组，其中S1组中，包含了所有来自于我国的样品和绝大多数其它样品，且无规律可循。而S2组中的样品仅只来自于埃及和波兰。总体上，PLRV CP序列的差异仍然较小。这说明目前PLRV病毒的种群基因较稳定。 关键词：马铃薯；卷叶病毒（Potato leaf roll virus, PLRV）；CP基因；序列分析 中图法分类号：文献标示码：A 文章编号： Thirty Sequences Analysis of CP Gene of Potato Leaf Roll Virus HAN Shu-Xin1,BAI Yan-Ju*1，2,ZHANG Wei1,2, GAO Yan-Ling1，2,FAN Guo-Quan1，2,ZHANG Shu1, SHEN Yu1 1. Heilongjiang Academ of Agricultural Sciences, Harbin 150086, China; 2. Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; Abstract: We used RT-PCR to amplified the different samples that contain PLRV, and we successfully cloned PLRV CP gene,comparing the sample of gene sequence CP, that the nucleic acid concordance rate of all the samples was 99.55%, but the sample from Guangdong were found five bases different to other samples. We had analysed the test samples PLRV CP gene and other PLRV CP gene in China that had been published with phylogenetic tree, the samples from different area can be divided into two groups, we named group A and group B, and we have found the regional characteristics in the test samples, However, from Guangdong, Yunnan and Guizhou samples were distributed in all two groups, but the samples from Inner Mongolia only clustering in the group A. The PLRV CP gene from Chinese samples compared with other countries PLRV CP gene that had analysed with phylogenetic tree, all the PLRV CP gene can also be divided into S1 and S2 two groups, all the PLRV CP gene from China and most of other countries PLRV CP gene were included group S1, but there was no regulation,. In the group S2, there were only the PLRV CP gene from Egypt and Poland. In general, the differences of PLRV CP gene from different area were still small. Thus, the gene of the PLRV population is stable.
马铃薯晚疫病测报技术规范
马铃薯晚疫病测报技术规范 1 范围 本方法规定了马铃薯晚疫病始见期调查、病情系统调查、设定测报观测圃、大田普查、气象条件记载、数据传输、预报方法等方面内容。 本方法适用于马铃薯晚疫病田间调查和预报。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本规范。 2.1 中心病株 田间出现零星的单株病株。 2.2 现蕾期 有50％的植株长出花蕾但未开花。 2.3 “标蒙”气候标准 存在菌源的条件下，在作物生长季节第一次出现连续48小时内，最低气温不低于10℃，相对湿度在75%以上，经15～22天后田间出现中心病株。 3 始见期调查(中心病株调查) 3.1 调查时间从植株现蕾期或根据“标蒙”气候标准预测中心病株出现日后开始，每3天一次，直到发现中心病株。 3.2调查田块选择低洼潮湿、生长旺盛、早熟的感病品种田5块。若当地普遍种植抗病品种，则预先在发病条件好的地块播种感病品种，用于调查。 3.3调查方法采用按行踏查方法，田块面积不足667m2则全田实查，田块面积在667m2以上，则取667m2实查；掌握中心病株出现日期及初始发病指数。若气候条件适宜，但未见中心病株，应扩大调查面积。结果记入表1。 表1 马铃薯晚疫病中心病株调查表 单位年
4 定点系统调查 4.1 调查时间出现中心病株后，每3天一次。 4.2 调查田块选择发病条件好、代表性强、已发病的感病品种田3块进行定点系统调查。有条件的地方也可设立测报观测圃，观测圃选择当地最感病的品种和低洼湿地，以带病种薯和健康种薯各半间行种植，观测圃远离马铃薯大田、四周设施隔离或种植非茄科作物作为隔离带，设置面积不小于3亩。以掌握田间病情自然消长规律和再侵染情况。 4.3 调查方法 采用平行跳跃式取样方法，每块田定5点，其中至少1点选有发病病株，隔行调查，每点2米行长，以株为单位调查发病株数，计算发病株率、病情指数。大田定点调查结果记入表2，测报观测圃调查结果记入表3、表4。 表2 马铃薯晚疫病病情系统调查表 单位年 表3 马铃薯晚疫病观测圃带病种薯系统调查表 单位年
马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法
马铃薯病毒种类及主姜病毒检测方法?农学论文 马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法 罗燕娜,刘江娜,王航 （兵团第六师农业科学研究所,新疆五家渠831300 ） 收稿日期：2 015—01—20 摘要：本文对：Ibli地区马铃薯主要病莓的特性和致病症状逬行了描述”并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。 关键词：马铃薯；病莓；检测方法 马铃薯在我国广泛种植,已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。 由于光照强、昼夜遍差大、气候冷凉等优势，新疆北疆沿天山一带的昌吉州、乌鲁木齐、昭苏、新源等地都非常适宜种植马铃薯，现种植面积已达2310hm2［l］. 然而在当前的马铃薯生产中，病壽病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题［2］。目前，已报道的马铃薯病毒种类超过25种、类病壽1种，其中，侵染乌鲁木齐地区马铃書的主要病原病莓有 PVX、PVY、PVA、PLRV,类病莓为PSTVd。主要检测的马铃薯病毒有马铃薯X 病毒（PVX X马铃薯Y病量PVY 1马铃S S病頡PVS \马铃薯M病毒（PVM \ 马铃薯卷叶病毒（PLRV ）及马铃薯纺锤块茎类病莓（PSTVd ）⑴。 1马铃薯主要病莓种类及致病症状 1.1马铃薯X病毒（PVX） X病莓又称普通花叶病莓,病莓粒子为长杆状,大小为515nmxl3nm ,基因组全长6.4kb［3］。该病莓可通过叶片汁液摩擦传播，也可通过蜗虫以非持久性方式传播,还可通过种暮传播［1］。感病植株症状多种多样,因栽培品种的敏感性 不同和病莓株系的不同而存在差异，多数表现为轻花叶或潜隐症状，症状严重的
则表现为严更的花叶或皱缩,产量损失可达50%。 1.2马铃薯Y病毒（PVY） Y病莓又称为重花叶病莓，病莓粒子形状为弯曲的线形,大小为 750nmxllnm ,多数通过桃妈和大戟长管妈传播。PVY包括3个株系组：马铃薯Y病毒普通株系组（PVYO X马铃薯点条斑株系（PVYC ）和马铃薯Y病毒褐脉株系（PVYN L前2个株系组引起的主要初期症状是叶片坏死、斑驳，后期 则表现为矮化、皱缩、斑驳和卷曲；第3个株系组初期表现为不同程度的花叶, 后期为花叶和斑驳,当溫度低于10°C或高于25°C时，花叶症状消失。产量损失最高可达80%。通常该病莓不会引起块茎发病，但近年来欧洲出现的一个新株系PVYNTN ,则可在块茎上导致坏死环斑［4］。 1.3马铃薯A病莓（PVA ） A病莓又称为轻花叶病莓,病莓粒体为弯曲的线形，大小为730nmxl5nm , 基因组全长9.7kb。该病莓可通过汁液摩擦传播或由33虫以非持久性方式传播, 也可通过种團专播。感病植株的症状表现为脉间花叶、叶片有光泽、叶脉深陷和说缘粗缩，产量损失可达40%。 1.4马铃薯S病莓（PVS ） S病毒又称为潜隐性花叶病毒，病莓粒子形状为线形,大小为650nmxl2nm, 病毒基因组全长7.4kb。可通过汁液摩擦传播，也可通过!@虫传播。感病植株初期症状不明显，严重危害时，叶片呈青铜色，叶脉轻微下陷，植株的开张度较大。 一些品种上会出现坏死斑和条纹。在田间常与其他病莓混合侵染，当与PVX或 PVM病莓混合侵染时,可减产20%?30%［5］。 L5马铃薯M病莓(PVM ) M病莓也厲于香石竹潜隐病毒厲(Carlavirus X病§粒子为线形,大小为 650nmxl2nm ,该厲病毒基因组全长&5kb。可通过机械传播,或者通过4?虫以非捋久性方式传播，也可通过种薯的调运远距离传播。感病植株叶上表面的叶脉深陷,有的出现粗缩.叶片轻微下垂,顶部叶片呈开散状。
马铃薯主要病害简介
马铃薯病害主要分为真菌病害、细菌病害和病毒病。 一、马铃薯真菌性病害 （一）晚疫病： 茎、叶受害部位产生褐色水渍状斑点，后扩展为黑色斑块。潮湿时，病斑周围有一圈白色霉状物，叶片背面很明显，薯块受害后，初期产生褐色或蓝紫色的病斑，以后扩大，表面逐渐凹陷，病部下层薯肉变为褐色。 （二）癌肿病： 块茎或匍匐茎由于病菌刺激寄主细胞不断分裂，形成大大小小花菜头状的瘤，表皮常龟裂，癌肿组织前期呈黄白色，后期变黑褐色，松软，易腐烂并产生恶臭。田间病株初期与健株无明显区别，后期病株较健株高，叶色浓绿，分枝多。 （三）粉痂病： 块茎染病，初在表皮上现针头大的褐色小斑。外围有半透明的晕环，后小斑逐渐隆起、膨大，成为直径3～5毫米不等的疱斑，其表皮尚未破裂，为粉痂的封闭疱阶段。后随病情的发展，疱斑表皮破裂，反卷，皮下组织现桔红色，散出大量深褐色粉状物(孢子囊球)，疱斑下陷呈火山口状，外围有木栓质晕环，为粉痂的"开放疱"阶段。根部染病，于根的一侧长出豆粒大小单生或聚生的瘤状物。 （四）早疫病： 该病的发生早于晚疫病，一般从下部老叶首先发病，开始在叶片上形成褐色的小点，后扩大成近圆形的具有同心轮纹的暗褐色病斑，故又称轮纹病斑，病斑与无病组织界线分明，严重时叶片干枯。 （五）干腐病： 发病初期仅局部变褐稍凹陷，扩大后病部出现很多皱褶，呈同心轮纹状，其上有时长出灰白色的绒状颗粒，即病菌子实体。剖开病薯可见空心，空腔内长满菌丝，薯内则变为深褐色或灰褐色，终致整个块茎僵缩或干腐，不堪食用。 二、马铃薯细菌性病害 （一）青枯病：
发病初期，下部叶片白天萎蔫，傍晚恢复，两天后，不再复原，由下向上逐渐发展，4天后，病株茎叶萎蔫枯死。 （二）黑胫病： 植株矮小，节短，或叶片上卷，褪绿黄化，或胫部发黑，萎焉而死，横切茎，三条主要维管束变成褐色；薯块染病：始于脐部呈放射状向髓部扩展，病部黑褐色，横切维管束呈黑褐色，薯块变黑褐色，湿烂发臭，别于青枯病 （三）环腐病： 植株矮小，从下部叶片边缘开始退绿，逐渐向上枯黄，最后枯萎，但叶片不脱落。感病薯块用手挤压有黄色菌液流出，薯皮与薯肉分离，重者皮裂，薯肉腐烂变质，臭不可闻，感病轻的薯块切开后有明显的环状。 （四）疮痂病： 块茎染病后，表面先产生褐色小点，扩大后形成褐色圆形或不规则形大斑，直径为5-10mm。因产生大量木栓化细胞致表面粗糙，后期中央稍凹陷或凸起，呈疮痂状硬斑块，有的产生裂口，病斑一般仅限于表层，不深入薯内。 （五）软腐病： 叶染病近地面老叶先发病，病部呈不规则暗褐色病斑，湿度大时腐烂。茎部染病多始于伤口，再向茎干蔓延，后茎内髓组织腐烂，具恶臭，病茎上部枝叶萎蔫下垂，叶变黄。块茎染病多由皮层伤口引起，初呈水浸状，后薯块组织崩解，发出恶臭。 三、马铃薯病毒性病害 （一）马铃薯卷叶病： 主要表现为叶片小叶向上卷。通常是植株下部或全株叶片变脆，上卷呈筒状。有的仅叶片边缘微向上卷，有的卷曲严重而成匙状或筒状，严重时，叶片变厚，发脆变硬，颜色较深较浓，给人以丛簇凌乱的感觉。生理性卷叶的特点是受害植株卷叶表现较为一致。 （二）马铃薯Y病毒： 脉缩、叶片卷曲、小叶叶缘向下翻、矮化、小叶叶脉坏死、坏死斑点、叶片坏死和茎上出现条纹都是典型的症状。不太敏感品种的反应只是发生轻微的花叶，或者表现不出症状。 （三）马铃薯A病毒： 产生轻微花叶、斑驳，叶脉上或叶脉间呈现不规则的浅色斑，叶面稍有粗缩。
马铃薯病害防治
马铃薯病害防治 一、马铃薯病毒及类病毒 （一）马铃薯病毒及类病毒的种类与危害 马铃薯新品种推广后，随着种植年限的增加，产量逐年下降，植株变矮，薯快变小，并伴有茎叶异常现象，如花叶、叶片卷曲或皱缩等。这种现象称之为退化。引起马铃薯退化的主要原因就是病毒病，是一种传染性病毒。这种病害在田间靠昆虫(主要是蚜虫)或叶片接触而传播。它可以导致植株生理代谢紊乱、活力降低造成大量减产。严重时可减产70%--80%，甚至没有商品产量。目前全世界已发现能侵染马铃薯的病毒有18种，类病毒一种，类茵原体2种。专门寄生在马铃薯上的病毒有9种，国内发现的有7种。这7种病毒分别是马铃薯x病毒(PVX)、马铃薯Y病毒4PVY)、马铃薯S病毒（PVS)、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯奥古巴花叶病毒（PVMA）、马铃薯A病毒(PVA)、马铃喜卷叶病毒(PLRV)。此外，侵染烟草、黄瓜、番茄等的一些病毒也侵染马铃薯。下面分别介绍一下以上几类病毒引发的病症及特点。 1、马铃薯x病毒(PVx) 马铃薯x病毒也叫马铃薯潜隐病毒，由该病毒引起的病叫马铃薯普通花叶病或轻花叶病。是马铃薯病毒中分布范围最广泛的一种。一般减产l0％一25%，依马铃薯品种和病毒株系而异。与Y病毒复合侵染造成皱缩花叶时，减产幅度可达50%以上。x病毒很容易通过汁液传播，在田间可借风、机械、人的走动使植株互相接触发生传毒。根与根或芽与芽的接触也能传毒，种植前切块时切刀可以传毒。蚜虫不能传播此病毒，但一些咀嚼式口器的昆虫能传播此病毒。在发育早期感染此种病毒，病毒会很容易运转到新生块茎中，而在生育后期感染这种病毒，则很可能运转不到新生块茎中去。这种病毒在茎尖脱毒中较难脱掉。 2、马铃薯Y病毒 马铃薯Y病毒也称作条斑病毒、条点病毒、沿脉变色病毒、顶端坏死病毒、重花叶病毒。其引起的病害叫做沿脉变色、垂叶条斑、重花叶或皱缩花叶。是引起马铃薯退化的主要病毒，危害范围广泛，能造成50％一80％的减产，尤其与PVx、PVA复合感染时减产幅度更大。由PVY侵染的植株轻的不表现症状，进而表现轻花叶、重花叶、粗缩和皱缩花叶。一些敏感品种叶片背面叶脉坏死形成条斑。还有些品种叶柄及茎上也出现条斑坏死。这种现象称作落叶条斑或垂叶条斑(叶片不脱落，枯死后吊在植株上)。带毒块茎长出的植株，表现矮化，叶片簇拥，变小变脆并皱缩；此种病毒主要由蚜虫传播，也可通过汁液及嫁接等途径传毒。 3、马铃薯卷叶病毒(PLRV) 马铃薯卷叶病毒引起的病害叫马铃薯卷叶病。发病后叶片向上卷曲成筒状，并变硬、革质化，用手摸发出像纸一样的声音。该病毒分布极广，是一种严重的病毒性病害。发病严重时可减产80％以上。不仅影响产量，而且还影响马铃薯品质。当年感病的植株，症状主要表现在顶部叶片上。通常叶片直立，变为白绿色，小叶沿中脉上卷，随病情发展可扩展到老叶。植株晚期侵染可能不表现任何症状，使病害的诊断变得困难。带毒种薯产生的植株表现矮小、直立，底部叶片严重卷曲并变硬、革质化。幼嫩叶子发黄，略卷。感病后块茎横切面有网状坏死。蚜虫是传播卷叶病毒的唯一媒体。其中桃蚜是最有效的传毒介体。蚜
应对马铃薯(土豆)晚疫病的五大杀菌剂
应对马铃薯晚疫病的五大杀菌剂 马铃薯晚疫病对马铃薯来说是一种毁灭性的病害，一般年份造成减产达10%~20%，大发生年份减产会超过50%，甚至绝收。而且马铃薯晚疫病发生范围非常广泛，只要种植马铃薯的地区都会发生，尤其是我国中部和北部地区。 马铃薯晚疫病的致病菌为“致病疫霉”，此真菌主要在寄主细胞间生长，并通过纽扣状细胞结构伸入寄主细胞获得养分。马铃薯叶片感染致病疫霉后，其边缘、尖端出现暗绿色病斑，叶子背面出现“白霜”（分生孢子梗和分生孢子囊），随着病情的发展，其会扩展到主脉、叶柄和茎部，造成落叶，严重时整株呈湿腐状。 马铃薯的块茎也会感染病原真菌，发病初期在块茎表面出现淡褐色或灰紫色的小斑点，在表皮层以下呈现出锈褐色。茎部很少直接受侵染,但病斑可顺叶柄扩展至茎部。 1、氟啶胺 氟啶胺是最常用的防治马铃薯晚疫病的杀菌剂之一，剂型主要有三种，悬浮剂、水分散粒剂和可湿性粉剂。氟啶胺二硝基苯胺类化合物，是保护性杀菌剂，作用机制是阻断病原菌能量代谢，从而杀死病菌，其从孢子萌发到孢子形成各阶段均都发挥药效，对阻止孢子侵入及萌发尤为有效。 登记号剂型使用方法 PD20183567 50% 氟啶胺悬浮 剂25-35毫升/亩喷雾 马铃薯晚疫病发生初期施药 PD20181930 70%氟啶胺水分 散粒剂20-28克/亩喷雾 于病害发病前或发生初期施药 PD20172374 50%氟啶胺可湿 性粉剂30-35克/亩喷雾 于马铃薯晚疫病发生初期施药 2、代森锰锌 代森锰锌做为杀菌剂界的常青树，也是防治马铃薯晚疫病的常用农药品种，
剂型主要包括水分散粒剂和可湿性粉剂。 登记号剂型使用方法 PD20082590 锌75%代森锰水 分散粒剂130-190克/亩喷雾，于病症出现前施药 PD20111048 代森锰锌80% 可 湿性粉剂140-180-克/亩， 发病前或发病初期喷雾 3、氰霜唑 氰霜唑是日本石原开发的苯基咪唑类杀菌剂，对霜霉病、疫病等卵菌性病害和油菜根腐病具有良好的防效，其能够有效的阻止游离孢子发芽、游动，阻止表面包子发芽，以及菌丝生长和卵孢子形成的各个阶段。 氰霜唑的主要剂型为悬浮剂，100克/升氰霜唑的悬浮剂，每亩使用量为32-40毫升，在发病前或发病初期使用；施药间隔期7-10天，每季作物使用2-3次。 4、嘧菌酯 嘧菌酯是一种广谱高效的杀菌剂，由先正达开发上市，是一种β甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，通过抑制病原菌线粒体的呼吸作用来阻止其能量合成, 是一种较新的作用机理的杀菌剂, 具有保护和治疗双重功效。目前嘧菌酯主要有两种剂型，水分散粒剂和悬浮剂。 登记号剂型使用方法 PD20180775 250克/升嘧菌酯 悬浮剂17-20毫升/亩 于病害发生前或初见零星病斑时叶面喷雾1-2次 PD20160994 嘧菌酯50% 水分 散粒剂8.7-10克/亩喷雾 发病前或发病初期叶面均匀喷雾 5、烯酰吗啉
马铃薯常见病虫害防治技术
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/713407961.html, 马铃薯常见病虫害防治技术 作者：赵春红 来源：《农民致富之友》2018年第07期 马铃薯是现在人类社会的四大粮食作物之一，同时也是我国现在种植量较多的粮食作物之一，随着社会的快速发展，不断推出各种新的脱毒中熟产品，使其在产量和品质上有不少的提升，但是马铃薯病虫害防治中还有一些问题，这些问题对马铃薯的产量和品质都有很大的影响，但是对于现阶段马铃薯种植来说，人们在种植中为了降低损失，需要采取相应的预防措施进行控制和处理。 一、马铃薯真菌性病害及防治技术 1、晚疫病 晚疫病是马铃薯主产区最重要的一种真菌病害，其最初传播来源是邻近的薯田或番茄、杂草和有机堆肥。防治晚疫病，首先要选择抗病品种；其次，播前严格淘汰病薯。一旦发生晚疫病感染，一般很难控制，因此必须在晚疫病没有发生前进行药剂防治，即当日平均气温在10～25℃之间，下雨或空气相对湿度超过90%达8小时以上的情况出现4～5天后喷洒药剂进行防治。可用70%代森锰锌可湿性粉剂来进行防治，每亩用量175～225克，兑水后进行叶面喷洒。如果没有及时喷药，田间发现晚疫病植株后，则需要用瑞毒霉（也称为雷多米尔、甲霜灵）之类的药剂进行防治，每亩用25%瑞毒霉可湿性粉剂150～200克，兑水进行叶面喷施。如果一次没有将病害控制住，则需要进行多次喷施，时间间隔为7～10天。 此外，环境条件也影响晚疫病的传播，为防止块茎感染，应当高培土。如果植株地上部分受到晚疫病侵染，则最好在收获前将病秧割除并清理处田块，防止收获的薯块与之接触。 2、粉痂病 用甲烷钠熏蒸土壤可以起到一定的防治效果。选择排水良好的无病地块种植马铃薯或长期与牧草轮作，可显著降低该病害的发生，选用抗病品种和无病种薯。 3、早疫病 叶片喷施有机杀菌剂可以减少早疫病的蔓延。当早疫病较为严重时可用70%代森锰锌可湿性粉剂来防治，用量为每亩175～225克，兑水后进行叶面喷施，如果一次没有防治住，则需要进行多次喷施，间隔10天左右。 4、干腐病和萎焉病