铜绿假单胞菌检测(滤膜法)
铜绿假单胞菌检测（滤膜法）
录入时间:2015-4-27 10:30:42 来源：青岛海博生物
一、原理
将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒温箱中培养48h，能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。
二、培养基和试剂
1.假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（配制好之后低温避光保存）
2.金氏B（King’s B）培养基（配制好之后低温避光保存）
3.乙酰胺肉汤（用蒸馏水配制，配置好之后低温避光保存）
4.营养琼脂
5.氧化酶试剂
6.钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）
7.设备和仪器
8.玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟
9.恒温培养箱：36℃±1℃
10.紫外灯：波长应为360±20nm
11.滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μｍ（处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将
滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15 min。前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。建议使用一次性无菌滤膜。）12.显微镜：10×～100×
13.冰箱：0℃～8℃
三、操作流程图
铜绿假单胞菌感染
铜绿假单胞菌感染 百科名片 铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)在自然界分布广泛，对人类而言，属于条件致病菌。长期应用激素、免疫抑制剂，进行肿瘤化疗、放射治疗等导致病人免疫功能低下，以及手术后或某些治疗操作后(气管切开、保留导尿管等)的病人易导致本菌感染，故认为该菌为医院内感染的重要病原菌之一。 [编辑本段]病原 铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，在琼脂平板上能产生蓝绿色绿脓素，感染伤口时形成绿色脓液。本菌为无荚膜、无芽胞、能运动的革兰阴性菌，形态不一，成对排列或短链状，为专性需氧菌，最适宜生长温度为370C，致病性铜绿假单胞菌在420C 时仍能生长，据此可与荧光假单胞菌等进行鉴别，本菌生长对营养要求不高。菌体0抗原有两种成分，一为内毒素蛋白，是一种保护性抗原，另一为酯多糖，具有特异性，根据其结构可将铜绿假单胞菌分成12个血清型，此外还可利用噬菌体或铜绿假单胞菌素分型。铜绿假单胞菌对外界环境抵抗力较强，在潮湿处能长期生存，对紫外 线不敏感，湿热550C 1小时才被杀灭。 [编辑本段]流性病学 正常人皮肤，尤其潮湿部位如腋下、会阴部及耳道内，呼吸道和肠道均有该菌存在，但分离率较低。铜绿假单胞菌感染常在医院内发生，医院内多种设备及器械上均曾分离到本菌，通过各种途径传播给病人、病人与病人的接触也为传播途径之一。除院内感染外，铜绿假单胞菌还可引起与医院环境无关的感染，近年来对此已有更多的认识，它已成为足穿刺感染、心内膜炎、滥用药物所致的骨髓炎、眼部感染、新生儿感染性外耳炎、游泳池等引起的皮肤病的主要病原菌，亦是战伤感染的常见致病 菌。 [编辑本段]发病机制 铜绿假单胞菌的多种产物有致病性，其内毒素则在发病上无重要意义。其分泌的外毒素A(PEA)是最重要的致病、致死性物质，进入敏感细胞后被活化而发挥毒性作用，使哺乳动物的蛋白合成受阻并引起组织坏死，造成局部或全身疾病过程。动物模型表明：给动物注射外毒素A后可出现肝细胞坏死、肺出血、肾坏死及休克等，如果注射外毒素A抗体则对铜绿假单胞菌感染有保护作用。铜绿假单胞菌尚能产生蛋白酶，有外毒素A及弹性蛋白酶同时存在时则毒力最大;胞外酶S是铜绿假单胞菌所产生的一
铜绿假单胞菌下呼吸道感染诊治专家共识
铜绿假单胞菌下呼吸道感染诊治专家共识 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，P. aeruginosa，PA）是一种革兰阴性杆菌，也是临床最常见的非发酵菌，在自然界广泛分布，可作为正常菌群在人体皮肤表面分离到，还可污染医疗器械甚至消毒液，从而导致医源性感染，是医院获得性感染重要的条件致病菌，具有易定植、易变异和多耐药的特点。下呼吸道是医院内细菌感染最常见的发生部位，感染种类主要包括支气管扩张合并感染、慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）合并感染和肺炎等，由多重耐药PA（multidrug resistant P aeruginosa，MDR-PA）引起的下呼吸道感染病死率高，治疗困难，因此规范PA下呼吸道感染的诊断和治疗具有特别重要意义。 一、微生物学特点 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽孢及无荚膜的革兰阴性杆菌，和不动杆菌属、黄杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌及洋葱伯克霍尔德菌等共同构成非发酵糖（Nonfermenters）革兰阴性杆菌，是常见的条件致病菌，是医院感染的主要病原之一。PA是假单胞菌的代表菌株，占所有假单胞菌感染的70%以上。PA呈球杆状或长丝状，宽约0.5～1.0 μm，长约1.5～3.0 μm，一端有单鞭毛，无芽孢，成双或短链排列。PA能产生多种色素，如绿脓素和荧光素等，专性需氧，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长。 二、流行病学 （一）流行状况 近年来，PA感染的流行病学特点突出地表现在两个方面，一是院内感染尤其是肺部感染的发病率不断增加。国内已有多项大型流行病学调查显示我国PA感染的严重性，其中最具代表性的“中国CHINET细菌耐药性监测”资料显示，2012年综合性教学医院PA的分离率占所有分离菌的第5位，2005-2012年PA的分离率分别占革兰阴性菌的11.6%、14.1%、16.9%、16.4%、15.8%、14.8%、14.2%和14.0%，居第2~5位[1]。有13家教学医院参与的中国医院院内获得性细菌耐药性分析（CARES）结果显示，2009年和2011年PA在所有分离细菌中也是居第4位，分离率分别为10.8%和12.6%[2]，且MDR-PA的比例高达12.7%。这一点在呼吸系统感染更为突出，根据美国疾病预防控制中心（CDC）的全国医院感染研究数据显示，PA 肺炎的发生率在逐年升高，1975-2003年医院获得性肺炎（HAP）中PA比例从9.6%上升至18.1%，几乎翻了一倍[3]。一项大规模ICU感染病原学的流行病学调查结果显示，PA是最常见的革兰阴性需氧菌，占23%（8 244/35 790），也是最常见的从呼吸道分离出的细菌（31.6%）[4]。美国一项关于呼吸机相关肺炎（VAP）的回顾性研究结果显示，PA分离率达9.3%。即便得到有效地治疗，PA导致的感染总病死率仍高达42.1%~87.0%，直接病死率为 32.0%~42.8%[5]。2005年胡必杰等[6]报道562例HAP中PA的分离率为18.6%，列第1位；我国近期进行的13家大型教学医院HAP的临床调查结果显示，PA的分离率为20.9%，居第2位[7]。2011年CARES研究也证实HAP中PA的分离率为22.9%，居第2位[2]。二是PA的耐药率居高不下，全球细菌耐药监测数据（SENTRY）显示PA在HAP致病原中居前几位，同时对常用抗菌药物耐药率的逐年升高[8]。中国CHINET 2005-2012年连续监测资料显示，PA对常用抗菌药物的耐药率保持在较高水平，但略呈下降趋势。如亚胺培南的年度耐药率分别为31.0%、42.8%、35.8%、30.5%、30.5%、30.8%、29.1%和29.1%，对美罗培南的年度
铜绿假单胞菌致下呼吸道感染的控制与护理对策
铜绿假单胞菌致下呼吸道感染的控制与护理对策 铜绿假单胞菌是革兰阳性杆菌、非发酵菌、假单胞菌属，是医院感染中主要的病原菌之一，本文以神经外科重病室患者铜绿假单胞菌致下呼吸道感染的控制与护理对策展开分析。 标签：重病室；铜绿假单胞菌；感染控制；护理对策 铜绿假单胞菌广泛分布于医院各种潮湿地方、物品上，对外界环境的抵抗力较其他细菌更强，铜绿假单胞菌可引起泌尿道、伤口、皮肤与软组织等部位感染，其传播途径可来自环境污染（如消毒液、尿壺、尿管等），医务人员的手，患者之间的交叉感染，以及患者自身的内部源性感染，以及患者自身的内部源性感染。铜绿假单胞菌引起医院感染发生率逐年上升，耐药谱广，日益受到重视[1]。2009年在7月～8月在神经外科重病房发现了3例铜绿假单胞菌感染患者，均为下呼吸道感染。流行病学调查结果如下。 1微生物学特点 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽孢及无荚膜的革兰阴性杆菌和不动杆菌属、黄杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌及洋葱伯克霍尔德菌等共同构成非发酵糖革兰阴性杆菌，是常见的条件致病菌，尤其是医院感染的主要病原之一。PA是假单胞菌的代表菌株，占所有假单胞菌感染的70%以上。PA呈球杆状或长丝状，宽约0.5～1.0 μm，长约1.5～3.0 μm，一端有单鞭毛，无芽孢，成双或短链排列。PA能产生多种色素，如绿脓素和荧光素等，专性需氧，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长。 2流行状况 国内已有多项大型流行病学调查显示我国PA感染的严重性，其中最具代表性的”中国CHINET细菌耐药性监测”资料显示，2012年综合性教学医院PA的分离率占所有分离菌的第5位，2005～2012年PA的分离率分别占革兰阴性菌的6%，14.1.%、16.9%、16.4%、15.8%、14.8%、14.2%和14.0%，居第2～5位《3b 有13家教学医院参与的中国医院院内获得性细菌耐药性分析（CARES）结果示，2009年和2011年PA在所有分离细菌中也是居第4位，分离率分别为10.8%和12.6%，且MDR-PA的比例高达12.7%。 这一点在呼吸系统感染更为突出，美国疾病预防控制中心（CDC）的全国医院感染研究数据显示，PA肺炎的发生率在逐年升高，1975～2003年医院获得性肺炎（HAP）中PA比例从9.6%上升至18.1%，几乎翻了I倍。 中国CHlNET 2005～2012年连续监测资料显示，PA对常用抗菌药物的耐药率保持在较高水平，但略呈下降趋势。如亚胺培南的年度耐药率分别为31.0%、42.8%、35.8%、30.5%、30.5%、8%、29.1%和29.1%，对美罗培南的年度耐药率
保健用品微生物检验方法-—铜绿假单胞菌测定
保健用品微生物检验方法 第3部分：铜绿假单胞菌测定 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了保健用品中微生物中铜绿假单胞菌的测定方法。 本标准适用于生产和经营的保健用品中的铜绿假单胞菌测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 ℃±1 ℃条件下能生长。 4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯 。实验用水符合GB/T 6682中二级水的要求。 4.1 灭菌生理盐水:详见附录A.1。 4.2 灭菌液体石蜡:详见附录A.2。 4.3 灭菌吐温-80:详见附录A.3。 4.4 SCDLP:详见附录A.4。 4.5 十六烷基三甲基溴化铵:详见附录A.5。 4.6 乙酰胺:详见附录A.6。 4.7 革兰氏染液:详见附录A.7。 4.8 绿脓菌素测定培养基:详见附录A.8。 4.9 硝酸盐蛋白胨水:详见附录A.9。 4.10 明胶液化培养基:详见附录A.10。
5 仪器和设备 5.1 天平：感量0.1 g。 5.2 灭菌刻度吸管:10 mL、5 mL、1 mL。 5.3 高压灭菌器。 5.4 量筒：100 mL、200 mL、2000 mL。 5.5 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5 ℃±0.5 ℃。 5.6 无菌锥形瓶：100 mL、200 mL、250 mL、2000 mL。 5.7 研钵。 5.8 振荡器。 5.9 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃、42 ℃±1 ℃、28 ℃±2 ℃。 5.10 接种针、接种环。 5.11 显微镜。 5.12 小倒管。 5.13 玻璃棒。 5.14 冰箱：2 ℃～5 ℃。 6 样品 6.1 样品的采集 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批保健用品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应从不少于2 个包装单位的取样中共取10 g(5.1)或10 mL(5.2)。包装量小于20 g的样品，采样时可适量增加样品包装数量。 6.2 注意事项 6.2.1 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。 6.2.2 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 6.2.3 若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做微生物检验，再将剩余样品做其它分析。 6.2.4 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌(5.3)，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。 6.2.5 如检出铜绿假单胞菌，自报告发出之日起该菌种应保存一个月。 6.3 样品的制备 6.3.1 液体样品 水溶性液体样品，用灭菌吸管吸取10 mL加到90 mL（5.4）灭菌生理盐水（4.1）中，混匀后，制成1:10匀液。 油性液体样品，取样品10 g，先加5 mL 灭菌液体石蜡（4.2）混匀，再加10 mL灭菌的吐温-80，在 40 ℃～44 ℃水浴中（5.5）振荡混合10 min，加入灭菌的生理盐水75 mL（在40 ℃～44 ℃水浴中预温），在40 ℃～44 ℃水浴中乳化，制成1:10的悬液。
临床感染铜绿假单胞菌的分布及耐药性分析
临床感染铜绿假单胞菌的分布及耐药性分析 发表时间：2010-08-30T15:42:15.013Z 来源：《中外健康文摘》2010年第17期供稿作者：王新建杨怀德[导读] 分析铜绿假单胞菌的临床分布及耐药谱的变迁,为临床合理选用抗菌药物提供指导依据。 王新建杨怀德（张家界市人民医院检验科湖南张家界 427000） 【中图分类号】R969.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)17-0065-03 【摘要】目的分析铜绿假单胞菌的临床分布及耐药谱的变迁,为临床合理选用抗菌药物提供指导依据。方法应用ATB细菌鉴定药敏系统鉴定细菌,K-B法做体外药敏试验,统计分析医院2008-2009年铜绿假单胞菌的检出率和耐药情况。结果 244株铜绿假单胞菌主要分布在重症监护病房(ICU), 来自痰标本的有192株(占78.7%),两年的分离率有逐年增加的趋势,对抗生素的耐药性也有鹉晟仙 那魇啤? 结论铜绿假单胞菌是临床感染的主要病原菌之一,应对其加强耐药性监测,合理使用抗菌药物。 【关键词】铜绿假单胞菌临床感染耐药性药物敏感试验监测 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa，PA)广泛分布于然界，是一种常见的条件致病菌[1]。近年来,随着医学的发展,各种广谱抗菌药物广泛应用于临床,该菌的检出率不断增高,且呈现多药耐药,已成为临床感染的重要病原菌和临床治疗的难点[2]。因此,监测铜绿假单胞菌的感染流行病学及耐药性,对有效预防及治疗该菌引起的临床感染具有重要意义。 为了解铜绿假单胞菌在我院临床感染中的分布与药敏情况,统计分析了我院2008年1月-2009年12月从所有临床标本中分离出的铜绿假单胞菌的分布情况,并分析了其耐药谱的变迁,作为我院防治铜绿假单胞菌感染的背景资料，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 菌株来源 2008年1月-2009年12月我院临床各科室送检标本中分离的铜绿假单胞菌共244株,同一患者多次分离相同菌株不重复计入。 1.2 药敏试验采用K-B纸片扩散法,各种抗菌药物纸片购自广州市迪景微生物科技有限公司,药敏结果严格按照CLSI/NCCLS(2009年)推荐的标准判断。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。 1.3 统计分析采用世界卫生组织推荐的WHONET5.4微生物实验室数据管理软件进行统计分析。 2 结果 2.1 两年中临床感染铜绿假单胞菌的分布情况 2009年铜绿假单胞菌的分离率比2008年有较大幅度的提高,来自ICU的铜绿假单胞菌两年都高居首位。 2.3 两年中铜绿假单胞菌在临床标本中的分布情况 244株铜绿假单胞菌中来自痰标本的有192株,占78.7%,来自脓液及伤口分泌物的有34株,占1 3.9%。 2.3 两年的铜绿假单胞菌对22种临床常用抗菌药物的耐药情况大多数抗菌药物的耐药率2009年比2008年都有大幅度的提高,只有庆大霉素和妥布霉素的耐药率有所下降,估计与医院的抗生素使用管理政策有关 AMK-阿米卡星；SAM-氨苄西林\舒巴坦；ATM-氨曲南；CL-多粘菌素E；SXT-复方新诺明；CIP-环丙沙星；FOS-磷霉素；MEM-美洛培南；MEZ-美洛西林；PIP-哌拉西林；TZP-哌拉西林\他唑巴坦；GEN-庆大霉素；CB-羧苄西林；TIC-替卡西林；TCC-替卡西林\克拉维酸；FEP-头孢吡肟；CFP-头孢哌酮；CSL-头孢哌酮\舒巴坦；CAZ-头孢他啶；TOB-妥布霉素；IPM-亚胺培南；LEV-左旋氧氟沙星. 3 讨论 铜绿假单胞菌（PA）广泛分布于自然界和正常人体的皮肤、呼吸道和消化道及医院环境中,其繁殖能力强,生长条件要求低,致病力强,目前已成为医院感染的主要病原菌之一，其临床分布率在逐年增加。从表1中可以看出我院2008和2009两年的分离株数也呈逐年增加趋势。 PA可引起伤口感染、下呼吸道、泌尿道感染、菌血症等严重感染,是医院内感染的主要致病菌,也是重症监护病房医院内感染最常见的致病菌。从表1和表2中可以看出，分离出的244株铜绿假单胞菌有154株来自ICU，占了63.1%,有192株来自痰标本(78.7%),有34株来自脓液及伤口分泌物(13.9%),两者占了92.6% ,这表明我院铜绿假单胞菌的感染主要是以呼吸道和伤口分泌物为主，与文献[2,3]报道一致。 PA具有多重耐药特点,其耐药性主要同耐药机制和临床滥用药物有关。由于临床上广谱抗生素的大量及不合理应用,其感染及耐药性日趋严重[4],这应引起临床工作者的高度重视。PA的耐药机制很复杂,研究发现,其主要是产生抗生素灭活酶或修饰酶、改变抗菌药物作用的靶位,从而逃避抗菌药物的抗菌作用、膜屏障与主动外排而限制药物到达其作用靶位以及形成生物被膜等[5]。近年来的研究表明,铜绿假单胞菌的细胞膜能产生富有黏附性的由糖蛋白构成的生物被膜,它可阻止和抑制白细胞、巨噬细胞、抗体及抗菌药物泵入生物被膜中杀灭病原菌,是造成抗菌药物耐药的重要原因[6]。同时病原菌还能从生物被膜中游离出来并繁殖,这可能是临床上常见的病原菌检测阳性经久不愈的原因之一[7]。 本文分离到的244株铜绿假单胞菌对抗生素均存在不同程度的耐药性,在22种抗生素中,铜绿假单胞菌对多粘菌素E的耐药率最低(0.0%),但国内暂无该药供应。其他耐药率较低的药物有阿米卡星（10.7%）、左氧氟沙星（13.3）(与文献[2]报道一致,但与文献[3]报道不一致)、妥布霉素（17.1）、亚胺培南(19.0)和美洛培南(19.7),这些药物可作为铜绿假单胞菌重症感染的首选药物。但随着亚胺培南的长期使用,其耐药率逐年增加,应引起临床科室的高度重视,应以其它抗生素联合应用或减少亚胺培南的使用频率。铜绿假单胞菌对其它抗生素耐药性十分突出,耐药率在90%以上的有氨苄西林/他唑巴坦(100.0%)和复方新诺明(98.4%),说明铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物及β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复合药都能产生较高的耐药性,可能与临床长期及不合理应用抗生素相关。药敏结果显示PA对抗生素呈多重耐药性,临床科室应根据药敏结果合理使用抗生素,从而减少耐药株的产生。 PA的耐药情况相当严重,临床用药应以药敏结果为指导,避免经验用药,同时在治疗过程中应不断地监测细菌的耐药率,减缓耐药菌株的产生。在院感工作中应严格执行消毒制度,做到无菌操作,避免铜绿假单胞菌在院内交叉感染的发生。总之,医院应重视合理应用抗菌药物的管理工作,临床感染性标本要求进行感染病原学检查,特别是进行细菌学培养和药物敏感试验,依据药敏试验结果选择有效的抗菌药物进行治疗,才能提高疾病治愈率,降低死亡率。 参考文献 [1] 周庭银.临床微生物学诊断与图解[M].2版.上海:上海科学技术出版社,2007:195-225. [2] 宁立芬,汪玉珍,谢彬,等.286株铜绿假单胞菌耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2009,19(4):458-460.
铜绿假单胞菌检查
铜绿假单胞菌检查 1 简述 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），习称绿脓杆菌，为假单胞菌属菌种，广泛分布在土壤，水及空气中，人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在，故可通过环境和生产的各个环节污染药品，本菌是常见的化脓性感染菌、在烧伤、烫伤、眼科及其他外科疾患中长引起继发感染，由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性，增加了治疗的难度。国内外药典均将铜绿假单胞菌列为检查项目之一。 铜绿假单胞菌按增菌，分离、纯培养、革兰染色、镜检及生化试验等步骤进行检验。 2 仪器、设备和用具（见大肠埃希菌2）。 3 试液、指示液 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.3]。 3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。 3.3 1%盐酸二甲基对苯二胺试液[附录2.1]。 3.4 盐酸试液[附录2.12]。 3.5 氯仿[附录1.57]。 4 培养基 4.1 营养肉汤培养基[附录 5.1]。 4.2 胆盐乳糖（BL）培养基[附录 5.6]。 4.3 营养琼脂培养基[附录 5.2]。 4.4 溴代十六烷基三甲胺[附录 5.14]。
4.5 绿脓菌素测定用培养基（POP琼脂）[附录 5.26]。 4.6 明胶培养基[附录3.27]。 4.7 硝酸盐胨水培养基[附录 5.28]。 5 对照用菌液 铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，于36±1℃培养18～24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106，使对照菌加入量含10～100cfu（一般用量为0.1ml），菌数测定在做阳性对照实验用营养琼脂浇碟或平板涂布经培养后计数确定。 6 操作方法 6.1 供试品的取样量（见细菌、霉菌和酵母菌计数5.3）。 6.2 供试液的制备（见细菌、霉菌和酵母菌计数7）；（大肠埃希菌6.2）。 6.3 增菌培养 取胆盐乳糖培养基2份，每份100ml，1份加入1:10供试液10ml（相当于供试品1g或1ml）。另1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。于36℃±1℃培养18～24h（必要时可延至48h）。阴性对照菌应无军生长。 6.4 分离培养 轻轻摇动上述增菌培养液，以接种环取1～2环培养液（如有菌膜应挑取之），划线接种于溴代十六烷基三甲胺琼脂平板，于36℃±1℃培养18～24h。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的典型菌落为扁平、
铜绿假单胞菌的传播途径
（一）铜绿假单胞菌的传播途径： 1、水源：水与铜绿假单胞菌的存在联系紧密。水源污染主要来自人或动物排泄物、人肠道铜绿假单胞菌两个途径。铜绿假单胞菌在污染的水中可较长时间的存留，各种液体药剂，包括眼药水长期放置有可能被铜绿假单胞菌污染，消毒剂、手术器械浸泡液都可能成为铜绿假单胞菌的贮存场所。呼吸机湿化装置及导管可作为传播的直接媒介。 2、环境：医院内长期潮湿的地方及湿的物品是铜绿假单胞菌贮存的场所。洗涤槽，防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。 3、医护人员：通过医护人员（手）可将病菌传给病人，特别在灼伤和新生儿重症监护室。 4、特殊的病人：人体本身是一个主要的铜绿假单胞菌贮存所，细菌主要存在人体较为潮湿的部位如腋下、会阴部、呼吸道和肠道等。HIV感染、气管切开和插管、大面积烧伤、恶性肿瘤、免疫力低下、静脉插管、留置导尿及各种侵入性操作的患者易感染本菌。 （二）铜绿假单胞菌的预防措施： 1、铜绿假单胞菌感染的患者应实行接触隔离，住隔离病室，隔离标志明确、醒目，在隔离病房或者区域的
入口处应配备手套、手消毒凝胶、隔离衣及外科口罩； 2、医务人员接触患者前，戴好口罩、帽子，穿隔离衣； 3、加强医务人员手卫生，接触患者血液、体液、污物后均应洗手。洗手提倡采用流动水洗手，如果手没有明显污染时，可以用消毒凝胶消毒双手；医务人员如手皮肤有破损，不宜护理此类感染性疾病的患者； 4、护士对患者导管的各项操作，应先从清洁的部位开始再到污染的部位，避免交叉污染，如进行可能产生气溶胶的操作（吸痰或雾化治疗、纤维支气管镜等）时必须戴标准外科口罩，必要时带保护性眼罩； 5、进行床旁检查（如便携式照片、心电图、B超）的仪器在检查完成后用消毒剂进行擦拭消毒； 6、如患者需离开隔离病室到医技科室做检查，主管医生应先电话通知该诊疗科室或在检查单上标注患者感染情况，检查完毕患者接触过的物体表面要及时进行消毒处理； 7、隔离病室患者接触过的一切物品，如被单、衣物、各类医疗器械、导管等应先行消毒处理，然后再清洁（洗）、消毒、灭菌； 8、严格医疗废物管理，患者用过的所有敷料、导管等废物须置入专用黄色医疗废物袋内、封口，锐利器具用后及时放入专用利器盒内,集中焚毁。
铜绿假单胞菌分布及耐药性分析
铜绿假单胞菌分布及耐药性分析 发表时间：2011-08-03T16:04:13.653Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第6期供稿作者：樊剑吴稷高咏梅李敬梅刘云秀陈艳玲 [导读] 铜绿假单胞菌广泛分布于自然界、正常皮肤、肠道、呼吸道、医院病房及医疗器械等樊剑吴稷高咏梅李敬梅刘云秀陈艳玲 【摘要】目的:了解本地区铜绿假单胞菌的耐药性，为临床合理选用抗菌药物提供依自动微生物鉴定/药敏分析仪进行培养、分离、鉴定及药敏试验。对分离80株铜绿假单胞菌的分布及细菌耐药性进行回顾性分析。结果细菌检出最高分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌在痰液标本中分布最高为86.25%。铜绿假单胞菌对头孢哌酮、头孢曲松、哌拉西林、耐药率分别为50.00%、46.15%、45.45%，耐药率低的是左氧氟沙星、亚胺培南、氨曲南、头孢吡肟、头孢他啶，耐药性分别是为18.42%、21.79%、21.79%、23.1%、25.79%。结论铜绿假单胞菌为医院呼吸道感染的常见致病菌，对多种抗菌药物呈不同程度耐药，应加强其耐药性的监测，合理使用抗菌药物。 【关键词】铜绿假单胞菌；耐药性；感染；抗菌药物 【中图分类号】R886【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)06-0159-02 铜绿假单胞菌广泛分布于自然界、正常皮肤、肠道、呼吸道、医院病房及医疗器械等，是临床上常见的条件致病菌，因其易定植、易变异、以及多重耐药性的特征，已逐渐成为医院感染的主要致病菌之一。特别是呼吸道感染感染多见，由于该菌属有多重耐药性，给治疗带来很多困难。王以光等报道[1]铜绿假单胞菌对目前临床应用的100种抗生素均显示有抗药性，是新世纪对人类生命造成威胁的3种细菌之一。为探讨铜绿假单胞菌感染分布及耐药现状，我们对本地区2008年1月~12月本院临床送检标本中分离的80株铜绿假单胞菌在标本中的分布及常用抗菌药物的耐药性进行统计分析，为合理选用抗菌药物提供依据。 1资料与方法 1.1标本来源来自我院2009年1月~ 12月临床送检标本，包括血、尿、痰及各种分泌物。 1.2菌株的培养、分离、鉴定、药敏试验采用英国Aris 全自动微生物鉴定/药敏分析仪，配套鉴定及药敏板，药敏板完全符合NCCLS 标准。 1.3质控菌株铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC700603 1.4采用回顾性统计分析。 2结果 2.1细菌检出情况:共送检标本1985份，阳性标本703份，检出率为35.41%。在检出的703株检出率排在前3位的是：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌。 2.2检出的铜绿假单胞菌在送检标本中的分布情况见表1
铜绿假单胞菌治疗策略分析
铜绿假单胞菌感染治疗策略 铜绿假单胞菌作为一种条件致病菌常定植于正常人的呼吸道,皮肤粘膜以及医疗设备等处。当患者免疫力低下,长期使用广谱抗生素,糖皮质激素及接受吸氧、气管插管机械通气时,铜绿假单胞菌大量繁殖,往往导致严重下呼吸道感染。因为铜绿假单胞菌的耐药及复发率高,故临床治疗较为困难。为更好地预防和控制医院感染，建议应采取以预防为主，加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测，及早进行菌株鉴定和药敏检测，避免大量和长期使用同一类型的抗菌药物，并规抗菌药物的应用，具体措施如下： 一、阻断病原菌播散 医院加强对高危患者的病原菌监测，尤其将下列患者列为目标监测的重点：住在ICU、接受过广谱抗菌药物治疗或抗菌药物治疗效果不佳的患者，留置各种导管以及合并慢性基础疾病的患者。对目标监测患者进行主动筛查和定期监测，及时发现、早期诊断铜绿假单胞菌感染与定植患者。如：患者的呼吸道长期定植铜绿假单胞菌，到多家医院就诊导致其克隆传播，致使不同医院间存在同一克隆株的PA,因此，加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控，是控制克隆株播散的关键。有文献报导PA克隆朱主要在ICU病房流行，原因可能为ICU住院患者病情重、自身免疫力低下，多接受过侵入性治疗，因此，加强病区（尤其是重点科室）的消毒、隔离和监控工作，阻断外源性传播媒介，是有效控耐药PA在医院感染发生和流行的重要途径。 二、加强监测抗铜绿假单胞菌的药物及其敏感性
目前可用于治疗铜绿假单胞菌感染的药物基本有六类：青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、单环β-酰胺类，氨基糖苷类和喹诺酮类，另外多黏菌素类(如黏菌素，多黏菌素B)以及磺胺类(甲磺灭脓、磺胺嘧啶银)主要用于铜绿假单胞菌的局部感染的治疗。多黏菌素B 也用于难治性的铜绿假单胞菌感染的全身治疗。2011年中国C H IN E T铜绿假单胞菌耐药性监测显示铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率 最低，为14．3%，对头孢哌酮和氨曲南的耐药率最高，分别为31.7%和38.9%，对其他抗菌药物的耐药率为19～30%，耐药率从低到高依次为：阿米卡星<头孢吡肟<头孢他啶<头孢哌酮一舒巴坦<环丙沙星<哌拉西林一他唑巴坦<庆大霉素<美罗培南<亚胺培南<哌拉西林<头 孢哌酮<氨曲南。 （1）青霉素类药物包括哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、美洛西林、替卡西林、替卡西林／克拉维酸，其中以哌拉西林最常用于铜绿假单胞菌导致的肺部感染。 （2）头孢菌素类药物包括头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢匹胺是铜绿假单胞菌的敏感药物。头孢他啶是目前针对铜绿假单胞菌作用最强的药物，头孢吡肟对铜绿假单胞菌的作用与头孢他啶相似，头孢哌酮对铜绿假单胞菌有良好的抗菌作用，可用于铜绿假单胞菌感染的联合治疗用药，头孢匹胺对铜绿假单胞菌的作用与头孢哌酮和哌拉西林相似或略优。 （3）碳毒霉烯类药物该类药物抗菌谱特别广，抗菌活性强。治疗PA感染应首选敏感药物碳青霉烯类，并且初始剂量宜大，以增强其
铜绿假单胞菌下呼吸道感染诊治专家共识汇总
铜绿假单胞菌下呼吸道感染诊治专家共识中华医学会呼吸病学分会感染学组）是一种革兰阴性杆菌，也是临床最常PA，P.aeruginosa，铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa见的非发酵菌，在自然界广泛分布，可作为正常菌群在人体皮肤表面分离到，还可污染医疗器械甚至消毒是医院获得性感染重要的条件致病菌，具有易定植、易变异和多耐药的特点。液，从而导致医源性感染.下呼吸道是医院内细菌感染最常见的发生部位，感染种类主要包括支气管扩张合并感染、慢性阻塞性）MDR-PA Paeruginosa，肺疾病（简称慢阻肺）合并感染和肺炎等，由多重耐药PA（multidrug resistant下呼吸道感染的诊断和治疗具有特别重要的意义。因此规范PA引起的下呼吸道感染病死率高，治疗困难，一、微生物学特点假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽孢及无荚膜的革兰阴性杆菌和不动杆菌属、黄杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌及洋葱伯克霍尔德菌等共同构成非发酵糖革兰阴性杆菌，是常见的条件致病菌，尤其是医院感染的主要病原之一。0.5~1.0呈球杆状或长丝状，宽约以上。PAPA是假单胞菌的代表菌株，占所有假单胞菌感染的70%能产生多种色素，如绿脓素和荧PA.成双或短链排列。xm，—端有单鞭毛，无芽孢（xm，长约1.5~3.0（光素等，专性需氧，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长。二、流行病学（一）流行状况感染的流行病学特点突出地表现在两个方面，一是院内感染，尤其是肺部感染的发病率PA近年来，CHINET中国感染的严重性，其中最具代表性的“不断增加。国内已有多项大型流行病学调查显示我国PA年—2012的分离率占所有分离菌的第5位，2005资料显示，细菌耐药性监测”2012年综合性教学医院PA，和14.0%、14.8%、14.2%，14.1%，16.9%、16.4%、15.8%PA的分离率分别占革兰阴性菌的11.6%2~5位。居第20112009年和家教学医院参与的中国医院院内获得性细菌耐药性分析（CARES）结果显示，有1312.7%。且MDR-PA的比例高达4位，分离率分别为10.8%和12.6%m，年PA在所有分离细菌中也是居第肺炎）的全国医院感染研究数据显示，PA这一点在呼吸系统感染更为突出，美国疾病预防控制中心（CDC，几乎翻18.1%比例从9.6%上升至—19752003年医院获得性肺炎（HAP）中PA的发生率在逐年升高，倍。了123%是最常见的革兰阴性需氧菌，占ICU感染病原学的流行病学调查结果显示，PA一项大规模）。8244/35790），也是最常见的从呼吸道分离出的细菌（31.6%（。即便得到有效的9.3%）的回顾性研究结果显示.PA分离率达美国一项关于呼吸机相关性肺炎（VAP。，直接病死率为32.0%~42.8%治疗，PA导致的感染总病死率仍髙达42.1%~87.0%家大型教13位；我国近期进行的18.6%，列第1PA2005年胡必杰等报道562例HAP中的分离率为2位。，居第的临床调查结果显示，PA的分离率为20.9%学医院HAP 的耐药率居高不下，位。二是PA的分离率为22.9%，居第22011年CARES研究也证实HAP中PA致病原中居前几位，同时对常用抗菌药物的耐药率逐在HAPSENTRY）显示，PA全球细菌耐药监测数据（年升高。对常用抗菌药物的耐药率保持在较高水平，但略年连续监测资料显示，PACHINET2005—2012中国29.1%，30.5%、30.8%42.8%、35.8%、30.5%、呈下降趋势。如亚胺培南的年度耐药率分别为31.0%、25.0%，，25.8%28.5%，24.5%、25.2%和29.1%，对美罗培南的年度耐药率分别为32.0%、34.1%， 1.5%。2012年分别达到1.8%和和27.1%，但其中全耐药（PDR）菌株数量显著增多，在2011年和，这一点在呼吸系22.1%对亚胺培南和美罗培南的耐药率达29.3%和CARES2011年研究也证实PA和70.7%PA对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别高达统感染中更为突出，我国HAP临床调查结果显示，PA对碳青霉烯类的耐药率。，远高于48.8%CHINET监测中各种标本分离菌中对PA年的中国CHINET资料显示2012PA 对于其他具有抗假单胞菌活性的药物敏感度也不容乐观，，19.8%，舒巴坦、头孢他啶、环丙沙星和哌拉西林--他唑巴坦的耐药率分别为13.5%阿米卡星、头孢哌酮。和、19.6%17.9%17.5% 1
铜绿假单胞菌感染分布和药敏分析
铜绿假单胞菌感染分布和药敏分析 余清源1，刘捷2 （1.利川市人民医院检验科，湖北利川445400 ; 2.利川市疾控中心，湖北利川445400 ） 摘要：目的分析利川市人民医院铜绿假单胞菌临床分离株的分布情况及其对常用抗菌药物的敏感性，为临床抗感染治疗提供依据. 方法药敏试验采用纸片扩散法，数据统计采用WHONET5.6统计软件处理。结果98珠铜绿假单胞菌中，来源于痰及咽拭子占73%，创口分泌物标本占18.9%，尿液标本占5.4%，血液标本占2.7%，科室分布主要见于重症医学科占29.7%，呼吸内科占18.9%。药敏试验结果显示对哌拉西林耐药率最高，达75%，对亚胺培南耐药率最低，为14.6%。分离到的98珠铜绿假单胞菌有3珠为泛耐药珠，占3.06%。结论临床分离到的铜绿假单胞菌主要来源于痰及咽拭子标本，以重症医学科和呼吸内科为主，耐药性严重，而且存在泛耐药株，因此在预防医院感染和临床抗感染治疗中，应根据药敏结果合理使用抗生素，减少耐药株的产生。 关键词铜绿假单胞菌标本分布耐药性 铜绿假单胞菌是革兰氏阴性非发酵菌，广泛分布于自然界，尤其是潮湿地带，在医院环境中也广泛分布，该菌为机会致病菌，但对抗菌药物有天然抵抗力，随着抗生素的大量使用，已成为院内感染的主要病原菌之一。其在不同地区医院间的耐药性相差较大,治疗所引起的感染非常困难。为了解本院铜绿假单胞菌的临床分布和耐药特征现状，为临床合理使用抗生素提供依据，本文对2012年1月~12月临床分离到的98株铜绿假单胞菌进行分析，现将结果报道如下。 1 材料与方法 1.1菌株来源收集2012年1~12月自本院住院患者送检的各种临床标本中分离到的铜绿假 单胞菌，去除同一患者重复菌株，共98株。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853，均来源于卫生部临检中心。 1.2培养基药敏试验用MH琼脂粉和尿培养使用的MAC琼脂粉均购自英国OXOID公司， 血琼脂平板经过质控株大肠埃希菌和铜绿假单胞菌验证均合格。 1.3抗菌药物药敏纸片哌拉西林、阿米卡星、亚胺培南、庆大霉素、头孢吡肟、替卡西林、 氨曲南、环丙沙星药敏纸片均购自英国OXOID公司。 1.4细菌鉴定细菌培养和鉴定严格按照《全国临床检验操作规程（第三版）》方法进行操 作，采用法国梅里埃VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定，鉴定值在95%以上，同时结合传统生化反应补充试验作出鉴定。 1.5药敏试验方法按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）2011年推荐的纸片扩散法测试 铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的敏感性。 1.6结果判读和数据分析药敏试结果依据CLSI 2011年标准判定耐药、中介和敏感。数 据统计采用WHONET 5.6统计软件处理分析。 2结果 2.1铜绿假单胞菌在临床送检的各类标本中的分布情况该院临床分离到的98株铜绿假单 胞菌主要来自痰液或咽试子、分泌物、脓液、尿液、血液等标本。其中痰液或咽试子标本中分离菌株最多，共72珠（占73%），分泌物标本19珠（占18.9%），尿液标本5珠（占5.4%），血液标本3珠（占2.7%）。 2.2铜绿假单胞菌在临床各科室的分布情况菌株分布于重症医学科29珠（占29.7%），
简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/7413417339.html, 简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法作者：马慧娟徐慧高宏 来源：《食品安全导刊·中旬刊》2019年第03期 引言 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），也称为绿脓杆菌，属于假单胞菌属。广泛分布于自然界（土壤、空气、水源等）及正常人皮肤、肠道和呼吸道，大小为（1.5～3.0）μm×（0.5～0.8）μm，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。该菌在普通培养基上生长良好，专性需氧，菌落形态不一，多数直径在 2～3 mm，边缘不整齐，扁平湿润。在血琼脂平板上形成透明溶血环。铜绿假单胞菌是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。 目前检测铜绿假单胞菌的标准中采用的主要是传统生化方法，包括分离培养、生化鉴定等，不能实现大批量水样的快速检测。近几年，随着科技的发展，检测铜绿假单胞菌的方法多种多样，本文对近年铜绿假单胞菌检测技术进行综述，为铜绿假单胞菌的快速、准确检测研究技术提供参考。 铜绿假单胞菌检测技术 国标滤膜法 检测桶装水中铜绿假单胞菌的方法是GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》。铜绿假单胞菌产色素分为三种：产绿脓菌素，产青脓素，产红脓素;铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长;具有氧化酶，可以使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物：可以产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物;根据这些生化特性，通过滤膜过滤将铜绿假单胞菌富集到CN琼脂上，再用生化试剂管进行生化鉴定。也可以用VITEK 2 Compact 全自动细菌鉴定系统用于微生物鉴定，准确率高，可用于微生物实验室的日常检测工作。 实时荧光定量PCR检测 外毒素 A 基因在铜绿假单胞菌中高度保守，根据 GenBank 中铜绿假单胞菌外毒素A基因片段序列，设计特异性引物及TaqMan探针，并利用实时荧光 PCR技术，对目标靶序列进行 特异性扩增，建立了一套检测食品中铜绿假单胞菌的方法，特异性试验和灵敏性试验良好，该检测方法具有特异、快速的特点，能够满足检测要求，为食品中铜绿假单胞菌的快速检测奠定了基础。 LAMP检测
铜绿假单胞菌治疗策略
铜绿假单胞菌治疗策略 SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-
铜绿假单胞菌感染治疗策略 铜绿假单胞菌作为一种条件致病菌常定植于正常人的呼吸道,皮肤粘膜以及医疗设备等处。当患者免疫力低下,长期使用广谱抗生素,糖皮质激素及接受吸氧、气管插管机械通气时,铜绿假单胞菌大量繁殖,往往导致严重下呼吸道感染。因为铜绿假单胞菌的耐药及复发率高,故临床治疗较为困难。为更好地预防和控制医院感染，建议应采取以预防为主，加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测，及早进行菌株鉴定和药敏检测，避免大量和长期使用同一类型的抗菌药物，并规范抗菌药物的应用，具体措施如下： 一、阻断病原菌播散 医院加强对高危患者的病原菌监测，尤其将下列患者列为目标监测的重点：住在ICU、接受过广谱抗菌药物治疗或抗菌药物治疗效果不佳的患者，留置各种导管以及合并慢性基础疾病的患者。对目标监测患者进行主动筛查和定期监测，及时发现、早期诊断铜绿假单胞菌感染与定植患者。如：患者的呼吸道长期定植铜绿假单胞菌，到多家医院就诊导致其克隆传播，致使不同医院间存在同一克隆株的PA,因此，加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控，是控制克隆株播散的关键。有文献报导PA克隆朱主要在ICU病房流行，原因可能为ICU住院患者病情重、自身免疫力低下，多接受过侵入性治疗，因此，加强病区（尤其是重点科室）的消毒、隔离和监控工作，阻断外源性传播媒介，是有效控耐药PA在医院感染发生和流行的重要途径。 二、加强监测抗铜绿假单胞菌的药物及其敏感性
目前可用于治疗铜绿假单胞菌感染的药物基本有六类：青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类，氨基糖苷类和喹诺酮类，另外多黏菌素类(如黏菌素，多黏菌素B)以及磺胺类(甲磺灭脓、磺胺嘧啶银)主要用于铜绿假单胞菌的局部感染的治疗。多黏菌素B也用于难治性的铜绿假单胞菌感染的全身治疗。2011年中国C H IN E T铜绿假单胞菌耐药性监测显示铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率最低，为14．3%，对头孢哌酮和氨曲南的耐药率最高，分别为%和%，对其他抗菌药物的耐药率为19～30%，耐药率从低到高依次为：阿米卡星<头孢吡肟<头孢他啶<头孢哌酮一舒巴坦<环丙沙星<哌拉西林一他唑巴坦<庆大霉素<美罗培南<亚胺培南<哌拉西林<头孢哌酮<氨曲南。 （1）青霉素类药物包括哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、美洛西林、替卡西林、替卡西林／克拉维酸，其中以哌拉西林最常用于铜绿假单胞菌导致的肺部感染。 （2）头孢菌素类药物包括头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢匹胺是铜绿假单胞菌的敏感药物。头孢他啶是目前针对铜绿假单胞菌作用最强的药物，头孢吡肟对铜绿假单胞菌的作用与头孢他啶相似，头孢哌酮对铜绿假单胞菌有良好的抗菌作用，可用于铜绿假单胞菌感染的联合治疗用药，头孢匹胺对铜绿假单胞菌的作用与头孢哌酮和哌拉西林相似或略优。 （3）碳毒霉烯类药物该类药物抗菌谱特别广，抗菌活性强。治疗PA 感染应首选敏感药物碳青霉烯类，并且初始剂量宜大，以增强其迅速的杀菌能力和延长药物浓度依赖性的药物后效应。
桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较
1403 桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较 张淑红，吴清平，徐晓可，张菊梅，潘宝怡、彭飞艇 （广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,广东省微生物研究所，广东广州 510070） 摘要：分别采用传统国标GB/T 8538-2008方法、基于OprL 基因的PCR 方法和环介导等温扩增(LAMP)方法检测桶装水中的铜绿假单胞菌，比较三种方法的检测效果。结果显示，采集的46份市场水样中，用传统GB8538-2008方法检出了3份阳性样品，检出率为6.5%，检测时间至少2天；而PCR 和LAMP 方法都检出4份阳性样品，检出率为8.7%，并且可在24 h 内报告结果。PCR 和LAMP 方法与传统方法相比具有快速灵敏等优点，可用于大批量水样的快速检测和结果初筛。 关键词：铜绿假单胞菌；传统方法；PCR ；LAMP 文章篇号：1673-9078(2011)11-1403-1405 Comparison of Detection of Pseudomonas aeruginosa in Bottled Water ZHANG Shu-hong, WU Qing-ping, XU Xiao-ke, ZHANG Ju-mei, PAN Bao-yi, PENG Fei-ting (Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology, State Key Laboratory of Applied Microbiology (Ministry-Guangdong Province Jointly Breeding Base ),South China Guangdong Institute of Microbiology, Guangzhou 510070, China) Abstract: Three methods including traditional method GB/T 8538-2008, PCR assay based on OprL gene and LAMP assay were used to detect the Pseudomonas aeruginosa in bottled water and the results were compared. It was found that 3 bottled water samples (6.5%) were positive detected by GB8538-2008 method, while 4 bottled water samples were detected positive by both PCR and LAMP methods with the positive rate of 8.7%. As for the test of time, the traditional method need at least 2 days to finish, compared to less than 24h using PCR and LAMP methods. Therefore, PCR and LAMP assays were more rapid and sensitive than traditional method, which may be used for rapid detection of large quantities of water samples. Key words ：Pseudomonas aeruginosa ; Traditional Method; PCR; LAMP 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[1~3]。 近年来，随着全球范围内桶装饮用水消费量的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注[4~10] 。目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，PCR 和环介导等温扩增技术（LAMP ）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快速检测中。本文通过对市场销售的桶装水进行抽样检测，比较了传统培养法与PCR 和LAMP 方法的特点，为桶装饮用水的快速检测提供参考。 收稿日期：2011-08-01 基金项目：广东省科技计划项目（2009A080209002、2010B031000020） 作者简介：张淑红（1978-），女，硕士，助理研究员，研究方向：食品微生物安全检测技术 通讯作者：吴清平研究员 1 材料与方法 1.1 样品来源和标准菌株 所检测的46份水样为广州市场销售的各类品牌桶装饮用水（包括34份矿泉水、2份纯净水和10份山泉水），样品均在保质期内。 1.2 主要仪器 SIGMA1-15微量离心机、SIGMA 3K30台式高速冷冻离心机、PE2400 PCR 仪、电泳仪、UV Ⅰ凝胶成像系统、TOMYES-215日本全自动灭菌、移液器、恒温培养箱、FMC-1000恒温水浴锅、超净工作台等。 1.3 主要试剂 DNA Marker2000购自TaKaRa 公司；PCR Mix 购自Fermentas 公司；铜绿假单胞菌LAMP 试剂盒购自华峰生物科技有限公司；琼脂糖购自美国Promega 公司。LB 肉汤、CN 琼脂及配套试剂、乙酰胺肉汤、金氏B(King ′s B)培养基、氧化酶试纸等购自广东环凯微生物科技有限公司。 w w w .m o d e r n f o o d .c o m .c n