血管性血友病因子对冠心病发生影响的研究进展
出凝血23.1血管性假性血友病因子抗原(VWFAg)含量测定(精)
出凝血23.1血管性假性血友病因子抗原（VWF:Ag）含量测定（ELISA 法）（第四版） 出凝血23.2原理： 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法原理定量测定凝血因子VIII相关抗原(VWF:Ag)水平。包被抗人VWF:Ag抗体与待测血浆中VWF:Ag 结合，加入酶标抗体后形成复合物，后者与底物作用呈现颜色反应。490nm处测得的A值与待测血浆VWF:Ag含量成正相关。 出凝血23.3标本处理： 患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。 全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。-20℃可保存3个月。冷冻过的标本可再次冷冻，不影响本实验结果的准确性。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。 出凝血23.４试剂：购于上海太阳生物技术公司。内含可拆式包被反应条：8孔×12；酶标抗体1瓶；标准血浆6支；底物OPD片剂6
片； 10×稀释液1瓶；20×洗涤液1瓶；底物缓冲液1瓶；终止液：1瓶 出凝血23.5 仪器： BIOTEK EL312e型全自动酶标分析仪 LRH-150型生化培养箱 出凝血23.6 方法： 1）试剂重建：浓稀释液用前置于37℃水浴15分钟,然后用蒸馏水作10倍稀释；浓洗涤液用前置于37℃水浴15分钟,然后用蒸馏水作20倍稀释；每支标准血浆用2ml稀释液准确复溶（稀释了20倍，设定此时VWF:Ag含量为200%），取200ul 用稀释液做5次倍比稀释，得到200%、100%、50%、25%、 12.5%、6.25%六个标准点；将待测血浆用稀释液作40倍稀释 （25ul待测血浆+975ul稀释液）。 2）加样：每孔加不同浓度标准血浆或待测稀释血浆100ul，空白对照孔加稀释液100ul，37℃孵育75分钟。 3）洗涤：弃取反应孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3秒钟，甩干，反复3次后拍干。 4）加酶标抗体：每孔加酶标抗体100ul，37℃孵育45分钟。 5）洗涤：弃取反应孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3秒钟，甩干，反复3次后拍干。 6）显色：临用前每片OPD用5ml底物缓冲液溶解。每孔加底物液100ul，37℃孵育10分钟。
人(human)血管性血友病因子(vwf)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）血管性血友病因子（vWF） ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被血管性血友病因子（vWF）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管性血友病因子（vWF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。 上海笃玛生物科技有限公司
血管性血友病因子裂解酶抗原及活性与年龄及性别的关系分析
血管性血友病因子裂解酶抗原及活性与年龄及性别 的关系分析1 董宁征，季顺东，阮长耿 苏州大学附属第一医院，江苏苏州（215006） E-mail：changgengruan@https://www.360docs.net/doc/7816507893.html, 摘要：目的：通过检测健康体检者血浆中ADAMTS13的抗原及活性，比较不同性别和年龄组间ADAMT13的抗原及活性的差别，分析ADAMTS13与年龄及性别的关系，为ADAMTS13相关疾病的判断提供依据。方法：用Frests-VWF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13的活性；用夹心酶联免疫反应试剂盒（ELISA）检测ADAMTS13抗原含量。结果：各年龄组ADMATS13 的活性均值无显著差异；而ADAMTS13抗原量随年龄的改变而改变，21-40岁年龄组最高，为109.7 ± 23.3 % ，在60岁以上组及低龄组（16-20岁）显著降低；ADAMTS13的抗原及活性水平在男女性别间无显著差异。 关键词：血管性血友病因子裂解酶; 抗原; 活性；年龄；性别 血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13) 是一种调控血管性血友病因子（vWF）结构与功能的金属蛋白酶，其作用于vWFA2区 842位酪氨酸与843 位蛋氨酸之间的肽键，将VWF 单体裂解为相对分子量为170 × 103和140 × 103的两个片段[1]。 ADAMTS13活性的变化与多种生理病理状态下相关，ADAMTS13活性的缺乏，系血栓性血小板减少性紫癜（TTP）发病的主要机制，也是诊断TTP的重要标准。ADAMTS13抗原及活性在不同年龄正常人群的分布情况，及其与性别的关系，国内外研究资料甚少，国外仅有文献报道ADAMTS13活性与年龄的关系[2]。本文旨在研究ADAMTS13与年龄及性别的关系，为临床疾病的判断提供依据。 1. 对象及方法 1.1 研究对象 健康体检者共 87 例，年龄l6～78岁，平均年龄(45.3±21.4)岁；男性44例，年龄16～78岁，平均(45.0±21.6)岁；女性43例，年龄l7～75岁，平均年龄(42.6±21.2) 岁，均无血栓性疾病史。正常人混合血浆取自40例献血员。 1.2方法 1.2.1 血样标本采集和保存: 取静脉血, 使用0.129mol/L的枸橼酸钠抗凝，采集后均3000rpm离心5分钟，分离血浆，分装后冻存-30℃备用。 1.2.2 ADAMTS13 活性的测定[3] 应用Frets-VWF73试剂盒（购自日本Peptide Institute）检测ADAMTS13的活性。根据试剂盒使用说明进行操作，使用前依次加入37μl DMSO和117μl水溶解荧光标记的ADAMTS13底物Frets-VWF73，用反应缓冲液（5 mM Bis-Tris, 25mM CaCl2, 0.05%Tween-20, 1本课题得到国家自然科学基金资助项目（30470732）教育部博士点基金（k5122501）苏州大学附属第一医院血液学“135工程”重点学科开放课题基金（135XY0406）的资助。
血管性假血友病(VWD)
血管性假血友病(VWD) 什么是什么是血管血管血管性假血友病性假血友病性假血友病(VWD)(VWD)(VWD)？？ 血管性假血友病(VWD)是遗传性出血性疾病的最常见类型。该病患者的血液中帮助控制出血的一种名叫冯维勒布兰德因子(VWF)的蛋白质出了问题。 当一个血管受伤出血，冯维勒布兰德因子(VWF)帮助血液中名叫血小板的细胞结合起来形成血块来止血。血管性假血友病(VWD)患者没有足够的冯维勒布兰德因子(VWF)，或者它不能正常起作用。因此凝血和止血时间变长。 血管性假血友病通常没有其它出血性疾病严重。许多血管性假血友病患者可能不知道自己有这种病，因为他们的出血症状很轻。对绝大多数患者而言，此病对他们的生命影响很小或没有损害，除非严重受伤或需要手术。然而，所有形式的血管性假血友病都可能有出血问题。 据估计全世界大约千分之一的人口有血管性假血友病，但是因为许多人的症状非常轻，所以只有少数人知道他们有这种病，而大多数患者没有诊断。 血管性假血友病血管性假血友病的类型的类型的类型 血管性假血友病有三种主要类型。在每种类型中，此病可能分为轻度，中度，或重度。每种类型中出血症状可能差别相当大，部分依赖于冯维勒布兰德因子(VWF)的活性。 知道一名患者的血管性假血友病是什么类型很重要，因为各种类型的治疗是不同的。 第一种类型 第一种类型最常见。第一种类型患者的冯维勒布兰德因子(VWF)水平比正常人低。症状通常非常轻。然而，第一种类型的某些患者有可能严重出血。 第二种类型 第二种类型包含了冯维勒布兰德因子(VWF)结构上的一个缺陷。冯维勒布兰德因子(VWF)蛋白质不正常起作用，导致冯维勒布兰德因子(VWF)活性低于正常值。第二种类型有不同种类的缺陷。症状通常为中度。 第三种类型 第三种类型通常最严重。第三种类型患者的冯维勒布兰德因子(VWF)非常少或没有。症状要严重得多。第三种类型患者可能会肌肉和关节出血，有时没有损伤。 更多资料，请访问 https://www.360docs.net/doc/7816507893.html, ，中文资料请访问https://www.360docs.net/doc/7816507893.html,
简述血管性血友病
简述血管性血友病 *导读：鼻衄、牙龈出血、皮肤瘀斑常见，偶有血尿、胃肠道出血及颅内出血，关节出血罕见。外伤或手术后出血严重，且不易止血。女性月经过多。…… 【概述】 血管性血友病是常染色体不完全显性遗传性疾病。由于血管性血友病因子(vWF)缺乏或异常，临床表现为出血、出血时间延长。 【诊断】 一、病史及症状 ⑴病史提问：注意发病的年龄、出血的诱因、出血程度及部位，出血的程度和频度是否随年龄的增长而趋于减轻。女性是否有月经过多或产后出血过多史。 ⑵临床症状：鼻衄、牙龈出血、皮肤瘀斑常见，偶有血尿、胃肠道出血及颅内出血，关节出血罕见。外伤或手术后出血严重，且不易止血。女性月经过多。 二、体检发现 皮肤粘膜可见瘀斑，创伤部位渗血，如有关节出血可见关节肿胀，压痛，活动障碍。 三、辅助检查 1. 血象：红细胞、白细胞、血小板计数及形态正常。
2. 出血时间延长或阿斯匹林耐量试验阳性。 3. 活化的部分凝血活酶时间延长或正常。 4. 血小板粘附率降低或正常(64.2%±8.3%)。 5. 因子VIII凝血活性测定降低或正常。 ６.vWF抗原(vWF：Ag)减低或正常。 ７.血管脆性试验阳性。 四、鉴别诊断 应与血小板无力症、巨大血小板病、血友病等凝血因子缺乏性疾病鉴别。 【治疗措施】 1. 忌服影响血小板功能的药物：阿斯匹林、潘生丁、消炎痛等。 2. 替代治疗：输注冷沉淀物。用法、剂量参照血友病甲的治疗方法。 3. 6-氨基己酸：75mg/kg，口服，1次/6h，共7～10d。或4～6g，静滴30min，3～4次/d。 4. DDAVP(1-去氨-8-D-精氨酸血管紧张素)：0.3mg/kg，溶于50ml 盐水，静脉注射15min，3～4次/d。II B型血管性血友病禁用。 5. 局部出血：压迫止血为主。
血管性血友病
血管性血友病 血管性血友病 血管性血友病(vonWillebranddisease，vWD)分为两种：遗传性血管性血友病(cvWD)和获得性血管性血友病(avWD)。遗传性血管性血友病是一种常染色体遗传性疾病，多为显性遗传。以自幼发生的出血倾向、出血时间延长、血小板黏附性降低、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集缺陷，及血浆vWFAg缺乏或结构异常为特点。在遗传性出血性疾病中，其发病率可能仅次于血友病，约为4～10/10万，但在我国本病的发生率较低。获得性血管性血友病可在多种疾病的基础上发生，少数患者可无基础疾病。 【病因与发病机制】 vWF主要存在于内皮细胞、巨核细胞及血小板，生理功能：①与FⅧ：C以非共价键结合成vWF-FⅧ：C复合物，即FⅧ。vWF增加FⅧ：C稳定性、防止其降解，并促进其生成及释放;②vWF在血小板与血管壁的结合中起着重要的桥梁作用。血小板活化时，vWF的一端与血小板糖蛋白Ⅰb结合，另一端则与受损伤血管壁的纤维结合蛋白及胶原结合，使血小板能牢固地黏附于血管内皮；③vWF 可与血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa结合，诱导血小板聚集。 vWF基因位于12号染色体短臂末端，当其缺陷时，vWF生成减少或功能异常，伴随FⅧ：C中度减低，血小板黏附、聚集功能障碍。 获得性血管性血友病涉及多种发病机制。最常见的是产生具有抗vWF活性的抑制物，主要为IgG；其次为肿瘤细胞吸附vWF，使血浆vWF减少；另外，抑制物可与vWF的非活性部位结合形成复合物，加速其在单核-巨噬细胞系统的破坏。 【临床表现】 出血倾向是本病的突出表现。与血友病比较，其出血在临床上有以下特征：①出血以皮肤黏膜为主，如鼻出血、牙龈出血、瘀斑等，外伤或小手术（如拔牙）后的出血也较常见；②男女均可发病，女性青春期患者可有月经过多及分娩后大出血；③出血可随年龄增长而减轻，此可能与随着年龄增长而vWF活性增高有关； ④自发性关节、肌肉出血相对少见，由此致残者亦少。 【实验室检查】 （一）出血时间 BT延长是vWD最常见的实验室异常，阿司匹林耐量试验多呈阳性。口服阿司匹林0.6g后2小时及4小时测BT，比服药前延长2分钟以上为阳性。 （二）血小板黏附试验 多数患者血小板黏附功能减低。 （三）瑞斯托霉素血小板聚集试验(RIPA) 患者血小板对瑞斯托霉素的诱导不产生聚集，为vWD的特异性诊断试验之一。 （四）vWF抗原(vWFAg)测定 在多数vWD患者降低。 （五）FⅧ：C活性测定 多数患者FⅧ：C活性中度降低。 【诊断与分型】 （一）诊断要点
人血管性血友病因子 瑞斯托霉素辅因子 (VWF)
人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF) 酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 产品编号：E0833h
自备物品 1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、微量加液器及吸头，EP管 3、蒸馏水或去离子水，滤纸 标本的采集及保存 1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4g离心20分钟，取上清即可 检测，或将上清置于-20保存，但应避免反复冻融。 2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于 1000 或-80 g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20保存，但应避免反复冻融。 4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10倍，如：稀释10倍，取100uL血清或血浆加入 900uL样品稀释液。标本使用0.1 M 的PBS稀释（PH=7.0-7.2）。 注：以上标本均应密封保存，4不应超过1个月，-80 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100温育1小时。 5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。 6、每孔加底物溶液90避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当 标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。 7、每孔加终止溶液50 '(。 注： 1、试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 2、加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不 同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。