人血管性血友病因子 瑞斯托霉素辅因子 (VWF)

人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF) 酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书

产品编号：E0833h

自备物品

1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热）

2、微量加液器及吸头，EP管

3、蒸馏水或去离子水，滤纸

标本的采集及保存

1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4g离心20分钟，取上清即可

检测，或将上清置于-20保存，但应避免反复冻融。

2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于 1000

或-80

g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20保存，但应避免反复冻融。

4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10倍，如：稀释10倍，取100uL血清或血浆加入

900uL样品稀释液。标本使用0.1 M 的PBS稀释（PH=7.0-7.2）。

注：以上标本均应密封保存，4不应超过1个月，-80

溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100

，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37

（临用前配制），酶标板加上覆膜，37

/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100温育1小时。

5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6、每孔加底物溶液90避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当

标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。

7、每孔加终止溶液50

'(。

注：

1、试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。

实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2、加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不

同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。

3、温育：为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发；

洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4、洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中

吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。

5、试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁

或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10

值扣除空白孔

值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如 curve expert 1.3，根据样品

值计算出标准

曲线的回归方程式，将样品的

由于实验者的操作失误或试剂盒保存不当导致结果不佳，不属产品质量问题。

4、在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的

污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

5、试剂盒保存：请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20

，长期保存则置于-20

，避免潮湿。

6、浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

7、刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

8、有效期：6个月。

9、本操作说明适用于48T试剂盒，但48T试剂盒所有试剂减半。