老垃圾填埋作业方案

老垃圾填埋作业方案
老垃圾填埋作业方案

老垃圾填埋作业方案

XXXXX生活垃圾处理工程

老垃圾填埋作业方案

一、填埋作业管理

1、垃圾卸料、摊铺与压实

垃圾通过转运车辆送至填埋作业面卸料,采用轮胎式装载机将垃圾摊铺成厚度大约为1m 的层,采用挖掘机机把松散垃圾逐层压实,压实密度≥1.0t/m3(由于垃圾堆体存在自身压实与沉降,计算使用年限时最终压实密度以1.2t/m3计)。卸车作业“监督员”组织卸车作业。挖掘机操作员和工人应协助现场指挥员指引车辆进行卸车作业。摊铺过程中应保证装载机机始终处于垃圾层1m之上。

2、填埋作业方式的选择

填埋作业一般“堆坡法”和“填坑法”两种方法可供选择。

采用“堆坡法”进行填埋作业时,使用装载机压实可取得更好的压实效果;摊铺作业更易控制;可有效避免垃圾散落现象。缺点是装载机工作量大,所有垃圾须自下向上堆起,作业负荷高。

填坑法作业自上而下进行,装载机作业负荷较低,但对摊铺、压实作业控制要求较高,若摊铺作业控制不好,易造成垃圾散落。在填埋作业过程中,可根据实际情况灵活选择填埋作业方式。

3、填埋作业单元

根据填埋垃圾量的大小,通过选择填埋作业单元的大小及形状,最大限度地减少暴露作业面的大小,减少臭气、蝇鸟以及渗沥液的产生量,减少覆盖材料的使用量,尽可能降低填埋作业对环境的影响。

4、库底初始填埋

在填埋库区启用时,距场底1~3m的库区垃圾为底层填埋。为了保护底部HDPE膜不被垃圾体中的尖状物刺破或损伤,以及保护渗滤液导排层,设计采用以下方式进行库区启用时的底层填埋:(1)对垃圾进行适当简易分拣,将其中20cm以上的长硬尖锐物,如钢筋、水管、长木棍等剔除;

(2)从作业平面由高到低一次性堆放大于1~3m厚度的垃圾,用装载机向前方推铺,但转载机不准直接碾压在膜的保护层上;

(3)不用压实机压实,仅用装载机摊平即可。

5、垃圾翻运临时作业便道

在垃圾填埋前,在库区库底表面修筑作业便道以满足垃圾运输。将新建库区已完成的与未做的库底接头处预留4~6m,在预留4~6m 处的库底表面上铺设一层土工网或土工膜,长度不少于8m,在上面填60cm素土加上15cm泥结碎石压实做成临时翻运垃圾的便道。将超出的2m土工网或土工膜翻起,做为垃圾体与临时便道的隔离设施,以便垃圾回填完过后,后期库底的施工,有利于清除临时便道不影响后期施工的衔接。填埋作业过程中,应对由于不均匀沉降造成的便道破坏进行及时修复。库区临时作业便道应满足全天候作业的要求。

二、覆盖与土方平衡

垃圾填埋压实后,为保持好的环境,应对作业面进行及时覆盖。对需要继续进行填埋的作业面,每日填埋作业结束后,使用PE 膜或编织布进行覆盖。对达到填埋层标高,暂不进行填埋作业的区域进行

中间覆盖,中间覆盖采用20~30cm 粘土。在下一层填埋作业时,前一层的覆盖土应被刮除。这样做的目的是,一方面可以重复利用一部分覆盖用土,节省土源,增加有效填埋库容;另一方面可以保证渗沥液下渗及填埋气体上溢。对较长一段时间不进行填埋作业的区域,为强化雨污分流效果,除使用粘土进行覆盖外,需要增加PE 膜进行覆盖。

三、填埋场的雨污分流

采用合理的雨污分流管理措施,尽可能减少填埋场渗沥液产量,降低填埋场运行成本,是现代化填埋作业的关键点之一。

实现合理的雨污分流,主要做到以下三点:

(1) 采用合理的填埋作业发展规划,堆体保持足够的排水坡度,为地表水导排打好基础;

(2) 及时进行日覆盖、中间覆盖与封场生态修复,减少暴露面积,分流进入库区地表水;

(3) 修建永久性、半永久性、临时性地表水导排沟渠或排水管,顺利导排进入库区的地表水。

四、填埋作业设备

填埋作业设备可以分为两种类型:一线作业设备及服务设备。一线作业设备通常包括垃圾摊铺作业设备及开挖设备。摊铺作业设备用于垃圾的推平、压实、堆体修角、覆盖设备;开挖设备用于开挖土方、运输土方至填埋作业区。服务设备,如洒水车、洒药车等。

1、填埋作业设备类型

垃圾填埋作业通常需要几种不同类型的重型设备。每种设备均可承担一项或几项填埋作业工序,但没有一种设备可承担填埋作业的全部工序。规模较小的填埋场(≤300t/d)可适当配备一种或几种作业设备完成作业任务,较大规模的填埋场应配备最适合各道填埋作业工序的专用设备。填埋场通常用的作业设备有:压实机、装载机、挖掘机、洒水车以及多用机械,对各种填埋作业机械详述如下。

(1)压实机

垃圾压实机是填埋场里重要的专用设备。其主要功能为:摊平、压实、修齐填埋作业面。垃圾压实机可实现对填埋垃圾的破碎与压实。最理想的垃圾填埋作业工序为:装载机将垃圾从倾卸点推平摊铺至填埋作业面上,形成约1m 厚的虚铺垃圾层,垃圾压实机进一步压实垃圾。但压实机实际的工作效率与实际状况有关。

(2)挖掘机

在填埋场里,挖掘机通常用于沟槽、土坑开挖,排水管安装。挖掘机也可以用以移动或装运垃圾、岩石或其它材料。经改装后可用作叉车,用于装载大件物品。

(3)轮式装载机

轮式装载机是填埋场中配备的机动性较强的多用机械。其可用于开挖、运输、装载覆盖材料。在安装了快速装配系统后,通过更换前斗型式,轮式装载机可完成多种功能:

①装载功能:使用装载机前斗,完成开挖、运输、装载功能。

②扫路功能:通过安装旋转扫路设备,用于清扫道路及地坪。

(4)洒水车

洒水车是大部分填埋场均配备的机械设备。其主要功能有:

①道路及场地降尘,使用时应当注意,少量多次喷洒效果要比多量一次喷洒降尘效果更好。

②回填作业时调节土的含水率。

③协助进行场地消防

五、其它作业要求

①临时遮盖

为了减少渗滤液的产量,和防止恶臭扩散,在暂时不需要作业的填埋体表面上加临时遮盖物(HDPE膜),尤其是雨季应及时进行覆盖,将表面清水导入边坡排水沟,减少渗滤液产生量。

②堆体外边坡封盖

垃圾堆体在不断升高的过程中,垃圾堆体的外坡面需要分期进行防渗处理。根据填埋作业计划,每5.0m高的垃圾填埋完成后,即进行边坡临时封场及生态恢复。

③稳定性监测

为了保证填埋边坡和填埋场的稳定性,在适当高程上设置堆体稳定监测点,以及时观测垃圾堆体的位移、沉降指标及垃圾堆体的浸润线;在填埋标高达一定高度时应对填埋场进行勘探,测取必须的物理力学指标及堆体内的水位线,对填埋场的稳定性进行全面分析,并决定是否采取修整措施。

感受态细胞的制备步骤和原理

实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37℃,180rpm培养过夜。 [让菌复苏,进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37℃250rpm大约小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变异。] 3取培养物置于40mL的灭菌离心管中,冰浴10min,4000rpm4℃离心 10min,弃上清。(将所有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL100mmol/L冰冷CaCl2中,轻吹,4℃30min,4000rpm 离心5min弃上清。 [细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA),经短时间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一

定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)]5菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 6取感受态细胞100uL,加入2uLpET-21a质粒,冰浴30 min受体菌:感受态细胞100uL,加入2 uL无菌双蒸水阴性对照:LCaCl2溶液100uL,加入2 uL阴性对照 [第一个阴性对照是为了验证LB中的抗生素有活性;第二个阴性对照是为了验证CaCl2溶液和pET-21a质粒未被污染。] [冰浴是为了降低细胞代谢率,防止细胞大量死亡。] 7热激42度,90s 【在低温处理后,热激,可以使细胞壁热胀冷缩,再低温,使细胞壁上黏附的质粒进入细胞体内。】 8冰浴2 min 9加入800 uL无抗生素的LB,37℃复苏1h 【用LB复苏细胞,使细胞恢复活力,从而使细胞中的质粒表达抗抗生素的基因,只有这样才能使转化成功的细菌在有抗生 素的LB平板上生长。】 10取100ul细胞直接在含50ug/mLCarbenicillin(羧苄西林)的LB培养基上铺平板,将平皿放置37 oC温箱30min至液体被吸收。倒置平皿37 oC培养过夜,出现菌落。 【这些菌落为转化成功的菌落,而对照组应该没有菌落。在目的菌落的旁边有可能出现卫星菌落,这是因为亩的菌落的抗性基因似的菌落周围的抗生素失效,长出了转化为成功的菌落。用羧苄西林因其对酸稳定、不易被细菌降解,所以可以降低卫星菌落的数量。

垃圾填埋场工程施工组织设计方案

垃圾填埋场工程项目施工组织设计方案

第一章编制说明 一、编制依据 1、某某省某某县生活垃圾卫生填埋场(二次公告)工程总承包施工招标文件。 2、某某省某某县生活垃圾卫生填埋场(二次公告)工程设计图纸。 3、现行国家有关施工规范、验收标准。 4、现行国家及地方有关施工管理规定。 5、现场实地踏勘情况及业主提供的相关资料。 6、本公司质量体系文件及技术、设备装备能力。 二、编制目标 1、质量目标 某某省某某县生活垃圾卫生填埋场(二次公告)工程施工质量达到现行国家施工验收规范合格标准。 2、安全目标 ①负伤频率≤3‰,重伤频率≤0.3‰,杜绝重大伤亡事故。 ②按照国家建筑施工安全检查标准(JGJ59-99)和某某县有关规定,确保施工现场安全达标合格率100%。 3、工期目标 经公司反复权衡,既要体现工期快,有一定的先进性,但也不能脱离现实的客观实际情况,本工程按业主要求准时投入施工,计划日历总工期381日历天,计划于2016年11月14日开工,2017年11月30日完工,工程施工总工期为381日历天。具体工期安排详见《施工控制进度计划网络图》。 第二章施工准备及布置 一、施工准备 施工前的准备工作是保证施工顺利进行的基本前提,按规定,如果施工前的准备工作经监理工程师审核后而未达到合同规定的要求,则不予批准开工。因此,必须认真按规定要求做好。准备工作的内容主要包括:组织准备、技术准备、材料准备、劳动力准备和施工机具准备等方面。 二、组织准备 我公司针对此工程严格实行“项目法”施工,实行项目经理责任制,项目经理将对

质量、工期、安全、成本及文明施工全面负责。各施工管理职能部门在项目经理部的直接指导下做到有计划的组织施工,确保工程质量、工期、安全等方面达到目标要求。 项目管理机构组成表 A、项目经理:

(完整版)XX垃圾填埋场施工方案

目录 1、投标依据 (1) 2、工程概况 (1) 3、质量、安全、工期目标 (9) 4、施工部署 (10) 4.1资源配置 (10) 4.2施工技术准备 (13) 4.3现场临时用水 (14) 4.4现场临时用电 (14) 4.5临时设施 (14) 4.6配合比试验 (15) 5、施工方案 (15) 5.1施工方案的选择 (16) 5.2施工程序 (17) 5.3施工方法 (17) 6、分项工程技术措施 (43) 6.1边坡修整与库底平整 (43) 6.2盲沟、石笼的施工 (44) 6.3防渗工程的施工 (45) 6.4坝体工程 (45) 6.5调节池的施工 (46) 6.6安装工程 (46) 7、质量保证措施 (47) 7.1HDPE膜焊缝测试规则 (47) 7.2管理制度 (48) 8、安全生产保证措施 (51) 8.1工作目标 (52) 8.2安全管理制度 (52) 8.3“三宝”安全保护措施 (54) 8.4施工用电 (55) 8.5中小型机具 (57) 8.6防火安全 (57) 8.7HDPE膜施工专项安全防护措施 (58) 9、保证工程施工工期的措施 (59) 10、冬、雨季施工措施 (61) 11、文明施工措施 (62)

1、投标依据 1.1 招标文件; 1.2 工程施工图纸; 1.3 相关标准、规范、规程; 1.4 答疑书; 2、工程概况 2.1 工程名称:临沧县城市垃圾填埋工程; 2.2 建设地点:临沧县县城东北郊老吴山; 2.3 设计单位:云南城乡规划设计研究院; 2.4 投标单位:云南省城镇建设总公司; 2.5 设计规模:本工程设计规模为150t/d。 2.6 填埋高度及使用年限。填埋高程1570m(标高为假定高程),埋填场容量为175万m3,埋填年限16年。

垃圾填埋场处置工程安全生产和环境保护措施.

安全生产和环境保护措施等 9.1.安全生产措施 9.1.1.分外安全措施 本工程在垃圾挖运过程中会有大量的垃圾填埋沼气放散,同时施工、办公场所均集中垃圾填埋场区域内,必须采取完善的防火防爆防中毒措施才能保证安全,使施工正常进行。 a)安全作业方式 c)设置甲烷气体监测仪 在施工作业区的合适位置布设甲烷监测报警仪(3台),随时监测甲烷含量并报警。 d)办公室及生产车间内配备通风设施 在土建施工、机械车辆运动过程中,会使地面产生裂缝,甲烷气体会沿此裂缝四处逸散,由于办公室及生产车间就座落在垃圾填埋场区域内且其房间气流不畅会使甲烷气体聚集,由此可能导致人员缺氧或火灾爆炸事故。 为此,办公室及生产车间必须有完善的通风措施。拟按每小时换e)严格管理 在不影响施工的前提下,施工用房与施工点须保持足够的距离。 照明和动力均采用防爆型电器。区内严禁烟火等明火火源,从而避免点燃垃圾与甲烷气体。针对填埋场有起火、爆炸的危险,应设置防火标牌;车辆出入应设置行车安全标牌和限速标牌;配电箱处设置高压警示标牌等。 f)配备消防器材 除设计的消防系统外,在办公及主要生产场所设置便携式二氧碳灭火器。 g)加强安全教育与宣传

垃圾填埋场是一分外的施工作业场所,针对垃圾填埋场填埋沼气的分外性进行防火、防爆、防中毒的安全教育与宣传,使员工在主观上予以重视。 h)防洪措施 沿山坡建排水沟并保证其水流通畅,将雨季山洪顺利导排,以避免其影响施工作业区,同时保护区域内的设施和设备。 i)应急措施 在作业区设置相应的事故应急照明设施,并设置必备的呼吸器、急救药品与器械等事故应急器具。9.1.2.常规安全措施 9.1.2.1.安全生产目标 9.1.2.2.安全保证体系 为确保本工程的施工安全,我们根据本工程的特点,建立有用的安全保证体系,除公司已有的机构外,项目经理部设立安全管理小组,并配备持证上岗的专职安全员,从而形成一个自上而下的健康的安全保证体系。项目经理部的安全管理小组负责工地日常的安全工作,定期组织安全检查,查出隐患,及时发出整改通知,并指导班组安全员的工作。详尽安全保证体系如下: a)建立完善有用的安全管理系统,切实行使安全监察职能。项目经理部配备一位有安全工作经历,且熟悉施工工作的同志任安全主任,负责抓安全;各作业队同时也设安全主任、安全监督检查员、班组设(兼)职安全员,使安全工作随时有人抓、有人管,处于受控状态中。 b)c)认真落实施工现场安全防护设施的投入,确保其功能正常发挥,并为现场职工(包括监理人员)提供必要的安全防护和劳动保护用品,使安全生产建立在科学的管理、优秀的技术、可靠的安全技术措施及防护设施的基础上。 d)e)认真实行标准化作业,严格施工纪律和劳动纪律,切实杜绝违章指挥和违章操作。加强安全生产教育,使每个管理人员和施工人员牢靠树立“安全第一”的思想,自觉遵守安全生产法令和各项规章制度。对进场新工人、内部调换工种人员,必须按公司有关规定进行“三级教育”和技术培训,经考试合格后方

大肠杆菌感受态细胞制备

大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板∑恐? 5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时 6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次) 7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时) 8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天) 9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至离心管的2/3体积。 10. 照上面步骤重复离心,小心弃去上清液 11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞 12. 离心,弃上清液 13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞 14. 照上面步骤离心,小心弃去上清液(沉淀可能会很松散) 15. 用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml 16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管,于-80°C保存 转化方法: 1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ,冰上培育约5分钟

2. 添加1-3μl DNA ,冰上培育约5分钟 3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器(无泡)中 4. 加载P1000,准备好300μl LB 或 2xYT 5. 对电穿孔容器进行脉冲(200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏)(检查时间常数,应该在3以上) 6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中 7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板∑恐? 5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时 6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次) 7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时) 8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天) 9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至离心管的2/3体积。 10. 照上面步骤重复离心,小心弃去上清液

垃圾填埋场综合治理方案

垃圾填埋场综合治理方案 (臭味、苍蝇) 目前随着城市化进程的推进,人们在生产活动过程中每天都产生大量的生活垃圾,日常生活垃圾通过垃圾箱、垃圾中转站等环节由专人收集,用专车送往指定的垃圾填埋场进行统一处理。 新鲜垃圾含水量较高,在进场堆放后会迅速发热、产生氨气、硫化氢、甲硫醇以及其他有机物质中蛋白质受杂菌所分泌的脱氨酵素、脱羧酵素、分解酵素等破坏而产生的腐烂和恶臭味。合适温度下,垃圾在面层下25-35公分大量孳生蝇蛆。蝇蛆即苍蝇幼虫,生产周期有三个龄期:1龄幼虫体称蛆,仅有后气门。蜕皮后变为2龄,有前气门,后气门有2裂。再次蜕皮即为3龄,后气门3裂。蝇蛆体色透明、乳白色变为乳黄色,直至成熟、化蛹。3龄幼虫呈长圆锥形,前端尖细,后端呈切截状,无眼、无足。蝇蛆的生活特性是喜欢钻孔,畏惧强光,终日隐居于孳生物的避光暗处。它具有多食性,形形色色的垃圾腐败发酵有机物,都是它的美味佳肴。最适环境温度为34~40℃,发育期可缩短为3~3.5天;温度25~30℃时,发育期为4~6天、[关注在垃圾内部发酵温度]:垃圾场就具备了让蝇蛆适宜成长的条件。蝇蛆的重要生态之一就是食杂性,而且在栖息处就地取食。经现场调查我们发现,在垃圾场湿温度合适处1平方米区域蝇蛆和蛹就多达上万个,而在垃圾箱里,蝇蛆通常分布于具有较大空隙的墙角、墙根处。 掌握蝇蛆的生长特性,亦可有效用于指导制定实际杀灭方案。蛹,

蛹壳内不断进行变态,一旦苍蝇的雏形形成,便进入羽化阶段。羽化时,苍蝇靠头部的额囊交替膨胀与收缩,将蛹壳头端挤开而爬出,穿过垃圾层到达表面。2~3小时后,两翅方能飞翔,开始源源不断飞向地面,人们所看到垃圾场漫天的苍蝇飞舞景象就这样形成了。 因此,垃圾场灭苍蝇首先要解决苍蝇的源头问题,配合杀灭成蝇工作的同步实施才会有效控制好苍蝇密度,同时解决好恶臭味、解决腐败菌也是有效方法之一。在此,向您提出以下几点控制建议: 一、控制臭源产生 臭源是垃圾中腐败菌分解有机物质所产生的恶臭味,建议使用分解酵素、蛋白酵素、化醣酵素、脂肪酵素、核酸酵等活性足的菌种来控制恶臭味、飞彪牌生物除臭剂就利用复合有益菌来控制腐败菌生产的原理来达到快速除臭的目的。 使用方法:在新鲜垃圾堆放后在垃圾上足量喷洒生物除臭剂,使之形成菌群网膜来分解臭源物的产生。[注]每天的新鲜垃圾堆放完后必须用喷水车全面喷洒下、湿透为止。陈旧垃圾每7-10天喷洒一次。 二、控制苍蝇幼虫 垃圾的有机腐烂物质给苍蝇提供了繁殖条件、利用飞彪牌生物除臭剂来控制源头能打断苍蝇的代谢功能、中断其变态过程、使苍蝇不能繁殖、达到大幅减少苍蝇的目的。 同时飞彪牌杀虫颗粒剂亦可有效控制苍蝇幼虫。杀虫颗粒剂是采用多孔材料利用物理方法配制而成、经过先进的生产工艺形成小颗粒

大肠杆菌感受态细胞的制备实验具体步骤及说明

大肠杆菌感受态细胞的制备实验具体步骤及详细说明 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。 具体步骤 1、从37℃培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm),转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验,1 OD600约含有大肠杆菌DH5α 109个/mL。 2、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50 ml聚丙烯管中,在冰上放置10 min,使培养物冷却至0℃。 3、于4℃用Sorvall GS3特头(或与之相当的转头)以4 100 r/min离心10 min,以回收细胞。 4、倒出培养液,将管倒置1 min以使最后的痕量培养液流尽。

5、每50 ml初始培养液用30 ml预冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2,20 mmol/L CaCl2)重悬每份细胞沉淀。 6、于4℃用Sorvall GS3转头(或与之相当的转头)以41 00 r/min离心10 min,以回收细胞。 7、倒出培养液,将管倒置1 min以使最后的痕量培养液流尽。 8、每50 ml初始培养物用2 ml用冰预冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重悬每份细胞沉淀。 9、此时,可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验,也可以将细胞冻存于- 70℃。 注意事项 1. 为达到高效转化,活细胞数务必少于108个细胞/mL,对于大多散大脑杆菌来说,这相当于OD值为0.4左右。为保证细菌培养物的生长密度不致过高,可每隔15-20 min测定OD600值来监测,用监测的时间及OD值列一个图表,以便预测培养物的OD600值到0.4的时间,当OD600值达到0.35时,收获细菌培养物。 2. 在菌株与菌株之间,OD值与每毫升中活细胞散间的关系变化很大,因此有必要通过漶量特定脑杆菌的生长培养物在生长周期的不同时相的OD600值,并

详细垃圾填埋场施工方案

榆林榆横工业区垃圾场防渗系统工程 施 工 组 织 设 计 工程公司

目录 一、编制依据..................................... 错误!未定义书签。 二、工程概况..................................... 错误!未定义书签。 三、施工组织机构及职责........................... 错误!未定义书签。 1、施工组织机构.............................. 错误!未定义书签。 2、项目部职责及项目管理...................... 错误!未定义书签。 四、施工准备..................................... 错误!未定义书签。 1、队伍及设备准备............................ 错误!未定义书签。 2、施工技术准备.............................. 错误!未定义书签。 3、施工现场的准备............................ 错误!未定义书签。 五、施工布署..................................... 错误!未定义书签。 一)、部署原则................................ 错误!未定义书签。 二)、施工安排................................ 错误!未定义书签。 六、主要分项工程施工方案及措施................... 错误!未定义书签。 A测量放线................................... 错误!未定义书签。 B机械土石方开挖............................. 错误!未定义书签。 C回填土石方................................. 错误!未定义书签。 D钢筋分项................................... 错误!未定义书签。 E砼分项..................................... 错误!未定义书签。 F模板分项工程............................... 错误!未定义书签。 G脚手架工程................................. 错误!未定义书签。 H垃圾坝施工要点............................. 错误!未定义书签。

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 ?1、从新活化的E.coli DH5α平板上挑取一单菌落,接种于3~5ml LB液 体培养中,37℃振荡培养至对数生长期(12h左右); ? 2、将该菌悬液以1:100~1:50转接于100ml LB液体培养基中,37℃振 荡扩大培养,当培养液开始出现混浊后,每隔20~30min测一次OD600,至OD600为0.3~0.5时停止培养,并转装到1.5 mL离心管中; ? 3、培养物于冰上放置20min; ? 4、 0~4℃,4000g离心10min,弃去上清液,加入1 mL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞, 冰浴20分钟; ?5、0~4℃, 4000g离心10min,倒净上清培养液,再用1.0 mL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞,冰浴20min; ? 6、 0~4℃, 4000g离心10min,弃去上清液,加入100 μL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞,冰上放置片刻后,即制成了感 受态细胞悬液; ? 7、制备好的感受态细胞悬液可直接用于转化实验,如果在4℃放置 12~24h,其转化效率可以增高4~6倍;也可加入占总体积15%左右 高压灭菌过的甘油,混匀后分装于1.5ml离心管中,置于-70℃条件下, 可保存半年至一年。

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 1.前夜接种受体菌(DH5α或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中 37℃摇床培养过夜(约16小时); 2 .取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振 荡培养约2.5-3小时(250-300rpm); 3 .将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷;以下步骤需在超净工作台和冰上 操作; 4 .吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟; 5 .4℃下3000 g冷冻离心5分钟; 6 .弃去上清,加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动 打匀,使细胞重新悬浮,在冰放置20分钟; 7 . 4℃下3000 g冷冻离心5分钟; 8 .弃去上清,加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动 打匀,使细胞重新悬浮; 9 .细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂(15% - 20%甘油)后超 低温冷冻贮存备用(-70℃)。 注意事项 1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使 用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml); 2 .所有操作均应在无菌条件和冰上进行; 3 .经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的 推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的 活菌数随时间延长而减少造成的); 4 .化合物及无机离子的影响:在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子 (如Mn 2+或Co 2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高(100-1000倍); 5 .所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能 大大降低细菌的转化效率; 6 .质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的DNA; 7 .一定范围内,转化效率与外源DNA的浓度呈正比;

高安屯垃圾填埋场垃圾渗滤液处理系统整改方案

.. 高安屯垃圾填埋场垃圾渗滤液处理系统 整 改 方 案

2015年4月21日 资料word .. 一、项目简介 1.1 项目简介 3/d,分高安屯垃圾填埋场垃圾渗滤液处理系统设计处理水量550m 两期建设,分别于2005年和2009年建成投入使用。采用“生化+膜过滤”处理工艺,调节池出水经反硝化和硝化两步生化处理后,再经超滤、纳滤及反渗透三步膜法处理,处理后的水质达到《北京市水污染物排放标准》三级限制。工艺流程图如下: 浓缩液回流

原水反硝化池硝化池调节池 至填埋场回灌污泥池浓缩液回流装TMBN装R装出水 清洗装置清洗装置清洗装置 原水指标及出水指标要求 1.2 原水指标及出水指标要求表1. 资料word .. 出水指标 6.5-8<10 <1.0 <10 <5 <10 1000 出水其他指标均满足《水污染物综合排放标准(北京市地方标排放限值要求。1中A准)》DB11/307-2013表现有工艺各阶段出水水质指标 1.3 结合硝化池出水及超滤出水进行水质分析,分别取调节池出水、2. 场区监测数据。现工艺各阶段出水水质指标如表现工艺各阶段出水主要污染物指标表2.

1.4 存在的主要问题现有工艺存在的主要问题为:.调节池出水直接进生化系统,无预处理工艺⑴、氨氮均较高,在进生化系统之前,COD由于调节池出水色度、、氨氮、色度,并去除部分重COD一般需对其进行预处理,消减部分,其对垃混凝工艺去除COD金属等。传统的预处理大多采用PAC+PAM左右;采用吹脱或膜法脱氨等去除率为COD20%圾渗滤液调节池出水工艺去除氨氮,以降低生化段生物脱氨负荷。资料word .. ⑵.硝化、反硝化系统运行效果差 由于垃圾渗滤液调节池出水的BOD与COD比值(B/C比值)较低,可生化性差,且含有重金属等有毒有害成分。其直接进入硝化、反硝化系统,拟制微生物对COD的去除,致使该系统对COD的去除效率较低,难以达到处理要求。

感受态细胞的制备步骤和原理

感受态细胞的制备步骤和原理 实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37℃,180rpm培养过夜。 [让菌复苏,进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取0.4mL过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37℃250rpm大约2.5小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变 GAGGAGAGGAFFFFAFAF

异。] 3取培养物置于40mL的灭菌离心管中,冰浴10min,4000rpm 4℃离心10min,弃上清。(将所有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL 100mmol/L冰冷CaCl2中,轻吹,4℃30min,4000rpm离心5min弃上清。 [ 细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA),经短时间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 5菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。(一定要轻吹,这时细 胞壁打开,十分脆弱)] GAGGAGAGGAFFFFAFAF

垃圾填埋场设计方案

第1章总图与道路工程 1.1 总平面布置 1.1.1 总平面及功能分区 由地形图可知,管理区所在区域地势平坦,场地标高最低点为26.20米,最高点为30.50米,整个卫生填埋场占地面积约13.53万m2,其中管理区及辅助生产区占地 3.32万m2,填埋库区有效占地8.64万m2,其他用地 1.57万m2。 整个场区由填埋库区、半环区道路、垃圾坝、分区隔堤、各种排洪构筑物、渗沥液处理工程以及根据卫生填埋工艺确定的辅助工程(如地下水导排、渗沥液导排等)等组成,可分为管理及厂前区XX填埋区两大部分,其中管理及厂前区由行政办公区、辅助生产区、污水处理区三部分组成。行政办公区包括综合办公楼、车库及单身宿舍,辅助生产区包括水泵房、清水池、柴油机房、箱式变电站,污水处理区包括污水处理站、污水调节池、弃土堆场,另外还有门房、地磅房XX洗车台。 总图布置时将填埋区XX污水处理站布置在管理区北侧,并用绿化隔离带将各功能区相对分隔。考虑到尽量利于水资源,在生产区中新建水塘一个,雨水导排系统将收集的雨水排往该水糖,最终通过泵的提升作用经专用管道入受纳河流。 辅助设施主要包括地磅房、洗车台、机修车间、泵房、变配电站等。 1.1.2 平面布置 垃圾车进入厂区后右转经地磅秤量后沿进填埋场道路进到填埋区,避免了垃圾运输车辆对管理区的污染,出填埋场的垃圾车经过洗车台时进行清洗后进入市区。将综合办公楼、车库及单身宿舍布置在盛行风向的上风侧,而将污水处理站、污水调节池放在盛行风向的下风侧,具体布置详见总平面布置图。1.1.3 竖向设计 填埋区的竖向设计根据填埋工艺的需要XX场外工程衔接确定的,场前区与场外道路接点标高为27m,半环区道路标高XX场前区道路衔接,与垃圾坝

垃圾填埋场施工方案pdf

目录 一、编制依据、范围和原则 (2) 二、工程概况: (5) 三、施工部署: (6) 四、公用辅助用房土建部分施工: (11) 五、垃圾填埋库区施工: (54) 六、季节性施工措施: (91) 七、平面布置: (96) 八、质量管理体系与措施 (97) 九、安全管理体系与措施 (111) 十、环境保护管理体系与措施 (116) 十一、工程进度计划及保证措施 (122) 十二、资源配备计划 (127) 十三、安全应急预案 (133)

施工组织设 计 一、编制依据、范围和原则 1.编制依据 本工程施工组织设计依据:设计图纸、项目招标文件和答疑、国家和 湖南省有关规范、标准以及我方的质量管理标准,结合现场实际情况及工 程特征编制。本工程组织设计所依据的规范、文件如下: 工程设计、建设遵循的规范、标准及有关文件 序 号 1 标准编号 GB50021-2001 GB50007- 2002 GB50009- 2001 GB50003-2001 GB50010-2002 GB50011-2008 GB50068-2001 GB50300-2001 GB50202-2002 GB50203-2002 GB50204-2002 GB50205-2001 GB50206-2002 GB50207-2002 GB50208-2002 标准名 称 岩土工程勘察规范 2 建筑地基基础设计规 范 建筑结构荷载规范 3 4 砌体结构设计规范 5 混凝土结构设计规范 建筑抗震设计规范 6 7 建筑结构可靠度设计统一标准 建筑工程施工质量验收统一标准 地基与基础工程施工质量验收规范 砌体工程施工质量验收规范 混凝土结构工程质量验收规范 钢结构工程施工质量验收规范 木结构工程施工质量验收规范 屋面工程质量验收规范 地下防水工程质量验收规范 建筑地面工程质量验收规范 建筑装饰装修工程质量验收规范 8 9 10 11 12 13 14 15

感受态细胞的制备步骤和原理

感受态细胞的制备步骤和原理 实验目的为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细 胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能 获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细 胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。实验原理及过程实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37C, 180rpm培养过夜。[让菌复苏, 进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取0.4mL过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37C 250rpm大约2.5小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变异。] 3取培养物置于40m L的灭菌离心管中,冰浴10min , 4000rpm 4C离心10min,弃上清。(将所 有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL 100mmol/L 冰冷CaCl2中,轻吹,4 C 30min , 4000rpm离心5min弃上 [细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基 -钙磷 酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA ),经短时 间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 5 菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。 (一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 6取感受态细胞100uL,加入2uLpET-21a质粒,冰浴30 min受体菌:感受态细胞100uL, 加入2 uL 无菌双蒸水阴性对照:0.1mol/LCaCl2溶液100uL,加入2 uL阴性对照 [第一个阴性对照是为了验证LB中的抗生素有活性;第二个阴性对照是为了验证CaCl2溶 液和pET-21a质粒未被污染。][冰浴是为了降低细胞代谢率,防止细胞大量死亡。] 7热激42度,90s 【在低温处理后,热激,可以使细胞壁热胀冷缩,再低温,使细胞壁上黏附的质粒进入细胞体内。】8冰浴2 min 9加入800 uL无抗生素的LB, 37 C复苏1h 【用LB复苏细胞,使细胞恢复活力,从而使细胞中的质粒表达抗抗生素的基因,只有这样才能使 转化成功的细菌在有抗生素的LB平板上生长。】 10取100ul细胞直接在含50ug/mL Carbenicillin(短节西林)的LB培养基上铺平板,将平皿放置 37 oC温箱30min至液体被吸收。倒置平皿37 oC培养过夜,出现菌落。 【这些菌落为转化成功的菌落,而对照组应该没有菌落。在目的菌落的旁边有可能出现卫星菌落,这是因为亩的菌落的抗性基因似的菌落周围的抗生素失效,长出了转化为成功的菌 落。用短节西林因其对酸稳定、不易被细菌降解,所以可以降低卫星菌落的数量。 因为抗生素高温易失活,所以应等到LB600C时(热而不烫),加入抗生素。】

垃圾的填埋场设计说明书

目录设计说明书 1、绪论 1.1生活垃圾 1.2生活垃圾处理与处置方法 1.3卫生填埋场概述 2、工程概况 2.1项目背景 2.2项目设计原始资料 2.3项目设计要求 设计计算书 3、填埋场的选址 3.1选址的考虑因素 3.2选址的程序 3.3地址的选定与所需的容积 4.填埋场的地基与防渗 4.1填埋区基底工程 4.2填埋场的防渗系统 4.3防渗材料 4.4防渗系统的构造 5. 渗滤液的产生及收集处理 5.1垃圾渗滤液概念和来源 5.2垃圾渗滤液的水质特征

5.3渗滤液收集系统 5.4渗滤液产生量的计算 5.4.1渗滤液产生量的计算 5.4.2渗滤液调节池设计 6.填埋气体的产生与收集处理6.1填埋气的组成 6.2填埋气体产生量的预测 6.3填埋场气体的收集与导排 6.3.1填埋场的导排方式及选择 6.3.2填埋场气体收集系统的设计 7.终场覆盖 7.1填埋场封场系统设计 7.2填埋场封场后的土地回用 8.封场后续工作 结语 参考文献 附图 主要符号说明

1、绪论 1.1生活垃圾概述 1.1.1生活垃圾的定义 生活垃圾,是指在日常生活中或者为日常生活提供服务的活动中产生的固体废物以及法律、行政法规规定视为生活垃圾的固体废物。生活垃圾一般可分为四大类:可回收垃圾、厨余垃圾、有害垃圾和其他垃圾。 城市生活垃圾亦称城市固体废物,是由城市居民家庭、城市商业、餐饮业、旅馆业、旅游业、服务业,以及市政环卫系统、城市交通运输、文教机关团体、行政事业、工矿企业等单位所排出的固体废物。其主要组成为:厨余物、废纸屑、废塑料、废橡胶制品、废编织物、废金属、玻璃陶瓷碎片、庭院废物、废旧家用电器、废旧家具器皿、废旧办公用品、废日杂用品、废建筑材料、给水排水污泥等。 1.1.1生活垃圾的危害 固体废物,特别是有害固体废物,如处理、处置不当,其中的有害物质可以通过环境介质——大气、土壤、地表或地下水体进入生态系统形成污染,对人体产生危害,同时破坏生态环境,导致不可逆生态变化。 (1)对土壤环境的影响:固体废物不加利用,任意露天堆放,不但占用一定的土地,导致可利用土地资源减少,而且如填埋处理不当,不进行严密的场地工程处理和填埋后的科学管理,容易污染土壤环境。 (2)对水体环境的影响:固体废物可随地表径流进入河流湖泊,或随风迁徙落入水体,从而将有害物质带入水体,杀死水中生物,污染人类饮用水水源,危害人体健康;固体废物产生的渗滤液危害很大,它可进入土壤污染地下水,或直接流入河流、湖泊或海洋,造成水资源的水质型短缺。 (3)对大气环境的影响:对方的固体废物中的细微颗粒、粉尘等可随风飞扬,进入大气并扩散到很远的地方;一些有机固体废物在适宜的温度和湿度下还可发生生物降解,释放出沼气,在一定程度上消耗其上层空间的氧气,使植物衰败;有毒有害废物还可发生化学反应生成有毒气体,扩散到大气中危害人体健康。 1.2生活垃圾处理与处置方法 1.2.1焚烧 焚烧法是一种高温热处理技术,即以一定量的过剩空气与被处理的有机废物在焚烧炉内进行氧化燃烧反应,废物中有还有毒物质在800——1200℃的高温下氧化、热解而被破坏,是一种可同时实现废物无害化、减量化和资源化的处理技术。 1.2.2堆肥

垃圾填埋场工程施工组织设计方案

目录 第一章编制说明 第二章编制依据 第三章施工总体布置 第四章主要管理人员及工程技术人员配备计划 第五章施工准备 第六章施工总平面布置 第七章主要施工方法及技术措施 第八章主要施工机县及劳动力配备计划 第九章施工进度计划及进度措施 第十章质量保障措施 第十一章安全生产及文明施工措施 第十二章扬尘治理措施 第十三章新技术、新工艺、新材料应用及所达到的效果第十四章季节性施工措施 第十五章地下管线及其他地上地下设施的保护加固措施附件(1)拟投入的主要施工机械设备表 附件(2)劳动力计划表 附件(3)计划开、竣工日期和施工进度网络图 附件(4)施工总平面图 附件(5)临时用地表

第一章编制说明 第一节工程概况 本工程为**县生活垃圾卫生填埋场工程,厂填位于**县庄村。主要工程容为卫生填埋场一区、二区,渗沥液提升井、渗沥液调节池、渗沥液处理站、地下水提升井的施工。 城市生活垃圾是世界性难题。在众多需要解决的社会问题中,城市生活垃圾被列为亟待解决的三大环境问题之首。我国政府已将垃圾处理与无害化系统列入《中国二十一世纪议程优先项目计划》,并且出台了一系列鼓励和优惠政策,国家从国债中拿出了21亿专款用于城市生活垃圾的处理,为城市生活垃圾处理技术的发展和应用提供了良机。 城市垃圾处理的原则是三化,即无害化、减量化、资源化。无害化:通过一定的技术对垃圾进行处理,使其不产生污染,不致对人体健康产生影响。减量化:减少固体废物的排出量;建设固体废物容量。资源化:从固体废物中回收有用的物质和能源 卫生填埋是目前世界上处理垃圾量最大的方法之一,也是垃圾处理的最终手段。因为对垃圾不管采用哪种处理方法,最终都将产生不可回收和处理的物质,这些废物只能通过填埋的方法进行处理。填埋技术的特点是操作简单,可以处理所有种类的垃圾。投资费用相对较低,是目前国普遍采用的方法。 填埋式垃圾处理流程如下:

垃圾填埋场处置工程安全生产和环境保护措施实用版

YF-ED-J5945 可按资料类型定义编号 垃圾填埋场处置工程安全生产和环境保护措施实用 版 In Order To Ensure The Effective And Safe Operation Of The Department Work Or Production, Relevant Personnel Shall Follow The Procedures In Handling Business Or Operating Equipment. (示范文稿) 二零XX年XX月XX日

垃圾填埋场处置工程安全生产和环境保护措施实用版 提示:该解决方案文档适合使用于从目的、要求、方式、方法、进度等都部署具体、周密,并有很强可操作性的计划,在进行中紧扣进度,实现最大程度完成与接近最初目标。下载后可以对文件进行定制修改,请根据实际需要调整使用。 9.1. 安全生产措施 9.1.1.特殊安全措施 本工程在垃圾挖运过程中会有大量的垃圾 填埋沼气放散,同时施工、办公场所均集中垃 圾填埋场区域内,必须采取完善的防火防爆防 中毒措施才能保证安全,使施工正常进行。 a)安全作业方式 c)设置甲烷气体监测仪 在施工作业区的适当位置布设甲烷监测报 警仪(3台),随时监测甲烷含量并报警。

d)办公室及生产车间内配备通风设施 在土建施工、机械车辆运动过程中,会使地面产生裂缝,甲烷气体会沿此裂缝四处逸散,由于办公室及生产车间就座落在垃圾填埋场区域内且其房间气流不畅会使甲烷气体聚集,由此可能导致人员缺氧或火灾爆炸事故。 为此,办公室及生产车间必须有完善的通风措施。拟按每小时换气8次设置通风设施。 e)严格管理 在不影响施工的前提下,施工用房与施工点须保持足够的距离。照明和动力均采用防爆型电器。区内严禁烟火等明火火源,从而避免点燃垃圾与甲烷气体。针对填埋场有起火、爆炸的危险,应设置防火标牌;车辆出入应设置行车安全标牌和限速标牌;配电箱处设置高压

大肠杆菌感受态细胞的制备原理、步骤以及重组质粒转化解析

一、目的 1.了解感受态细胞生理特性及制备条件,掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。 2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法,了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。 二、原理 (一)大肠杆菌感受态细胞制备的原理 所谓感受态,是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物,只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体,能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后,细胞生理状态会发生改变,出现各种蛋白质和酶,负责供体DNA 的结合和加工等。细胞表面正电荷增加,通透性增加,形成能接受外来的DNA 分子的受体位点等。本实验为了把外源DNA(重组质粒)引入大肠杆菌,就必须先制备能吸收外来DNA分子 的感受态细胞。在细菌中,能发生感受态细胞是占极少数。而且,细菌的感受态是在短暂时间内发生。 目前对感受态细胞能接受外来DNA 分子的本质看法不一。主要有两种假说: 1、局部原生质体化假说――细胞表面的细胞壁结构发生变化,即局部失去细胞壁或局部溶解细胞壁,使DNA 分子能通过质膜进细胞。证据有: (1)发芽的芽孢杆菌容易转化; (2)大肠杆菌的原生质体不能被噬菌体感染,却能受噬菌体DNA 转化; (3)适量的溶菌酶能提高转化率。 2、酶受体假说――感受态细胞的表面形成一种能接受DNA 的酶位点,使DNA分子能进入细胞。证据是:(1)蛋白质合成的抑制剂如氯霉素,可以抑制转化作用;

(2)细胞分裂过程中,一直有局部原生质化,但感受态只在生长对数期的中早期出现;(3)分离到感受态因子,能使非感受态细胞转变为感受细胞。 目前对感受态细胞的转化理论尚未有统一结论,但是许多实验室一直进行探索,试图从实验中获得明确回答。有人根据pBR322 质粒DNA对E?coli K――12X1776菌株的转化结果,认为: 近来,在许多研究室都发现CaCl2对受体菌处理,可提高转化效率几十倍,通常把细胞悬浮在pH6.0 的100mmol/L CaCl2中,在冰浴条件下,放置过夜,转化率转高,但一过24小时,转化率测恢复为原来的水平。 (二)重组DNA 的转化原理 我们已经制备好大肠杆菌感受态细胞,接下的实验是把重组的DNA 引入受体细胞,使受体菌具有新的遗传特性,并从中选出转化子。作为受体的大肠杆菌C600 或DH5α,必须不同外来DNA分子发生遗传重组,通常是rec基因缺陷型的突变体,同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株。这样外来的DNA分子不会受其限制酶的降解。保持外来DNA 分子在受体细胞中的稳定性。制备的大肠杆菌细胞就具有这三种缺陷(rk- mk- rec-)同时此受体细胞还是氨苄青霉素敏感(Ap)。 在体外构建好的重组分子上具有分解氨苄青霉素(Ap)基因存在,当它导入受体细胞后,就赋于这些受体细胞新的特性,即Ap 抗性。同时载体质粒上具有乳糖操纵的β一半乳糖苷酶基因(lacZ,我们可以利用外源基因插入载体β一半乳糖苷酶基因(lacZ,使其失去β一半乳糖苷酶活性的原理来选择新构建的重组子。

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