自噬调控神经干细胞的分化潜能

目录

中文摘要 ................................................................................................................................ I 英文摘要 ............................................................................................................................. III 常用缩写词中英文对照表.................................................................................................. V 前言 .. (1)

1 材料与方法 (3)

1.1材料与试剂 (3)

1.2实验方法 (4)

1.3 统计学处理 (12)

2 结果 (13)

2.1不同年龄NSCs的培养 (13)

2.2不同年龄NSCs分化能力的比较 (15)

2.3检测NSCs内自噬现象 (16)

2.4 自噬对NSCs分化能力的影响 (17)

3 讨论 (20)

4 结论 (23)

参考文献 (24)

综述 (28)

参考文献 (36)

致谢 (42)

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 (43)

个人简历 (44)

山西医科大学硕士学位论文

自噬调控神经干细胞的分化潜能

摘要

目的：

观察源自不同年龄阶段小鼠神经干细胞(NSCs)分化能力的改变，与自噬基因的表达变化，探讨自噬对NSCs分化能力的调控作用。

方法：

分离提取胚胎14d(E14)、新生(P0)、生后30d(P30)和90d(P90)小鼠NSCs，应用NSCs标记物nestin进行免疫荧光染色鉴定实验。NSCs经1%胎牛血清诱导分化后，Tuj1和GFAP免疫荧光染色比较不同年龄NSCs分化为神经元和胶质细胞的比例。分离培养P0和P300小鼠NSCs制备超薄切片，应用透射电镜观察NSCs超微结构。采用SYBR Green Real-time PCR(QPCR)分析不同年龄小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)和不同年龄阶段NSCs，自噬相关基因A TG3，ATG5，A TG7及Beclin1的表达变化。另外，观察NSCs分化前后自噬相关基因的表达变化。并且分别应用1μM、5μM和10μM 自噬抑制剂Ly294002作用于NSCs，通过Tuj1和GFAP免疫荧光染色分析自噬对神经干细胞分化能力的影响。

结果：

1. 随着年龄增长NSCs形成神经球的平均直径降低，P30和P90 NSCs形成70～100μm神经球的数量较E14和P0降低～65%。诱导分化实验结果显示随年龄增加，NSCs分化为神经元的比例降低(P<0.05)，而分化为星形胶质细胞的能力上升(P<0.05)。其中P90小鼠Tuj1的阳性率为8%±2%，较E14小鼠(29%±3%)明显下降(P<0.01)而其GFAP阳性细胞率为72%±4%，较E14小鼠(39%±3%)明显升高(P<0.01)。

2. 透射电镜结果显示P300 NSCs线粒体嵴出现断裂肿胀，正常状态的线粒体数目较P0明显减少，并且内聚集大量自噬小体，提示P300 NSCs自噬功能降低。QPCR 结果显示随年龄增长SVZ自噬相关基因ATG3、A TG5、ATG7的表达水平降低,但Beclin1表达水平无显著变化。P90 NSCs A TG3、ATG5、ATG7和Beclin1表达水平分

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