基因工程实验与理论总结
1.动物细胞DNA提取原理是什么?
答：先用SDS裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸。然后用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提，使蛋白质变性沉降到酚与水相的界面，DNA则留在水相中，离心后在上清液中加入醋酸钠和两倍体积无水乙醇，除去多糖物质和沉淀DNA，然后离心后沉淀用70%乙醇洗涤，最后用ddH2O溶解沉淀DNA，－20℃保存。
2.DNA提取中用到了哪些试剂？有什么作用？
EDTA:二价金属离子螯合剂，螯合Mg2+，抑制DNA酶活性。因为Mg离子是DNA酶的辅因子。
SDS:一种阴离子去污剂，在高温（55℃—65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸。
酚:使蛋白质变性。
氯仿:作为除杂剂，除去糖、脂等杂质；加速有机相与液相分离；抽提核酸溶液中残留的酚。乙丙醇:作为消泡剂；降低DNA的水溶性，让DNA从溶液中析出；有利于分层，使离心后的上层含DNA水相，中间的蛋白质相及下层有机溶液相维持稳定。
无水乙醇:降低DNA的水溶性，沉淀DNA。
醋酸纳:调PH，中和Tris-Buffer，形成中性环境，利于DNA沉淀。
Tris-Buffer（PH8.0）:提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏。
70％乙醇:清洗溶液中离子及其他杂质。
NaCl:提供高盐环境，使DNA溶解于液相中。
2.有机溶剂使用注意事项？
答：①有机溶剂的容器，不论是否在使用中，都应随手盖紧。
②尽可能在通风位置工作，以避免吸入有机溶剂的蒸汽。
③尽可能避免皮肤直接接触。
3.PCR原理？
答：将目的基因DNA在高温（94℃）下解链成为单链模板;人工合成的一对与目的基因两侧序列相互补的寡核苷酸引物在低温（40~60℃）下分别与变性的目的基因片段两侧的两条链的部分序列互补结合；在中等温度（65~75℃）下，由耐热的DNA聚合酶(Taq酶）将dNTP 中的脱氧单核甘酸加到引物3，-OH末端，并以此为起点，沿着模板以5，→3，方向延伸，合成一条新的互补链。
4.PCR类型？反转录PCR怎么做的?
答：反向PCR、巢式PCR、锚定PCR、数字PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR、免疫捕捉PCR等。
RT-PCR的原理：提取组织或细胞中的总RNA，以ployA（A）+选择性RNA为模板采用oligo(dT)、随机引物或基因特异性的引物GSP经反转录酶的作用从RNA合成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，获得目的基因或检测基因表达。
5.PCR影响因素？
答：引物；模板；DNA聚合酶；Mg2+；底物；反应缓冲液。
6.PCR体系有什么物质？作用？
答：①引物：是两段与待扩增目的DNA序列侧翼片段具有互补碱基特异性的寡核苷酸，使DNA聚合酶以其3，-OH末端为起点合成互补链，决定了特定基因的扩增。
②模板：提供DNA复制的模板，模板DNA可以是单链分子，也可以是双链分子。
③TaqDNA聚合酶：将dNTP中的脱氧单核甘酸加到引物3，-OH末端，并以此为起点，沿着模板以5，-3，方向延伸，合成一条新的互补链。
④底物dNTPmix：4种脱氧核苷酸，提供PCR反应的原料和能量。
⑤反应缓冲液：反应缓冲液一般含有Tris-HCl、KCl和适当的Mg2+。Mg2+是DNA聚合酶的激活剂，Tris-HCl起缓冲作用，KCl有利于引物的退火。
7.怎样提高PCR产物的特异性？
引物:a.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。b.选择GC含量为40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物。c.设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。d.避免引物对3'末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。e.避免3'末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。f.避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。g.避免存在可能会产生内部二级结构的序列，这会破坏引物退火稳定性。
Mg2+:浓度通常为0.5—2.0mmol/l，过高或过低均影响产物的特异性。
模板:模板量应适宜，过量则可能增加非特异性。
延伸时间:应适宜，时间过长会导致产物非特异性增加。
循环次数:一般为30个（25—30个）周期，如果循环次数过高，会增加非特异性产物及其复杂度。
8.PCR都有哪些酶可以用？
答：TaqDNA聚合酶；TthDNA聚合酶；Vent聚合酶；PfuDNA聚合酶。见实验书69页。
9.T4 DNA连接酶连接的原理？
答：T4 DNA连接酶作用机制：酶先与A TP形成酶-AMP共价复合物，再与DNA作用、AMP 转移至DNA缺口5，-磷酸基上形成焦磷酸键而活化5，-磷酸基，然后再与3，-羟基形成磷酸酯键，完成连接过程。
10.PCR产物与T载体怎样连接的？
答：PMD18-T质粒0.5uL，PCR产物4.5uL，2×solution（含T4DNA连接酶）5uL，混匀后16℃水浴过夜。
11.DNA用试剂盒是怎么回收纯化得到的？
答：依据吸附柱中的硅胶膜在高盐浓度下特异性吸附DNA，在低盐浓度下可被洗脱的原理。按照100mg胶块加入700uL溶胶液的比例，55℃溶胶。将融化的胶溶液转移到吸附柱中，离心后倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入同一收集管，加漂洗液离心洗涤，重复漂洗一次，去掉废液后放回吸附柱空转，尽量去除多余溶液。再将吸附柱放入新的收集管中加入洗脱液，静置离心后去掉吸附柱，即为纯化产物。
12.DNA回收的注意事项?
答: ①加入的胶块溶化液的量要足量，保证胶能完全溶解，避免堵塞硅胶模
②确保WB液中已经加入了酒精
③把胶液倒入柱子后要静止2min以后再离心，使DAN完全吸附于膜上
④洗脱液要滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
⑤将离心后的洗脱液倒掉后，要在空离心。
13.连接为何在16℃？
答：因为黏性末端的DNA双键间有氢键的作用，温度过高使氢键不稳定，但连接的最适温度恰为37℃，所以经综合考虑，采用16℃较为合适。
14.载体与目的基因连接时各自的量有什么讲究？
答：连接时外源基因的量要多一些，载体的量要少一些，这样碰撞的机会就会多，否则载体自身环化就严重，一般载体DNA与目的基因连接采用1:(1-3）的比。连接酶的用量不宜过
多。
15.Cacl2制备感受态原理？
答：将细胞培养至OD600为0.4-0.6后放入冰浴中使其停止生长，然后将菌株置于低温预处理的低渗Cacl2 溶液中，即造成细胞膨胀，细胞通透性发生暂时性的改变，从而极易与外源DNA相黏附并在细胞表面形成复合物
16.转化？感受态?以及其的影响因素？
答：转化：是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段。
感受态：指宿主细胞最易接受外源DNA片段并实现转化的一种生理状态，它是由宿主菌的遗传性所决定，同时也受菌龄；外界环境因子等的影响。
影响因素：细胞的生长状态和密度、CaCl2处理时间、热击时间、感受态细胞的保存期、质粒DNA的质量和浓度、试剂的质量、防止杂菌和杂DNA的污染、整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
17.制备感受态的方法有哪些？(大肠杆菌、农杆菌、酵母）
（1）大肠杆菌感受态制备方法：CaCl2法制备
（2）农杆菌感受态制备：CaCl法制备，类似于大肠杆菌的方法。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl溶液中，0o C下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于—70o C可保存相当一段时间而不会对其转化率有太大影响。
（3）酵母感受态制备：
18.热击转化的原理？
答：利用CaCl2处理感受态宿主细胞，然后通过热击法处理，即置于42℃高温60—90s，细胞布朗运动剧烈，膜流动性增强，由于感受态细胞细胞膜有受伤，DNA进入细胞，然后降温在培养基上生长，表达足够的蛋白质，以使能在抗生素的平板上生长菌落。
19.蓝白斑筛选的原理？
答: 许多载体都带有一个大肠杆菌DNA的短区段，包含β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控区和N端146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），这种载体适合转入可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的受体细胞。宿主和质粒单独编码的片段仅是β-半乳糖苷酶的部分序列，单独存在时没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶活性的蛋白质，即为互补。由互补而产生的lacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基-β-D硫代半乳糖苷）的作用下，在无色底物X-Gal存在时产生蓝色沉淀底物，使菌落显蓝色。如果外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，无法实现互补，使得带有重组质粒菌落形成白色菌落。
20.LB的配方
答：LB培养基：1％胰化蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％Nacl。即10g胰化蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠溶解在950ml水中，用1mol/LNaOH调至7.2在补足水至1L。固体培养基在LB培养基中添加1.5％~2％琼脂，121℃灭菌20min备用。
21.灭菌的过程？
121℃，灭菌20min。首先往高压蒸汽灭菌锅内添适量水，然后把培养基放入锅内，锅盖对称拧紧。待压力升至0.05MPa时，打开排气阀，排完气后，关闭排气阀。待压力再次升至0.1MPa时，开始计时，直至升至0.15MPa时关闭电源开关。待压力将至0.1MPa时，打开电源开关，升至0.15MPa时关闭电源。如此循环，20分钟后，关闭电源，直到压力降至0时，打开排气阀，最后打开锅盖取出培养基。
22.涂板前在LB上37℃1h？
答：质粒只有在大肠杆菌中跟随其复制，使拷贝数增加，转录翻译出足够的酶，才具有抗性。
23.转化常见方法？
答:大肠杆菌：化学转化法、电击法。动植物细胞：显微注射法、农杆菌转化法、基因抢法。
24.质粒DNA提取原理？
答：基于环状质粒DNA相对分子质量小，易于复性的特点。在热或碱性条件下DNA分子双链解开，若此时将溶液置于复性条件下，变性的质粒分子能在较短的时间内复性而染色体DNA不能复性。经过离心除去变性的染色体DNA和蛋白质杂质沉淀，上清液中的DNA分子则利用无水乙醇与盐凝聚形成沉淀。
25.溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有什么作用？成分是什么？
答：solutionⅠ：含葡萄糖，Tris-Hcl（PH8.0），RNA酶和EDTA。葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子底部；Tris-Hcl（PH8.0)提供一个适当的PH环境；EDTA螯合二价金属离子，抑制DNase的活性;RNA酶降解RNA。
solutionⅡ：含NaOH和SDS。NaOH使染色体DNA氢键断裂，双螺旋结构解开而变形形成杂乱无章的片段，同时使质粒DNA的大部分氢键发生断裂；SDS用于溶解细胞膜上的脂肪和蛋白质。
solutionⅢ：含NaAc或KAc（PH4.8），用于中和solutionⅡ中的碱性溶液，使得质粒可以复性，而染色体DNA则不能复性，从而经离心后把质粒分离出来。
26.TAKARA公司都有哪些产品？有什么用途？（酶、载体类型等）
27.限制性内切酶识别、切割有什么特点？
答：识别和切割双链DNA分子内特殊的核苷酸序列。其切口有两种类型：平末端和黏性末端。
28.星号活性的影响因素?
答：甘油体积分数过高（>5%）；酶过量（>100u/uL）；离子浓度低（<25mmoL/L）；PH 过高（>8.0）等。
29.T载体的结构？（从大连宝生物下载说明书阅读。)
T载体是一种高效克隆PCR产物(TA的克隆)的专用质粒载体，为线性化载体，线性化后两侧3'端各多出一个脱氧胸苷酸(T)，无需酶切可直接与游离A末端的PCR产物连接，属于非定向克隆。
30.酶切体系有哪些成分？
答：10uL ddH20；2uL 10×buffer(高盐缓冲液H buffer；中盐缓冲液M buffer；低盐缓冲液L buffer)；7uL质粒DNA；作用于目的基因两端的酶切位点的限制性内切酶两个各0.5uL。31.为什么胶块能在溶胶液中溶解？
答：实验中所使用到的凝胶回收试剂盒，作用是从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA片段，采用了独特的凝胶融化液Buffer GM，其具有较强的缓冲性能并含有PH指示剂，方便判断溶液的PH值，是否与DNA制备膜结合，其溶解能力很强，无需加热，在室温(15-25°C)条件下可快速溶解凝胶。
32.影响连接的因素？
答：1.连接酶的用量：酶浓度越高反应速度越快，产量也高，但连接酶是保存在50%的甘油中的，甘油浓度过高会影响连接效果。
2.作用的时间与温度:一般采用16℃，连接12-16h，因为虽然DNA连接酶的最适温度是37℃，但在37℃时，黏性末端之间的氢键结合是不稳定的，它不足以抵御热破裂作用，而反应时间是依据温度而定的，所以综合考虑后采用16℃连接12-16h。
3.底物浓度:一般采用提高DNA的浓度来增加重组的比例，但底物浓度过高。反应体积太小，连接效果也很差。
33.回收DNA中空转有什么作用？
答：去除吸附柱中多余溶液及杂质，保证DNA的纯度。
34.复制型载体有哪些系列？表达型载体分哪些？
复制型载体：质粒载体，粘粒载体，噬菌体载体，人工染色体。
表达型载体：大肠杆菌表达载体，利用T7噬菌体启动子的表达载体，表达融合蛋白的表达载体，分泌型表达载体，大肠杆菌/革兰氏阳性菌穿梭载体，大肠杆菌/酵母菌穿梭载体，随机插入突变载体，基因插入/基因敲除。
35.目的基因鉴定有哪些方法？是如何实现的？
（1）检测转基因生物染色体上的DNA上是否插入了目的基因。
采用DNA分子杂交技术，先将转基因的基因组提取出来；把目的基因的DNA片段用放射性同位素做标记作为探针；使探针与基因组DNA杂交，如果出现杂交带，则表明目的基因已插入染色体DNA中。
（2）检测目的基因是否转录出了mRNA。
采用DNA与RNA杂交技术。从转基因生物中提取mRNA,把目的基因的DNA片段用同位素标记作为探针；使探针与mRNA杂交，如果出现杂交带，就表明目的基因转录出了mRNA。（3）检测目的基因是否翻译出了蛋白质。
从转基因生物中提取蛋白质，用相应抗体（先进行同位素标记）进行抗原—抗体杂交；如果出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。
（4）个体生物学水平的鉴定
将转基因的产品与天然产品作比较，以确定是否转入目的基因。
36.Amp、Kan筛选的原理？
答：质粒具有氨苄青霉素抗性或卡那霉素抗性，转化了这些质粒或重组质粒的大肠杆菌寄主可以在含有氨苄青霉素或卡那霉素的培养基上生长，而非转化子则不能生长。从而筛选出含有重组载体的细胞。
37.琼脂、琼脂糖的区别？
答：琼脂是由琼脂糖和琼脂果胶组成的，琼脂是一种固化剂，本身不提供任何营养，是一种高分子的碳水化合物，仅溶于热水，主要用于细胞培养。
琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，由半乳糖及其衍生物构成，不带电荷，主要用于凝胶电泳，凝胶过滤。
38.内切酶不同末端连接形成几种键？分别有几个
答：内切酶酶切产生的粘性末端进行连接形成两个3'-5'磷酸二酯键和若干互补碱基对之间的氢键，若酶切产生的平末端进行连接，形成两个3'-5'磷酸二酯键。
39.怎样研究一个基因的功能？
(1)在基因库中查找该基因的同源基因或同源物种的该类基因，根据他们的功能对欲研究基因的功能作大体的推测。
(2)寻找该基因缺失型的个体，或对生物个体进行该基因的基因敲除，将其与正常含有该基因的个体进行比对，根据对该基因的功能的推测进行相应的性状，生理方面的差异的观察。
(3)利用基因工程技术对生物个体进行该基因的过表达操作，再将其与正常个体和基因缺失型个体进行比照，根据性状或生理功能的差异从而确定该基因的功能。
《基因工程》期末总结
2012级生工（七）班王俊
1.基因漂流：转基因生物的外源基因通过花粉传授等途径扩散到其他物种并转入、整合到其他生物的基因组中，使得其他生物或产品混杂有转基因成分，完成自然界基因库的混杂和污染。
2.基因工程：基因工程是在分子生物学和分子遗传学综合发展基础上，通过在分子水平上对基因或基因组进行改造，使物种获得新的生物性状的一种崭新技术。p1
3.质粒：是细菌中独立于染色体外，能进行自我复制的，双链，共价闭合环状DNA分子，少数为线形。p16
4.电泳：带电颗粒在电场作用下，向着与其自身所带电性相反的电极移动。
5.PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）,是一种类似于细胞内DNA的天然复制过程，利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，在体外由引物介导的酶促合成特异DNA片段。（实验教材p64）
6.半定量PCR：半定量PCR是通过RT—PCR最终产物电泳后电泳条带的明暗来间接反应出原始模板的丰度的PCR技术。
7.反转录PCR：（RT—PCR）将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链扩增相结合的技术。其原理是提取组织或细胞中的总RNA，以poly(A)+选择性RNA作为模板，采用oligo(dT)，随机引物或基因特异性的引物GSP（gene special primer）经反转录的作用从RNA合成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，从而获得目的基因或检测基因表达。
8.实时荧光定量PCR：通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，从而实现对起始模板定量及定性的分析。P21
9.引物：两段与待扩增目的DNA序列侧翼片段具有互补碱基特异性的寡核苷酸。（实验教材P65）
10.RACE：cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends）。主要通过PCR技术由已知的部分cDNA序列来获取完整的cDNA的5`和3`端序列。最终，从两个有相互重叠序列的3`和5`—RACE产物中获得全长cDNA,或者通过分析RACE产物的3`和5`端序列，合成响应引物扩增出全长cDNA。P43
11.western印迹：即蛋白质印迹杂交，将电泳分离后的组织或细胞总蛋白从凝胶转移到固体支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
12.基因文库：是指通过克隆方法保存在适当宿主中的某一生物体DNA分子的总和，这些插入分子片段和载体连接在一起，代表某种生物的全部基因组序列或全部mRNA序列。P44
13.分子杂交：不同的DNA 片段之间，DNA 片段与RNA 片段之间，RNA片段之间，如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性，形成新的双螺旋结构。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程称为分子杂交。
14.星号活性：在某些条件下，一种特异性识别顺序的限制性性内切酶在酶切同一种DNA片段时会产生新的酶切位点而得到不同的酶切片段的酶活性叫做星号活性。
15.蓝白辬筛选：许多载体都带有一个大肠杆菌DNA的短区段，包含β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控区和N端146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），这种载体适合转入可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的受体细胞。宿主和质粒单独编码的片段仅是β-半乳糖苷酶的部分序列，单独存在时没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶活性的蛋白质，即为互补。由互补而产生的lacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基-β-D硫代半乳糖苷）的作用下，在白色底物X-Gal存在时产生蓝色沉淀底物，使菌落显蓝色。如果外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，无法实现互补，使得带有重组质粒菌落形成白色菌落。
16.目的基因：在基因工程实践中，研究者所感兴趣和想研究的基因就是目的基因。
17.Taq聚合酶：从温泉中的水生栖热菌中分离出TaqDNA聚合酶。该酶具有5`→3`聚合酶活性以及依赖于聚合作用的外切酶活性，不存在3`→5`外切酶活性，是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶。P55
18. 转化：重组质粒DNA分子导入受体细胞的过程称为转化。P69
19.启动子：启动子是一段位于结构基因5`端上游区，基因转录起始所必须的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。
20.限制酶：（限制性内切酶）是能够识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。（限制：限制外源DNA进入；内切：切DNA内碱基）
21.限制性内切酶：一类能够针对特定核苷酸序列进行特定位点的切割，产生特定的粘性末端或平末端的酶。P51
22.载体：把携带外源基因进入受体细胞的这种工具叫做载体。在基因工程中，最常用到的是质粒载体。P57
23.感受态细胞：是指最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态的细胞。（实验教材P153）
24.转基因技术：转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。
25.转基因食品：又称基因改良食品或基因工程食品，是利用基因工程技术将一些微生物、动物或植物的基因植入另一种微生物、动物或植物中，接受的一方面由此获得了一种它所不能自然拥有的品质。P138
26.粘性末端：经酶切后，切口处留下没有配对的单链尾巴即为粘性末端。粘性末端可以分为5`磷酸突出的末端，3`羟基突出的末端。(实验教材P136)
27.DNA连杆：连杆又叫衔接物，是指用化学法合成的由10～12个核苷酸组成，具有一个或数个限制性酶识别位点的寡核苷酸片段。P68
28.基因药物：基因工程药物是指用现代基因重组技术对基因进行克隆，通过重组DNA导入大肠杆菌、酵母或动物细胞成功构建工程菌株或细胞株，在工程菌株、细胞中所表达产生的新型药物包括细胞因子、激素、溶血栓药物、疫苗、抗体、反义RNA及基因治疗药物等多种难治疾病的基因工程药物。P148
29.基因诊断：基因诊断即DNA诊断或分子遗传学诊断，是指利用标本中的DNA或RNA作为检测对象进行疾病诊断的方法。P161
30.基因治疗：基因治疗是指通过基因水平的改变来治疗疾病的方法。P168
31.T-DNA：它是在农杆菌侵染细胞时，从Ti质粒上切割下来转移到植物细胞的一段DNA，与肿瘤形成有关，包括左边界和右边界。
32.农杆菌：从土壤中分离出来的革兰氏阴性菌，主要有两种：根癌农杆菌和发根农杆菌，其中研究最多也最彻底的是根癌农杆菌，他能将自身Ti质粒的一段DNA（T-DNA）转移到植物细胞中，从而使至于受伤部位形成冠瘿瘤。
1.基因工程在各领域中的应用(举例说明)
(教材P6～P11)
(1)在农业生产中的应用：在大田作物、园艺作物中应用，如培育作物新品种、品质改良、作物增产、防除杂草、防治病虫害等。
(2)在林木花卉中的应用：在花卉产业中为定向育种提供了技术保障。
(3)在畜牧业、养殖业中的应用：转基因牛，猪，鱼等动物获得优良性状。
(4)工业领域中的应用：影响最为深远的为食品工业，基因工程技术涉及在食品领域中的作
用目前涉及对食品资源的改造、新产品的开发、食品添加剂的生产以及食品卫生检测等方面。
(5)在医药卫生领域中的应用：通过基因工程技术生产制造基因工程药物，现已成功开发了人血球蛋白、干扰素、乙肝疫苗等令人鼓舞的新药。
(6)在环境保护领域中的应用：采用基因工程的方法可对不同菌株中的特异性降解基因进行修饰、累加、转移，提高微生物净化环境的能力，吞噬和分解多种污染环境的物质。
2.基因工程中研究一个基因能有哪些技术运用到其中？
(1)DNA的提取技术
a.基因组DNA提取：CTAB法，SDS法等
b.质粒DNA提取：碱裂解法、煮沸法
c.线粒体、叶绿体DNA的提取：差速离心结合SDS裂解法
(2)DNA的凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(3)基因扩增技术：PCR（聚合酶链式反应）
LP-PCR、锚定PCR、RT-PCR、荧光实时定量PCR技术等
(4)DNA印迹杂交技术：Southern杂交
(5)DNA核苷酸序列的测定技术：Sanger法测序—双脱氧链末端终止法等
3.给予一个基因，如何构建一个载体：
(1)根据该基因序列设计特异引物，通过PCR进行该基因的大量扩增。
(2)选择合适的内切酶对质粒进行酶切，用同样的酶对目的基因进行酶切，使之产生与质粒相同的粘性末端。
(3)在体外环境下应用DNA连接酶构建重组质粒。
4.农杆菌介导的转基因植物是如何实现的？
植物细胞在受伤后细胞壁破裂，分泌高浓度的创伤诱导分子，它们是一些酚类化合物，如乙酰丁香酮，农杆菌对这类物质具有趋化性，首先在植物细胞表面发生贴壁，继而植物创伤分子诱导农杆菌vir区各种基因的激活和表达。首先是virA和virG基因的活化，磷酸化的virG 蛋白激活一系列vir基因的表达，导致T-DNA被剪切、加工，形成T-链蛋白复合体，通过农杆菌和植物细胞膜，细胞壁进入细胞内，T-复合物上的核靶向序列可引导T-DNA整合到植物基因组。
5.转基因动物是如何实现的？ P107、108
转基因动物技术是指利用DNA重组技术、基因突变技术、基因导入技术和基因表达技术等基因工程方法，将人工提取的DNA在体外切割、拼接和重组，然后通过适当载体导入动物细胞内，使这种外源基因与动物本身的染色体整合在一起，随着细胞的分裂而复制和表达，从而定向地产生人类所需的生物产品或得到能够稳定遗传的具有优良新性状的动物。
转基因动物操作流程：
目的基因的分离载体的选择
重组载体的构建
供体的培养受体细胞的制备
目的基因的获取→转基因的动物受体细胞系统→目的基因的导入→重组胚的检测→转基因重组胚胎的移植→转基因动物的鉴定
6.谈谈你对转基因技术的未来和前景。 未来，转基因技术将更加普遍更加寻常的出现在人们的视野和生活中，人们不在“谈转色变”。转基因技术也可以为人类做出很多贡献。比如在环境保护方面，利用转基因技术改造出了专喝污水的植物，专吃有毒废弃物的细菌，专门降解农药的微生物等。在食品方面，人们不在担心粮食不够吃，可以通过转基因技术生产营养价值高，产量高，抗病虫害，抗自然灾害的农作物。在疾病方面，可以通过转基因的手段生产许多疑难杂症的药物。在能源方面，人们不再过多的依赖石油、煤炭、天然气等传统能源，而可以通过转基因技术改造工程菌，利用秸秆等木质纤维发酵生产酒精。总之，转基因技术有很好的未来和前景，我们更多的不是一味的去抵触它，而是应该更加了解它，把它作为一项为人类服务的技术，通过它来为人来做更多的贡献。
7.转基因食品与转基因技术的区别和联系。
外源基因导入受体细胞 转基因胚胎的获得，培养与检验
转基因胚胎的移植 受体动物的选择
获得子代 转基因动物的鉴定 转基因动物的传代
基因工程实验报告
基因工程实验报告 、
小麦GAPDH截短体的重组与表达 摘要：本实验通过基因工程（genetic engineering）手段对小麦总RNA进行提取、PCR扩增及与质粒载体的重组构建的操作，并将重组质粒以氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞，诱导目的基因表达，并在蛋白水平进行Western检测。通过本对实验的实践，我们对基因工程技术将会有一个比较全面的认识和了解。 关键字：小麦基因；载体；感受态 前言 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。为在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。它克服了远缘杂交的不亲和障碍。 （一）实验过程
1.实验部分流程：
2．小麦总RNA提取（Trizol法） 2.1 材料 小麦幼苗 2.2 试剂配制及器具处理 ① 0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） ②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在 0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。 ③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入 0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 ④Trizol ⑤ 75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 ⑥氯仿(最好用新的)。 ⑦异丙醇(最好用新的)。 2.3 操作步骤： ①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。 ②室温放置5min，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③ 12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10min，12000rpm 离心10min。 ④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。 ⑤重复步骤④。 ⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30μL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 3. RT-PCR扩增目的基因cDNA 3.1 试剂 ① RNA模板 ②Olig（dT）18 ③反转录缓冲液 ④dNTP ⑤ M-MULV反转录酶 ⑥ RNA抑制剂（RNasin） ⑦Premix EX Taq DNA聚合酶 ⑧ PCR特异引物 3.2操作步骤： 3.2.1 RNA的反转录 采用Thermo Scientific（Fermentas）RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit Total RNA 6μL（需加入RNA约1μg） OligodT primer 1μL H2O（nuclease-free）5μL 12μL 65℃ 5min，补加下列试剂： 5× Reaction buffer 4μL RibolockRNase Inhibitor 1μL 10mM dNTP Mix 2μL RevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase 1μL 20μL 42℃ 60min 70℃，5min，﹣20℃保存
基因工程思考题答案--删减后
第二章 1. 名词解释 （1）顺反子(cistron)：基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子（cistron），一个顺反子编码一种完整的多肽链。它是遗传的功能单位。 （3）转位因子（transposable elements）：是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。 （4）基因组（genome）：细胞中，一套完整单倍体的遗传物质的总合。 （5）启动子（promoter）：是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始转录的序列，其大小不等，具有转录目标基因的mRNA的功能。启动子是基因表达不可缺少的重要元件。（6）基因（gene），基因是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 （7）顺反子(cistron)：基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子（cistron），一个顺反子编码一种完整的多肽链。它是遗传的功能单位。 （8）终止子（terminator），在基因3 端下游外侧与终止密码子相邻的一段非编码的核苷酸短序列，具有终止转录的功能，叫做终止子（terminator）。 （9）断裂基因（split gene），真核生物的结构基因是不连续的，编码氨基酸的序列被非编码序列所打断，因而被称为断裂基因（split gene）。在编码序列之间的序列称为内含子（intron），被分隔开的编码序列称为外显子（exon）。 （10）顺式作用元件（cis-acting elements），指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 （11）反式作用因子（trans-acting elements），可结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子称为反式作用因子（trans-acting elements）。 （13）反应元件（response elements），是一类能介导基因对细胞外的某种信号产生反应的DNA序列，被称为反应元件（response elements）。 （14）增强子（enhancer），是一段DNA序列，其中含有多个能被反式作用因子识别与结合的顺式作用元件，反应作用因子与这些元件结合后能够调控（通常为增强）邻近基因的转录。（15）转位因子（transposable elements）：是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。 （16）转座子（transposon，Tn），是一类较大的可移动成分，它是由几个基因组成的特定的DNA片段，除有关转座的基因外，至少带有一个与转座作用无关并决定宿主性状的基因（如抗药性基因）。 （17）假基因（pseudogene），假基因是多基因家族中的成员，因其碱基顺序发生某些突变而失去功能，不能表达或表达异常，生成无生物活性的多肽。 （18）重叠基因（overlapping genes），或嵌套基因（nested genes），是指基因的核苷酸序列（或阅读框）是彼此重叠的基因，称为重叠基因或嵌套基因。 （19）基因家族（gene family），就是指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因。 （20）反向重复序列，是指两个顺序相同的拷贝在DNA链上呈反向排列。有两种形式，一种形式是两个反向排列的拷贝之间隔着一段间隔序列；另一种形式是两个拷贝反向串联在一起，中间没有间隔序列，这种结构亦称回文结构（palindrome）。 （21）看家基因（housekeeping gene），在几乎所有细胞中或发育过程中持续表达的基因，被称为看家基因。 （22）锌指（zinc fingers）结构，由约30个氨基酸残基组成的一段多肽序列，其中4个氨
基因工程实验技术介绍
一、大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法。此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养 基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3 min，弃上清液。 4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-H Cl pH8.0)充分混合。 5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。 6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc，p H4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。 7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另 一新Ep管 8、加入等体积的异戊醇，混匀后于?0℃静置1 0min。 9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。 10、用70％乙醇0．5ml洗涤一次，抽干所有 液体。 11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE缓冲液中 二、质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，应选用电泳纯的，琼脂糖此级产品筛除了抑制物和核酸酶，而且用溴化乙锭染色后荧光背景最小。 (1)琼脂糖凝胶电泳装置
由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高，而适应性又强，在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walt er Schaffner发明的水平板凝胶。 水平板凝胶通常在一块可安放于电泳槽平台的玻璃板或塑料盘上灌制。在有些装置中，则可将凝胶直接铺在平台上。凝胶恰好浸在缓冲液液面下进行电泳。凝胶的电阻几乎与缓冲液的电阻相同，所以有相当一部分的电流将通过凝胶的全长。 （2）琼脂糖凝胶的制备 琼脂糖凝胶的制备是将琼脂糖在所需缓冲液中熔化成清澈、透明的溶液。然后将熔化液倒入胶模中，令其固化。凝固后，琼脂糖形成一种固体基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。通贯凝胶的电场接通后，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移。 （3）琼脂糖凝胶的染色 电泳完毕，将琼脂糖凝胶转移入含EB的染液中，染色10分钟，取出紫外灯下观察。 三、质粒DNA热激法转化大肠杆菌 感受态的细胞可以摄入外部溶液中的DNA，而常态的细胞却不能，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。 1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2ml LB培 养基的试管中，37℃振荡培养过夜 2、取0.1ml过夜培养物转种于含10ml LB培 养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至OD600=0. 3 3、然后把培养物倒入1.5ml离心管中，冰浴1 0min。 4、在4℃下以4000rpm离心5min，去上清液 5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1M CaCl2溶液 中，置冰上30min 6、然后再在4℃下以4000rpm离心10min，去 上清液
(完整word版)武生院基因工程期末试题.docx
2013-2014 年度第二学期基因工程期末考试 卷型： A 考试时间： 90 分钟满分：100分 一、名词解释（ 3×5） 限制性内切酶 ( 或其它工具酶 ) ：能在特异位点上催化双联 DNA分子断裂，产生相应的限制性 DNA片段 荧光定量 PCR: 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用 荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量 PCR: 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过 mRNA反转录成cDNA，再进行 PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的 生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。二、填空（ 1×15） 1.Cosmid 实际上是由 cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有 cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒 >开环质粒。 3.质粒 DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。 5.设计引物是一般要求 C+G的比例在 40%-60%，长度在 17-30bp 。 6.BAC 载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（ 2× 15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（ D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（ A.既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链 B. 只能作用于单链DNA C）DNA C.只能作用于双链 DNA D.只能作用于 RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（ A ） A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B. 可以抑制核糖体的转位 C. 可以与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D. 可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（ C） A. 依赖C. 依赖DNA的RNA 的DNA聚合酶 DNA聚合酶 B. D. 依赖 依赖 DNA的 RNA聚合酶 RNA的 RNA聚合酶 5.II类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
基因工程实验(答案)
——凯1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？（实验题目的总结） 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？（自己写的） 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。（题目有歧义） 答：①取0.5g琼脂粉置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂溶解； ②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇，冷的异丙醇，终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq
扬州大学基因工程期末试题复习要点整理
基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）
基因工程总结
简述Southern blot,northern blot,western blot的原理，比较它们的不同. 答：Southern Blot 原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。DNA => 琼脂糖电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针）=> 洗膜=> 放射自显影或显色Northern Blot 原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 mRNA提取=> 甲醛变性电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针）=> 洗膜=> 放射自显影或化学发光 Western Blot 与 Southern Blot或 Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 不同：所用于分析的对象不同。 Northern杂交用于分析RNA； Southern杂交用于分析DNA； Western杂交用于分析蛋白质。 转基因动物与转基因植物的产生有什么不同？ 答：技术原理相同，用转基因技术将具体特殊经济价格的外源基因导入动植物体内，不但表达出人类所需要的优良性状（如抗虫，抗病，抗除草剂，抗倒伏，产肉，产蛋量高）,还可以通过蛋白质重新组合得到新的品种。但是，对动物和植物进行目的基因导入的方法不同。动物一般采用显微注射法将带有目的基因的病毒注入细胞；而植物一般采用农杆菌转化法或基因枪法将目的基因导入受体细胞。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
基因工程思考题
《基因工程》思考题 第一章绪论 1. 简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。 2. 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？ 3. 简述基因的结构组成对基因操作的影响。 4. 谈谈你对gene的认识，并简要说说gene概念的演变过程. 5. 如何理解gene及其产物的共线性和非共线性？ 6. 试从理论和技术两个方面谈Gene Engineering诞生的基础. 第二章基因工程的基本原理与支撑技术 1. 试比较原核基因组与真核基因组的结构和功能特点 2. 试比较原核基因和真核基因表达调控的主要方式和特点 3. 分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？ 4. 琼脂糖凝胶电泳中，简述影响DNA在凝胶中迁移速率的因素. 5. 小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？ 6. 在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质分子量的常规方法？ 7. 印迹分子杂交有哪些种类，并说明在什么情况下需要使用这些方法。 8. 核酸分子的标记有哪些方法，各有何特点？ 9. 由mRNA反转录成cDNA和DNA的PCR扩增是两个完全不同的酶催化反应过程，如何将两个过程联系在一起，实现由mRNA起始扩增出DNA？ 10. Primer是PCR反应体系的四大要素之一，PCR的许多应用都是通过primer设计来实现的，请问primer设计的一般原则是什么？ 11. 在PCR反应的后期，或者循环次数过多时，反应体系中就会出现一种所谓的平台效应（Plateau effect），请问什么叫Plateau effect？产生Plateau effect的原因有哪些？ 12. 在对PCR产物进行电泳检测时，有时会出现拖带或非特异性扩增条带，请分析其原因？如果检测结果是看不到DNA带或DNA带很弱，那又是为什么？ 13. 通过双向蛋白质电泳发现某蛋白质与某植物的一种表型密切相关，若要利用编码该蛋白质的基因来转基因植物，试问如何分离得到该基因？ 14. 现有一序列已知的DNA片段和一序列未知的DNA片段，你分别如何设计测序策略？ 15. 设想一下在什么情况下你希望知道一个基因或一段DNA的序列？ 16. 什么叫有性PCR？有性PCR导致DNA重组的分子机制跟体内重组有何异同？ 17. Explain the PCR. List the steps in carrying it out; include all the components and special conditions, explaining why each one is used. Illustrate the process with appropriate labels. Use the correct scientific terminology in your explanation. 第三章基因工程操作的基本条件 1. 试指出影响限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素. 2. 在酶切缓冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？ 3. 何谓Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法. 4. 某DNA序列中存在DpnI酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？
武生院基因工程期末试题
2013-2014年度第二学期基因工程期末考试 卷型：A 考试时间：90分钟满分：100分 一、名词解释（3×5） 限制性内切酶(或其它工具酶)：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段 荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 （半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量） 星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。 二、填空（1×15） 1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。 3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%，长度在17-30bp 。 6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（2×15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C） A. 既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链DNA B.只能作用于单链DNA C. 只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（A ） A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位 C.可以与核糖体50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D.可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（C ） A. 依赖DNA的DNA聚合酶 B. 依赖DNA的RNA聚合酶 C. 依赖RNA的DNA聚合酶 D. 依赖RNA的RNA聚合酶 5.II 类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
分子生物学实验心得体会
关于分子生物学实验的体会 梁慧媛（生技01 级） 不知不觉间，一年的时间就这样流逝了，与分子生物实验相伴，对我而言，的确不同寻常。并不仅仅是学习生物学实验技术和方法的宝贵经历，它意味着更多。 首先是实验条件、实验过程、实验设计的完备性，从这里可以初步感受到生物学研究的科学性与严肃性，自己可以得到宝贵的机会，亲身体会生物学研究的苦辣酸甜。一直一直喜欢，得到正确实验结果时刻的畅快感，那是无法言明的欣慰感，一次身心彻底地放松，可以将所有一整天来积累的疲劳抛之身后，即使仅仅是小小的成功，也会让我们兴奋不已。在整理资料，将一年来保存的记录一遍一遍的翻看，重温其中的特别滋味，我，轻轻地笑了。我，喜欢这里，喜欢生物学。 失误是常有的，经历过吃惊、后悔、无奈，检讨分析，最后重新开始。一波三折的记忆清晰的印在脑海中，这种深深的挫折感，再试一次的勇气，我会一生记取的。一年间，随着对生物学实验知识和技能的进一步学习，我更坚定了自己学习生物学的志向，感谢分子生物学实验的"试炼" 。 分子生物学实验心得体会 刘东强（生科01 级） 分子生物学实验室本科生第一次接触到了真正培养实验能力的实验课，它不同于我们在大二开的植物、动物、微生物等实验课。在这些课上，主要以制备样品并观察样品的形态、结构特征为主，这是由于我们当时正值大二，专业知识还远不够。 随着以后理论课学习的深入，我们开始了分子生物学实验的学习，这无疑对于深刻巩固我们理论课上学到的知识是有帮助的，也进一步加深了对原有知识的理解，如启动子的概念、类型、PCR的原理等。另外，在实验课中，我们掌握并学会如何运用分子生物学研究中的一些基本实验技术，如质粒的提取、总RNA 的制备、PCR 技术等。 我们的实验动手能力通过亲身接触实验过程并亲自设计一些实验得到了提高，使我们不再象刚开始做分子生物学实验的时候照搬实验指导上的实验步骤，而是通过我们自己的思考，根据现有的实验条件，对原有的步骤作必要的改进。 此外，通过这门实验课的学习，我们形成了严谨的态度，如有时得出的实验结果与理论不符，我们渐渐养成了仔细分析实验结果的习惯，查找在实验设计或操作过程中出现的问题，同时对理论知识认识得更清楚。 总之，我认为，分子生物学实验课，是称得上实用、精彩、有意思的好实验，对于今后我的研究或工作很有价值 刘佳凝（生技01 级） 一学期的分子生物学实验对我来说很重要，同时通过一学期的实践让我给分子生物学有了较深入地体会： 1、很感谢由我系生化组老师们编写的这本实验指导。里面的实验原理与操作步骤都清晰易懂，有助于我
基因工程试验指导
《基因工程》实验指导 湖南师范大学生命科学学院 遗传与发育生物学系 2009年5月
基因工程课程综合实验---转基因斑马鱼的构建 一、实验目的 本课程的教学目的是让学生对基因工程技术所涉及的主要环节的基本原理、完整流程和基本技术进行系统地学习和掌握，培养学生具有通过这些原理进行基因工程实验和研究方面的设计能力。在基因工程理论课程的讲授和实践课程的实际操作过程中对学生进行基因操作与社会伦理方面的训练和教育，重在素质和能力的培养。 二、实验原理 转基因动物（transgenic animal）是指动物所有细胞基因组中整合有外源基因的一类动物，具有将外源基因遗传给子代的能力，整入动物基因的外源基因被称为转基因（transgene）。转基因动物技术是常规分子生物学技术的延伸和拓展，是基因工程技术的核心内容之一，它不仅为人们研究生命科学提供了一个更有效的工具，转基因技术是生物学领域最新重大进展之一，已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。转基因动物已成为探讨基因调控机理、致癌基因作用和免疫系统反应的有力工具。同时人类遗传病的转基因动物模型的建立，为遗传病的基因治疗打下坚实的理论和实验基础。转基因技术涉及外源基因的获取、重组载体的构建与检测鉴定、受体系统的准备、显微注射基因导入、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物的饲养等方面的内容。 三、材料
限制性内切酶：Eco R I、Sal I、Age I、Not I、Bam H I；T4 DNA聚合酶；LA DNA聚合酶混合物均为大连TaKaRa公司产品； 3. 2菌株及细胞系 DH5α感受态细胞：由本实验室自行制备并存于-20℃； 3. 3 质粒与表达载体系统 3. 3.1 pEGFP-N1载体 pEGFP- N1载体是一种把异源性的蛋白质融合至EGFP的N端的哺乳动物表达载体，为Clontech公司的产品。含有人类巨细胞病毒（CMV）启 图1 含有绿色荧光蛋白基因的卡那霉素抗性的pEGFP-N1质粒 动子，SV40 Poly A尾，pUC复制起始点（原核）和SV40复制起始点（真核），20个多克隆位点，具有筛选标志卡那霉素（原核）和新霉素（真核）的抗性基因，见图1。异源性蛋白与EGFP阅读框一致地克隆入pEGFP-N1，形成的表达重组体在CMV启动子启动下，表达EGFP和目标蛋白的融合蛋白。该融合蛋白保持了EGFP的荧光特性，可对融合蛋白进行活细胞内
基因工程期末复习总结
一、单选 1、第一个实现DNA重组的实验:1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。 2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。 3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。 4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。 5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA，有的以线型存在，有的以环状存在。 6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNA。 7、DNA的分离抽提法：酚-氯仿抽提法（常用、经典）。 8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。 9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。 10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。 11、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的0D260/OD280值应为 1.7~2.0，0D260/OD230值应大于 2.0，如果0D260/OD280小于1.7，可能有蛋白质污染，如果0D260/OD280大于2.0
或0D260/OD230小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。 13、 14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。例如：B acillus am ylolique faciens H、 H aemophilus in fluenzae dⅠ→Bam H、Hind 15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制—修饰系统。 17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。
生物实训实验报告
生物实训实验报告 篇一：细胞生物学实验社会实践报告 建立一个动物细胞培养室与植物细胞培养室所需的条件与社会价值 无菌环境是细胞离体培养的最基本条件，所以构建一个细胞培养室需要保证工作环境不受微生物和其他有害物质污染，并且干燥无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。 一、基础实验室配置 ⑴消毒间：消毒间主要为了处理实验器材以及实验材料，营造一个无菌的试验环境，一般消毒间会配备超净实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉、酸缸等。 ⑵无菌操作间：一般由缓冲间和操作间两部分组成。缓冲间在外侧，多用于实验之前的准备，例如：更衣，准备实验材料，处理实验数据等，可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。工作人员进入操作间一定要消毒并更衣。 （3）培养基配制间：主要用于配置细胞培养所用的培养基。主要包括冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、
药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。 （4）培养室：用于培养细胞，放置以接种的培养基等。为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺 设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。 （5）洗涤间：主要用于清洗实验之后的用具。除配置水槽外，还需配置洗液皿、落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等，有需求的还可以配置洗瓶机。 以上基础设施若实验室条件不够，可将消毒间，培养基配制间，洗涤间合并一起，但注意实验室卫生以及仪器摆放，房间要保持清洁，明亮。 二、辅助实验室 细胞学鉴定室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。 生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分
基因工程原理与技术思考题
Chapter I Introduction 1)什么是基因？基因有哪些主要特点？ 基因是一段可以编码具有某种生物学功能物质的核苷酸序列。 ①不同基因具有相同的物质基础.②基因是可以切割的。③基因是可以转移的。④多肽与基因之间存在 对应关系。⑤遗传密码是通用的。⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。 2)翻译并解释下列名词 genetic engineering遗传工程 gene engineering基因工程：通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物获得新的遗传性状的操作。 gene manipulation基因操作：对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。 recombinant DNA technique重组DNA技术 gene cloning基因克隆：是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节。 molecular cloning分子克隆 3)什么是基因工程？简述基因工程的基本过程？p2 p4 4)简述基因工程研究的主要内容？p5 5)简述基因工程诞生理论基础p2和技术准备有哪些p3？ 6)基因表达的产物中，氨基酸序列相同时，基因密码子是否一定相同？为什么？ 否，密码子简并性 7)举例说明基因工程技术在医学、农业、工业等领域的应用。 医学:人胰岛素和疫苗 农业:抗虫BT农药 工业:工程酿酒酵母
Chapter ⅡThe tools of trade 1)什么是限制性核酸内切酶？简述其主要类型和特点？ 是一种核酸水解酶，主要从细菌中分离得到。类型特点p11 2)II型核酸内切酶的基本特点有哪些p12-14？简述影响核酸内切酶活性的因素有哪些 p14？ 3)解释限制酶的信号活性？抑制星号活性的方法有哪些？ 4)什么是DNA连接酶p15？有哪几类p16？有何不同p16？ 5)什么叫同尾酶、同裂酶p12？在基因工程中有何应用价值？ 同裂酶：识别位点、切割位点均相同，来源不同。在载体构建方面往往可以取得巧妙的应用。应用较多的同裂酶比如Sma1和Xma1，它们均识别CCCGGG，但前者切后产生钝末 同尾酶：来源各异，识别序列各不相同，但切割后产生相同的粘性末端。由同尾酶(isocaudomer)产生的DNA片段，是能够通过其粘性末端之间的互补作用彼此连接起来的。 6)什么是DNA聚合酶？根据DNA聚合酶使用的模板不同，可将其分为哪两类？各有什么活 性？p17-18 聚合酶：在引物和模板的存在下，把脱氧核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3‘-OH 末端，催化核苷酸的聚合作用。 ①依赖于DNA的DNA聚合酶 ②依赖于RNA的DNA聚合酶 7)Taq DNA聚合酶：是一种从水生嗜热菌中分离得到的一种耐热的dna聚合酶，具有5-3聚 合酶活性和3-5外切酶活性，在分子中主要用于PCR。 逆转录酶：RNA指导的DNA聚合酶， 8)Klenow片段的特性和用途有哪些？举例说明。p17 9)名词解释：S1核酸酶、核酸外切酶、磷酸化酶激酶、 甲基化酶
(整理)分子生物学与基因工程复习题
一、名词解释 1、分子生物学 2、基因工程 3、DNA的变性与复性 4、细胞学说 5、遗传密码的简并性 6、DNA半保留复制、半不连续复制 7、SD序列 8、开放阅读框（ORF） 9、多顺反子 10、蓝白斑筛选 11、中心法则 12、限制修饰系统 13、断裂基因 14、单链结合蛋白 15、核酶 16、密码子家族 17、TA克隆 18、PCR 19、SNP 20、操纵子学说 21、DNA重组技术 22、减色效应-增色效应 23、可变剪接 24、反转录 25、同尾酶 26、加帽反应 27、蓝白斑筛选 28、表观基因组学 29、DNA的溶解温度 30、DNA的大C值 31、重叠基因 32、引物酶 33、逆转录 34、限制性内切酶 35、载体的选择标记 36、DNA甲基化
37、端粒 38、端粒酶 39、前导链 40、启动子 41、反式作用因子 42、同义密码子 43、多克隆位点（MCS） 44、基因组计划 45、C值悖论 46、顺式作用元件 47、胸腺嘧啶二聚体 48、寄主的限制修饰现象 49、拓扑异构酶 50、DNA的溶解 51、拓扑异构体 52、间隔基因 53、假基因 54、同源异型蛋白 55、翻译 56、多重PCR 57、抗终止作用 58、SD序列 59、空载tRNA 60、cDNA RACE 61、分子杂交 62、cDNA文库 63、载体 64、RT-PCR 65、反义RNA 66、延伸tRNA 67、起始tRNA 68、探针 69、反式剪接 70、增强子 71、动物基因工程 72、基因组 73、限制性内切酶 74、单顺反子
75、密码子 76、转录 77、RNA干扰 78、中心法则 79、回环模型 80、TATA box 81、前导链 82、目的基因 83、RFLP 84、RACE 二、判断 1、大肠杆菌DNA生物合成中，DNA聚合酶I主要起聚合作用。( ) 2、DNA半保留复制时，后随链的总体延伸方向与先导链的延伸方向相反。( ) 3、原核生物DNA的合成是单点起始，真核生物为多点起始。（） 4、以一条亲代DNA(3’→ 5’)为模板时，子代链合成方向5’→ 3’，以另一条亲代DNA链 5’→ 3’为模板时，子代链合成方向3’→ 5’。（） 5、RNA的生物合成不需要引物。（） 6、大肠杆菌RNA聚合酶全酶由4个亚基（α2ββ’）组成。( ) 7、大肠杆菌在多种碳源同时存在的条件下，优先利用乳糖。 ( ) 8、在DNA生物合成中，半保留复制与半不连续复制指相同概念。（） 9、逆转录同转录类似，二者均不需要引物。（） 10、真核生物染色体核心组蛋白的乙酰化、组蛋白H1的磷酸化，都会使基因得以失活。（） 11、在原核细胞中，起始密码子AUG可以在mRNA上的任何位置，但一个mRNA上只有一个起 始位点。( ) 12、蛋白质生物合成过程中，tRNA在阅读密码时起重要作用，他们的反密码子用来识别mRNA上的密码子。( ) 13、表观遗传效应是不可遗传的。( ) 14、cAMP与CAP结合、CAP介导正性调节发生在有葡萄糖及cAMP较高时。( ) 15、DNA甲基化永久关闭了某些基因的活性，这些基因在去甲基化后，仍不能表达。 （） 16、RNA聚合酶催化的反应无需引物，也无校对功能。( ) 17、基因是存在于所有生命体中的最小遗传单位 18、人类基因组中大部分DNA不编码蛋白质 19、蛋白质生物合成过程中，tRNA在阅读密码时起重要作用，他们的反密码子用来识别 mRNA上的密码子。 ( )