总砷含量测定的方法验证作业指导书

一、方法验证依据

参照《GB 5009.11－2014食品安全国家标准食品中总砷及无机砷的测定》，制定总砷含量测定方法验证的作业指导书。

二、方法验证条件

2.1 仪器及配套设备

1.1 PF6-3原子荧光光度计，配砷（As）空心阴极灯。

1.2 电子天平：感量为0.1mg

1.3 马弗炉

1.4 标准溶液：砷（As）标准溶液，浓度1.0mg/mL。

2.2 试剂及配制

硝酸：优级纯

硼氢化钾：分析纯

氢氧化钾：分析纯

盐酸：优级纯

硫酸：优级纯

硝酸镁：分析纯

氧化镁：分析纯

抗坏血酸

硫脲+抗坏血酸溶液：称取10.0g硫脲，加约80ml水，加热溶解，待冷却后加入10.0g 抗坏血酸，稀释至100ml.现用现配。

硝酸镁溶液（150g/L）：称取15.0g硝酸镁，溶于水并稀释至100ml.

盐酸溶液（1+1）：量取100ml盐酸，缓缓倒入100ml水中，混匀。

硫酸溶液（1+9）：量取100ml硫酸，缓缓倒入900ml水中，混匀。

硝酸溶液（5+95）：量取5ml,缓缓倒入95ml水中，混匀。

硼氢化钾溶液（15g/L）：称取15.0g硼氢化钾，溶于5.0g/L的氢氧化钾溶液中，并稀释至1000ml,混匀，现用现配。

2.3 标准溶液配制

准确吸取1.00mL砷标准溶液（1.0mg/mL）于100mL容量瓶中，用硝酸溶液（2+98）稀释定容至刻度，即为10mg/L标准使用液；按照稀释办法，依次获得100μg/L、10μg/L的标准使用液。

2．环境条件

（1）环境温度：（10--35）℃。

（2）相对湿度：≤85%。

（3）电源：电压为（220±22）V，频率（50±1）Hz，并具有良好的接地。

（4）仪器应置于水平无振动的工作台上，操作时不得有摇动现象。

（5）场所应通风良好，不得有强光直射，仪器周围无强磁场，电场或振动源干扰，无强气流干扰。

三、方法验证项目

检测要求，方法验证内容为：

1．基线稳定性；

2．测量重复性；

3．加标回收率

四、分析步骤

4.1试样的预处理

4.1.1 在采样和制备过程中，应注意不使试样污染。

4.1.2 粮食、豆类等样品去杂物后粉碎均匀，装入洁净聚乙烯瓶中，密封保存备用。

4.1.3 蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等新鲜样品，洗净晾干，取可食用部分匀浆，装入洁净聚乙烯瓶中，密封，于4℃冰箱冷藏备用

4.2 试样的消解

4.2.1 干法灰化

称取样品1.0g左右，置于50ml坩埚中，同时做两份空白。加150g/L硝酸镁10mL混匀，低热蒸干，将1g氧化镁覆盖在干渣上，于电炉上炭化至无黑烟，移入550℃马弗炉灰化4h,

取出放冷，小心加入盐酸溶液（1+1）10ml,以中和氧化镁并溶解灰分，转入25ml容量瓶或比色管中加入硫脲+抗坏血酸溶液2ml,另用硫酸溶液（1+9）分次洗涤坩埚合并洗涤液至25ml，刻度，混匀，放置30min,待测。同时做空白试验。

4.3 仪器条件

负高压：280v；砷空心阴极灯电流：50mA；

载气流速：300mL/min；屏蔽气流速：300mL/min；

测量方式：荧光强度；读数方式：峰面积。

4.4 标准曲线的制作

使用原子荧光光度计自动配置标准曲线，标准系列使用液浓度，配置成浓度 1.0μg/L、2.0μg/L、4.0μg/L、8.0μg/L、10.0μg/L；测定好仪器的最佳条件，连续用2%的硝酸溶液进样，待读数稳定以后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。

4.5 试样溶液的测定

相同条件下，将样品溶液分别引入仪器进行测定。根据回归方程计算出样品中砷元素的浓度。计算方法参照公式（1）

4.6 加标回收率

在试样中根据试样砷含量的1--2倍加入砷标样，进行试样处理，处理后的试样溶液按照上述最佳条件进行测量，测量结果计算加标样的回收率，计算方法参照公式（2）。

4.7 方法检出限

将仪器各参数调整至正常状态，分别对砷标准溶液的每一个浓度点分别进行三次重复测定，取平均值后，按线性回归法求出工作曲线斜率（b），即为仪器的灵敏度。

在相同的条件下，对空白溶液 (或浓度三倍于检出限的溶液) 进行11次吸光度测量，并求出其标准偏差(sA)。

S A=

I0i?I02 n

i=1

n?1

式中：I0i-------单次测量值I0-------测量平均值

按下式计算仪器测砷的方法检出限Q

L

：

Q L (K=3)＝3S

A

/S(μg/ml)

五、结果分析

1. 试样中总砷含量按下式计算：

X=（C?C0）×V×1000

m×1000×1000

---------------公式（1）式中：

X---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;

C---试样被测液中砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）;

C

---试样空白消化液中的砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）;

V---试样消化液总体积，单位为毫升（mL）;

M---试样质量，单位为克（g）或毫升（mL）；

计算结果保留两位有效数字。

2. 加标回收率按下式计算：

X1=C1×0.025?m1×X

m0

×100%-----------公式（2）式中：

X

1 ------

加标样品的回收率，单位为（%）。

C

1

---加标样品被测液中砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）

X ---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;

m

1

---加标试验的称样质量，单位为克（g）

m

---加标量，单位为（μg）；

六、方法验证结果的判定

6.1基线稳定性

基线的相关系数≥0.99

6.2 测定总砷的重复性 (RSD)

测量重复性≤3%；

加标回收率的区间为80-120%

6.4 方法检出限

方法检出限≤0.010mg/kg

七、结果的处理

7.1 方法验证符合6条中各项要求为正常，允许继续使用。

7.2 方法验证结果任何1项不符合6条要求为不正常，不正常方法需停止使用，经仪器调试、方法改进后再次验证正常后使用。