北师大版细胞工程单元测试

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练出高分

1下图为将胡萝卜的离体组织在一定条件下培育形成试管苗的过程示意图。有关叙述正确

的是()

A ?利用此过程获得的试管苗可能为杂合体

B .①②过程中都会发生细胞的增殖和分化

C.多倍体植株的培育必须经过如图所示过程

D ?此过程依据的生物学原理是细胞膜具有流动性

答案A

解析利用此过程获得的试管苗的基因型与亲本的基因型相同,可能为杂合体,也可能为纯合体,A正确;①是脱分化过程,没有发生细胞分化,B错误;此过程采用的是植物组织培

养技术,其依据的原理是细胞的全能性,多倍体植株的培育不需要采用植物组织培养技术,

C、D错误。

2?右图所示是人工种子的结构简图,对其叙述不正确的是()

A ?人工种子的胚乳中含有胚状体发育所需要的营养物质,还可以添加农药和植物激素

B ?人工种子胚状体还未分化出胚芽、胚轴和胚根等结构

C.人工种子可以工业化生产,播种人工种子可节省大量粮食

D ?人工种子克服了有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题

答案B

解析所谓人工种子,就是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料,

经人工薄膜包装得到的种子。人工种子在适宜的条件下同样能够萌发长成幼苗,可见,人工种子的胚状体已经分化出胚芽、胚轴、胚根等结构。

3 ?下图是某组织培养过程的简图。下列有关说法中,正确的是()

① ② ③

花粉粒一■愈伤组织- '胚状体-■植株

A ?花药离体培养的条件与种子萌发的条件完全相同

B ?若花粉粒核中有两个或多个染色体组,则所得植株为二倍体或多倍体

C.②③过程都是细胞分化过程,因此起作用的激素只有生长素

D ?该过程体现了植物细胞的全能性

答案D

解析花药离体培养所需条件要求更高,需要MS培养基,另外还需要适宜的pH、温度和光照,而种子萌发需要适宜的温度、水分等, A 错误;花粉培养形成的植株称为单倍体, B 错误;在细胞分化过程中有多种激素起作用,其中起主要作用的是细胞分裂素和生长素,C 错误;在该过程中,单个细胞最终培养成了植株,体现了植物细胞的全能性, D 正确。4?用动、植物体的体细胞进行离体培养,下列叙述正确的是( )

A .都需用CO2培养箱

B ?都必须用液体培养基

C.都要在无菌条件下进行

D ?都可体现细胞的全能性

答案C

解析动物细胞培养需要用CO2培养箱,但植物细胞培养不需要用CO2培养箱,A错误;

动物细胞培养必须用液体培养基,而植物组织培养需要用固体培养基, B 错误;动、植物细胞培养都要在严格的无菌条件下进行,C正确;植物细胞培养能体现细胞的全能性,而动物细胞培养的原理是细胞增殖,不能体现全能性, D 错误。

5?用a表示骨髓瘤细胞,b表示已免疫的B淋巴细胞,制备单克隆抗体的细胞融合过程中两次筛选的目的分别为( )

A ?

a、

aa、

ab、bb、a、aa、ab^ ab

B ?a、

aa、

ab、bb、ab、bb、b^ ab

C. a、

aa、ab、bb、ab^产生特定抗体的ab

D ?

a、

aa、

ab、bb、aa^能无限增殖的aa

答案C

解析第一次筛选是选出杂交瘤细胞即ab,第二次筛选是选出能产生特异性抗体的ab细胞。

6 ?新快报记者与“多莉羊之父”面对面,他认为克隆生物和供体会像双胞胎一样相似,但并不完全一样。即使一般人类的双胞胎也不会长得完全一样,体型、个头上总是存在区别。下列有关克隆的叙述,正确的是( )

A .植物组织培养的过程不属于克隆技术范畴

B .克隆动物,如“多莉羊”的诞生涉及多种细胞工程技术

C克隆生物和供体不完全相同是因为细胞内遗传物质的改变引起的

D ?克隆过程中发生了细胞的增殖和分化,未发生细胞的衰老

答案B

解析克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖, 以及由无性繁殖形成基因型完全相同的

后代个体的过程。采用植物组织培养方法由植物细胞得到具有相同基因型的个体的过程,也被称为克隆,A错误;克隆动物,如“多莉羊”的诞生涉及多种细胞工程技术,如核移植、动物细胞培养等,B正确;克隆生物和供体不完全相同主要是由于细胞质基因不同,以及生活环境的影响,而非遗传物质的改变,C错误;克隆过程中的细胞跟正常细胞一样,也经历

着细胞的增殖、分化和衰老,D错误。

7?单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。科学家米尔斯坦和科勒设计了一个用已免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验,下图为其实验流程图。则相关的叙述或说法中,不正确的是()

A? a是骨髓瘤细胞,②表示在选择培养基上进行培养

B ?制备单克隆抗体时,选择B淋巴细胞的原因是它能分泌多种特异性抗体

C.③过程如在体外培养,则需要无菌、无毒,营养充足,温度、pH适宜等环境条件

D ?诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是聚乙二醇

答案B

解析对于B淋巴细胞来说,每一种B淋巴细胞经特定抗原刺激只能产生一种特异性抗体。

根据单克隆抗体制备的流程判断:a是骨髓瘤细胞、b是杂交瘤细胞。①是诱导B淋巴细胞

与骨髓瘤细胞融合的过程。②表示在选择培养基上进行培养、筛选能产生单一抗体的杂交瘤

细胞。③包括体外培养和注入小鼠腹腔内培养。选择培养基只允许杂交瘤细胞生长、增殖,其他细胞不能生存。动物细胞培养需具备的条件是:无菌、无毒,营养充足,温度适宜,pH

适宜,充足的空气。诱导细胞融合时常用聚乙二醇作诱导剂。

&下列关于细胞工程的叙述,错误的是()

A ?电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合

B .去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理

C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体

D ?某种植物甲、乙两品种的体细胞杂交与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同

答案D

解析利用物理(电刺激、振荡、离心)和化学的方法既可诱导植物原生质体融合,也可促进动物细

胞融合;植物体细胞杂交常先用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞,获得有活力的原生质体,用胰蛋白酶处理动物组织分散成单个细胞;将小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的小鼠的

B 淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞, 杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖, 经克隆后生成的 细胞群可产生单克隆抗体; 甲、乙两品种的体细胞杂交后代的染色体数是甲、 乙两品种染色 体数之和,甲、乙两品种杂交后代的染色体数是甲、乙两品种配子染色体数之和。

9?抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究。下列是利用生物学技 术制备抗体的两个途径模式简图。下列说法错误的是 ( )

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A .过程①至②所获取的抗体称为单克隆抗体

B .③至⑥过程获取抗体的技术称为转基因技术

C .过程⑤需要限制性内切酶和 DNA 聚合酶

D . VI 基因体外扩增的技术称为 PCR 技术 答案 C

解析过程①至②是通过细胞融合的方式生产单克隆抗体的过程, 个完整的基因工程的过程, 包括了目的基因的获取、 基因表达载体的构建、 将目的基因导入

A .单克隆抗体制备过程的顺序是:

交瘤细胞具有在体外大量繁殖、产生特异性抗体的特性

C .由图中可看出,此过程运用的技术手段有动物细胞融合和动物组织培养

D .单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高,并且可以大量制备的优点,所以可以制成“生物 导弹” 答案 C

A 正确;过程③至⑥是 受体细胞和目的基因的检测与鉴定四个过程,

B 正确;过程⑤需要限制性内切酶和 DNA 连 接酶,

C 错误;PCR 技术可以实现基因的大量扩增,

D 正确。 10. 下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解。

请据图分析下列四个选项, 其中说法 不正确的一项是( ) B .在单克隆抗体制备过程中之所以选用

B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞,是因为它们融合后的杂

已她疫的

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解析单克隆抗体的制备过程所运用的技术手段包括动物细胞培养和动物细胞融合,

物组织培

养。

11.科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁

育,可以对此转基因奶牛进行克隆(如图所示)。请结合图示回答下列问题:

⑴在进行细胞培养时,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理,形成单个细胞,这

个过程中需要利用 _________________ 酶处理。

⑵用于核移植的供体细胞,一般都选用传代10代以内的细胞,原因是

⑶在进行原代培养时,细胞增殖的方式是_____________________ ,此外,细胞增殖还表现出

____________ 和接触抑制等特点。

⑷将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞细胞核的目的是

(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后,该母牛就会生出与供体奶牛

遗传物质相同的犊牛,但也不是100%的复制,原因最可能是

(6)上述动物细胞工程中涉及的技术有____________________________________________ 转基因

奶牛的克隆成功,说明了动物___________________ 具有全能性。

答案(1)胰蛋白(或胶原纤维酶)(2)该种细胞代谢旺盛、分裂能力强,且遗传物质没有发生改

变(3)有丝分裂贴壁生长(4)使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞

(5)①生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制;②生物的性状还受环境因素的影响

(6)核移植、动物细胞培养、胚胎移植技术体细胞的细

胞核

解析(1)实践中常用胰蛋白酶(或胶原纤维酶)处理动物组织细胞使其分散开来。(2)传代10

代以内的细胞代谢旺盛、分裂能力强,遗传物质没有发生改变,适于作核移植的供体细胞。

(3)在进行原代培养时,细胞以有丝分裂的方式进行增殖,同时表现出贴壁生长和接触抑制的现

象。(4)去除卵母细胞细胞核的目的是使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞。

(5)生物的性状是细胞核基因和细胞质基因共同作用的结果,同时,生物的性状还受环境因素的影

响,因此,克隆动物不可能是供体奶牛100%的复制品。⑹该克隆动物的培

育过程中涉及核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术,说明了高度分化的动物体细胞的细胞核具有

全能性。

而非动

12 .植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示:

叶片加也血原生质怵悬液过滤'离心'

纯净的原牛质体培W肘愈伽织

(1) __________________________________ 培育胚状体利用了这一项生物技术,胚状体再继续培养,则可培育

出完整的植株,这体现了_________________ 。培养基中除了含有一定的营养外,还必须含有

_____________________ 等植物激素,还需要对培养基进行严格的____________________ 。

(2)如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的,若为了获得三七的细胞产物,则只需要培养

到__________ ;若为了获得三七的人工种子,则需要培养到______________________ 。如果愈伤组织是棉花叶肉细胞培养产生的,通过基因工程要获取抗虫棉,目的基因导入棉花愈伤组织细

胞常用的方法是_________________ 法。

(3) __________________________________________________________________ 从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中,必须要经过______________________________________ 。

①无丝分裂②有丝分裂③减数分裂④原代培养

⑤传代培养⑥植物体细胞杂交⑦细胞融合⑧脱分化⑨再分化

答案(1)植物组织培养植物细胞的全能性细胞分裂素、生长素灭菌(2)愈伤组织

胚状体农杆菌介导的遗传转化(3)②⑧⑨

解析(1)离体植物细胞通过脱分化形成愈伤组织,通过再分化形成具有根和芽的胚状体,

再通过细胞分裂、分化发育成一个完整的植株。该技术称为植物组织培养,其原理为植物细胞的全能性。培养基的成分包括水、无机盐、维生素、氨基酸、蔗糖、植物激素(生长素和细胞分裂素等)等;培养基要求进行严格的灭菌。(2)三七的细胞产物为细胞的代谢产物,将

三七叶肉细胞培养到愈伤组织即可;获得人工种子需培养至胚状体;棉花为双子叶植物,导

入抗虫基因常用农杆菌介导转化法。(3)离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分

化和有丝分裂形成愈伤组织,再分化和有丝分裂形成具有根和芽的胚状体。

13.人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关,抗HPV的单克隆抗体可以准确检测

出HPV,从而及时监控宫颈癌的发生,以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程,请据图回答下列问题:

小亂骨s臓细胞

檸时的持丸(不能业HAT

愿锻‘厂培舷冶*昨

细胞工程复习题

细胞工程复习题 一、名词解释(每小题3分,共21分)1.酶工程: 2.继代培养 3.人工种子: 4.单倍体培养: 5.微细胞: 6.胚胎工程: 7.克隆: 8.蛋白质工程: 9.外植体: 10.动物细胞与组织培养: 11.组织工程: 12.雌核发育: 13.胚胎融合: 14.转基因动物: 15.生物化学工程: 16.愈伤组织: 17.看护培养: 18.细胞固定化: 19.染色体工程 20.细胞重组: 21.基因工程技术: 二、简答题 1.细胞工程的重要应用体现在哪些方面

2.何为植物细胞两相培养技术建立植物细胞的两相培养系统必须满足的条件是什么 3.动物细胞体外培养有哪些特点 4.动物器官培养技术中,传统的器官培养方法主要有哪些 5.什么是细胞核移植技术以鱼类细胞核移植为例,其技术要点有哪些方面6.植物组织培养与植物细胞培养有什么区别 7.何为细胞悬浮培养怎样做到悬浮培养细胞的同步化 8.动物细胞生物反应器培养生产的生物制品主要有哪些种类 9.什么是试管动物试管动物技术主要包括哪几个主要技术环节 10.何为体细胞克隆技术多莉羊是怎样培育出的 11.芦荟组织培养快速繁殖中,通过哪些途径可以得到完整的植株 12.人工种子利用有何优势 13.用于动物细胞与组织培养的生物反应器应具备哪些基本要求

14.何为胚胎移植主要包括哪些关键技术 15.转基因动物技术的应用主要体现在哪几个方面 三、论述题 1.请阐述单克隆抗体的制备过程 2.植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容有哪些 3.请阐述原生质的分离,纯化和活力鉴定的技术过程 四、计算题 μ和ppm浓度各是什么1.有一培养基的IAA浓度是1.5/ mg L,问其/ mol L (分子量) 2.培养基的配方是 2.0/0.5/ +++水解酪蛋白 MS BA mg L NAA mg L 500mg/L+3%蔗糖+%琼脂粉。MS母液的浓度分别是:大量元素10倍,微量元素100倍,铁盐100倍,有机物100倍;BA母液浓度ml,NAA母液浓度ml。要配制800ml 该培养基,需要吸取各种母液各多少ml分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克 3.要配制1mol/L的 NaOH100ml, 要称取98%的固体NaOH多少克要配制1mol/L的HCl1000 ml,要量取浓HCl多少ml(NaOH分子量40,HCl分子量,浓HCl含量38%,比重) 五、填空题 1.生物工程操作的对象是什么这是与化学工程等其他工程类学科最明显的不同

高中生物选修3优质教学设计2:2.1.1植物细胞工程基本技术 教案

第二节细胞工程简介──植物细胞工程教学设计案例 教学目标 1.知识方面 (1)细胞的全能性(理解)。 (2)植物细胞工程的主要技术──植物组织培养和植物体细胞杂交(知道)。 2.态度观念方面 (1)通过介绍植物组织培养技术发展简史,植物体细胞杂交技术取得的进展和尚未解决的问题,激发学生探索生命科学奥秘的兴趣。同时,使学生认识到随着人们视野的不断拓宽,认知的不断加深,科学技术呈现日新月异、日臻完善的发展趋势。从而在学习过程中用发展的眼光看待问题,分析问题,不墨守陈规,不拘泥于原有知识的限制而勇于开拓,推陈出新。 (2)在植物细胞工程两大技术的学习过程中,渗透科学态度、科学方法和科学精神的养成教育。 3.能力方面 (1)在教学过程中,合理利用录像、软件等相关资料,培养学生的观察能力、思维能力以及整合、运用科学信息的能力。 (2)创设问题情境,在质疑、探究的学习过程中,培养学生独立思考,推理判断和创造性思维能力。 (3)通过联系农业生产实际,培养学生活学活用,理论联系实际的能力。 重点、难点分析 1.植物组织培养是本节的重点。 分析:植物组织培养重点讲述植物组织培养技术和基本原理,即离体培养的植物细胞脱分化和再分化的过程。其不仅在知识上对高二必修课中有关内容进行了深化和扩展,而且还为培育无病毒植株、制备人工种子、培养转基因植物以及植物体细胞杂交等提供技术支持。

同时,随着科学技术的不断进步,植物组织培养这门崭新的技术将日益普及和深入,成为现代农业生产中重要的技术手段。 2.植物体细胞杂交是本课的难点。 分析:植物体细胞杂交是在植物组培技术的基础上,借助动物细胞融合的方法发展起来的一门新型生物技术。这部分知识对于学生是全新的,加之与其有关的感性材料不多,因而给教学带来一定难度。 教学模式 自学──指导──启发──探究。 教学手段 实物材料、录像、软件。 课时安排一课时。 设计思路 1.布置课前预习:要求学生充分复习与本课有关的旧知识,预习新课,并对新知识的框架及层次结构有一个初步的认识。 2.从新旧知识联系入手,进一步深入学习细胞全能性理论,并在学习过程中,渗透对学生能力和方法的培养。 3.充分利用学生已有的知识积累,借助于多种直观教学手段,采用综合──分散──深化的教学方法,引导学生对植物组培知识进行比较广泛、深入的学习。 4.在学习植物体细胞杂交技术时,教师有意识地创设情境,提出渐进式问题,引导学生进行思维探索,并借助于计算机课件,对该技术进行由点及面的学习。 5.智能训练,实现知识的正向迁移。 重点提示 1.在本段教学中,应注意发挥教材的多功能性,深刻发掘教材的内涵,以知识学习为载体,强化学生多方面良好素质和能力的培养。

细胞工程实验方案设计

目录一、基本原理 (一)基本概念 (二)细胞冻存及复苏原理 二、操作器材、设备及灭菌处理(一)准备室的设备 (二)配液室的设备 (三)培养室的设备 (四)细胞培养用液的配制器材与试剂(五)灭菌操作 三、基本用液的配置 (一)水的制备 (二)PBS的制备与消毒 (三)胰蛋白酶溶液的配制与消毒(四)血清的灭活 四、实验步骤 (一)传代前准备工作 (二)取材 (三)原代培养 (四)传代培养

(五)细胞纯化 (六)细胞系的建立 (七)细胞冻存 (八)冻存细胞的复苏 五、实验记录及基本注意事项(一)基本注意事项 (二)实验记录

小鼠肝脏上皮细胞系的建立 动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的中,让这些和增殖。这个实验方案就是选取小鼠肝脏上皮利用动物细胞培养技术建立细胞系。 一、基本原理 (一)基本概念 1、原代培养(primary culture) 直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。 2、传代培养(subculture) 细胞从一个培养皿以1:2或1:2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养,这种培养称之为传代培养。 (二)细胞冻存及复苏原理 在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

细胞工程练习题(解析版)

细胞工程练习题 1.在下列过程中,需要采用植物组织培养技术的是() ①利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,获得多倍体植株②利用花药离体培养得到的单倍体植株③利用基因工程培养抗棉铃虫的植株④利用细胞工程培养“番茄—马铃薯”杂种植株⑤无子西瓜的大量繁殖A.①②③B.③④⑤ C.①②④⑤D.②③④⑤ 答案D 解析利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,获得多倍体植株,不需要采用植物组织培养技术,①错误;利用花药离体培养得到的单倍体植株,需要采用植物组织培养技术,②正确;利用基因工程培养抗棉铃虫的植株,需要采用植物组织培养技术,③正确;利用细胞工程培养“番茄—马铃薯”杂种植株,需要采用植物组织培养技术,④正确;无子西瓜的大量繁殖,需要采用植物组织培养技术,⑤正确。所以②③④⑤正确。2.科学家培育克隆羊时,使用了三种细胞核的供体细胞,分别将这些细胞核移入去核卵细胞的细胞质中,形成重组细胞,发育成重组胚胎,这些重组胚胎的发育情况如下。 细胞核的供体细胞类型妊娠数/受体母羊数 乳腺上皮细胞1/13 胚胎成纤维细胞4/10 早期胚胎细胞14/27 据此分析不正确的是() A.早期胚胎细胞作为细胞核的供体细胞妊娠成功率最高 B.克隆羊的遗传信息与细胞核的供体细胞完全相同 C.体细胞核移植难度高于胚胎细胞核移植 D.重组细胞发育与去核卵母细胞的细胞质有关 答案B 解析分析表格数据可知,早期胚胎细胞作为细胞核的供体细胞妊娠成功率最高,A正确;克隆羊的培育用到了核移植、胚胎移植技术,克隆羊的细胞核遗传信息来自细胞核的供体,细胞质的遗传信息来自卵细胞,B错误;对比表格中的数据可知:体细胞核移植难度高于胚胎细胞核移植,C正确;核移植中做受体细胞的都是去核卵母细胞,可见重组细胞发育与去核卵细胞的细胞质有关,D正确。

大鼠骨骼肌细胞培养实验指导

大鼠骨骼肌细胞培养 骨骼肌是一种横纹肌,通常是通过肌腱固定到骨骼上,其伸缩可以带动骨骼的移动,促进机体运动。 肌细胞呈纤维状,不分支,有明显横纹,核很多,且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维,每一肌原纤维都有相间排列的粗肌丝及细肌丝。肌纤维收缩并不是肌纤维中肌丝本身的缩短或卷曲,而是细肌丝在粗肌丝之间滑行的结果,肌丝滑行使肌节长度缩短,肌原纤维缩短表现为肌纤维收缩。 体外培养大鼠骨骼肌细胞,为临床肌肉损伤的治疗提供理论依据. 一、实验前准备 实验开始前,将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿,15ml离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台,以紫外线照射30min。 按照含0.2%的XI胶原酶、0.2%的中性蛋白酶、0.1%的胶原酶进行配制消化液,用0.22微米的PES微孔滤膜进行过滤除菌,置于50毫升离心管中,可直接用于组织消化。瓶口消毒后室温待用。 取出无菌培养皿,分别作好标记,吸取适量PBS置于相应标记的培养皿中。 无菌条件下,准备好各种大小的眼科剪刀、止血钳、眼科镊子和手术刀。将断颈处死后浸泡于体积分数为 75%乙醇的SD大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。 二、骨骼肌提取 眼科剪刀剪开大鼠后肢皮肤,暴露腿部肌肉,用手术刀小心割取后肢大腿肌肉,同样方法分离另一后肢大腿肌肉。小心剪取表面无附着膜和脂肪组织的肌肉,置于装有PBS的无菌培养皿中。 吸取适量消化液于相应标记的培养皿中。 将剪取的骨骼肌在无菌PBS浸泡清洗,去除脂肪组织后放置于含消化液的培养皿中,采用眼科剪刀剪碎骨骼肌组织,成1平方毫米不规则碎片。 轻轻摇匀,室温静置消化30分钟 收集组织悬液于50毫升离心管中,用消化液反复冲洗培养皿,直至将全部组织块收集到离心管内。 轻轻吹打混匀组织块悬浮液。

细胞工程实验课题

盐城师范学院海洋与生物工程学院 ——细胞工程实验微课题设计 细胞工程微课题实验方案 不同浓度磷元素对鱼肝细胞的活性 的影响 专业:生物技术 班级:技术14(1)班 成员:14243148杨永周14243150朱剑秋14243146 王宁14243138 胡峰 14243140 李强14243136 陈一帆 14243137 贡森森 日期:2016年11月

磷元素对鱼肝细胞活性的影响 一、实验目的 随着农业的不断高速发展,我国农村为了更高的产量施大量的氮磷钾肥,虽然极大提高了农作物的存活率,但是肥料过剩所产生的水质问题也日趋显著。在这些问题中尤为突出的就是磷元素对水质的影响,调查发现,磷元素过多会使水富营养化从而产生水华破坏水中鱼类的生存环境导致大量鱼类死亡,所以我们今天想研究磷元素过多对鱼的细胞有什么影响,从而警醒人们关注水质安全不要过多施肥。 二、实验原理 草鱼是我国目前养殖产量最大的淡水鱼类之一,在人工养殖过程中,由于水质、饲料等因素易出现以脂肪性肝病为特征的营养性疾病。肝脏作为鱼体最大的解毒和营养代谢器官,在营养物质的消化吸收和保障鱼体健康方面起着重要作用。体外肝细胞分离和原代培养是研究肝细胞功能的有效方法,培养体系中的肝细胞可以很好的模拟体内肝脏的生理环境,用不同浓度的的磷化合物对其进行耐性实验,测试其生物活性。 三、实验器材 (1)设备 培养箱,超净工作台,倒置显微镜,高压蒸汽灭菌锅,低速离心机,冰箱,分析天平,细胞培养瓶8个,移液器,青霉素空瓶6个,血球计数板等。 (2)试剂 D-Hanks 液、PBS缓冲液、胰蛋白酶、牛跟腱胶原、10%胎牛血清、牛胰岛素、100 IU / mL 青霉素、100 μg / mL 链霉素,DMEM培养基,红细胞裂解液、细胞活性鉴别染液台盼蓝染色剂,不同浓度的磷酸溶液。 1:D-Hank’s液的配制称取KCl:0.1g,KH2PO4:0.03g,NaCl:4.0g,NaHCO3:0.175g,Na2HPO4`12H2O:0.04g,溶于双蒸水,混合均匀,定容至500ml,调节pH值7.0-7.4,高压蒸汽灭菌,4℃保存。 2:DMEM培养基的配制:血清的灭活:常用小牛血清,新鲜血清要在56℃水浴灭活30min,再经抽滤分装,即可加入培养基中;吸取配制好的青霉素、链霉素加入到50mlDMEM培养基中(不含小牛血清及双抗),再吸取5ml灭活的小牛血清和2ml 双抗加入培养基中混匀,小牛血清的含量为10%,置于4℃冰箱待用。 4:配置磷酸溶液母液,实验时候稀释成所需的浓度。 实验动物:市场售卖的鱼

(完整版)细胞工程练习题(附答案)

细胞工程练习题 一.选择题 1. 在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中,下列哪一项条件 是不需要的 A.消毒灭菌B.适宜的温度C.充足的光照D.适宜的养料和激素 2. (08江苏生物)下列关于植物组织培养的叙述中,错误 ..的是 A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同3.下列选项中能正确说明生物工程技术的是() A.植物组织培养是指离体的植物器官或细胞进行脱分化形成新个体 B.动物克隆的技术的基础是动物的细胞培养 C.人工诱变、细胞工程、基因工程等都能对微生物进行定向改造 D.动物细胞融合技术目前的用途是培养具有双亲优良性状的经济动物 4.下图是“白菜 —甘蓝”杂种植 株的培育过程。 下列说法正确的 是 A.所得到的“白菜—甘蓝”植株不能结籽 B.愈伤组织是已高度分化的细胞 C.上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程 D.诱导原生质体融合时可用聚乙二醇 5.下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图,相关叙述中正确的是 A.②阶段会发生减数分裂过程B.①阶段需生长素而③阶段需细胞分裂素C.此过程体现植物细胞具有全能性D.此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体6.右图为将胡萝卜的离体组织在一定条 件下培育形成试管苗的过程示意图。 有关叙述正确的是 A. 利用此过程获得的试管苗可能为杂合子 B.①②过程中都会发生细胞的增殖和分化 C. 多倍体植株的培育需经过如图所示过程 D.此过程依据的生物学原理是细胞膜具有流动性 7. 各项培育植物新品种的过程中,不经过愈伤组织阶段的是 A.通过植物体细胞杂交培育白菜——甘蓝杂种植株 B.通过多倍体育种培育无子西瓜 C.通过单倍体育种培育优质小麦 D.通过基因工程培育转基因抗虫水稻 8. (09浙江卷)用动、植物成体的体细胞进行离体培养,下列叙述正确的是 A.都需用CO2培养箱B.都须用液体培养基 C.都要在无菌条件下进行D.都可体现细胞的全能性D.植物体细胞杂交过程中,需用不同浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种体细胞 9. 动物细胞培养必需条件的是 A.无菌、无毒的环境 B.适宜的温度和pH C.O2等气体环境 D.适宜的光照条件 10. 物的肝肿瘤细胞进行细胞培养。下列说法错误的是 A.在利用肝组织块制备细胞悬液时,可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是刺激细胞呼吸 C.为了防止细胞培养过程中细菌的污染,可向培养液中加入适量的抗生素D.在合成培养基中,通常需加入血清、血浆等天然成分 11. (08上海生物)制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括 ①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植 A.①②B.①③C.②③D.③④12. 能有效打破物种界限,定向改造生物的遗传性状,培育新的优良品种的生物技术是A.基因工程技术B.诱变育种技术C.杂交育种技术D.组织培养技术13. 某小鼠生活过程中被多种病原体感染过,科学家却能够以该小鼠为实验材料, 通过细胞工程技术获得抗某种病原体的高纯度单克隆抗体,这是因为 A.小鼠体内只有一种抗体B.小鼠体内只有一种B淋巴细胞 C.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后只产生一种杂交瘤细胞 D.可以通过克隆培养法和抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞14. (08理综Ⅰ)下列关于细胞工程的叙述,错误 ..的是 A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 ③ ② ① 四倍体兰花叶片愈伤组织胚状体植株

细胞培养实验指导

细胞培养实验指导陈轶霞刘俊林

实验报告书写要求: 1、学生实验后应按时完成并提交实验报告。报告要求结构完整、内容充实、图表齐全、书面整洁、分析讨论认真合理等。 2、严禁互相抄袭实验报告,发现雷同实验报告一律视为不及格。 3、切忌全班同学统一打印相同的实验结果图(以前曾发生过全班同学共用一张错误的图的情况) 实验一细胞培养实验室介绍及使用卫生要求 【目的与要求】 1.了解细胞培养实验室的基本设施和布局 2. 掌握细胞培养实验室的使用卫生要求 【基本原理】 细胞培养必须无菌操作,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素影响,应建立专门的实验室并划分不同功能区。理想的细胞培养实验室可分为准备室、更衣室、缓冲室、培养室等。 【内容与方法】 1.通过教师讲解并参观了解开展本课程教学的细胞培养实验室的布局、设施与仪器设备的摆放情况 2.使用卫生要求。 (1)实验室的消毒 实验室日常采用紫外灯消毒;按实验室的卫生管理要求对实验室洁净区按周期进行熏蒸消毒;在培养期间发生严重污染时要进行熏蒸消毒。 (2)培养工作开始操作前将所有培养用的物品经专用物流通道通过传递窗放进培养室,开紫外灯消毒30min,关紫外灯后方进入操作。配有空气净化系统的洁净室在风机开启至少30min后才能达到相应的洁净度级别。 (3)操作者进入培养室时要遵守的程序 a: 用肥皂洗手,在干手器上吹掉手臂上的水滴。 b: 换穿无菌室专用鞋,进入更衣室,外衣挂到指定的衣柜里,用0.1%新洁尔灭溶液对手及前臂进行消毒,戴帽子(不露头发)、口罩(应包住胡须),穿已消毒的洁净服,进入缓冲室。再用0.1%新洁尔灭溶液对手及前臂消毒,在其滞留3min后进入培养室。 (4)开超净工作台10min,期间用0.1%新洁尔灭溶液的擦拭操作台面后可开始具体的操作,同时点燃酒精灯用于临时性的火焰消毒。 (5)实验完毕,关闭超净工作台,及时清理实验用品,废物从通往物流通道的传递窗中传出。工作台面用0.1%新洁尔灭溶液的擦拭消毒后方可出培养室。 (6)出培养室时,将工作服放在更衣室指定的位置以便清洗和消毒,鞋放到隔离鞋柜里,跨过隔离鞋柜,将用过的一次性帽子、口罩、鞋套等放到指定的废物桶,出实验室前用肥皂洗手,关闭空气净化系统,开紫外灯30min。 注:(不写实验报告)

细胞工程实验报告

原理,实验步骤或实验方法,实验结果与分析,注意事项,实验感悟 实验一培养基母液的配制 一、实验目的 通过配置MS培养基母液,掌握母液的配置和保存方法 二、实验原理 配置培养基时,为了使用方便和用量准确,通常采用母液法进行配置,即按培养基配方中各试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。 三、实验材料、试剂和仪器设备 1.试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 , CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O, , KI,CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇,甘氨酸, 盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇,烟酸,蒸馏水NAA,6-BA 2.仪器设备 电子天平,烧杯(50ml、100ml、500ml、1000ml)量筒(1000ml、100ml、25ml),容量瓶(1000ml、500ml、100ml),试剂瓶,玻璃棒数支,药芍,称量纸等。 四、实验步骤 1 大量元素母液的配制 先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中,按照配方表中用量依次分别称取: NH 4NO 3 ,KNO 3 , KH 2 PO 4 , MgSO 4 ·7H 2 O, CaCl 2 ·2H 2 O,待第一种化合物完全溶解后再 加入第二种化合物,当最后一种化合物完全溶解后,将溶液转移至500ml容量瓶中,用蒸馏水定容至500ml,然后转移至细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称,放大倍数,配制日期,配制人,并置于冰箱中保存备用。 2 微量元素母液的配制 按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO 4·4H 2 O, ZnSO 4 ·7H 2 O H3BO3 , KI, Na 2 MoO 4 ·2H 2 O,CuSO 4 ·5H 2 O, CoCl 2 ·6H 2 O,按制备母液I的方法逐个 溶解,转移至容量瓶中,然后定容至500ml,转入细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称,放大倍数,配制日期,配制人,并置于冰箱中保存备用。 3铁盐母液的制备

细胞工程 实验一

细胞器的分离、制备与观察 [目的要求] 1.掌握差速离心法的原理。 2.了解甲基绿-派洛宁、中性红-詹姆斯绿的染色原理和着色现象。 3. 掌握细胞核、线粒体等细胞器的染色方法。 [实验原理] 球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质黏度和离心力。 差速离心法(differential centrifugation)是将细胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心,较大颗粒先在低速离心时沉淀,再用高速离心上清液中的小颗粒物质,从而达到逐级分离细胞器的目的。 细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分离和分析三个步骤完成。 分级分离方法有两种,即:差速离心法和密度梯度离心法。 细胞器沉降先后顺序是细胞核、线粒体、溶酶体和替他微体、核糖体和大分子物质。 线粒体内膜上分布细胞色素氧化酶,能使詹纳斯绿B燃料保持在氧化状态呈现蓝绿色,而胞质中的颜料被还原成无色。 [实验用品] 1.器具:匀浆器、高速冷冻离心机、天平、普通光学显微镜、1.5 ml Ep管、载玻片、10 ml滴管、冰盒、冰块、滤网、染缸、20 ml烧杯。 2.材料:动物肝脏。 3.试剂:生理盐水、PBS、0.25 mol/L的蔗糖溶液、0.34mol/L的蔗糖溶液、0.88mol/L 的蔗糖溶液、95%乙醇、丙酮、甲基绿—派洛宁、中性红—詹纳斯绿、蒸馏水、冰。 4. 甲基绿-派洛宁染液:0.2mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):冰醋酸1.2ml,加蒸馏水至100ml;醋酸钠2.72g溶于100ml蒸馏水中; 使用时两液按2:3比例混合. A液:5%派洛宁水溶液4ml、2%甲基绿水溶液14ml、蒸馏水16ml;B液:0.2mol/L。醋酸缓冲液(pH4.8)16ml。使用时临时将A液与B液混合(5:2)。 5.)中性红-詹纳斯绿B染液: A: 将3滴詹纳斯绿B饱和水溶液(溶解度5.18%)加到5ml无水乙醇中,然后再加入1ml 1:15000中性红溶液(中性红10mg溶于

细胞工程复习题 (2)

《细胞工程》复习题 一、选择题: 1.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是(B)A.结果是相同的 B.杂种细胞的形成过程基本相同 C.操作过程中酶的作用相同 D.诱导融合的手段相同 2. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是( C ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③ 3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的有( D )

A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段完全相同 C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞 4.单克隆抗体是指( C ) A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体 D.单个抗体通过克隆化,产生大量抗体 5.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合,可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体,其依据是(多选) (AC ) A.B淋巴细胞可以产生抗体,但不能无限增殖 B.B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体 C.骨髓瘤细胞可以无限增殖,但不能产生抗体 D.骨髓瘤细胞可以产生抗体,但不能无限增殖 6.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖,形成细胞群。其原因是( D ) A.在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖 B.在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体 C.每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应

. D.每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 7.关于单克隆抗体,下列叙述不正确的是(D ) A、可以制成诊断盒.用于疾病的珍断 B、可以与药物结合,用于病变细胞的定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产,不能体外生产 8. 以下不属于生长素的是(D) A IAA B NAA C 2,4- D D 6-BA 9.植物细胞有而动物细胞没有的结构是(D) A细胞质 B线粒体 C内质网 D叶绿体 10.拥有接触抑制的是(B) A原核细胞 B动物细胞 C植物细胞 D真核细胞 11.产生自胸腺的淋巴细胞是(A) A T淋巴细胞 B B淋巴细胞 C C淋 巴细胞 D G淋巴细胞

细胞原代培养细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名: 学号: 班级: 专业: 同组成员: 一、实验原理

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法: 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎,每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20-30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶培养。 取材注意事项: 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时,要用锋利的器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物:9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤

细胞工程实验报告

细胞工程实验报告 专业:生物技术班级:0801 姓名:励丹学号:30804305 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法,以建立起无菌操作的概念。 2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法,熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。初步掌握无菌操作技术。 3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理,初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。 4、掌握ELISA测定抗体效价的方法,细胞的超低温冻存和复苏,及MTT法测定细胞活性的方法。 5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法,为杂交瘤细胞的制备做准备。 6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法,从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液,用于杂交瘤细胞的融合。 7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法,通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞,并进行选择。 8、学会细胞形态的观察和分析,细胞技术等细胞培养中常见的问题。 二、实验原理 1、原代培养 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,经体外培养后直到第一次传代为止。原代培养首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的组织或器官,切成一定大小的组织块,直接或经消化分散成单个游离的细胞,在人工培养条件下,使其不断地生长、繁殖。 2、细胞活性测定——MTT法 MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒,经二甲基亚砜(DMSO)溶解后,在490nm处测吸收值,其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。 3、培养细胞的超低温冻存于复苏 为了保持细胞株(系)遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存,建立了细胞

2017春 植物生物技术实验指导 (自编) -1

生物工程综合实验—植物生物技术模块 生物工程教研组编 2017年春学期

目录 实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 (3) 实验二MS培养基母液的配制 (6) 实验三MS培养基配制与灭菌 (9) 实验四无菌接种操作 (12) 实验五外植体分化生长的诱导培养 (12) 实验六外植体脱分化生长的诱导培养 (17) 实验七组培苗的炼苗 (20)

实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 一、目的与要求 1、结合对植物细胞工程安徽省工程技术研究中心植物组织培养生产车间和研究实验室的现场认知,了解掌握植物组织培养实验室的组成和所需的基本仪器设备,学会植物组织培养实验室的设计; 2、为后续植物组培实验课程学习与实训准备所需的相关用品。 二、教学场所 1、植物细胞工程技术研究中心; 2、生物工程综合实验分室(A514)。 三、内容与方法 (一)关于植物组培实验室的认知与设计 1、组培实验室设计原则 要求环境干燥清洁;符合无菌操作规程要求;满足生产技术流程需要。 2、组培实验室的一般组成与设备 包括化学实验室、洗涤准备室、培养基制备室、无菌操作室、培养室、细胞学观察研究室,等。 (1)化学实验室 各种相关药品的贮存、溶液配制等。 主要设备:药品柜,防尘橱,冰箱,天平,蒸馏水发生器,加热器(电磁炉等),玻璃器皿,等。 (2)洗涤准备室 用于完成相关器具的洗涤、干燥、堆放存储等。 主要设备:洗涤池,洗瓶机,操作台,烘箱,储物架(柜)等。(3)培养基制备室

用于进行培养基的生产。 主要设备:冰箱,天平,蒸馏水发生器,酸度计,加热器(电磁炉等),玻璃器皿,分装机,灭菌设备,操作台,等。 (4)无菌操作室 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的继代等。无菌室的房间不宜太大,数量根据需要设置。要求干爽清洁,相对密闭,墙地光滑防潮,配置平移门。每一无菌室设内外二间,外间为缓冲室,内间较大,为接种室。 主要设备:紫外灯,超净工作台,臭氧发生器,酒精灯,接种器械(镊子、剪刀、解剖刀、接种针),手推车,等。 (5)培养室 是将接种的材料进行培养生长的场所,大小依规模而定。培养室的设计以充分利用空间和节省能源为原则。 主要设备:空调机,加热器,增湿器,培养架,光照设备,培养箱,转床,人字梯,等。 (6)细胞学观察室 用于进行培养物的取样观察和分析。 主要设备:显微镜,细胞染色、计数、制片设备,天平,离心机,等。(二)组培实验用品的准备 1、玻璃器皿及规格 (1)培养瓶:100~500 mL的玻璃或塑料培养瓶等; (2)培养皿:9~15 cm;(3)烧杯:100~5000 mL; (4)量筒:10~1000 mL;(5)移液管:1~10 mL; (6)试剂瓶:100~1000 mL;(7)容量瓶:100~1000 mL。 2、接种器械 酒精灯,不锈钢镊子、剪刀、解剖刀等。

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导 Prepared on 24 November 2020

植物生理学实验指导

目录

植物材料的采集、处理与保存 植物生理实验使用的材料非常广泛,根据来源可划分为天然的植物材料(如植物幼苗、根、茎、叶、花等器官或组织等)和人工培养、选育的植物材料(如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织、酵母等)两大类;按其水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料(如苹果、梨、桃果肉,蔬菜叶片,绿豆、豌豆芽下胚轴,麦芽、谷芽,鳞茎、花椰菜等)和干材料(小麦面粉,玉米粉,大豆粉,根、茎、叶干粉,干酵母等)两大类,因实验目的和条件不同,而加以选择。 植物材料的采集和处理,是植物生理研究测定中的重要环节。在实际工作中,往往容易把注意力集中在具体的仪器测定上,而对于如何正确地采集和处理样品却不够注意,结果导致了较大的实验误差,甚至造成整个测定结果的失败。因此,必须对样品的采集、处理与保存给予足够的重视。 一、原始样品及平均样品的采取、处理 植物生理研究测定结果的可靠性(或准确性),首先取决于试材对总体的代表性,如果采样缺乏代表性,那么测定所得数据再精确也没有意义。所以,样品的采集除必须遵循田间试验抽样技术的一般原则外,还要根据不同测定项目的具体要求,正确采集所需试材。目前,随着研究技术的不断发展,应该不断提高采样技术的水平。 在作物苗期的许多生理测定项目中都需要采集整株的试材样品,在作物中后期的一些生理测定项目中,如作物群体物质生产的研究,也需要采集整株的试材样品,有时虽然是测定植株的部分器官,但为了维持器官的正常生理状态,也需要进行整株采样。 除研究作物群体物质生产外,对于作物生理过程的研究来说,许多生理指标测定中的整株采样,也只是对地上部分的采样,没有必要连根采样,当然对根系的研究测定例外。采样时间因研究目的而不同,如按生育时期或某一特殊需要的时间进行。除逆境生理研究等特殊需要外,所取植株应是能代表试验小区正常生育无损伤的健康植株。

《细胞生物学与细胞工程实验》

细胞生物学与细胞工程实验 课程编号:2511240 英文名称:Cell Biology and Cell Engineering 课程负责人:王昌留 师资队伍:王昌留、黄玲、李清、曲明娟、孙振兴 适用专业:生物科学 开课学期:秋季学期 课程类型:专业基础必修课 实验课性质:独立设课/非独立设课 先修课程:植物学实验/2511110、动物学实验/2580070、生物化学实验/2501040 总学时:理论学时实践学时 36 课外学时 总学分:1 采用教材及参考书: 1. 安利国主编:《细胞生物学实验教程》,科学出版社,2004 2. 杨汉民主编:《细胞生物学实验》第二版,高等教育出版社,1997 3. 李志勇:《细胞工程》第一版,科学出版社,2003 4. 徐承水,党本元主编:《现代细胞生物学技术》,青岛海洋大学出版社,1995 5. 王金发主编:《细胞生物学实验教程》,科学出版社,2003 内容简介: 本课程是一门理论性和技术性都很强的课程,是在学生已修完生物学、生物化学、细胞遗传学、细胞生物学与细胞工程、微生物学、免疫学基础上而设立的,是生物科学专业的必修课程。 本课程既包括细胞生物学基础实验又包括细胞工程综合实验,是一门对实验仪器要求较高的课程。开设本课程的目的是使学生掌握细胞生物学与细胞工程实验设备的操作方法,具备观察和研究细胞结构、功能与生命活动的基本方法,学会发现问题和解决问题的基本技能,为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。 本课程考核成绩由平时成绩(占30%)、实验报告成绩(占30%)和终期考核成绩(占40%)三部分构成。 本实验包括的实验项目包括:

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细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程(cytotechnology或cell engineering):它是以生物细胞、组织或器官为研究对象,运用工程学原理,按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品,为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图,在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株,并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养(nursing culture):用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交(cell hybridization):指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕:从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子:是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养(anther culture):将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下,放在无菌的条件下,使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。(指离体培养花粉和花药,使小孢子改变原有的配子体发育途径,转向孢子体发育途径,形成花粉胚或花粉愈伤组织,最后形成花粉植株,并从中鉴定出单倍体植株,使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium):培养过程中,有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中,这种培养过某种细胞以后,含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒:由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除,以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系:指从机体中取出而直接培养的细胞,从一代到十代的细胞培养是原代培养,形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交:指在人工控制条件下,不经过有性过程,两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养:是指胚或具胚器官(如子房、胚珠等)在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择:是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征,在特定培养条件下,具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法,是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存:是指液体转变为非晶态(玻璃态)的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition):当细胞在基质上分裂增殖,逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时,细胞就停止增殖,即细胞密度不再增加,这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合(aymmetric fusion):利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合(symmetric fusion):两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体:不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚:离体培养下没有经过受精过程,但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物(不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞)。 21、永久细胞系:大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖,当超过有限世代后,在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。

细胞工程实验小结

细胞工程实验小结 专业:生物技术班级:0801 姓名:励丹学号: 在本次暑期短学期的细胞工程实验课上,我们做了细胞工程中基础的几个实验——饲养层细胞的制备、动物细胞的原代培养(组织块法培养小鼠肝脏细胞,消化法培养小鼠肾脏细胞)、免疫脾细胞的制备、免疫脾细胞与骨髓瘤细胞的融合、细胞的超低温冻存与复苏及活性测定(MTT法检测)、抗体IgG的检测(ELISA 法),让我受益菲浅。其中很多知识在平时的学习中都是无法学习到的,其中很多实验都开阔了我们的视野,让我们获得了许多平时课堂上得不到的知识。在细胞工程实验课即将结束的时候,我对这个短学期的学习进行总结,总结细胞工程课程试验来的收获与不足。 这次的实验分成了8个小组,因为细胞工程的实验都须在无菌室内进行,而无菌室较小,所以各小组轮流进无菌室进行实验操作,故没轮到进无菌室的小组在外面的实验室进行简单的操练,所以较为轻松。 我们中的大多数人都是第一次进无菌室,对无菌室充满了好奇。而进无菌室也需要一重重地灭菌,以确保无菌室内的安全。首先需要用新吉尔灭溶液对需要带进无菌室的物品及我们的手进行消毒灭菌,然后进入缓冲间穿戴无菌服、帽、手套及口罩。在进入无菌室后还需要用酒精棉擦拭手、超净台以及一些物品。在无菌室内的操作都需在超净台上进行,而且需要在酒精灯边上进行,不可以远离超净台,否则可能使培养的细胞或培养液等受到污染,从而造成实验失败。 我们小组在细胞培养的实验中较为成功,细胞生长状态良好,没有出现染菌现象。在进行细胞超低温冻存于复苏实验时,我们组将两只小鼠的细胞混在一起,是的细胞数增加,相对的在冻存中损伤的细胞数也增多,这个实验应该算不成功的。 通过9天的细胞工程实验,我发现实验是细胞工程学学的实践,我们学到的许多理论都会最终作用于实验,也学到了许多其他专业课上没有教到的理论。很多实验都是需要花费许多心思去学习的,也是非常复杂的。我们学习理科的同学,更加要重视实验课,因为理论与实际结合是最重要。在每次实验之后,我们都要做实验报告,通过实验讲义和自己参阅资料,得知本次实验的目的、原理、所需仪器、实验步骤、实验中的要求及注意事项等问题。实验操作当然是细胞工程

细胞工程复习题及答案

细胞工程复习题 一、名词解释 1.细胞工程:以生物细胞、组织或器官为研究对象,运用工程学原理,按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品,为人类生产或生活服务的科学。 2.外植体:指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料 3.植物组织培养:将植物的器官、组织或细胞,在无菌条件下接种于人工配置的培养基上,使其细胞分裂、增值、分化、发育,甚至形成完整植株的方法。 4.愈伤组织:在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞,多在外植体切面上产生。 5.离体无性繁殖:简称离体繁殖,是指利用组织培养方法进行植物离体培养,在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。 6.继代培养:更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料(愈伤组织.芽等)。 7.体细胞杂交:(原生质体融合)指在人工控制条件下不经过有性过程,两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 8 细胞分化:即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变,或发育方式改变的过程。 9 细胞脱分化:培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。 10 细胞再分化:即脱分化后的分生细胞在特定的条件下,重新恢复细胞分化能力,并经历器官发生形成单极性的芽或根,或经历胚胎发生形成双极性的胚状体,进一步发育成完整植物体,这一过程成为细胞再分化。 11 人工种子:指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 12 植物细胞全能性:指植物体的每一个活细胞都具有该植物的全套遗传信息,具备发育完整植株的潜在能力。 13 胚状体:在离体培养过程中产生一种形似胚(具有明显的根端和芽端),功能与胚相同的结构。

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