斐林试剂法测定还原糖的误差分析
斐林试剂法测定还原糖的误差分析
史建国杨俊慧马耀宏张利群
（山东省科学院中日友好生物技术研究中心济南 250014）
摘要：本研究根据斐林试剂测定还原糖的基本原理，采用自动控制系统调整反应条件，定量分析了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响。
关键词：还原糖斐林试剂自动滴定仪
还原糖是谷氨酸发酵生产中重要的生化控制指标，如何快速而准确地测定还原糖是各生产厂家普遍关心的问题。目前，我国谷氨酸生产企业主要采用斐林试剂测定法。由于该法在实际测定过程中易受很多因素的干扰，严重影响测定的准确性［１］。而不同的操作人员控制反应条件的技术不同，测定误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来很多麻烦，严重影响了生产技术水平的提高。本文主要研究了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响，确定了误差来源。为正确掌握斐林试剂滴定法，提高测定的准确度，提供了新的依据。１试剂与仪器
1.1 试剂配制
1.1.1斐林甲液：称取35g硫酸铜（CuSO4·5H2O），取1%次甲基蓝溶液5mL，用水共容后定容至1000mL。
1.1.2斐林乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾，用水共容后
定容至1000mL。
1.1.31０％标准葡萄糖溶液：精确称取100g分析纯葡萄糖（105℃
干燥2h，恒重），加水溶解，并加10 mL分析纯盐酸，定容至1000mL。
1.1.4 1.0%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液100mL，
加水稀释定容至1000mL。
1.1.5 0.1%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液10mL，加水稀释定容至
1000mL。
1.2仪器设备全自动测定仪（山东省科学院中日友好生物技术研究中心研制生产）：按实验要求分别调整加热温度、加热时间、滴定速度、搅拌力度。
2测定方法
2.1开机：按动开/关键、仪器自动清洗一次，开机完成。
2.2定标：按定标键。用微量进样器注入1.0%的标准葡萄糖液100uL，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。反应完成后，仪器显示和打印定标结果。
2.3样品测定
（1）被测样品为1.0%的葡萄糖标准液。
（2）按分析键，用微量进样器注入100uL 1.0%的标准葡萄糖液，用
0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。
（3）反应完成后，仪器显示并打印测定结果。
2.4 结果计算
（1）该反应系统中，滴定反应达到终点所需糖的总体积为10ml（按0.1%的葡萄糖计算）。
相对结果（被测糖体积）= 糖总体积（10mL）—滴定糖体积
（2）仪器设定标准测定值为1.0% 。其它测定值是标准值的校正值。
测定值（%） = 校正系数×相对结果（被测糖体积）
校正系数 = 1.0（%） / 定标时被测糖体积
3结果与分析
3.1加热温度对测定结果的影响
斐林试剂中滴定终点指示剂次甲基蓝在氧化状态下呈蓝色，还原状态下呈无色［２］。反应液中溶解氧含量的高低直接影响次甲基蓝的颜色变化，干扰滴定终点的确定。反应液的温度与溶解氧的含量有直接的关系。温度越高，溶解氧含量越低。因此温度的变化对测定的结果有很大的影响。本研究在反应温度100℃的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标，研究不同的温度下对还原糖测定的影响结果见表1。可见温度越高，测定结果越高，从66—100℃，测定结果相差近8倍。60℃以下则没有反应终点显示。本仪器采用高精度传感器控制恒定的反应温度，最大限度地降低了温度变化对测定产生的影响。
表１加热温度对测定的影响
３.２加热时间对测定结果的影响
手工滴定时，首先将试剂加热到１００℃，然后开始用标准葡萄糖进行滴定。从温度升高至１００℃到开始滴定，这段间隔时间（持续沸腾加热时间）的不同可引起测定误差。在没有间隔时间的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标，研究不同间隔时间对测定结果的影响
（见表２）。结果表明：开始滴定前（间隔时间）长，消耗标准滴定糖液少，测定结果偏高。在１分钟内测定的最大误差可达１２％左右。
表２加热时间对测定的影响
３.３滴定速度对测定的影响
手工滴定时，不同的操作者，滴定的速度不同，由此可引起测定的误差。在自动滴定泵转速恒定的条件下，变化泵管的粗细以调节滴定液的流速，控制滴定速度。本研究在反应温度100℃、滴定速度为0.47ml/min的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标。不同滴定速度对测定结果的影响见表３。滴定速度快，消耗滴定液多，测定结果偏低，反之结果偏高。
表３滴定速度对测定结果的影响
３.４搅拌力度对测定的影响
手工滴定时，要求操作者摇动滴定瓶。摇动滴定瓶的力度和次数不同，可引起测定误差。本研究在反应池中放入不同长度的搅拌子，调整搅拌的力度。在转速不变的情况下，搅拌子大则搅拌力度强，反之搅拌力度小。本研究在反应温度100℃、没有搅拌子的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标。不同的搅拌力度对测定结果的影响见表４。结果表明搅拌力度越大，消耗的滴定液越少，测定结果越高。搅拌力度提高到一定程度以后，测定结果趋于稳定。
表４搅拌力度对测定结果的影响
由以上结果可以看出：加热温度、加热时间、滴定速度、摇动反应瓶的次数都影响测定结果的准确性。在实际应用种，不同的操作者由于测定习惯或方式不同，容易产生不同的测定结果。因此，应加强对滴定过程中技术细节的管理和要求，以降低人为的测定误差，提高还原糖测定的准确性。
参考文献：
１胡嗣明。酒精生产分析检验，轻工出版社 1983。
２臧瑾康等。成都大学学报，1997 ，16（3）：27-28。
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法 xx 生科四班 201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1.初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。 2.正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。 【实验原理】 1.还原糖 还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键 能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液) 的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖） ，不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林 试剂是含 Cu 2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu 2O 的沉淀。托伦斯试 剂被还原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分 子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫 还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。 一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖 则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会 变成葡萄糖酸。 2.费林试剂 费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量 分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还 原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化 亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 3.实验方法 本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶 液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠， 酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反 应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧 、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行 高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况 ，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
实验六检测还原糖
实验六检测生物组织中还原糖的实验 一、教学目标 1、初步学会生物组织中还原糖的鉴定方法，领悟并能描述该实验的实验原理。 2、比较不同实验材料所做的实验结果，探索该实验的理想实验材料。 3、培养学生的动手操作能力，培养学生树立实事求是、认真严肃的的科学态度。 二、学情分析 学生在《第一节 - 细胞中的元素和化合物》的学习中，学生对糖的概念有了明确的认识，对于生物组织中哪些含糖类型，怎么鉴别还原糖还不清楚。通过本节实验教学让学生对颜色反应这一类验证实验有一个总体把握，再则让学生体会出生物学上一些典型的实验现象是要选择实验材料是关键，以及实验中要注意每一步实验方法。 三、实验原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu 2 O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： 2NaOH+CuSO 4 Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2 (淡蓝色沉淀) -CHO+2Cu(OH) 2-COOH+Cu 2 O(砖红色沉淀)+2H 2 O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 本实验能利用还原糖能与斐林试剂发生颜色反应的特性，通过一系列实验检测生物组织中是否含有还原糖。
发酵液还原糖的测定方法
中间体化验操作法 发酵液中糖含量的测定： 1．原理：利用还原性糖类的自由配合基在碱性溶液中能将高价铜还原成为 低价铜，过量的高价铜在酸性溶液中与碘化钾作用生成Cu2I2，同时析出碘，析出的碘以标准硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液滴定，同时做一空白对照，从两者之间求出糖的含量。 反应式如下： 酸△ (C6H10O6)n n(C6H10O6) 水解 CuSO4+2NaOH Cu(OH)2＋Na2SO4 CHOH—COONa O—CH--COONa Cu(OH)2＋Cu ＋2H2O CHOH—COOK O—CH--COOK O-CHCOOK CHO Cu ＋CHOHO4 O-CHCOOK CHOH O--CHCOOK COONa HO--CHCOOK 2Cu ＋NaOH＋H2O (CHOH)4＋Cu2O＋ O--CHCOOK CH2OH HO--CHCOONa O—CHCOOK CHOHOOK 过量的Cu ＋2H2SO4 O—CHCOOK CHOHOONa ＋CuSO4＋Na＋＋K＋＋SO42- 2CuSO4＋4KI＋2Cu↓2K2SO4＋I2（在酸化条件下） I2＋2Na2S2O32NaI＋Na2S4O6 2．试剂： 1）斐林试剂直接配制法：将酒石酸钾钠800g溶于水中，再溶入硫酸铜160g，加入1N的NaOH溶液1318ml （或固体氢氧化钠580g），最后加入KI400g溶后，加入纯化水至总体积为10000ml，摇匀即得。 2）斐林试剂贮备液的制备 a．硫酸铜贮备液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）800g加纯化水溶解（如 浊可用玻璃棉过滤），使总体积成10000ml，摇匀即可。 b．酒石酸钾钠贮备液：称取酒石酸钾钠400g，加纯化水使总体积为1000ml 摇匀即得。 c．斐林试剂混合液：取硫酸铜贮备液1000ml，加酒石酸钾钠贮备液1000ml， 摇匀加11mol/L氢氧化钠（NaOH）659.5ml或固体NaOH290g，最后加入碘化钾（KI）200g，溶后加入水，使总体积为5000ml。 3）8N的硫酸：取36mol/ml 的试剂H2SO4（密度为1.84g/ml）222ml，缓缓注入778ml水中，放冷摇匀，即得。 4）0.5%淀粉指示剂： a．称取可溶性淀粉5g，溶于约50ml纯化水中。
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法 xx 生科四班201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。 2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。 【实验原理】 1. 还原糖 还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu O的沉淀。托伦斯试剂被还 2 原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。 一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。 2. 费林试剂 费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 3. 实验方法 本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用
可溶性还原糖的鉴定原理
《生物组织中还原糖与蛋白质的鉴定》学案 陈臻一、可溶性还原糖的鉴定原理： 生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛基，因此叫还原性糖；蔗糖的分子内没有游离的半缩醛基，因此叫非还原性糖，不具有还原性。实际上本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 可溶性还原糖与斐林试剂（质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/ml的硫酸铜溶液配制而成）混合后,可以生成砖红色沉淀。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色到棕色再到砖红色 二、蛋白质的鉴定原理： 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/ml的硫酸铜溶液。在碱性溶液NaOH中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色或紫色的络合物，这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应，从而用来鉴定蛋白质的存在。 题例领悟 例1：用斐林试剂鉴定可溶还原糖时，溶液的颜色变化过程为： A、浅蓝色棕色砖红色 B、无色浅蓝色棕色 C、砖红色浅蓝色棕色 D、棕色绿色无色 解析：斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后，立即生成浅蓝色的Cu（OH）2沉淀。Cu（OH）2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，答案为A 例2：将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是： A、碘液、苏丹Ⅲ溶液 B、双缩脲试剂、碘液 C、双缩脲试剂、苏丹Ⅳ染液 D、碘液、斐林试剂 解析：白浆为淀粉，淀粉遇碘变蓝，黏稠物质为蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。因此，答案为B 自我评价 一、选择题： 1、徒手切片时的刀口方向应是（） A、向前 B、向内 C、向左 D、向右 2、在鉴定蛋白质样品时，加双缩脲试剂的正确操作方法是（） A、先加A液，混合后再加B液 B、先加B液，混合后再加A液 C、A、B液混合后立即加入 D、上述方法都可以采用
(完整版)斐林试剂和双缩脲试剂区别
斐林试剂和双缩脲试剂区别 1、试剂的浓度和配制方法不同 斐林试剂：甲液： 0.1g/mL 的NaOH 溶液；乙液：0.05g/mL 的4CuSO 溶液。使用前临时配制，在2mL 的甲液中滴入4滴～5滴乙液，振荡使混合均匀后即可。 双缩脲试剂：A 液：0.1g/mL 的NaOH 溶液；B 液：0.01g/mL 的4CuSO 溶液。 分别配制好A 液和B 液即可。 2、试剂的作用和鉴定原理不同 斐林试剂： 作用：可鉴定可溶性还原糖。 原理：甲液和乙液混合后产生 2)OH (Cu 沉淀，2)OH (Cu 与含醛基（—CHO ）的可溶性还原糖，在加热条件下反应，将 2)OH (Cu 还原为砖红色的O Cu 2沉淀。双缩脲试剂： 作用：可鉴定蛋白质溶液。 原理：在碱性溶液（NaOH ）中，双缩脲（22CONH NH NCO H ）能与2Cu 反应，形成紫色络合物。由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键（— CO —NH —）， 因此，蛋白质都可以与双缩脲试剂发生反应而使溶液呈现紫色。3、试剂的使用方法不同 斐林试剂：使用时现配现用，要水浴加热。如果斐林试剂放置一段时间， 因2)OH (Cu 沉淀在溶液底部而无法使用。使用时，甲液和乙液不可分别加入到待测液中，否则，待测液（苹果组织样液）中的有机酸会中和NaOH ，使产生的2)OH (Cu 不足而影响鉴定。 双缩脲试剂：使用时，双缩脲试剂A 液和双缩脲试剂 B 液要分别先后加入到待测液中，不需要加热。双缩脲试剂A 液和双缩脲试剂 B 液不可以混合后再加入待测液。如先混合，则会产生2)OH (Cu 沉淀而无2Cu 产生。加入的双缩脲试剂 B 液（4CuSO ）也不能过量，
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定——斐林试剂热滴定法 发布时间：2013-7-1 11:01:32 实验原理 还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。 直接滴定法即斐林试剂热滴定法。斐林试剂由甲溶液和乙溶液组成。甲溶液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙溶液含氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。将一定量的甲溶液和乙溶液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu（OH）2+NaSO4。在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀于酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜络合物。 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀。 反应生成的氧化亚铜沉淀于斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。滴定时以亚甲基蓝为氧化还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。 实验材料 藕粉、淀粉 实验器材 试管3.0×20cm（×1）、移液管5ml（×2）、烧杯100ml（×1）、250ml锥形瓶、调温电炉、滴定管25ml （×1）、电子天平等。 试剂 1、斐林试剂 甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水并稀释到1000ml。 乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于蒸馏水中，在加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，储存于具橡皮塞玻璃瓶中。 2、0.1%葡萄糖标准溶液：称取1g经98-100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCL（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。 3、6mol/L HCL：取250ml浓HCL（35%-38%）用蒸馏水稀释到500ml。 4、碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于蒸馏水中，定容至100ml。 5、6mol/L NaOH：称取120gNaOH，溶于蒸馏水中，定容至500ml。 6、0.1%酚酞指示剂。 实验方法 1、样品中还原糖的提取：准确称取1g藕粉，放入100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20分钟，不时搅拌，使还原糖浸出。过滤，将滤液全部收集到50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 2、样品中总糖的水解及提取：准确称取1g淀粉，放入大试管中，然后加入10ml 6mol/L HCL和15ml蒸馏水，在沸水浴中加热0.5小时，取出1-2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解
费林试剂热滴定定糖法实验报告
生物化学实验报告 费林试剂热滴定定糖法
一、实验目的 1. 学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2. 了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。 3. 熟练掌握动物细胞传代培养的实验方法。 4. 学习细胞生死状态鉴别的方法。 5. 了解细胞生死状态鉴别的原理。 6. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。 7. 掌握细胞技术方法，计算细胞存活率 二、实验原理 还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液 含质量分数为0.05 g/mL的硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含质量分 数为0.1 g/mL的氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时， 硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠 与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物，该含Cu2+络合物的溶液，被还原 后得到砖红色Cu2O的沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的 存在与否。 费林试剂热滴定定糖法的基本原理,是在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定 量的费林试剂时, 将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜, 以亚甲基蓝为指示 剂, 稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基 蓝, 指示滴定终点。 三、实验器材 1. 试剂
1.1费林试剂(定量)： 费林甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和0.05克次甲基蓝，溶于1000毫升水中。 费林乙液：称取50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠和4克亚铁氰化钾溶于1000毫升水中。 1.2 标准葡萄糖溶液：称取葡萄糖(预先在105℃烘干，恒重)1克，用少量蒸馏水溶解后加入8毫升浓盐酸(防止微生物生长)，再用蒸馏水定容至1000毫升。 1.3 6N盐酸溶液。 1.4 10%氢氧化钠溶液。 1.5碘试剂：将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀释10倍。 1.6 PH1~14试纸。 2. 器材 (1)25毫升碱滴定管。(6) 万能夹 (2)移液管(5、10毫升) (7) 铁架台 (3)100毫升溶量瓶(8) 点滴板 (4)100毫升锥形瓶(9) 水浴锅 (5)滴管(10) 600瓦电炉 五、操作步骤 1. 空白测定 准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失为止。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)。 全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件 2. 总糖的测定 准确称取面粉1克，加入6N盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，过滤，滤液定容至100毫升。准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。 准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定) A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备 1)斐林试剂甲液 称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42 滤 2)斐林实际乙液 分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤 B斐林试剂标定 精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。此操作在1min内完成。再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。 R=WG/V 式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g; W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml G——葡萄糖的质量，g V——葡萄糖定容体积，250ml
C测定步骤 称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。 计算 还原糖含量按下式计算 还原糖(%)=100RV/WG 式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g; W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml; G——样品质量，g; V——葡萄糖定容体积，250ml。
斐林试剂
斐林试剂、双缩脲试剂和班氏试剂比较 苗树新 斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同，但二者的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂，二者的使用方法及原理、成分也有区别，下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。 1. 斐林试剂和双缩脲试剂 斐林试剂和双缩脲试剂都由溶液和溶液组成，但二者有如下三点不同： （1）溶液浓度不同 斐林试剂中溶液称为斐林试剂甲，其浓度为溶液称为斐林试剂乙，其浓度为；双缩脲试剂中溶液（双缩脲试剂A）的浓度为，溶液（双缩脲试剂B）的浓度为。 （2）使用原理不同 斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 （3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先反溶液和溶液混合（将滴溶液滴入溶液中），而后立即使用：双缩脲试剂使用时，先加入溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴溶液，振荡摇匀后观察现象。 2. 斐林试剂和班氏试剂 关于斐林试剂和班氏试剂，可用下面的例题引出其异同点：例：你可用什么方法，检验人的尿液中是否含有糖？ 答案： 方法一：在试管中加入人的尿液0.1mL，加入班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放
实验四斐林试剂法法测定还原糖含量
一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)××1/10×n 式中：Vo--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml n---------样品稀释倍数 六、思考题：
实验四 斐林试剂法法测定还原糖含量(1)
实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量 一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：69.3g CuSO4.5H2O加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0ml)。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)×0.002×1/10×n 式中：V o--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 0.002-----标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml
【课外阅读】可溶性还原糖鉴定的几种方法
可溶性还原糖鉴定的几种方法 生物组织中普遍存在着各种糖类，其中葡萄糖、果糖、麦芽糖等分子内含有醛基，醛基具有还原性，可与弱氧化剂反应。因此凡是与醛基有特定颜色反应的化学试剂都可以用来鉴定可溶性还原糖的存在。在化学上常用新制的氢氧化铜和银氨溶液来鉴定可溶性还原糖，在生物学上常用斐林试剂、班氏试剂、本尼迪特试剂来鉴定可溶性还原糖。 1．利用银氨溶液（也叫托伦试剂）：银氨溶液是在2％的AgNO3溶液中逐滴滴入2％的稀氨水，至最初产生的沉淀恰好溶解为止，这时得到的溶液就是银氨溶液。银氨溶液中含有Ag(NH3)2 OH（氢氧化二氨合银），这是一种弱氧化剂，能把可溶性还原糖中的醛基氧化成羧基，同时Ag＋被还原成金属银。还原生成的银附着在试管壁上，形成银镜。可见，银镜反应可用于鉴定可溶性还原糖，鉴定的结果是出现银镜。 2．利用新制的氢氧化铜：在试管里加入10％的NaOH溶液2mL，滴入2％的CuSO4溶液4～6滴，振荡后就会生成新制的Cu(OH)2，加入生物组织样液0.5 mL，加热至沸腾，若生物组织样液中含有可溶性还原糖，就会产生砖红色的Cu2O（沉淀）。 3．利用斐林试剂：斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL C uSO4溶液配制而成。使用时，先将NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mL NaOH溶液中），生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀，然后向所要鉴定的生物组织样液加入该混合液进行水浴加热，若溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀），则说明生物组织样液中含有可溶性还原糖。由于斐林试剂要现配现用，否则实验难以得到满意结果，因为此鉴定方法实际利用的是斐林试剂中的新制Cu(OH)2作为弱氧化剂，与可溶性还原糖的反应，而Cu(OH)2是一种沉淀物质，放置过久沉淀过多则不利于反应，因此人们对斐林试剂进行改良，配制出了班氏试剂和本尼迪特试剂。 4．利用班氏试剂（也叫班氏糖定性试剂）：班氏试剂是斐林溶液的改良试剂，由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配制而成。配制方法是：将85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶解在400mL 水中，将8.5g无水硫酸铜溶解在50mL的热水中，然后将CuSO4溶液加入上述的柠檬酸钠和碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀产生可过滤除去。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH－，柠檬酸钠和碳酸钠溶液与CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH－结合，生成Cu(O H)2与可溶性还原糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。由于柠檬酸钠与碳酸钠为一对缓冲物质，产生的OH－数量有限，与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低，不易析出变质，因此该试剂可长期保存。不必象斐林试剂那样配成甲、乙两种溶液，分别保存，所以比斐林试剂使用方便。 5．利用本尼迪特试剂：也是斐林溶液的改良试剂，也是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液，与班氏试剂相比，只是有关的物质浓度有所差异。配制方法是：20克柠檬酸钠和11.5克无水碳酸钠溶解于100毫升热水中。在不断搅拌下把2克结晶硫酸铜的20毫升水溶液慢慢地加到上述柠檬酸钠和碳酸钠溶液中。此溶液应该十分清彻，否则需要过滤。本尼迪特试剂在放置时不易变质，也不必象斐林试剂那样配成甲、乙两种溶液，分别保存，所以比斐林试剂使用方便。 班氏试剂、本尼迪特试剂与斐林试剂只适用于可溶性还原性糖的鉴定，不适用于非还原性糖（如蔗糖）的鉴定。无论是班氏试剂、本尼迪特试剂，还是斐林试剂，归根结底都是Cu(OH)2与可溶性还原性糖中的醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的Cu2O沉淀，因而三者反应现象是一样的。
实验还原糖鉴定教案
实验一、生物组织中还原糖的鉴定[教案] 一、课型：新授课 二、教学目标： 1、知识与技能目标 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）体验实验操作过程中的操作问题，讨论实验指导的关键。（3）培养学生分析、解决问题的能力，坚持实事求是的科学态度。 2、过程与方法 （1）通过简单演示实验，创建情景，引入新课题。 （2）通过PPT、探究学习和讨论等方法来获得信息。 （3）通过讲解、演示、PPT展示、课堂练习以及课后习题等，让学生加深对生物组织中还原糖的鉴定的理解。 3、情感态度与价值观 （1）通过学生实验和演示实验，进一步培养学生动手、观察、分析的实验能力。 （2）能将所学的知识与生活、环境、社会等实际问题相联系，并运用到生活中去，发展学习的兴趣 三、教学重、难点 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握验证实验及探索实验的设计技巧，从而培养创新思维能力。 四、教具准备：
1、PPT课件。 2、实验材料：（1）实验仪器：解剖刀、研钵、漏斗、纱布、漏斗 架、烧杯、试管、试管架、酒精灯、石棉网、三脚架、试管、胶头滴管、量筒。 （2）实验材料：斐林试剂A液：0.1g/ml的NaOH 溶液、斐林试剂B液：0.05g/ml的CuSO4溶液SiO2、H2O、苹果、土豆、菠菜。 五、课时安排：1课时。 六、教学方法： 讲授法、讨论交流、练习法、问答法、演示法、多媒体辅助教学法等。 七、教学过程： 情境导入： 【老师】同学们，上课了。今天老师给大家带来了一个小魔术。 【展示】一个装有刚配好的斐林试剂的试管。 【老师】这是一种蓝色的溶液。 【展示】一个装有苹果汁的试管。 【设问】这是刚榨好的苹果汁，猜猜我要干什么？很简单，我要把苹果汁倒入蓝色溶液的试管中，那大家猜猜会有什么变化呢？ 【学生】思考回答 【老师】抽问 【学生】回答
还原糖的鉴定中的易错点
高中生物实验中的还原糖鉴定实验之易错点 河南师大附中吴彦军 斐林试剂和班氏试剂都是高中生物必修一中检验还原性糖的试剂，但其二者在成分和使用原理以及保存方法方面都有一定的区别。下面就从这两种试剂的使用原理、所含成分及使用方法等方面做一简单比较： 1、成分不同： 班氏试剂的配制方法：把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液-Na2CO3溶液中，边加边搅，滤去沉淀即可。 斐林试剂的配制方法：斐林试剂甲液为0.1 g/mLNaOH的溶液。乙液为0.05 g/mL CuSO4的溶液。使用时，将4～5滴乙液滴入2 mL甲液中，混合后立即使用。 2、使用原理不同：柠檬酸钠和碳酸钠都是强碱弱酸盐，在水中水解时均可产生OH-。柠檬酸钠-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，所生成的Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基（-CHO）发生反应生成砖红色沉淀。而斐林试剂则是将CuSO4溶液与NaOH溶液发生反应生成Cu(OH)2。因此，无论是班氏试剂还是斐林试剂，归根结底都是Cu(OH)2与还原糖分子中的醛基（-CHO）在沸水浴加热条件下相互作用生成砖红色的Cu2O沉淀，两者反应现象是一样的，这是两种试剂在鉴定还原糖的结果上的相同之处。 3、保存方式不同：在班氏试剂的配方中，柠檬酸钠为-Na2CO3是一对缓冲物质，产生的OH-数量不大，与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低，不易析出，因此该试剂可长期保存。正因为如此，医疗上一般使用班氏试剂鉴定尿糖；而斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后可以产生较多地Cu(OH)2，很容易沉淀析出，因此斐林试剂一般为现用现配。 4、反应条件与现象：斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2 O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。班氏试剂亦如此。 该实验中还应掌握常见还原糖种类：单糖（葡萄糖、果糖、核糖、半乳糖）和部分二糖（乳糖和麦芽糖） 本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。 鉴定还原糖一般不宜选择叶片作为实验材料： 在双子叶植物中,光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉,暂时储藏在叶子内,因此最好不用双子叶植物的叶子作实验材料。 有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾，叶内尽管含有大量的可溶性单糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此，也不宜用单子叶植物的叶子作实验材料。
斐林试剂法测定还原糖的误差分析
斐林试剂法测定还原糖的误差分析 史建国杨俊慧马耀宏张利群 （山东省科学院中日友好生物技术研究中心济南250014） 摘要：本研究根据斐林试剂测定还原糖的基本原理，采用自动控制系统调整反应条件，定量分析了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响。 关键词：还原糖斐林试剂自动滴定仪 还原糖是谷氨酸发酵生产中重要的生化控制指标，如何快速而准确地测定还原糖是各生产厂家普遍关心的问题。目前，我国谷氨酸生产企业主要采用斐林试剂测定法。由于该法在实际测定过程中易受很多因素的干扰，严重影响测定的准确性［１］。而不同的操作人员控制反应条件的技术不同，测定误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来很多麻烦，严重影响了生产技术水平的提高。本文主要研究了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响，确定了误差来源。为正确掌握斐林试剂滴定法，提高测定的准确度，提供了新的依据。 1试剂与仪器 1.1试剂配制 1.1.1斐林甲液：称取35g硫酸铜（CuSO4·5H2O），取1%次甲基蓝溶液5mL，用水共容后定容至1000mL。 1.1.2斐林乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾，用水共容后定容至1000mL。 1.1.310%标准葡萄糖溶液：精确称取100g分析纯葡萄糖（105℃干燥2h，恒重），加水溶解，并加10mL 分析纯盐酸，定容至1000mL。 1.1.4 1.0%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液100mL，加水稀释定容至1000mL。 1.1.50.1%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液10mL，加水稀释定容至1000mL。 1.2仪器设备 全自动测定仪（山东省科学院中日友好生物技术研究中心研制生产）：按实验要求分别调整加热温度、加热时间、滴定速度、搅拌力度。 2测定方法 2.1开机：按动开/关键、仪器自动清洗一次，开机完成。 2.2定标：按定标键。用微量进样器注入1.0%的标准葡萄糖液100uL，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。反应完成后，仪器显示和打印定标结果。 2.3样品测定 （1）被测样品为1.0%的葡萄糖标准液。 （2）按分析键，用微量进样器注入100uL1.0%的标准葡萄糖液，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。 （3）反应完成后，仪器显示并打印测定结果。 2.4结果计算
酿酒工艺学实验讲义
实验一啤酒的感官分析 一、实验目的 利用感官检验对啤酒的优劣作出判断。 二、实验原理 通过用口、眼、鼻等感觉器官检查产品的感官特性，即对啤酒的色泽、香气、滋味及典型性等感官特性进行检查与分析评定。 三、实验器材 原瓶啤酒三瓶、放大镜、啤酒起子、温水、秒表、尺子、烧杯（玻璃杯或一次性透明杯） 四、实验步骤 1、啤酒样品前处理 将待品评样品编号，然后放入冰箱中恒温至12-15℃，待用。 2、外观的评价 透明度 先取原瓶啤酒，将其标签洗掉，根据需要将酒样密码编号，置于明亮处迎光观察。 倒酒 将恒温至12-15℃的啤酒沿品评杯轴线方向平稳匀速倒入洁净的品评杯中，瓶口距杯上方2-3厘米处，待泡沫涌起至杯口处停止倒酒。借助于放大镜于光亮处观察。记录色泽透明、清亮、微亮、微混及浑浊等；对于有沉淀的酒样，则记录为轻沉淀、沉淀或重沉淀等；有时啤酒虽透明，但可以发现小粒游动，浮游物可用离心机使其沉淀，再以显微镜进一步观察。 泡沫评价 方法：秒表法测泡沫 原理：在同一构造的器具，在同一温度、固定条件下，测定啤酒泡沫消失速度。 将预先彻底清洗干净已干燥过的玻璃杯置于铁架台底座上，固定铁环于距杯口3cm处。将原瓶啤酒置于15℃水浴中保持至等温后启盖。立即置瓶口于铁环上，沿杯中心线，以均匀流速将啤酒注入杯中，直至泡沫高度与杯口相齐时止。同时按秒表计时，观察泡沫升起情况。直至泡沫高度与杯口相齐时为止（满杯时间宜控制在4s-8s内）。同时按秒表开始计时。 a、等待泡沫稳定后测定泡沫的高度（厘米）。 b、观察泡沫升起的情况，记录泡沫的形态（包括色泽及细腻程度）和泡沫挂杯情况。 c、泡持性观察，记录泡沫从满杯至消失（露出0.05cm2酒面）的时间,以秒表示。 测定时严禁有空气流通，测定前样品瓶应避免振摇。所得结果表示至整数。 3、气味和滋味 酒样在15℃保温至少一小时，启盖后嗅其气味和品尝滋味，根据其气味进行描述。（1）香气
用斐林试剂检测还原糖时一定要加热吗-2019年文档
用斐林试剂检测还原糖时一定要加热吗 1 问题的提出笔者有一次在进行还原糖检测实验时，已经向梨汁中加入了斐林试剂，因为临?r有其他事情需要处理，没有来得及进行水浴加热，就将试管放置于试管架上离开了一段时间。当返回实验室时竟发现试管内也出现了砖红色沉淀，当时大为惊讶。人教版高中生物必修一教材第18页、苏教版高中生物必修一教材第15页以及高中化学教科书，在讲解还原糖检测方法时均要求水浴加热。为什么这支没有加热的试管内试剂竟然变成了砖红色了呢？由此产生疑问：用斐林试剂检测还原糖时一定需要加热吗？对此，笔者经过实验探究与分析，试图给出合理的可供参考的解释。 2 实验探究 2.1 斐林试剂检测还原糖的实验原理 生物组织中存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖和麦芽糖等，它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基）。斐林试剂由质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05 g/mL的CuSO4溶液混合配制而成，两者混合后，立即生成淡蓝色的Cu（OH）2沉淀。Cu（OH）2与加入的葡萄糖，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： CH2OH-（CHOH）4-CHO+2Cu（OH）2→CHOH-（CHOH）
4-COOH+Cu2O↓+2H2O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。水浴加热则会促进上述反应的进行，缩短反应所需时间。水浴温度为60℃时，反应完成约需2 min。 2.2 不加热，还原糖与斐林试剂也能完成显色反应 室温条件下（即未经水浴加热），还原糖与斐林试剂能否反应产生砖红色沉淀？若能完成显色反应，又需要多长时间？笔者设计了如下实验进行探究。 实验步骤（该实验的环境温度为24℃）： （1）向试管内注入2 mL梨汁。 （2）向试管内注入1 mL斐林试剂，震荡摇匀后插到试管架上。 （3）适时震荡试管中的溶液，观察试管中溶液的颜色变化，每隔10 min记录下试管中溶液的颜色。 实验结果：当环境温度为24℃时，在梨汁中加入斐林试剂后，随着反应时间的延长，溶液颜色为浅蓝色→墨绿色→棕色→棕红色→橙红色→砖红色。可见在室温条件下，不经过水浴加热，还原糖与斐林试剂也能发生反应，产生砖红色沉淀。只是完成显色反应所需时间延长，约需50 min后才能出现砖红色沉淀。 2.3 不同温度对还原糖与斐林试剂显色反应的影响 前面探究了室温条件下，完成显色反应所需时间的长短。但其他温度条件下，完成显色反应需多长时间？笔者又设计了系列