梅毒螺旋体检测标准操作规程
目 的:规范的梅毒螺旋体检验操作,确保检测结果准确。
适用范围:性病实验室工作人员
责
任 人:实验操作者
1、标本的采集与处理
1.1标本采集的基本要求
1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性,医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集
梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法,各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液
1.2.1.1血清标本
根据需要,用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml,室温静置1-2小时(或37℃静置30分钟),待血液凝固、血块收缩后,3000r/min离心10-15分钟,分离新鲜血清,备用。也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本
根据需要,用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml,轻轻颠倒混匀8-10次,3000r/min离心10-15分钟,分离血浆,备用。血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验(一般仅用于RPR实验,),但易出现假阳性反应(需用血清复试),如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血
消毒局部皮肤(成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂,1岁以下儿童采用足跟部)。一次性采血针刺破皮肤,用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液,立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液
1.2.2.1用于病原学检查
用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位,取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测,或取渗出液直接涂片,用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测
用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位,刮取渗出液,加入有DNA保存液(1ml/管)的标本管中,备用。
1.2.3淋巴液
无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结,注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次,取少量的淋巴液直接滴于载玻片上,加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
1.2.4脑脊液
操作由专业人员进行,一般用腰椎穿刺术获得。患者侧卧于硬板床,两手抱膝紧贴腹部,头向前胸屈曲,使躯干呈弓形,以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点,相当于第3-4腰椎棘突间隙,消毒处理后,用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。术者用左手固定穿刺皮肤,右手持穿刺针以垂直背部方
向缓缓刺入,针尖稍斜向头部,成人进针深度约4-6cm,儿童约2-4cm。当针头穿过韧带与硬脑膜时,有阻力突然消失落空感,此时可将针芯慢慢抽出,即可见脑脊液流出,至于合适的容器中,备用。
1.3标本接收的标准
1.3.1核对样品与运送单,检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出,对样品管和盛器消毒并做记录。
1.3.2检查样品的状况,记录有无严重溶血、微生物污染、脂血以及黄疸等情况。如果样品污染或者认为样品不能被接受,应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知运送机构。
1.3.3对不合要求的标本,可以拒绝接受。
2、梅毒的实验室检查
2.1梅毒螺旋体暗视野显微镜检查
2.1.1原理
梅毒螺旋体侵入人体后,在皮肤黏膜下增殖,并很快沿着淋巴管到达附近淋巴结,经过2-4周的潜伏期,在侵入部位发生炎症反应,称为硬下疳,数天到1周后,淋巴结肿大。二期梅毒是梅毒螺旋体由局部经淋巴结进入血液,在人体内大量播散后而出现的全身表现,一般发生在感染后的7-10周或硬下疳出现后6-24周,主要为皮肤黏膜损害,有扁平疣、黏膜斑和玫瑰斑疹等。患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染。研究证明,在妊娠期7周时,梅毒螺旋体即可通过胎盘。其梅毒患者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可检查到梅毒螺旋体。将标本置于暗视野显微镜下,光线从聚光器的边缘斜射到涂片上,可使梅毒螺旋体折射出亮光,从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。
2.1.2方法
2.1.2.1仪器耗材:
1)暗视野显微镜
2)无菌纱布
3)不锈钢刮刀
4)灭菌棉拭子
5)载玻片、盖玻片
6)注射器,注射针头
7)灭菌生理盐水
2.1.2.2检测流程
1)将待检标本制成生理盐水涂片,加盖玻片后立即备检。
2)在预先调整好的暗视野显微镜的聚光器上加数滴浸油,轻轻调低聚光器,
使之在载物台下方。
3)将标本玻片置载物台上,上升聚光器,使浸油接触载玻片底面,避免浸油
内有气泡。
4)镜检:先低倍后高倍,寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。
2.1.3结果
2.3.1.1结果判读:
在暗视野显微镜下观察,发现有纤细、白色、有折光的螺旋状微生物,长6-20um,直径小于0.2um,有6-14个螺旋,具有旋转、蛇行及伸缩等特征性的运动方式,可判断为梅毒螺旋体。
2.3.1.2结果报告:
暗视野显微镜下若发现上述特征的梅毒螺旋体则报告阳性结果;未见到上述特征的梅毒螺旋体则报告阴性结果。
2.1.4临床意义
1)梅毒螺旋体暗视野显微镜检测阳性在临床上可确诊梅毒,特别是对于有皮
肤黏膜损害和淋巴结病变的一、二期梅毒的诊断具有重要价值,且具有快速,方便,易操作等特点。
2)若未能发现梅毒螺旋体,不能排除梅毒诊断。阴性结果原因可能为:标本
中的微生物数量不足(单次的暗视野检测其敏感性低于50%)、病人已接受治疗、皮损已接近自然消退或取自非梅毒性皮损。
3)无论暗视野显微镜检查的结果如何,都应进一步进行血清学检测。
2.1.5注意事项
1)取材前,应用无菌生理盐水清洁皮肤表面,取材时应注意无菌操作。
2)应取到组织渗出液,尽量避免出血,以提高检出阳性率。
3)取材后应立即置暗视野显微镜下观察,如搁置太久,梅毒螺旋体活动能力
会下降,导致镜下难以观察到阳性结果。
4)对口腔溃疡标本,在暗视野显微镜下如观察到梅毒螺旋体的特征性形态和
运动方式,应与其他螺旋体相区别。
2.2.甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)
2.2.1原理
梅毒螺旋体一旦感染人体,宿主迅速对感染早期被损害的自身细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放脂类物质做出免疫应答,在3-4周内可产生抗类脂抗原的抗体(亦称为反应素)。这种抗体在体外可与心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原(0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂和0.90%胆固醇)发生抗原-抗体反应。心磷脂、卵磷脂和胆固醇都是醇溶性脂类,遇水形成胶体溶液。当含有反应素的梅毒血清与之混合时,即粘附在胶体颗粒的周围。经摇动、碰撞,形成抗原抗体复合物,出现凝集颗粒,即为阳性反应。甲苯胺红不加热血清试验即在抗原中加入甲苯胺红颗粒作为指示物,与待检血清(浆)中的反应素结合,形成肉眼可见的红色絮状物。血清不需灭活,肉眼可观察结果。
2.2.2方法
2.2.2.1仪器耗材:
1)TRUST试剂盒
2)水平旋转仪:要求旋转环状直径为2cm,转速为(100±2)r/min,并带有
计时器和保湿盖)
3)无菌生理盐水(0.9%)
2.2.2.2检测流程:
2.2.2.2.1定性试验
1)试剂准备:检测前将试剂盒置室温预温30分钟
2)加标本:吸取50μl血清(浆)置试验卡片圈中,并均匀地涂布在整个卡
圈内。不能将标本溢出环圈外面。
3)加抗原:将抗原轻轻摇匀,在每个标本圈中,用专用滴管针头垂直滴加1
滴(60±1滴/ml,约17μl/滴)抗原,不需要手工混匀。
4)反应:将卡片置水平旋转仪上,建议罩上保湿盖,(100±2)r/min旋转8
分钟。
5)从旋转仪中取出卡片后立即在亮光下用肉眼观察结果。用手轻微的旋转或
倾斜卡片可有助于弱阳性和阴性标本。
2.2.2.2.2定量实验
1)实验卡片准备:在卡片中圈1到圈4中分别标上1:2,1:4,1:8,1:16
2)稀释液准备:在圈1到圈4中加入50μl生理盐水,勿将盐水液滴涂开。
3)标本稀释:吸取50μl血清(浆)于圈1中,用移液器来回吸放5-6次已
混合圈1中的生理盐水和标本,但要避免产生气泡。从圈1(1:2)中移取50μl到圈2(1:4)用上述同样方法混合后依次稀释至圈3(1:8)和圈4(1:16)。混旋后从圈4中弃去50μl。
4)依次从圈4-圈1将不同稀释度的标本涂布整个圈内。
5)加抗原等以下实验步骤同定性试验的2-4。
6)如阳性反应滴度大于1;16,则继续稀释以测定最高稀释反应滴度。
2.2.3结果
2.2.
3.1结果判读
1)阳性反应:圆圈内出现中或大的红色絮状物,液体清亮;
2)弱阳性反应:圆圈内出现小的红色絮状物,液体混浊;
3)阴性反应:圆圈内仅见炭颗粒集中于中央一点或均匀分散。
2.3.3.2结果报告
1)定性试验:出现凝集反应报告阳性,不产生凝集反应报告阴性。
2)定量实验:出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度,结果报告滴度
为1:X,X依次为1、2、4等稀释倍数。
2.2.4临床意义
1)梅毒螺旋体一旦感染人体后产生抗类脂抗原的抗体,未经治疗可长期存
在。经适当治疗后,抗体可以逐渐减少至转为阴性,早期梅毒(一期、二期)经足量规则抗梅毒治疗后3个月,TRUST抗体滴度可下降2个稀释度,6个月可下降4个稀释度,一期梅毒一般约1年后可转为阴性,二期梅毒2年后可转为阴性。但晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢,2年后约50%病人血清反应仍为阳性。
2)TRUST定性试验结果可用于现症梅毒诊断。TURST定量试验结果可用于疗效
观察和判愈。
2.2.5注意事项
1)生物学假阳性:非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为心磷脂、卵磷
脂和胆固醇的混合物,所检测的抗心磷脂抗体易见于其他多种疾病,如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕的妇女等。因此该类反应会出现假阳性反应。所以该类试验阳性标本需进一步采用梅毒螺旋体抗原血清学试验(如TPPA、ELISA)等复检,以排除生物学假阳性,确认是否为梅毒螺旋体感染。
2)前带现象:只对早期梅毒患者进行非梅毒螺旋体抗原血清试验时,有时血
清中存在高浓度的抗体,导致抗原抗体浓度不匹配,出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果,此时需将血清稀释后再进行试验,可出现阳性结果。
该现象称为前带现象。
2.3梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)
2.3.1原理
梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子,致敏粒子与待检血清(浆)中的梅毒螺旋体抗体结合,产生肉眼可见的颗粒凝集。
2.3.2方法
2.3.2.1仪器耗材:
1)TPPA检测试剂盒
2)移液器
3)保湿盒
2.3.2.2检测流程:
1)试剂准备:试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出,恢复至室温。
2)加稀释液:每份样本作4孔,用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1
孔(100μl),从第2孔-第4孔各滴25μl。
3)样本稀释:用移液器取待检血清25μl置第1孔中,然后以2n 的方式从第
1孔稀释至第4孔。
4)加对照液:用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子;在第4孔滴入25μl
致敏粒子。
5)混合:以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟。
6)反应:加盖置湿盒内,于室温(15℃-30℃)下水平静置。2小时后观察并
记录结果。
附:重吸收试验
对于未致敏粒子和致敏粒子均显示±以上凝集的样品,要按照下列程序在完成吸收操作的基础上进行再试验。
1)取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。
2)加入样品50μl混合,于室温(15℃-30℃)下放置20分钟以上。
3)离心分离(2000rpm、5分钟),然后分别吸取上清液【吸收完毕的稀释样品
(1:20)】50μl至反应板第3孔中,特别注意不要混入粒子。
4)从第4孔以后,要预先各滴入25μl血清稀释液,从第3孔至最后一孔用
移液器以2n 的方式进行稀释。
5)之后的步骤同上。
2.3.3结果
2.3.3.1结果判读
首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集(第3孔),判断试验有效性后,再根据致敏粒子与标本反应孔(第4孔)与致敏粒子是否产生1+ ~2+凝集反应凝集反应,判断结果。如未致敏粒子反应孔出现凝集(第3孔)为无效试验,需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。
++ :产生均一的凝集,凝集粒子在底部,呈膜状延展;
+ :粒子环明显变大,其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围;
±:粒子形成小环状,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形;
- :粒子呈纽扣状聚集,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。
2.3.3.2结果报告
阳性:未致敏粒子反应孔(第3孔)不出现凝集,致敏粒子反应孔(第4孔)出现1+~2+凝集反应,报告阳性。
阴性:未致敏粒子反应孔(第3孔)和致敏粒子反应孔(第4孔)均未出现凝
集反应,报告阴性。
弱阳性:未致敏粒子反应孔(第3孔)不出现凝集,致敏粒子反应孔(第4孔)出现±凝集反应,报告弱阳性。
2.3.4临床意义
1)梅毒螺旋体一旦感染人体后约2-4周即可检测到抗梅毒螺旋体抗体,此抗
体特异性高可达98%以上,所以检测到梅毒螺旋体抗体阳性可确证为现在或既往有过梅毒螺旋体感染。
2)患者感染梅毒螺旋体后产生的抗梅毒螺旋体抗体一般能保持终生,梅毒患
者即使经过正规疗程的抗梅毒治疗后,梅毒螺旋体抗原血清学试验仍可阳性,故梅毒螺旋体抗原血清学试验不能作为疗效观察的指标。
3)梅毒螺旋体抗原血清试验亦不能区分既往感染和现症感染,试验阳性结果
应进一步进行非梅毒螺旋体抗原血清试验,以判断是否为梅毒现症感染。
2.3.5注意事项
1)若未致敏粒子孔出现凝集反应,血标本需要进行吸收后再重复试验,或改
用其他方法复检。
2)试验加入致敏粒子、未致敏粒子后,应以不会导致微量反应板内容物溅出
的强度混合。
3)红细胞及其他血液的有形成分会影响结果,所以血液标本应通过离心分离
血清。
4)致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应混合均匀后再使用。
5)微量反应板中的内容物充分混匀后再静置,静置过程中一定要对反应板加
盖并禁止振摇。
6)梅毒螺旋体感染初期,有可能不产生抗体,或虽然产生抗体但数量很少的
情况。
2.4 梅毒螺旋体IgM检测
2.4.1原理
梅毒螺旋体溶解物经处理后,将其中的螺旋体蛋白成分用聚丙烯凝胶蛋白电泳按分子量分馏,之后经二次电泳转移至硝化纤维薄膜上,风干切片,最后制成测试条,病人血清稀释后与检测条一起孵育,如果存在梅毒螺旋体特异性抗
体,则抗体会与相应的抗原条带结合。冲洗未结合的酶结合抗体后,测试条最后与染色剂反应,在与抗原条带结合的抗体上产生紫色的沉淀。在特异性条带(15.5 ,17,47KD)上产生的反应具有临床意义。在其它位置也有可能出现条带,但并不具有临床意义。每条测试条的顶端数字标签下都有血清和酶的加样质控带。这些质控带用于确认病人样本和酶的加样。
2.4.2方法
2.4.2.1仪器耗材
1)梅毒螺旋体IgM试剂盒
2)移液器
3)平台摇摆仪
2.4.2.2检测流程
1)用钝头镊子按需将电泳条取出(手不能碰到电泳条),放在孵育盒的小槽
中,每槽一条,数字面向上。
2)注意检测条使用前需预湿处理,直接对着检测条中央缓慢加入 2.0ml样本
稀释液/冲洗液至每一槽中,确保所有检测条浸湿,检测条不能部分漂于缓冲液面上。
3)将孵育盒置于平台摇摆仪上(设置最小摆角7°±2°,40-45个循环/分
钟),浸泡及摇摆至少5分钟。
4)在第一第二槽分别加入80ul阳性质控及阴性质控,在各相应槽中加入20ul
病人血清标本,当缓冲液流至槽的前端时加入。
5)将孵育盒置于平台摇摆仪,孵育及摇摆45分钟,之后取出。小心倾斜孵育
盒倒出液体。
6)在每槽中加入2.0ml样本稀释液/冲洗液,置于平台摇摆仪摇摆5分钟
7)完全倒出小槽中液体,重复6,7步骤2次
8)在每槽中加入2.0ml稀释后的酶结合抗人IgM抗体,防止平台摇摆仪赋予
及摇摆15分钟。
9)倾斜孵育盒倒出酶结合抗人IgM抗体
10)在每槽中加入2.0样本稀释液/冲洗液,置于平台摇摆仪摇摆5分钟
11)完全倒出小槽中液体,重复10,11步骤2次
12)在每槽中加入2.0ml蒸馏水,置于平台摇摆仪摇摆1分钟。
13)完全倒出小槽中液体
14)在每槽中加入2.0ml染色剂,置于平台摇摆仪摇摆5-10分钟或直到阳性质
控充分显色。(条带明显、清晰、清楚)
15)从平台摇摆仪取出孵育盒
16)用蒸馏水冲洗3次以终止反应
17)用钝头镊子将湿检测条取出,放置在纸巾上自然风干
18)风干后的检测条可随时阅读,将标本条,阳性质控条及阴性质控条粘贴在
检测条结果粘贴单上,之后放入塑料保护袋内,放至阴凉,干燥处(勿置于阳光下)
2.4.3结果
1)47KD、17KD、15.5KD中任何两个位置出现明显色带都表示梅毒IgM抗体阳
性
2)47KD、17KD、15.5KD中只有一个位置出现明显色带,结果可疑
3)47KD、17KD、15.5KD三个位置全部没有出现明显色带,表示梅毒阴性。2.4.4临床意义
1)来源于其他螺旋体病原体疾病病人的血清,如莱姆病,雅司病,品他病,
钩端螺旋体病和回归热,可能会出现假阳性结果。需要进行临床,流行病学和实验室调查以防假阳性结果出现
2)对于晚期感染的检测,需使用检测IgG抗体的试剂系统
3)所有检测结果必须考虑病人提供的临床病史,梅毒螺旋体危险区域的接触
史,流行病学数据和其他检测的结果。
2.4.5注意事项
1)阳性质控条带应显示出明显的色带
2)阴性质控不应显示有色带,非有色带的标准是显色非常微弱难以观察到
3)如果阴性和阳性质控得色带区显示不符合要求,或血清和酶质控带同时也
没有反应,则实验无效不能报告结果。
4)每个病人的检测条上的血清质控带和酶质控带都应该显色。如果任一质控
带未显色或无显色,则实验无效该病人的结果不能报告。
梅毒检测操作规程
梅毒螺旋体抗体检测(乳胶法)作业指导书 1.检测目的 定性检测人血清或血浆样本中梅毒螺旋体抗体(TP),可作为梅毒感染的辅助诊断。 2.测定原理 采用高度特异性的抗体抗原反应原理及乳胶标记免疫层级分析技术,试剂含有预先固定于膜上检测区(T)的梅毒重组抗原盒包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。 3.标本要求 1试剂适用于检测血清或血浆样本,检测时应使用未溶血的样本。 2.样本应收集于清洁、干燥的容器中,可采用肝素、EDTA或柠檬酸三钠作为抗凝剂。 3.样本收集后应尽可能马上使用,不可再室温长时间存放。血清血浆样本可在2-8°C冷藏存放一周,长期保存需冷冻于-20℃。冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混均,样本禁止反更冻融。 4.试剂 艾博生物医药(杭州)有限公司 5.操作步骤 5.1使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意:在扣开铝箔前应先恢复至室温),在1小时内应尽快地使用。 5.2将试剂置于干净平坦的台面上,用吸管吸取血清血浆标本,垂直加入1滴(约25UI)试剂板的加样孔(S)中,然后加入2滴缓冲液。 5.3加样后立刻开始计时等待红色条带的出现,在15分钟时读取测试结果。20分钟后读取的结果无效。 6.结果判定 6.1阳性(+):两条紫红色条带出现。一条位于检测区(T)内,另一条位于质控区(C)。 6.2阴性(-):近质控区(C)出现一条紫红色条带,在检测区(T)内务紫红色条带出现。 6.3无效(X):质控区(C)未出现紫红色条带,标本不正确操作过程或试剂已变质损坏。 1湎血清/血桨
∖υC2滴缓冲液 —阳性阴性无效 7.质量控制 7.1请控制判读时间,测试结果应在测定开始后15-20分钟左右读取,20分钟后读判定无效。 7.2质控区内(C区)一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。质控内(C)所显现的红色条带是判定标本是否足够,层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。 8.注意事项 8.1加样过多或过少可能导致结果出现偏差。 8.2由于在技术上和操作上可能出现的失误,同时也由于标本中存在的干扰物质,检测结果可能有错误。8.生物安全防护 8.3在检测前,所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。 8.4如操作中不慎洒落血液,要及时对污染台面消毒处理。 8.5操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。 8.6HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸IOOC1O分钟、高压蒸汽灭菌121C15分钟或加热 160C2小时均可灭活HBV。5~10g∕1次氯酸钠30分钟,1:4000福尔马林37C72小时,0.5%过氯乙酸15分钟均可破坏其传染性。 9.参考文件 梅毒螺旋体抗体检测试剂(胶乳法)说明书。
梅毒螺旋体抗体测试标准操作规程
1 检验申请 单独检验项目申请:梅毒螺旋体抗体(速写TP);组合项目申请:性病检测、输血前监测定加选本项目。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 采用含高效促凝剂或含分离胶的真空采血管,常规静脉采血约2 ml,无需抗凝。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符号。 2.1.3 急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.5 ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.3 其它如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 标本接收后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2 标本保存时间:血清室温(15~25℃)下可稳定48h,在冰箱中(2~8℃)可稳定7天。-20℃放置12个月。为避免标本中水份挥发使血清浓缩,对保存超过1天的标本均加塞密闭或覆盖保鲜膜。 2.2.3 已完成测试的标本保存完整的识别号,置2~8℃冰箱内保存7天。备复检。 2.3 标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆,推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 本品采用胶体金免疫检测技术和层析原理,定性检测血清(血浆)样本中的梅毒螺旋体抗体。检测时,样本中梅毒抗体可与胶体金标记抗原(大肠杆菌表达)结合形成抗原抗体复合物,由层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线时与预包被的抗原(大肠杆菌表达)结合形成“Au-TPAg-TPAb-TPAg”夹心物而凝聚显色。游离的胶体金标记梅毒抗原(大肠杆菌表达)则在对照线处与预包被的兔抗TP抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照处显色。 4 试剂及其他用品 4.1 梅毒螺旋体抗体试验试剂盒,由英科新创(厦门)科技有限公司出品。4.2 试剂盒保存:贮存于4~30℃干燥保存,有效期18个月。 4.3 试剂盒准备:试剂从包装里取出,需尽快进行试验,避免放置于空气中过长时间,导致受潮。 8标本检测步骤:
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
. 梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请:TPPA;组合项目申请:RPR+TPPA,临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。 2.1.8 下列标本为不合格标本 2.1.8.1 标本量不足。 2.1.8.2 严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.8.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.8.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 标本保存时间:立即测定或放置2~8℃冰箱内。 2.2.2 已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。 方法原理、3凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅 毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 试剂及其他用品准备、4溶解液8ml/瓶×1,血清稀释液60ml/瓶×1,致敏粒子(冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5,未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5,阳性对照血清 (液状) 0.6ml/瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 5.1 质控液重建方法:液态质控血清,即开即用,无需特殊准备。 5.2 质控品测定:在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 5.3 质控规则:阴性和阳性对照符合即可。 5.4 如出现失控情况,按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正,并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)。 6.2吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。 . . 6.3用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴(25ul)未致敏粒子,从第4孔至最后一孔滴 入1滴(25ul)致敏粒子。
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请:TPPA;组合项目申请:RPR+TPPA,临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 标本采集 常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。 下列标本为不合格标本 标本量不足。 严重溶血、严重浑浊的标本。 无法确认标本与申请单对应关系的。 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 标本保存 标本保存时间:立即测定或放置2~8℃冰箱内。 已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。 3、方法原理 凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 4、试剂及其他用品准备 溶解液8ml/瓶×1,血清稀释液60ml/瓶×1,致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,未致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,阳性对照血清(液状) 瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 质控液重建方法:液态质控血清,即开即用,无需特殊准备。 质控品测定:在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 质控规则:阴性和阳性对照符合即可。 如出现失控情况,按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正,并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)。 吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。 用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴(25ul)未致敏粒子,从第4孔至最后一孔滴入1滴(25ul)致敏粒子。 用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟,加盖后于室温(15-30℃)下静置,2小时后,观察结果。另外,即使静置至次日也不会影响其判定结果。
梅毒螺旋体抗体测试标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测试标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请:梅毒螺旋体抗体(速写TP);组合项目申请:性病检测、输血前监测定加选本项目。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 采用含高效促凝剂或含分离胶的真空采血管,常规静脉采血约2 ml,无需抗凝。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符号。 2.1.3 急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.5 ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.3 其它如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 标本接收后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2 标本保存时间:血清室温(15~25℃)下可稳定48h,在冰箱中(2~8℃)可稳定7天。-20℃放置12个月。为避免标本中水份挥发使血清浓缩,对保存超过1天的标本均加塞密闭或覆盖保鲜膜。 2.2.3 已完成测试的标本保存完整的识别号,置2~8℃冰箱内保存7天。备复检。 2.3 标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆,推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 本品采用胶体金免疫检测技术和层析原理,定性检测血清(血浆)样本中的梅毒螺旋体抗体。检测时,样本中梅毒抗体可与胶体金标记抗原(大肠杆菌表达)结合形成抗原抗体复合物,由层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线时与预包被的抗原(大肠杆菌表达)结合形成“Au-TPAg-TPAb-TPAg”夹心物而凝聚显色。游离的胶体金标记梅毒抗原(大肠杆菌表达)则在对照线处与预包被的兔抗TP抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照处显色。 4 试剂及其他用品 4.1 梅毒螺旋体抗体试验试剂盒,由英科新创(厦门)科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:贮存于4~30℃干燥保存,有效期18个月。
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
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梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请:TPPA;组合项目申请:RPR+TPPA,临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 标本采集 常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录 标本的状态,对不合格标本予以拒收。 下列标本为不合格标本 标本量不足。 严重溶血、严重浑浊的标本。 无法确认标本与申请单对应关系的。 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 标本保存 标本保存时间:立即测定或放置2~8℃冰箱内。 已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。 3、方法原理 凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 4、试剂及其他用品准备 溶解液8ml/瓶×1,血清稀释液60ml/瓶×1,致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,未致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,阳性对照血清 (液状) 瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 质控液重建方法:液态质控血清,即开即用,无需特殊准备。 质控品测定:在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 质控规则:阴性和阳性对照符合即可。 如出现失控情况,按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠 正,并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)。 吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。
梅毒螺旋体检测标准操作规程
目 的:规范的梅毒螺旋体检验操作,确保检测结果准确。 适用范围:性病实验室工作人员 责 任 人:实验操作者 1、标本的采集与处理 1.1标本采集的基本要求 1.1.1操作应规范化。 1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性,医务人员应戴手套谨慎操作。 1.2梅毒标本采集 梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法,各期梅毒的检测方法及部位见下表。 1.2.1血液 1.2.1.1血清标本
根据需要,用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml,室温静置1-2小时(或37℃静置30分钟),待血液凝固、血块收缩后,3000r/min离心10-15分钟,分离新鲜血清,备用。也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。 1.2.1.2血浆标本 根据需要,用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml,轻轻颠倒混匀8-10次,3000r/min离心10-15分钟,分离血浆,备用。血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验(一般仅用于RPR实验,),但易出现假阳性反应(需用血清复试),如用其他抗凝剂应首先评价后再用。 1.2.1.3末梢全血 消毒局部皮肤(成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂,1岁以下儿童采用足跟部)。一次性采血针刺破皮肤,用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液,立即用于检测。 1.2.2皮损部位组织液 1.2.2.1用于病原学检查 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位,取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测,或取渗出液直接涂片,用于镀银染色试验。 1.2.2.2用于核酸检测 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物,钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位,刮取渗出液,加入有DNA保存液(1ml/管)的标本管中,备用。 1.2.3淋巴液 无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结,注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次,取少量的淋巴液直接滴于载玻片上,加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。 1.2.4脑脊液 操作由专业人员进行,一般用腰椎穿刺术获得。患者侧卧于硬板床,两手抱膝紧贴腹部,头向前胸屈曲,使躯干呈弓形,以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点,相当于第3-4腰椎棘突间隙,消毒处理后,用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。术者用左手固定穿刺皮肤,右手持穿刺针以垂直背部方
梅毒螺旋体检测标准操作规程
梅毒螺旋体检测标准操作规程 【梅毒螺旋体检测标准操作规程】 1. 引言 梅毒作为一种性传播疾病,早期检测对于治疗和控制传播至关重要。本操作规程旨在规范梅毒螺旋体检测的操作流程,确保检测结果 的可靠性和准确性。 2. 实验器材与试剂准备 (1)实验器材:显微镜、荧光显微镜、玻片、盖玻片、恒温水浴、离心机等。 (2)试剂准备:梅毒螺旋体检测试剂盒、PBS缓冲液、荧光素。 3. 实验操作步骤 (1)准备标本:从患者体内采集组织液(如血液、脑脊液等)作为标本。 (2)制备玻片:将标本涂在多个玻片上,将玻片放入恒温水浴中,使组织液干燥。 (3)固定标本:将玻片置于甲醛固定液中浸泡15分钟,然后用PBS缓冲液洗涤。 (4)孵育标本:将固定的玻片置于荧光显微镜下,加入梅毒螺旋体检测试剂盒中的梅毒螺旋体特异抗体,孵育30分钟。 (5)洗涤标本:用PBS缓冲液洗涤玻片,去除非特异性结合的抗体。 (6)添加荧光素:加入荧光素作为可视化记号,孵育15分钟。 (7)洗涤标本:用PBS缓冲液洗涤玻片,去除未结合的荧光素。
(8)观察标本:将玻片置于显微镜下,观察是否有梅毒螺旋体的荧光信号。 4. 质量控制与结果判读 (1)质量控制:每次实验需进行质控,使用已知梅毒阳性标本作为阳性对照,使用无感染标本作为阴性对照。 (2)结果判读:观察玻片下的荧光信号,有荧光信号则判定为阳性,无荧光信号则判定为阴性。 5. 结果报告与记录 记录每次实验的梅毒螺旋体检测结果,包括标本信息、实验日期、操作人员姓名、实验结果等。 6. 问题与解决方法 (1)标本准备不当:确保采集到的标本质量良好,避免污染或变质。 (2)实验操作不准确:按操作规程进行实验,避免操作中的误差。 (3)质量控制出现问题:检查质控过程是否严格按照规程执行,确保质量控制结果可靠。 7. 安全注意事项 (1)遵守个人防护措施:在实验操作过程中,佩戴手套、口罩等个人防护装备。 (2)遵守实验室安全规范:实验室内保持清洁、整齐,并按规定处置废弃物。 (3)避免交叉感染:标本处理后,彻底清洗工作台、仪器等,避免交叉感染的发生。 8. 结束语
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定T P P A标 准操作规程 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请:TPPA;组合项目申请:RPR+TPPA,临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 标本采集 常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。 下列标本为不合格标本 标本量不足。 严重溶血、严重浑浊的标本。 无法确认标本与申请单对应关系的。 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 标本保存 标本保存时间:立即测定或放置2~8℃冰箱内。 已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。 3、方法原理 凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 4、试剂及其他用品准备 溶解液8ml/瓶×1,血清稀释液60ml/瓶×1,致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,未致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5,阳性对照血清 (液状) 瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 质控液重建方法:液态质控血清,即开即用,无需特殊准备。 质控品测定:在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 质控规则:阴性和阳性对照符合即可。 如出现失控情况,按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正,并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)。 吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。