蒽酮法测定可溶性糖方法

（一) 实验原理

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计

1 材料

12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备

分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂

（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：

1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）

（三）实验步骤

1．标准曲线的制作：

按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

试剂管号

01，23,45,67,89,10 100µg.1-1蔗糖

00.20.40.60.81

/ml

水/ml2 1.8 1.6 1.4 1.21

蔗糖量/µg020*********

2．取样

取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

3．可溶性糖的提取

将样品从冰箱中取出，称取0.20－0.30 g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

4．显色测定

吸取样品提取液0.5 ml于20 ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，然后加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比（切勿忘掉对照）。在630 nm波长下测其光密度，测定样品的光密度。

5．计算可溶性糖的含量，计算公式：

C ×V总× D

样品含糖量（%）= ─────────────×100%

W ×V测×106

其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），

V总——提取液总体积（ml），

V测——测定时取用体积（ml），

D——稀释倍数，

W——样品重量（g），

106——样品重量单位由g换算成µg的倍数

数据统计表

（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。五、结果计算

蒽酮法测定苹果中可溶性糖含量论文

蒽酮法测定苹果中可溶性糖含量班级：08生物科学2班学号：282010211 姓名：杨亮亮摘要：采用蒽酮比色法测定苹果中的可溶性总糖含量果实中可溶性糖的含量( 干样品中百分比)分别为31.％实验表明:苹果中可溶性糖的含量比较丰富有很大的利用价值。关键词：苹果；总糖；含量苹果作为营养物质主要是可溶性糖和淀粉它们的作用主要有：有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。一、试剂与仪器设备葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL 蒽酮试剂、分光光度计，分析天平，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管,剪刀，玻棒水浴锅，漏斗，滤纸。二、实验材料成熟的苹果去除果皮，称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g备用。三、实验方法 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。四、结果计算

可溶性总糖的测定原理和方法

可溶性总糖的测定原理和方法一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、原理强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料１、仪器分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅２、试剂葡萄糖标准液；浓硫酸；蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制使用。３、材料小麦四、操作步骤１、葡萄糖标准曲线的制作取７支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。２、植物样品中可溶性糖的提取将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克，放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。３、测定吸取１ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。查表所得糖含量×稀释倍数五、结果处理植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg）×稀释倍数／样品重（g）×106×100

实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。三、材料、仪器及试剂

1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。五、结果计算样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。（二）材料、仪器设备及设计 1 材料 12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。 2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。 3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。（2）100 ug/L蔗糖溶液： 1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。 100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤 1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。管号试剂 0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10 100μg.1-1蔗糖 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 /ml 水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/μg 0 20 40 60 80 100

植物可溶性糖测定

植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。实验用品 721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重）稀释成1000mL而成。实验步骤 1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。试剂（ml) 管号

植物体内可溶性糖含量的测定

植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的 1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理 2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。四、材料、仪器及试剂 1.材料：苹果 2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片 3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。）四、实验方法

1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。编号1234567 00.100.200.300.400.600.80 葡萄糖标准液 (100ug/ml) H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010 每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。待各管溶液达室温后用1 cm厚度的比色皿，以第1管为空白，迅速测其余各管光吸收值。然后以第2管一7管溶液含糖量ug数数为横坐标，吸光度 (A620nm)为纵坐标，画出含糖量与A值的相关标准曲线。测定样品的含糖量，取4支试管按下表操作。编号1234样品溶液0 1.0 1.0 1.0 H2O 1.0000蒽酮试剂10101010 其他操作与制作标准曲线相同。五.结果计算将2管~4管测出的A620nm平均值，根据A620m平均值从标准曲线上查出相应的含糖ug数,再换算成100g样品中总糖的含量。六、注意事项 1、加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况应迅速用自来水冲洗。

可溶性糖测定

可溶性糖测定作物可溶性糖的测定(蒽酮比色法) 测定意义可溶性糖主要是单糖，即葡萄糖和果糖(也称还原糖)和双糖即蔗糖(也称非还原糖)组成，它是植物体内一种重要的碳水化合物，在一般植物及植物产品中，测定其含量多少，不仅能反映作物的生长状况，而且还能反映其品质。因此在植物分析中进行可溶性糖的测定颇为重要。测定原理糖类遇硫酸即脱水成为羟醛类： H H HOC COH CH—CH 脱水 H2C CH—CH HC C—CHO + 3H2O O OH OH 然后，蒽酮与糖醛脱水、缩合，形成糖醛衍生物，呈蓝色，蓝色的深浅，可做为定量的标准。 H H O C —C O + HC C—CHO O CH— CH2OH O 试剂配制 (1)准确称取1.000g葡萄糖溶于1升容量瓶中，此清液为1000mg/L，从此液中吸取0、1、2、4、6、8、10毫升注入100毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，此溶液即0、10、20、40、60、80、100mg/L糖溶液，分别吸取系列标准糖液各2ml分别注入7个比色管中，按照试样测定的方法进行处理并比色，以横坐标表示不同的糖浓度，纵坐标表示光度计的相应光密度。绘出葡萄糖的标准曲线。 (2)蒽酮溶液称取0 1克蒽酮溶于100毫升72%的硫酸中，(每100毫升0 1%蒽酮溶液硫酸含量为比重1 84的浓硫酸74毫升)此试剂需新鲜配制，若在100毫升蒽酮试剂中加1克硫脲，则可以延长保存时间至一个月。测定步骤 1提取：精确称取经磨细的干样品100毫克，置于一个15毫升的离心管中，加入10毫升80%酒精，在管口上盖一个塞子，保持在80～85℃热水浴内，30分钟，取出离心，把上层清液轻轻移至一个50毫升烧杯中，照此法对残渣重复提取2次，以使可溶性糖提取完全。把上述酒精提取液置于80～85℃水浴上，使酒精蒸发，直到剩下3毫升液体为止。而后用蒸馏水定容至25毫升。作为可溶性糖的提取液。 2 测定：吸取5毫升的糖提取液至一个25毫升容量瓶中，用蒸馏水定容，取2毫升此稀释的糖提取液至一个具有塞的比色管中，然后，沿管壁缓缓注入蒽酮试剂10毫升，加

常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定

常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。测定步骤如下: 1. 标准曲线的制作 1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。 1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡

1.3标准曲线制作编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）0 10 20 30 40 50 60 注:1 2为一个重复，以此类推｡取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。本研究所有指标测量所用分光光度计均为岛津UV2600（SHIMADZU UV2600）。 2. 样品可溶性糖及淀粉含量测定 a．可溶性糖的提取：用0.0001g分析天平准确称取20mg干燥待测样品粉末于10ml离心管中，加入80%乙醇5ml，然后于80℃水浴锅中提取30min 后取出，冷却至室温后放入离心机中（2000r，10min），然后吸取上清液至另一干净的10ml离心管中，并加蒸馏水容至10ml，此溶液即为可溶性糖提取液。

实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法

实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～ 120mg/100ml）。血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。血糖浓度的调节血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。神经系统的调节作用神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另

一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。激素使血糖浓度降低的激素 :胰岛素使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。胰岛素使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。胰高血糖素主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。肾上腺素

实验8可溶性总糖的测定蒽酮法

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法) 蒽酮法是一种常用的测定可溶性总糖的方法，其基本原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。下面我们来详细了解一下实验步骤和注意事项。一、实验原理蒽酮法测定可溶性总糖的原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比。在一定的范围内，溶液的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。该方法的优点是灵敏度高、准确性好、操作简单、干扰因素少。二、实验步骤 1.准备试剂和仪器试剂：蒸馏水、葡萄糖标准溶液（已知浓度）、待测溶液、蒽酮、浓硫酸。仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、容量瓶、移液管、试管、滴管、冰块等。 2.配制工作曲线（1）用移液管吸取葡萄糖标准溶液100μL，将其加入10个试管中。（2）用移液管分别吸取蒸馏水1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mL，分别加入上述试管中，并加入蒸馏水至总体积为10mL。（3）向每个试管中加入1.0mL蒽酮溶液，迅速混匀。（4）向每个试管中加入浓硫酸5.0mL，迅速混匀。（5）将试管放置在冰水浴中静置10min，使反应完全。（6）从冰水浴中取出试管，在室温下放置10min，使溶液温度恢复到室温。（7）用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度（波长为625nm）。（8）以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制工作曲线。 3.测定待测溶液的浓度

（1）用移液管吸取待测溶液100μL，将其加入试管中。（2）向试管中加入蒸馏水至总体积为10mL。（3）按照步骤2.3~2.7进行操作，测定待测溶液的吸光度。（4）根据工作曲线查得待测溶液的浓度。 4.计算待测溶液中可溶性总糖的含量可溶性总糖含量（mg/mL）= 查得浓度× 稀释倍数三、注意事项 1.实验过程中要避免阳光直射，以免影响实验结果。 2.在加入蒽酮和浓硫酸后要迅速混匀，以免产生局部温差引起飞溅。 3.在放置过程中要保持低温，以保证反应充分进行。 4.在测定吸光度时要注意将溶液摇匀，避免出现气泡等干扰因素。 5.本方法适用于可溶性总糖的测定，如果待测溶液中存在不溶物或者悬浮物，会对测定结果产生影响，因此需要过滤或者离心处理后再进行测定。 6.待测溶液的浓度对测定结果有一定影响，因此需要选择合适的稀释倍数以保证结果的准确性。

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料 1 .仪器（ 1) 分光光度计 (2 ）电子顶载天平 (3 ）三角瓶： 50m1 X 1 （ 4 ）大试管： 9 支（ 5) 试管架，试管夹（ 6 ）漏斗，漏斗架（ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2 （ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 （ 9 ）水浴锅 2 .试剂（ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2 ）浓硫酸 (3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。 3 .材料小麦分蘖节。

四、操作步骤 1 .葡萄糖标准曲线的制作取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液 2m1 ，置另一 50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中，加入 4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）。查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数五、结果处理六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。七、思考题 1 .用水提取的糖类有哪些？

蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量

蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量实验目的 1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理 2.学习求标准曲线方程—最小二乘法 3. 掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。反应式：该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。实验步骤 1．求标准曲线方程取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4） 2. 样品含糖量的测定（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中

（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。（2）吸取0.5mL 滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。最小二乘法求标准曲线方程的公式： X：G 的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－�ST 本实验要求相关系数r≥0.99

蒽酮法测定可溶性糖

蒽酮法测定可溶性糖植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法) 一、材料、仪器设备及试剂 1( 材料新鲜或烘干的植物叶片 2( 仪器设备分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。 3(试剂蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解; 9.2mol/L HCIO 浓硫酸(相对密度1.84); l,蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80?下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度; 100μg蔗糖标准液:精确吸取1,蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。淀粉标准溶液:准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60-70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml， ,g加蒸馏水稀释至50ml，却为每ml含淀粉100的标准液。

二、实验步骤 1( 标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0~10分别编号，按表加人溶液和水，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml(以糖含量为横坐标;光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。表管号试剂 0 1,2 3,4 5,6 7,8 9,10 -1100μg?L蔗糖液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 水/ ml 2.0 1.8 12.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量/μg 0 20 40 60 80 100 2(可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10~0.30g ,共3份，分别放入3支刻度试管中，加人5,10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。 3(显色测定:吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml，然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm 波长下测其吸光度。 6可溶性糖含量(%),(C*V,a*n),(W*10) 式中C:标准方程求得糖量(g) a:吸取样品液体积(ml); V:提取液量hal);

蒽酮比色法测可溶性糖

蒽酮比色法测可溶性糖一、实验目的 1.1学习分光光度法的基本原理 1.2学习对水果中糖含量进行测定的方法二、实验原理 2.1分光光度法基本原理物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了研究。皮埃尔·布格（Pierre Bouguer）和约翰·海因里希·朗伯（Johann Heinrich Lambert）分别在1729年和1760年阐明了物质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系；1852年奥古斯特·比尔（August Beer）又提出光的吸收程度和吸光物质浓度也具有类似关系，两者结合起来就得到有关光吸收的基本定律——布格－朗伯－比尔定律，简称比尔－朗伯定律。溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律。朗伯-比尔定律：A=lg(1/T)=Kbc A：为吸光度； T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度； K: 摩尔吸收系数。它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关；

c：为吸光物质的浓度； b：为吸收层厚度；物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b 成正比。 2.2蒽酮比色法原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。