质粒抽提常见问题与解答
1.没有提出质粒或者质粒收获量很低
A菌种老化
建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化，涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1:500的比例进行菌种培养。二次培养时间最好不要超出16小时(或者OD600不超过3.0)。
B低拷贝质粒
建议：如果是由于低拷贝质粒引起的质粒收获量低，可以采用两倍的菌体量，并相应增加各种Buffer的用量。
C质粒丢失
建议：某些质粒在次继代培养的过程中会出现丢失的想象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
D裂解不充分
建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。并确保细菌混悬均匀。
EBuffer中有沉淀未溶解
建议：BufferB1和BufferN1，BufferC1在温度较低时会出现沉淀，使用前请检查是否有沉淀生成，如果有沉淀生成，请置于37℃温育片刻，待溶液澄清后使用。
FDNAWashBuffer中未加入要求量的乙醇
建议：按照说明书要求加入要求量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，防止乙醇挥发。另外对于质粒中提，大提等，要求用70%乙醇洗涤，请确保乙醇的体积不小于70%。
G离心柱中乙醇残留
建议：漂洗后，可适当延长离心时间，尽量去除残留的乙醇。另外对于质粒中提，大提和朝大量提取，建议离心后，将柱子或大漏斗用吹风机冷风吹片刻(或置于65℃烘箱)，以彻底去除残留的乙醇，便于洗脱和后续实验操作。
H洗脱液加入位置不正确
建议：洗脱液应加在膜中央，已取得最好的洗脱效果。
I洗脱液pH值不正确
建议：将DNA从柱子上洗脱下来的最适pH值在7.0-8.5之间，如果洗脱液的pH超出此范围将会显著影响洗脱效果，请使用试剂盒配套的ElutionBuffer(pH8.5，10mMTris-HCl)进行洗脱，如果用ddH2O进行洗脱，请确保pH在7.0-8.5之间。
J洗脱体积的选择
建议：洗脱体积将会影响最终的收获量，洗脱体积越大，收获量越高，但是浓度将会降低。请使用试剂盒推荐的洗脱体积进行洗脱，以保证最好的收获量和浓度。如果需要高浓度的质粒，请减少洗脱体积。另外，如果想收获高浓度高收获量的质粒，请根据试剂盒要求进行二次洗脱，再用推荐的方法进行沉淀，浓缩质粒。
K洗脱时间的选择
建议：加入洗脱Buffer后，室温放置2-5分钟，将有利于洗脱。
2.质粒纯度不高
A蛋白质污染
建议：选择推荐量的菌体，离心后小心吸取上清，如果上清液中混有悬浮物，可再次离心，以彻底去除蛋白。另外如果用ddH2O作为稀释溶液,测定OD比值，比值可能较低，造成蛋白污染的假象，可用pH8.0的TEBuffer来稀释。
BRNA污染
建议：检查配送的RNaseA是否完全加入到BufferA1中，加入RNaseA后，BufferA1/RNaseA应该存放在4℃，如果存放时间过长，或者没有正确存放，RNaseA活力下降，请重新加入RNaseA。
C基因组DNA污染
建议：加入BufferB1后，轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡涡旋，加入BufferB1的处理时间最好不要超过5分钟。
D菌株为含内源核酸酶的宿主菌株
建议：请选用含内源核酸酶的宿主菌株质粒DNA提取试剂盒，或者转化质粒到不含内源核酸酶宿主菌株中。
3.加样时DNA飘出加样孔外
原因：柱中残留乙醇未除干净。
建议：洗脱质粒DNA前确保无乙醇残留在柱子上。可再离心或者抽真空。
常见问题解答
一．“喝了一辈子自来水，活的很好”。有必要安装水机吗？ 答：人的疾病有一个累计的过程。喝了一辈子自来水，现在没生病，不等于明天不生病。几十年前江河湖畔清澄见底，自来水的水质就好。现在的自来水水源已存在再次污染的状态，失去了原始的功能，如不进行净化、消毒处理是不能作为生活饮用水的，所以水厂在净化杀菌过程中施加了氯气。氯气和自来水中的有机物发生化学反应生成三卤甲烷，三卤甲烷是世界卫生组织公认的强致癌物，所以家庭想要喝好水，必须对自来水进行净化处理，安装一台合适的净水机，应该是一个不错的选择。 二．水中的矿物质可以从食物中摄取吗？ 答：人体摄取矿物质及微量元素的主要途径是食物和水。健康七大营养素中，水被排在首位，可见它的重要性。水对人体的生理功能已在我们的手册里有详细说明。另外，水中的矿物质锶可以软化心脑血管，预防高血压、冠心病。硒元素能抑制癌细胞的生成，清除血管中的有害物质等等。而这些矿物质在食物中很难摄取。 三．水的溶解性总固体含量越低越好吗？ 答：溶解性总固体指水中有益于人体吸收的矿物质和微量元素的总和。用TDS笔测出自来水的数值是包含了有害于人体吸收的重金属等其他物质。测出纯净水的数值是15mg/L以下。属于没有骨架没有营养的软水。西藏冰川水的小瓶装在超市卖6.2元/瓶。标明的溶解性总固含量为482～725mg/L。而这种价位的好水是不适合家庭烧饭煲汤和长期的饮用。2007年7月1日颁布实施的《生活饮用水标准》规定，总固体含量为1000mg/L以下。国内外专家也表明：最理想的溶解性总固体含量为300mg/L左右。所以说水的溶解性总固体含量不是越低越好。 四．“RO膜的孔径是万分之一微米，所制出的水是小分子团水”，对吗？ 答：反渗透膜制出的水不含矿物质和微量元素。而水中的矿物质是水分子团中的骨架，抽去了骨架改变了结构，失去了支撑的水分子会串联成线团，使分子团变大。所以纯净水不是小分子团水，而是大于30以上分子团的大分子团水。这也就解释了为什么在市场上看不到任何一家纯净水厂家有小分子团检测报告。 五．为什么万丰水是小分子团水？ 答：现在国际上公认并且唯一的测定方法是用核磁共振中的氧谱（O - 17）测定水的半幅
质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用
细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和 SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。 纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。 一、试剂准备 1. 溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH ，10mM EDTA(pH ）。1M Tris-HCl[t1] (pH ），EDTA （pH ）10ml，葡萄糖，加ddH2O至500ml。在10 lbf/in2高压灭菌15min ，贮存于4℃。 任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。 50 mM葡萄糖最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此，如果溶液I 中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。EDTA呢大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢实话告诉你，只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。 NaOH也使DNA变性，但只是个副产物，在溶液3加入后其中的醋酸和NaOH中和，质粒DNA 恢复活性 2. 溶液Ⅱ：NaOH，1% SDS。2N NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。使用前临时配置[t2] 。这是用新鲜的N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH稀释制备的NaOH，无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向 micelle（微囊）结构的相变化所导致。用了不新鲜的N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌（不妨可以自己试一下），自然就难高效率抽提得到质粒。如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为 SDS也是碱性的，只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢那是为下一步操作做的铺垫。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合（象对待女孩子一样），不然基因组DNA也会断裂。基因组 DNA的断裂会带来麻烦。 3. 溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 。5M KAc 300ml，冰醋酸，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。 溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白这沉淀的本质。最容易产生的误解是，
新软极通EWEBS_V5.x故障问题集合
西安新软极通5.0常见问题 本问题集应用于新软的极通EWEBS 5.0 是我们继极通EWEBS 4.2之后的最新版本，极通EWEBS 5.0包括四个模块远程接入、本地收藏、即时通讯、网络收藏。下面是极通EWEBS 5.0的最新常见问题可供用户参考，如果遇到此类问题可根据此文档解决。 一、极通服务平台 1、可以对企业信息进行保存吗？ 答：可以保存企业的组织架构图，一种为图片的形式；另外一种为内容的形式可以根据需要导入企业组织架构信息。 2、为什么输入服务器地址加上端口号登陆不上去？ 答：要看你的端口号正确与否，此端口为远程接入安装时的Web端口。 3、为什么我在客户端测试服务器端口都已做通但外网通过Web还是访问不了？，提示“这台计算机无法找到指定的服务器。请确认服务器的域名或IP地址是否正确，然后重新连接”如图
答：打开控制台后，在‘集控平台→集控设置→组件信息→信息编辑’处，选择‘远程接入’点右上角的‘修改’，如图按说明处填写‘互联网地址’项。 4、以Win2008系统作为服务器安装极通EWEBS 5.0的过程中提示“如果当前系统是作为[Windows2003]以后的操作系统，需要安装终端服务，否则程序不能正常运行。继续安装吗”这里要怎么操作? 答：1、你已经安装了Windows2008的终端服务及授权并做了配置，则选确定继续安装。 2、你没有安装Windows2008的终端服务及授权并做相应设置，则选取消，安装终端 服务及授权并做相应配置。具体安装配置参照极通Ewebs5.X安装手册。 5、是否可以在Windows XP和Windiws2008下安装极通EWEBS ? 答：能，极通EWEBS 5.0现在已全面支持WindwosXP 、2003和2008。（注：2008下安装需要安装Windows终端服务和授权）
质粒提取有关问题及注意点
质粒提取常见问题解析 涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死？ 参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常? 参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办法： 1、降低培养温度，在20～25℃下培养，或室温培养可明显减少发生概率。 2、使用一些特殊菌株，如Sure菌株，它缺失了一些重组酶，如rec类等，使得质粒复制更加稳定。 3、质粒抽提有一个酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的NaOH浓度过高造成的，请大家注意一下！ 【有两种方法可以在提质粒前判断菌生长是否正常： 1、利用你的嗅觉。只要平时做实验仔细点就能闻出大肠杆菌的气味，新鲜的大肠杆菌是略带一点刺鼻的气味，但不至于反感。而在泥水状的菌液中你只要一凑过去就感觉到其臭无比或者没有气味，可以和正常菌液对照。 2、肉眼观察活化菌株。对于生长不正常的菌液进行划板验证或者稀释到浓度足够低涂板，第二天观察单克隆生长情况，LB平板生长的DH5A正常形态在37℃16h后直径在1mm左右，颜色偏白，半透明状，湿润的圆形菌斑，如果观察到生长过快，颜色又是泛黄的话基本上不正常了。】 未提出质粒或质粒得率较低，如何解决？ 参考见解： 1、大肠杆菌老化：涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。 2、质粒拷贝数低：由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体。 3、菌体中无质粒：有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。 4、碱裂解不充分：使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加溶液的用量。对低拷贝数质粒，提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液，可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。 5、溶液使用不当：溶液2和3在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。 6、吸附柱过载：不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB或2×YT，菌液体积必须减少；若质粒是非常高的拷贝数或宿主菌具有很高的生长率，则需减少LB培养液体积。 7、质粒未全部溶解(尤其质粒较大时) ：洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。 8、乙醇残留：漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，再加入洗脱缓冲液。 9、洗脱液加入位置不正确：洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。 10、洗脱液不合适：DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如洗脱缓冲液EB(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA，pH8.5)或水。洗脱效率还取决于pH值，最大洗脱效率在pH7.0-8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60℃后使用，有利于提高洗脱效率。
高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/f16114067.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号：PL03 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存 50次 （PL0301） 100次 （PL0302） 200次 （PL0303） 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA（10mg/ml）-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管（2ml）室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－
极通远程连接问题处理集锦
极通远程连接问题处理 如果客户端电脑登陆sunlike系统时，提示【当前没有可用许可，请稍后登陆】的信息，原因是由于客户端电脑非正常退出远程应用程序，服务器端系统无法释放缓存造成该现象发生。 解决方法：双击服务器桌面图标【监控工具】，出现如下信息：在远程登陆不上去的客户机名称上，单击右键将该会话进行注销，注销一分钟后，客户端方可再次登陆。 其他出现问题详见如下内容： 1、客户端登录的时候提示“获得的AIP协议参数不完整，请验证客户端与服务器的版本是否一致 解决办法： ?把客户端卸载掉重新在网页上下载安装； ?看看是不是用的非windows的ie浏览器，如果不是将其的默认下载工具设置成ie 下载即可。
2、客户端登陆提示： ? ?解决办法： ?检查绑定的系统用户的权限，检查绑定的系统用户密码是否正确。 ?由于极通EWEBS 2008系统用户身份绑定的NT系统用户没有设置密码、密码错误或者系统绑定的用户没有加入到remote desktop users里。 3、客户端登陆时提示： 解决办法： ?在服务器上用127.0.0.1的ip登录，确定一下问题出在本机上还是路由器上。 A.如果本机可以登录 ?检查路由器的2700端口映射（映射方法，详见路由器端口映射解析文档）。 B. 如果本机不可以登录请检查一下几点： a)检查我的电脑右键属性，远程，允许远程连接到此计算就的勾打上没（必须勾上）； b)检查EW Multi User Driver服务是否启动状态； c)Windows 2003 server系统可以检查”管理工具”—“终端服务器配置”里面的”AIP-TCP协 议”是否启用。 4、正在加载应用程序配置信息 解决办法： 大多出现aipserver.exe文件丢失或者系统环境变量丢失。 A）Aipserver.exe文件存在极通EWEBS 2008系统服务器安装的bin文件夹下面，若没有此问题，从相同的版本上拷贝到此文件夹下面即可。 B）系统变量，我的电脑右键属性——高级——环境变量打开系统变量里面的path 变量，检查里面有没有极通的安装路径。（默认为C:\Program Files\Gintel\EWEBS Server\bin;）。
关于质粒抽提的杂菌污染问题解决方案
关于质粒抽提的杂菌污染问题解决方案过 对于从事分子生物学的研究的人来说，质粒抽提几乎是每天都用做的常规技术。我们经常会收到来自用户的各种求助，像质粒提取失败了、不是自已想要的那个质粒及提取得率低等等。 其实提取质粒并不难，基本上按照质粒提取试剂盒的说明书，小心操作，一般不会有问题。但是为什么还会有这些问题存在？因为在实验中我们应该注意一些我们经常忽略的细节。可能实验室的环境的污染，操作时的不注意都会造成我们培养细菌时染杂菌，使得在质粒的提取过程中现象出现异常，导致实验不成功。说到这里，有些人可能会问：那我们染的杂菌是什么菌呢？其实大部分为真菌，也有可能是革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌等。 为了让大家能能判断出所用的菌体是否染杂菌，继而能从实验现象可以判断出该原因，我们特意在本实验室里做了一个从染杂菌的细菌中提取质粒的对照模拟实验。 实验方案 编号具体方案 号高拷贝质粒的大肠杆菌1 2号号染杂菌的大肠杆菌3 4号全为杂菌（酵母菌）号 5．6号 实验步骤 根据simgen快速质粒DNA小量试剂盒的说明书的操作步骤进行实验。 实验结果 （一）Buffer II裂解不完全
后溶液变粘稠的澄清液体；而部分BufferII2号为正常的大肠杆菌加入如上图所示1、号加入之后溶液呈不粘稠的浑浊、64号变为粘稠的浑浊液体；全为杂菌的5染菌的细菌3、液体。时，其中的碱性溶液能使革兰氏阴性菌的细胞壁破裂以及蛋白质变Buffer II 在加入号正常的革兰氏阴性细2等细胞内容物。对于1、性，从而释放出质粒DNA、基因组DNA等细胞内容物从而溶液变为粘稠的DNAII溶液能将其细胞壁破裂，释放出质粒菌，Buffer 溶液能号，我们可以看到它出现了粘稠的浑浊液体，这是因为Buffer II澄清液体，而3、4的细胞壁却不能破裂，真菌）溶解正常的革兰氏阴性细菌的细胞但部分杂菌（革兰氏阳性菌、5、6号都为杂菌，不能被破裂的杂菌呈现浑浊状。它们的细胞壁较厚，Buffer II溶液只能裂解很小部分的细胞壁使其穿孔而泄露部分核酸（主要是RNA），细胞内的基因组DNA等其他细胞内容物难以释放，所以它呈现了不粘稠的浑浊状。 （二）拷贝数降低或质粒丢 失． 图2
极通常见问题解6.15
（常见问题解答）： 1．为什么极通客户端登录网页打不开？ 答：请检查此电脑是否能打开其它网页及QQ是否能正常登录，如正常可能是服务器那边网络有问题，请联系系统管理员处理。否则，则有可能是您电脑网络有问题。 2．远程客户端访问服务器非常慢，是什么问题？ 答:客户端连接服务器慢有以下原因： a，服务器端或者客户端电脑中毒； b，服务器端的配置，内存达不到客户端连接的需要； c，实际传输的网速不够快。 3．为什么有的用户不能正常使用虚拟打印而其他用户可以？ 答：客户端若是已经设置好虚拟打印后，在使用应用程序打印的时候必须选择NfEwebs虚拟打印机。4．为什么服务器上安装好虚拟打印后客户端依然不能使用虚拟打印？ 答：1. 首先确认客户端打印本地文档是否正常，还有本地打印机支持的打印纸张范围是多大，若是软件设置的纸张范围超过打印机的打印范围请重新设置纸张格式； 2，在极通EWEBS中客户端在第一次使用虚拟打印不能进行正常打印时，建议先选择PDF打印，然后在选择虚拟打印就可以了。
注意：在选中虚拟打印后要重新退出应用程序这次的虚拟打印才有效。 5．登录后双击运行程序，显示“该应用程序暂时没有可供使用的服务器或许可，请稍后再试”？ 答： a.是服务器点少，而且在刚刚退出之前已经占满，然后退出再登录会出现这个情况，稍等会再登录即可。 b.是客户的点数满了，这个情况里包括实际使用人数占满了点数，还有客户端的用户操作时多占用了点数。 c.就是服务器的内存和CPU使用率超过80%，超过了软件负载平衡限制。建议稍后再试或通知管理员。 或者 d.进入极通管理平台，查看是注册状态是否已过期。如已过期，请检查加密狗是否插，指示灯是否正常。如已插上，请检查电脑是否已检测到加密狗。然后进入开始 程序 极通EWEBS应用虚拟化系统 授权管理工具，刷新Ukey看是否有加密设备号。如没有则表示未检测到加密狗，请插到其他的USB口试试。否则表示加密狗已损坏或与操作系统不兼容。
质粒提取注意事项
1. 质粒制备的基本原理是什么？ 答：做过分子生物学实验的,大多数做抽提过质粒，但不是所有人都知道质粒制备的基本原理。所以有必要做一个说明，能帮助您了解和解决实验过程中遇到的一些问题。制备质粒最常用的方式是碱裂解法。质粒被转化到细菌中，单菌落接种到含有特定抗生素的培养基中，一般培养到细菌生长的平台期离心收集细胞；细菌用悬浮液（Solution I, 内含RNase A）悬浮细胞，用SDS-NaOH (Solution II)裂解。SDS是很强的去污剂，抽提出细胞膜蛋白质和磷脂，释放出细胞内物质，NaOH为强碱，使蛋白质，染色体DNA和质粒DNA变性；细胞裂解彻底后，加入酸性醋酸钾（Solution III）, 中和裂解液，同时SDS-K,变性蛋白质，变性基因组DNA和细胞碎片形成沉淀，通过离心，但是质粒DNA正确复性，仍留在上清溶液中。如何从上清液中回收DNA的方法有很多，有用苯酚/氯仿抽提的，有用乙醇沉淀的，有用核酸吸附吸附的，目的都是试图采用有效，快速的方式纯化质粒DNA。我们提供的试剂盒就是选用特异的核酸吸附材料，优化结合与洗脱条件得到高纯度质粒DNA，纯化的质粒DNA纯度和得率可以满足分子生物学实验的要求。 2. 质粒DNA 制备的关键是什么？ 答：碱裂解法的关键是如何把握SDS-NaOH处理的时间。质粒制备过程中，如果质粒长时间暴露于NaOH, 质粒有可能不可逆变性，使得抽提质粒中有部分是变性质粒。这些变性质粒，不能酶切。所有一般情况下，SDS-KOH处理时间不能超过5分钟，最好在冰里处理，观察到液体变得清就可以加入中和液。 3. 质粒中基因组污染是怎么产生的？ 答：基因组的产生一般是因变性和中和步骤处理不当所致。如果为了提高混合效果，混匀的动作过于剧烈，基因组DNA可能被剪切成小片段，这些小片段在后来中和过程中被复性，保留在溶液中，与质粒一起回收出来了。要降低基因组的污染，记注两点：混合动作要温和，细胞用量要合适。 4. 如何确定质粒小抽细胞的用量？ 答：根据实验目的确定质粒的需求量。对于一般的克隆酶切鉴定，亚克隆、测序分析等常规分析，有几微克的DNA就够了。质粒拷贝数的高低确定接种体积的大小。高拷贝的质粒，接过2-3ml 的细胞就够了，对于中低拷贝的如pBR322,接种5ml也能满足要求。使用过过的细胞，由于细胞裂解难以彻底，时间难以把握，DNA的纯度和得率有时因吸附材料容量的限制，得率并没有显著提高，纯度反而下降。对于细胞数很大的质粒制备，需要按比例提高各溶液的用量，才能保证抽提质粒的纯度和得率。 5. 电泳分析抽提的质粒会看到什么？ 答：如果您制备的质粒很脏，从电泳加样孔起，您会看依次看到微量的基因组DNA, 开环环装质粒（open circular plasmid），超螺旋质粒(Super Coiled), 变性的超螺旋质粒（denatured supercoiled plasmid）, 细菌RNA。判定质粒制备质量高低的标准是观察超螺旋质粒在整个抽提DNA中的百分比。质量高的主要部分为超螺旋质粒，没有变性超螺旋质粒和没有基因
质粒DNA提取方法与原理
质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。 纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。 一、试剂准备 1. 溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。1M Tris-HCl (pH 8.0）1 2.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在10 lbf/in2高压灭菌15min ，贮存于4℃。 任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。50 mM葡萄糖最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢？实话告诉你，只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。 NaOH也使DNA变性，但只是个副产物，在溶液3加入后其中的醋酸和NaOH中和，质粒DNA恢复活性 2. 溶液Ⅱ：0.2N NaOH，1% SDS。2N NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。使用前临时配置。 这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH，无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向 micelle（微囊）结构的相变化所导致。用了不新鲜的0.4 N NaOH，即便是有SDS 也无法有效溶解大肠杆菌（不妨可以自己试一下），自然就难高效率抽提得到质粒。如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为 SDS也是碱性的，只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS 呢？那是为下一步操作做的铺垫。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合（象对待女孩子一样），不然基因组DNA也会断裂。基因组 DNA 的断裂会带来麻烦。 3.溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。 溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白这沉淀的本质。最容易产生的误解是，当SDS碰到酸性后发生的沉淀。如果你这样怀疑，往1%的 SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。大量沉淀的出现，显然与SDS的加入有关系。如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是
质粒抽提原理和详细操作步骤
质粒抽提,实验室必备技能之一 质粒 质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA 分子。 质粒抽提 从细菌中分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用强碱液、加热或溶菌酶（主要针对革兰氏阳性细菌）可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）和 TritonX-100（一般很少使用）可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或 Triton X-100处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA，简称cccDNA）的两条链不会相互分开。当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。 质粒抽提最常用的方法是碱裂解法，它具有得率高、适用面广、快速和纯度高等特点。当然，碱裂解法也有缺陷：容易导致不可逆的变性。要降低不可逆的变性，就要控制好碱裂解的时间。 碱裂解法抽提质粒需要用到以下三种溶液 溶液Ⅰ 50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0），10 mmol/L EDTA（pH 8.0），在15 psi 压力下蒸汽灭菌15 min，4℃保存。 溶液Ⅱ 0.2 mmol/L NaOH（从10 mmol/L 贮存液中现用现稀释），10 g/L SDS（室温保存）。 溶液Ⅲ
HGO常见问题解答
HGO常见问题解答 1.HGO建立项目后无法改名项目名称，没有“另存为”的功能，如何更改项目名字。 HGO没有直接“另存为”的功能，因为项目文件夹里的内容很多，不只是一个文件，强制换名容易导致文件系统出错。如果确实需要修改项目名字，可关闭项目后手动更改，但切记必须同时修改项目主文件“***.HGO”必和项目文件夹“***”两个的名字，且必须同名，否则打开项目会报错。 2.同步环为什么总是超限 2009规范用仪器标称精度来对同步环进行检验，要求非常严格，很难保证所有同步化均合格，所以采用该规范时就算某些同步环不合格也不用担心，只要其满足2001规范即可放心使用。如果一定要使其按照2009规范合格，可以调整项目属性中的“仪器精度”，放大同步环的限差要求，使其通过检验。 3.基线解算设置里的“观测值”选为“自动”后，软件是如何选择观测值类型进行解算的， 如何手动更改？ 默认的基线解算设置里采用固定的是“自动“选择观测值进行解算，HGO会根据基线长度来进行选择L1/Lc模型进行解算，L1模型观测误差小，但是容易受大气误差影
响，所以适用于短基线；Lc模型即无电离层组合模型，观测误差大，但是不受大气误差影响，所以适合于中长基线。如果基线长度小于下图中设置的“自动化处理基线长度阈值”（默认为10km），会采用L1模型进行解算，如果基线长度小于该阈值，会采用Lc模型（必须是双频数据）进行解算。这种设置是一种经验值，用户可以根据需要进行修改，如基线长度在10km左右时，可以根据需要切换L1/Lc模型进行解算，选择效果好的解算结果参与平差；对于双频短基线，可选择L1L2模型进行解算，解算精度有可能会优于L1模型。另外，用户可根据当地经纬度修改“自动化处理基线长度阈值”，如北方高纬度地区，该值可以改为20km，南方地区，该值可以改为5km。 4.为什么有时候基线解算结果为“L1浮动解”，不进行固定解运算，且解算结果为“合格” 在基线解算设置的”高级”选项卡中有一个“单频固定解基线长度限制(m)”的设置项，默认值是30km，当基线长度大于该值，且该基线只有单频观测数据时，将不进行模糊度固定，只输出浮动解。因为对于长距离基线，只依靠L1单频数据很难进行模糊度固定，固定后的解算结果也往往不如浮动解准确。如果一定要得到固定解，可将此值设置为超过待解算基线长度的数值。
极通Ewebs常见问题解答..
（常见问题解答）： 1，为什么极通客户端登录网页打不开？ 答：请检查此电脑是否能打开其它网页及QQ是否能正常登录，如正常可能是服务器那边网络有问题，请联系系统管理员处理。否则，则有可能是您电脑网络有问题。 2，远程客户端访问服务器非常慢，是什么问题？ 答:客户端连接服务器慢有以下原因： a，服务器端或者客户端电脑中毒； b，服务器端的配置，内存达不到客户端连接的需要； c，实际传输的网速不够快。 3，为什么有的用户不能正常使用虚拟打印而其他用户可以？ 答：客户端若是已经设置好虚拟打印后，在使用应用程序打印的时候必须选择NfEwebs虚拟打印机。 4, 为什么服务器上安装好虚拟打印后客户端依然不能使用虚拟打印？ 答：1. 首先确认客户端打印本地文档是否正常，还有本地打印机支持的打印纸张范围是多大，若是软件设置的纸张范围超过打印机的打印范围请重新设置纸张格式； 2，在极通EWEBS中客户端在第一次使用虚拟打印不能进行正常打印时，建议先选择PDF打印，然后在选择虚拟打印就可以了。
注意：在选中虚拟打印后要重新退出应用程序这次的虚拟打印才有效。 5，登录后双击运行程序，显示“该应用程序暂时没有可供使用的服务器或许可，请稍后再试”？ 答： 第一种情况是： 1.是客户的点数满了，这个情况里包括实际使用人数占满了点数，还有客户端的用户操作时多占用了点数。2。就是服务器的内存和CPU使用率超过80%，超过了软件负载平衡限制。建议稍后再试或通知管理员。 或者 第二种情况是：进入极通管理平台，查看是注册状态是否已过期。如已过期，请检查加密狗是否插，指示灯是否正常。如已插上，请检查电脑是否已检测到加密狗。然后进入开始 程序 极通EWEBS应用虚拟化系统 授权管理工具，刷新Ukey看是否有加密设备号。如没有则表示未检测到加密狗，请插到其他的USB 口试试。否则表示加密狗已损坏或与操作系统不兼容。
质粒提取简介问题分析
质粒提取简介及问题分析 一、导论 (一) 质粒提取的原理： 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液： 溶液I，50 mM葡萄糖，25 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II，0.2 N NaOH，1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸钾，2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-HCl溶液，是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言几乎没有任何影响，所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达10 mM 的EDTA，就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。如果手上正好缺了溶液I，可不可以抽质粒呢？只要用等体积的水或LB培养基来悬浮菌体就可以了。有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。 轮到溶液II了。这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2%的SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH 稀释制备0.4N的NaOH，无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致。用了不新鲜的0.4 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌(不妨可以自己试一下)，自然就难高效率抽提得到质粒。如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA 变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢?那是为下一步操作做的铺垫。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。基因组DNA的断裂会带来麻烦。 溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白沉淀的本质。最容易产生的误解是，当SDS 碰到酸性后发生的沉淀。如果这样怀疑，往1%的SDS溶液中加2M醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。大量沉淀的出现显然与SDS的加入有关系。如果在溶液II中不加SDS，也会有少量沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1%的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。这其实是十二烷基硫酸钠(SDS)遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾(PDS)，而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。 (二)细菌的收获和裂解。 细菌的收获可通过离心来进行，而细菌的裂解则可以采用多种方法中的任意一种，这些方法包括用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理等。选择哪一种方法取决于3个因素：质粒的大小、小肠杆菌菌株及裂解后用于纯化质粒DNA的技术。尽管针对质粒和宿主的每一种组合分别提出精确的裂解条件不切实际，但仍可据下述一般准则来选择适当方法，以取得满意的结果。 1、大质粒(大于15kb)容易受损，故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。将细菌悬于蔗糖等渗溶液中，然后用溶菌酶和EDTA进生处理，破坏细胞壁和细胞外膜，再加入SDS一类去污剂溶解球形体。这种
常见问题解答]
[常见问题解答] 1、填表时间无法填写？ 答：系统自动生成的。不需要填写。 2、推荐单位和工作单位填写完成后，打印出来的推荐单位为什么变成了部门？ 答：打印表和录入表是有区别的。 3、专家标识，跟踪标记怎么填写？ 答：根据您自身的情况，请向您单位的人事部门或上级人事部门咨询。 4、个人信息采集工具，软件从新安装后出现不能填写或报错不能打开软件？ 答：先到“C:\人力资源和社会保障部”下，删除掉“人社部政府特殊津贴个人信息采集工具”这个文件夹。再从新安装个人信息采集工具软件，就可以使用了。 5、个人信息采集工具中数据填写完成以后，点击保存，打印或生产报送出现：
答：原因是有数据重叠的地方，只能点击个人信息采集工具中清除按钮后重新填写。在清除前先将报表中每个单元格数据，逐项复制粘贴到记事本或WORD文档，清除数据后，再逐项从记事本或WORD文档6、点击生成报送而生成的RPU的数据文件怎么打不开呢？ 答：rpu文件只能使用我们的软件，点击接收报送，将数据重新接收回软件才能进行查看，您是无法直接双击打开的！ 7、数据填写完成以后，点击保存，打印或生产报送出 答：请您检查相同奖项类别下获奖项目是否有重复，重复的修改或删除。 8 获奖情况里是怎么排序的？我想按自己的顺序可以吗？
答：不可以自定义排序。系统默认是按奖励种类来排序的，如果是同一种奖励种类下想排序的话，可以在获奖项目里添加1,2,3就可以了。 9、在获奖情况里，怎么发现我的数据丢失了呢？ 答：不是您的数据丢失了，是我们软件有自动识别信息的功能。如果您的年度、获奖情况和获奖项目三个空里填写的信息相同，只是在等级和排名那块不同，那么我们软件会自动删除相同信息中的一条，只保留最后填写的那条信息。 10、获奖情况可以填写12项，为什么我看到栏中只能填写5项呢，我怎么填写第6项？ 答：本页5条信息填写满之后，把鼠标放入最后一行，在键盘上找方向键的“↓”，就会出现一篇新的表让继续填写获奖情况。如果第一页未填满，那是没办法弹出第二页的。