5基因克隆的几种常用方法
基因克隆的几种常用方法
基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。
1 根据已知序列克隆基因
对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取,即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。现在国际上公开发行的杂志一般都不登载整个基因序列,而要求作者在投稿之前将文章中所涉及的基因序列在基因库中注册,拟发表的文章中仅提供该基因在基因库中的注册号(accession number),以便别人参考和查询。目前,世界上主要的基因库
有:(1)EMBL,为设在欧洲分子生物学实验室的基因库,其网上地址为https://www.360docs.net/doc/f414356018.html,/ebi-home.html;(2)Genbank,为设在美国国家卫生研究院(NIH)的基因库,其网上地址为
https://www.360docs.net/doc/f414356018.html,/web/search/index.html;(3)Swissp ort和TREMBL,Swissport是一蛋白质序列库,其所含序列的准确度比较高,而TREMBL只含有从EMBL库中翻译过来的序列。目前,以Genbank 的应用最频繁。这些基因库是相互联系的,在Genbank注册的基因序列,也可能在Swissport注册。要克隆某个基因可首先通过Internet
查询一下该基因或相关基因是否已经在基因库中注存。查询所有基因文库都是免费的,因而极易将所感兴趣的基因从库中拿出来,根据整
个基因序列设计特异的引物,通过PCR从基因组中克隆该基因，也可以通过RT-PCR克隆cDNA。值得注意的是,由于物种和分离株之间的差异,为了保证PCR扩增的准确性,有必要采用两步扩增法,即nested PCR。
根据蛋白质序列也可以将编码该蛋白质的基因扩增出来。在基因文库中注册的蛋白质序列都可以找到相应的DNA或cDNA序列。如蛋白质序列是自己测定的,那么需要设计至少1对简并引物(degenerated primer),从cDNA文库中克隆该基因。以这种方法克隆的基因必须做序列测定才能鉴别所扩增产物的特异性。
另外,在基因克隆之后,如还要进一步做表达研究,所使用的PCR 酶最好不用Taq DNA聚合酶,而采用其他有自我检测(reading proof)功能的酶,如pfu。这样可以避免由于扩增过程中出现的点突变或终止密码子而导致整个研究结论的错误。
2 根据已知探针克隆基因
这也是基因克隆的一种较直接的方法。首先将探针作放射性或非放射性标记,再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交,最后将
所识别的片段从胶中切下来，克隆到特定的载体(质粒、噬菌体或病
毒)中作序列测定或功能分析。这种方法不但可以将基因克隆出来,还能同时观察该基因在基因组中的拷贝数。但在探针杂交后,要注意高强度(high stringent)漂洗,以避免干扰信号,即保证克隆的特异性,同时节省时间。
3 未知序列的基因打靶
根据已知序列进行基因克隆,多数是重复别人的工作,或者是在别人工作的基础上继续自己的工作,因而不存在新基因的克隆过程。对未知序列的基因克隆才是真正的创造性研究。
3．1 随机引物法克隆未知序列基因
随机引物PCR(arbitrarily primed PCR,AP-PCR)首先被用于基因组DNA或RNA的指纹图谱(finger print)分析,后来也有人将这种方法用于克隆与表型相关的基因或mRNA。该方法的理论依据是:表型受基因支配,在一个生物体发生了表型变化后,其基因组DNA很可能发生变化或出现不同基因的激活或关闭等;另一方面,如在寄生虫的发育过程中,不同发育阶段的虫体所表达的基因很可能不同,如将不同发育阶段的虫体mRNA提取出来,用单一引物(随机引物,其长度不超过16 nt)对不同时期的虫体mRNA进行扩增比较,即可找出导致表型变异的遗传学依据。这种方法是一种比较PCR,它要求至少有2种来自不同表型但又很类似的基因组DNA或mRNA。AP-PCR扩增后的产物必须99%是一致的,只有个别特异的产物出现在特异的表型个体
中。该方法对表型或种源关系相差甚远的生物个体之间没有比较意义(见图1)。
图1 应用AP-PCR法进行2种或多种表型特征类似的个体间指纹图谱分析或表型相关基因克隆箭头所指扩增带为特异于个体(Ⅱ)的扩增产物
AP-PCR的操作一般采用两步法,即前10个循环多以较低的退火温度(annealing temperature)进行扩增,后20个循环则采用较高的退火温度扩增。AP-PCR产物多较短,一般需高浓度的琼脂糖凝胶检测,也可用聚丙烯酰胺凝胶检测。如扩增的模板为mRNA,通过比较扩增产物的强度,可以得知该基因在2种生物或同一生物不同发育阶段的表达强度。另外,在AP-PCR检测到与某一表型相关的基因或基因产物(mRNA)以后,下一步工作就是克隆出整个基因或mRNA。主要操作程序为:(1)AP-PCR产物的提取、克隆及序列测定。首先将AP-PCR检测到的特定片段从凝胶中切下,提取DNA克隆到适宜的载体内(如TA载
体),再测定其核苷酸组成。根据其核苷酸组成设计2个方向相反的引物(P-1,P-2,见图2)。引物长度多在20 nt以上；退火温度在60℃以上；(2)将基因组DNA做适当酶切,然后在其两端连接上相同的接头(见图2,这种接头可从生物制品公司购买)。根据接头的序列扩增。
3.2 Differential display PCR(DD-PCR)
DD-PCR是在AP-PCR基础上发明的一种RT-PCR方法,主要用于2种或多种类似生物个体在基因表达上的差异分析。其基本原理是:所有真核生物的成熟mRNA都含有不同长度的poly+(A)尾部序列,根据poly+(A)内部的2个核苷酸排列的不同,可以将所有的mRNA分子分为12类(见图3)。
图３真核生物12种mRNA的序列特点
图４DD-PCR示意图箭头所示为特异扩增产物
根据这12种mRNA序列可合成12种相应的反转录引物，即
M’N’TTTTTTTT……,用其分别进行反转录,即可将所有mRNA分类合
成12种cDNA(于12个试管内)，然后再用随机引物,以这12种cDNA
分别做模板进行PCR扩增(见图1和图4)，那么与表型相关的mRNA
就很容易被发现并克隆出来。但不论AP-PCR还是DD-PCR,都适用于2种种源近似生物或不同发育阶段的同一个体之间的比较。因而,其PCR 的模板必须是来自2个生物或同一生物的不同发育阶段的mRNA。
DD-PCR的优点是快速、方便,可以检测表达量极低的mRNA，但其技术条件要求较高，所扩增的mRNA的质量不能有差异,即mRNA不应降解。目前这一方法已广泛应用于生物表型相关基因的克隆及比较研究。
3.3 Representative difference analysis PCR (RDA-PCR)
这是一种差减杂交 (subtractive hybridizatio-n)与PCR相
结合的技术，其整个操作程序完全不同于AP-PCR和DD-PCR。前2种
方法是将两模板DNA或cDNA分别进行PCR扩增,最后通过扩增产物的差异,分离和克隆特异扩增带,其缺点是需要将特异扩增产物从胶中
切下来,提取DNA,再扩增后才能克隆。RDA-PCR只扩增区别于某一表型的特异基因，因而更便于扩增产物的克隆与分析(见图5)。
其基本原理是：用一个在种源上相近的基因组将靶基因组中所有共同的基因掩盖起来,而只暴露出特异的基因,在整个反应中只有特
异基因能被扩增。其操作程序为:(1)用同一限制性内切酶(一般用Bam HI,Bgl II或Hind III)同时处理靶基因组和掩盖基因组DNA，其中掩盖基因组DNA的量至少要2倍于靶基因组DNA的量；(2)在经酶切的靶基因组片段的两端加上连接头,其序列与酶切产生的粘性末端的
序列相对应；(3)将2个基因组的DNA混合后,高温变性,低温退火。由于掩盖基因组DNA的量远大于靶基因组DNA量,那么与掩盖基因组DNA相同的靶基因就会与掩盖基因形成杂合体，而只有特异的靶基因才能重新组合,不会受掩盖基因的影响；(4)用Taq DNA聚合酶将粘性末端补齐后,加入与连接子相对应的引物,经过30个左右的PCR扩增,就可以将靶基因组中与掩盖基因不同的特异基因扩增出来。这种方法的起始操作程序较复杂,各反应步骤要求准确无误,但其检测的准确度较高。对于基因组内的点突变、重排、插入序列等变化均可检测出来。
4 用特异抗体克隆基因
用抗体克隆基因的关键是抗体的特异性。一般以单克隆抗体最为理想。获取特异抗体的方法主要有:(1)制备识别功能抗原的单克隆抗体;(2)将SDS-PAGE分离的蛋白质特异带切下免疫动物,其抗体只识别该特异蛋白质;(3)用Western-blot法将识别某一蛋白质带的抗体从膜上洗脱下来。在获取理想的抗体后,便可以用这些抗体筛选表达型基因组文库或cDNA文库,从文库中将编码某一特异蛋白质的基因克隆出来。
5 特异基因的功能克隆
它是借助于基因产物即基因所编码的蛋白质的功能将该基因克隆出来的一种方法。基因的功能克隆主要有2种:一是phage
display,另一是peptide display。后者的原理与前者基本相同。目前以phage display的应用最为广泛,本文只对这一方法加以介绍。
任何一种病原体，包括细菌、病毒和寄生虫,在其对宿主侵入或致病过程中,病原体本身的蛋白质成分(ligand)需要首先与宿主细胞上的受体(receptor)相互识别连接。如口蹄疫病毒需要借助于受体细胞上的Heparan sulfate受体，并与其相互作用后才能侵入细胞内；巴贝斯虫裂殖子需借助于宿主的补体作为桥梁，才能与红细胞结合并最后侵入红细胞内。对病原体与宿主受体相互作用成分的特性与功能分析,是制订免疫预防措施及制备阻断药物的前提。phage display 法是克隆病原体ligand的一种最为理想的手段。
图6 phage display克隆基因示意图
Phage display的基本操作过程为:(1)提取某一病原体基因组DNA,用超声波将DNA切割成500～1 500的片段;(2)将片段末端用
T4DNA聚合酶处理后,与载体DNA(phagemid)连接形成噬菌体质粒。用这些质粒与辅助噬菌体(helper phage)同时转染大肠杆菌。phagemid在大肠杆菌内包装成噬菌体,大量繁殖,同时将插入的外源基因片段表达,表达产物主要集中在噬菌体颗粒的表面；(3)将特定的受体固定于载体上(多为ELISA板),方法同一般的ELISA包被。将噬
菌体悬液作适当稀释后,加入平板孔内,感作一段时间,用PBS等缓冲液漂洗。最后,只有表达特异功能蛋白的噬菌体才能与包被在平板上的受体相互结合,那些表达非相关蛋白的噬菌体由于不能与受体连接而被洗脱;(4)用高强度NaCl液将结合在受体上的噬菌体分离下来,再感染大肠杆菌,便可将编码特异功能蛋白质的基因克隆。
一个真核生物至少含有10万个不同的基因,其中只有10%～15%的基因在不同的发育时期表达,且不同的基因表达的强度相差甚远。在致病生物中,致病力强的生物,其致病因子(往往是1种或几种功能蛋白或酶)的表达量往往多于致病力弱的生物。从基因组中将人们感兴趣的基因或其转录产物扩增并克隆出来,是进一步对所编码蛋白质作功能分析的关键。本文介绍的几种基因克隆的方法是近几年应用比较广泛的方法。在具体实验中选择哪一种方法,还要根据研究者所要克隆的基因及其所在的基因组和对该基因的研究背景来决定。
（作者：陈启军，解放军农牧大学动物医学系, 长春 130062）
基因克隆及转基因方法
基因克隆及转基因 一、基因克隆及转基因过程 1、设计引物 软件是https://www.360docs.net/doc/f414356018.html,sergene.v7.1，用到里面的PrimerSelect和EditSeq。 一般原则：1、长度：18-25； 2、GC含量：40-60％，正反向引物相差不要大于5%； 3、Tm值：55以上（到65），实在不行50以上也可以，正反向引物相差不要大 于5； 4、3’端结尾最好是GC，其次是T，不要A； 5、正反向引物连续配对数小于4； 6、在NCBI上的Primer Blast上看引物特异性如何； （如果克隆的话不能满足条件也没办法。） 不是必须条件，但可以考虑：多个基因设计引物时，可尽量使Tm值相似，方便PCR。 步骤： 一、打开PrimerSelect和EditSeq。 二、在EditSeq中输入你的序列。 引物有一对F和R 1、对于F是从5’到3’，在序列的前部分选择长度为18-25bp的碱基，如果你是要验证就随便选，如果你是要克隆就在最开始选，不符合原则就只能在你选的后边增或减碱基。 2、将选择的F引物输入到PrimerSelect中，在File中选择Enter New Primer，复制，OK，然后可以看到引物的情况，看看长度、Tm、GC含量是不是符合标准，不符合就继续选。 3、对于R是从3’到5’，选中序列，在EditSeq的Goodies中选择第一个“反向互补”，此时序列已反向互补，按照前面F的方法搜索R的引物。、 4、注意你想要的目的带的大小，比如序列是1000bp，你想PCR出来800大小的目的带，那就要看看F和R之间的长度在你想要的范围内。可以将R反向互补，在正向的序列中搜索R在的位置，就是在EditSeq中选择Search，点击第一个Find，开始搜寻。 5、搜索完引物在PrimerSelec中的Report中选择前两个查看二聚体情况。 6、在NCBI上的Primer Blast上看引物特异性如何。 7、因为是克隆，所以引物要有酶切位点，酶切位点的加入主要考虑所用到的表达载体，在NEBcutter网站中输入总序列查看可用的酶切位点。在引物上游加入酶切位点，注意加入时载体的表达的方向，前面的酶切位点在引物F上，后面的酶切位点在引物R上。一般在引物上游还要加上两个保护碱基。 2、提取醋栗DNA 3、PCR扩增与目的基因回收 PCR先找合适的退火温度，找到后回收时就可以多PCR几管，一般我们用20ul的体系，PCR5管就可以回收，就是琼脂糖凝胶回收，将目的基因用刀片切下来，用试剂盒回收。回收完可以再跑电泳检测一遍。 PCR： 20ul体系：灭菌水13.8ul，若模板为质粒灭菌水14.3ul； 2.5mMdNTP2.0ul；
企业定量安全管理方法-预测方法
编号：SY-AQ-00931 ( 安全管理) 单位：_____________________ 审批：_____________________ 日期：_____________________ WORD文档/ A4打印/ 可编辑 企业定量安全管理方法-预测 方法 Enterprise quantitative safety management method prediction method
企业定量安全管理方法-预测方法 导语：进行安全管理的目的是预防、消灭事故，防止或消除事故伤害，保护劳动者的安全与健康。在安全管理的四项主要内容中，虽然都是为了达到安全管理的目的，但是对生产因素状态的控制，与安全管理目的关系更直接，显得更为突出。 预测方法有定性预测和定量预测两种。定性预测主要是指各种 调查方法，如重点调查、典型调查、抽样调查、专家意见调查等。 定量预测则主要有以下几种。 一、时间序列预测法 所谓时间序列就是按时间顺序排列的、反映某种安全现象发展 变化情况的统计数据。在企业安全管理中，我们经常要与时间序列 打交道。如按年度连续排列起来的事故起数，按季度排列起来的某 类事故起数等。时间序列预测法，就是根据时间序列变动的方向和 程度向前延伸来推断下一期或以后若干时期可能的变化情况的一类 预测方法。所以，时间序列预测法也称趋势外推法或历史延伸法。 这是目前安全预测中常用的一类定量预测方法。目前常用的时间序 列预测有以下几种。 1．算术移动平均法
这种方法是假设预测值与近几期的实际值有关，而与前几期或较远期无关。因此可以用最近几个时期的移动平均值作为下一期的预测值、预测公式是： 式中Xt ——t期的预测值； X—t期之前各期的实际值； n——所用资料的期数。 这种方法的预测误差与所用资料的期数即n值有关。一般说，n 值愈大，预测误差愈大；反之，n值愈小，预测误差愈小。 在实际安全预测中，”值的选择，主要取决于预测的目的和实际数据的特点。如果要求预测值比较精确，n应取的小一点，可在3～5之间，反之，如果想得到事物变化的大致趋势，”可取得大一些，可在10—30之间。如果实际数据上下波动不大，n值也可以取得大一些。 这种方法由于侧重考虑了近期实际情况对预测期的影响，因此预测比简单平均法要准确些，但一般也只宜用于短期预测。
常用划线工具种类及使用方法
常用划线工具种类及使用方法 一、划线工具按用途分类: 1.基准工具，包括划线平板、方箱、V形铁、三角铁、弯板（直角板）以 及各种分度头等。 2.量具，包括钢板尺、量高尺、游标卡尺、万能角度尺、直角尺以及测量 长尺寸的钢卷尺等。 3.绘划工具，包括划针、划线盘、高度游标尺、划规、划卡、平尺、曲线 板以及手锤、样冲等。 4.辅助工具，包括垫铁、千斤顶、C形夹头和夹钳以及找中心划圆时打入 工件孔中的木条、铅条等。 二、划线工具使用方法 1.平台。一般由铸铁制成。工作表面经过精刨或刮削，也可采用精磨加工而成。较大的划线平板由多块组成，适用于大型工件划线。它的工作表面应保持水平并具有较好的平面度，是划线或检测的基准。 2.方箱。一般由铸铁制成，各表面均经刨削及精刮加工，六面成直角，工件夹到方箱的V形槽中，能迅速地划出三个方向的垂线。
3.划规。划规由工具钢或不锈钢制成，两脚尖端淬硬，或在两脚尖端焊上一段硬质合金，使之耐磨。可以量取的尺寸定角度、划分线段、划圆、划圆弧线、测量两点间距离等。 4.划针。一般由4～6 mm 弹簧钢丝或高速钢制成，尖端淬硬，或在尖端焊接上 硬质合金。划针是用来在被划线的工件表面沿着钢板尺、直尺、角尺或样板进行划线的工具，有直划针和弯头划针之分 5.样冲。用于在已划好的线上冲眼，以保证划线标记、尺寸界限及确定中心。 样冲一般由工具钢制成，尖梢部位淬硬，也可以由较小直径的报废铰刀、多刃铣刀改制而成。 6.量高尺。由钢直尺和尺架组成，拧动调整螺钉，可改变钢直尺的上下位置，因而可方便地找到划线所需要的尺寸。 平台 方箱 划针 大尺寸划规 样冲
参与式方法的运用
参与式方法的运用 问题一：参与式方法的基本理念 在生活中，每一个人对事物都有自己的态度和看法。而一个人的态度和看法是由他（她）看问题的角度、思维方式、他们的文化背景、成长过程、只是、阅历、经验乃至经济条件、生活环境的不同来决定的，而且，生活中的一些事物和问题的答案并不是唯一的，通过一些活动和大家的参与，我们有机会了解别人的看法和态度，学习丛各个角度和层面看问题，并且学会听取他人的意见，以便我们能能够对事物有接近全面、准确的认识，这就是参与式学习的理念。 参与式的学习是一种新的学习方法，众所周知，每个人所掌握的只是都是有所不同的，而参与式学习是一个共同学习、共同提高的过程。
从形式上看，传统教学法，老师的地位是高高在上，绝对权威；在参与式培训中，培训者与参与者的地位是平等的。 从性质上看，传统式学习是学生被动接受的过程；而参与式培训师参与者主动学习的过程。
参与式培训师以SARAR为基础的。所谓的SARAR，大致说来就是：培训者对参与者持尊重和平等的态度，运用各种活动，使参与者在彼此的信息交流和自我发现的过程中，提出解决人们面临的问题。 SARAR的具体含义是： Salf-esteem，即“自尊”，指参与者自身的价值观和权力应受到尊重，他们的经验和能力应得到承认。 Associated Strength，即“集体力量”，指运用小组活动，使人们在小组中互相启发、交流、充分发挥每一个的能动作用。 Resourcefulness，即“足智多谋”，指调动参与者的积极性、创造性和聪明智慧，为参与式培训提供良好的气氛。 Action Planning，即“活动计划”，指应该设计出有特定目标的培训活动。 Responsibility，即“责任感”，指通过尊重和调动参与者的积极性，使参与者建立起对培训目标及内容的使命感，从而产生有价值的培训成果。 问题五：参与式培训的原则 基本原则：平等、尊重 实现基本原则的要求： u 参与者与培训者之间、参与者之间、培训者之间都要建立起相互尊重、相互支持、相互理解、相互信任的关系。彼此做到：不批评、不指责，多鼓励多肯定、积极主动分享、交流信息和思想；辩论时对事不对人。 u 培训者积极协助参与者。 协助参与者独立思考、分析和解决问题，帮助参与者认识自己的潜能，这样，他既能提供信息分享，又对培训成果有拥有感和成就感。 u 灵活和创新 事物都在不断地发生变化，在进行参与式培训时，应及时补充重要信息，及时修改和调整培训计划。运用参与式的方法是，没必要墨守成规，应充分 u 树立责任意识并懂得自我反省 不断回顾和反思前面的行动，不仅可以强化学习，还可以从中找到不足，并努力做到更好，让每个成员意识到自己在团队中的作用，从而培养个体对团队的责任感。 问题六：培训活动中参与者的参与程度 参与式一个个体主观能力、意愿与参与的条件和环境相互作用的过程。而不同的个体具有不同的参与能力和意愿，不同的环境对个体的参与提供不同的支持和条件，所以，参与者的参与程度是有所区别的。
4植物基因克隆的策略与方法
4植物基因克隆的策略与方法 基因的克隆确实是利用体外重组技术,将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的要紧目标是识不、分离特异基因并获得基因的完整的全序列,确定染色体定位,阐明基因的生化功能,明确其对特定性状的遗传操纵关系。通过几十年的努力由于植物发育,生理生化,分子遗传等学科的迅速进展,使人们把握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识,再运用先进的酶学和生物学技术差不多克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆,育性、高蛋白质及与植物发育有关的许多基因。我们实验室对天麻抗真菌蛋白基因作了功能克隆的研究(舒群芳等,1995;舒群芳等,19 97),为了克隆植物基因也探讨了其它克隆方法,本文论述基因克隆的策略、方法及取得的一些进展。 1功能克隆(functional Cloning) 功能克隆确实是按照性状的差不多生化特性这一功能信息,在鉴定和已知基因的功能后克隆(Collis,1995)。其具体作法是:在纯化相应的编码蛋白后构建cDNA文库或基因组文库,DNA文库中基因的选择按照情形要紧可用二种方法进行,(1)将纯化的蛋白质进行氨基酸测序,据此合成寡核苷酸探针 从cDNA库或基因组文库中选择编码基因,(2)将相应的编码蛋白制成相应抗体探针,从cDNA入载体表达库中选择相应克隆。功能克隆是一种经典的基因克隆策略,专门多基因的分离利用这种策略。 Hain等从葡萄中克隆了两个编码白藜芦醇合成的二苯乙烯合成酶基因(Vst1和Vst2),葡萄中抗菌化合物白藜芦醇的存在,能够提升对灰质葡萄孢(B otrytis cinerce)的抗性,在烟草和其它一些植物中无二苯乙烯合成酶,因此克隆该基因通过转基因后,对有些植物产生对灰质葡萄孢的抗性专门有意义(H ain等,1985)。Kondo等1989年对编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的基因组DN A做了克隆和序列分析(Kondo等,1989)。周兆斓等构建了水稻cDNA文库,分离了编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的cDNA(周兆斓等,1996)。植物蛋白酶抑制剂是一类天然的抗虫物质,它可抑制摄食害虫对蛋白质的消化,使害虫因 缺乏所需氨基酸而导致非正常发育或死亡。胡天华等人从烟草中分离出流行于我国的黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic virus)(CMV),并克隆了编码该
常用的几种画线方法
常用的几种画线方法成功总结操盘程序 （一）结合均线的金叉点和死叉点画线 以金叉点或者死叉点为基准画水平线。 均线死叉点如果伴随较大的成交量，那么均线死叉点将成为重要压力位。今后股价第一次上升到此时会有阻力。此时应减仓观望。反之，均线金叉点如果伴随较大的成交量，那么均线金叉点将成为重要支撑位。今后股价第一次下跌到此时获得支撑的可能性较大，此时不宜再抛股票。股价向上突破均线死叉点，回落调整时，此均线死叉点位又转变成支撑位。可在死叉点和金叉点处画水平直线，以观察股价走势。 （二）黄金分割法 一般软件画线工具中都有黄金分割画线工具，使用很简单，这里我不再多说。 利用黄金分割画线的关键是找基准点，常用的是最高点和最低点。 （三）股价高点低点连线 （四）跳空缺口处水平线 （五）前期支撑位连线及压力位连线
A线是高点之间连线与地点之间连线的平行线。 B线是点1的水平线（支撑线），股价跌破B线后反弹到点2处受阻回落B线转变成压力线，在点3处突破（30分钟K线回调确认）又变成支撑线。 C线是下跳空缺口处的水平线。 D线是前期高点之间的连线。 E线（黄线）是点6的水平线（支撑线），股价跌破E线后反弹到点8处受阻回落B线转变成压力线。 F线是4，5，6的连线（支撑线），股价跌破F线后反弹到点8处受阻回落F线转变成压力线。 （六）关键K线的黄金点处水平线
2)头肩顶形态 头肩顶形态是有非常大杀伤力的头部形态之一。在实际操盘过程中宁可信其有不可信其无，股票卖了还能再买，套牢就只能做旁观者。研判头肩顶形态要和成交量结合起来。一般情况下，左肩量最大，头部量次之，右肩量最小。
几种常用的参与式方法
8.几种传统/重要的参与式方法组合 特别适用于（社区宣传与社会调查）8．1 半开放式(半结构式)访谈 8.1.1 我们见到的采访是结构式的 -先拟定好要问的题目；问一句,答一句 -优点：好统计；缺点：不深入,对对方的内心无触动,无了解我们见到的脱口秀是非结构式的 -基本有一个方向,甚至没有 -想到哪里说到哪里,比较有趣,但信息随意性太强 8.1.2半结构式是什么呢? （一）半结构式访谈的特点 1.议题有，但不是一成不变的 -访谈者事先有一个确定的议题 -该议题会伴随着讨论和分析的过程而不断展开 -新的问题和见解会不断涌现出来。 2.被访谈者是积极参与的 -访谈者对访谈的结构和内容具有一定的控制 -鼓励受访者主动参与，提出自己感兴趣的问题。 3.信息是全面的 -关注所要问的问题 -关注访谈时的情境 是谁做的访谈?受访人是谁?访谈者与受访人之间是什么关系?访谈是怎样做的?什么时候做的?在什么地方做的? 4.技巧也是最难的 （二）访谈的核心要素
为访谈作准备/注意访谈情境/仔细聆听/详细询问/判断受访者的反应/作访谈记录/自我反思 (1)为访谈作准备 -明确目标（我们访谈最需要了解的内容是什么?） -寻找最佳途径（制订和完善访谈计划和访谈提纲） -分工 -（培训者的异质性组成问题/角色分配: 角色和职责主要的访谈者和记录员） -组织访谈对象(哪些人?/性别敏感吗?/各个阶层都有吗?/需要分开吗? (2)注意访谈情境:访谈的情境对访谈的实施和效果有非常重要的影响-进入讨论的过程融洽吗? -访谈的地点是否让人安心? -访谈的时间是否影响了人家的工作生活? -访谈的双方关系融洽吗? -访谈时的身体语言是友好开放的吗? -访谈时的座位安排是平等\开放\安全的吗? (3)仔细聆听-有效聆听的技巧A -找出有趣的领域(随时都要注意不要跑题) -重内容而不是表达(人家有自己说话的方式) -控制情绪(不要争辩,不下结论) -善于变通(本身就不是指定结构的要善于发现新东西) (3)仔细聆听-有效聆听的技巧B -努力倾听（表情和身体语言可是要一致） -避免分心 -训练心智(要能听到丰富的信息) -开放胸襟（不同的意见应该尊重也许会给你很多启发） -积极地听:言外之意,证据,相关信息
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签 蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia(复能基因)为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag?、Sumo等;也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。 以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。 TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： 标签的量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能; His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性; His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究; His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和; 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK)，同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。 FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
人力资源需求预测的常用方法
人力资源需求预测的常用方法 1.管理人员判断法 管理人员判断法，即企业各级管理人员根据自己的经验和直接，自下而上确定未来所需人员。这是一种粗浅的人力需求预测方法，主要适用于短期预测。 2.经验预测法 经验预测法也称比率分析，即根据以往的经验对人力资源需求进行预测。 由于不同人的经验会有差别，不同新员工的能力也有差别，特别是管理人员、销售人员，在能力、业绩上的差别更大。所以，若采用这种方法预测人员需求，要注意经验的积累和预测的准确度。 3.德尔菲法 德尔菲法（Delphi Method）是使专家们对影响组织某一领域发展（如组织将来对劳动力的需求）达成一致意见的结构化方法。该方法的目标是通过综合专家们各自的意见来预测某一领域的发展趋势。具体来说，由人力资源部作为中间人，将第一轮预测中专家们各自单独提出的意见集中起来并加以归纳后反馈给他们，然后重复这一循环，使专家们有机会修改他们的预测并说明修改的原因。一般情况下重复3~5次之后，专家们的意见即趋于一致。 这里所说的专家，可以是来自一线的管理人员，也可以是高层经理；可以是企业内部的，也可以是外请的。专家的选择基于他们对影响企业的内部因素的了解程度。 4.趋势分析法 这种定量分析方法的基本思路是：确定组织中哪一种因素与劳动力数量和结构的关系最密切，然后找出这一因素随聘用人数而变化的趋势，由此推断出未来人力资源的需求。 选择与劳动力数量有关的组织因素是需求预测的关键一步。这个
因素至少应满足两个条件： 第一，组织因素应与组织的基本特性直接相关 第二，所选因素的变化必须与所需人员数量变化成比例。 有了与聘用人数相关的组织因素和劳动生产率，我们就能够估计出劳动力的需求数量了。 在运用趋势分析法做预测时，可以完全根据经验估计，也可以利用计算机进行回归分析。 所谓回归分析法，就是利用历史数据找出某一个或几个组织因素与人力资源需求量的关系，并将这一关系用一个数学模型表示出来，借助这个数学模型，就可推测未来人力资源的需求。但此过程比较复杂，需要借助计算机来进行。
常用划线工具种类及使用方法
常用划线工具种类及使用方法 : 一、划线工具按用途分类形铁、三角铁、弯板（直角板）以V1. 基准工具，包括划线平板、方箱、及各种分度头等。 量具，包括钢板尺、量高尺、游标卡尺、万能角度尺、直角尺以及测量2. 长尺寸的钢卷尺等。绘划工具，包括划针、划线盘、高度游标尺、划规、划卡、平尺、曲线 3. 板以及手锤、样冲等。 形夹头和夹钳以及找中心划圆时打入辅助工具，包括垫铁、千斤顶、 C 4. 条、铅条等。工件孔中的木 二、划线工具使用方法平台。一般由铸铁制成。工作表面经过精刨或刮削，也可采用精磨加工而1.成。较大的划线平板由多块组成，适用于大型工件划线。它的工作表面应保具有较好的平面度，是划线或检测的基准。持水平并 方箱。一般由铸铁制成，各表面均经刨削及精刮加工，六面成直角，工件2. 形槽中，能迅速地划出三个方向的垂线。夹到方箱的V
平台方箱． 划规。划规由工具钢或不锈钢制成，两脚尖端淬硬，或在两脚尖端焊上一3.段硬质合金，使之耐磨。可以量取的尺寸定角度、划分线段、划圆、划圆弧线、测量两点间距离等。弹簧钢丝或高速钢制成，尖端淬硬，或在尖端焊接上6 mm4.划针。一般由4～硬质合金。划针是用来在被划线的工件表面沿着钢板尺、直尺、角尺或样板进行划线的工具，有直划针和弯头划针之分 5.样冲。用于在已划好的线上冲眼，以保证划线标记、尺寸界限及确定中心。 样冲一般由工具钢制成，尖梢部位淬硬，也可以由较小直径的报废铰刀、多刃铣刀改制而成。
大尺寸划规 样冲划针 可改变钢直尺的上下位置，由钢直尺和尺架组成，拧动调整螺钉，量高尺。6. 因而可方便地找到划线所需要的尺寸。普通划线盘。划线盘是在工件上划线和校正工件位置常用的工具。普通划7. 线盘的划针一端（尖端）一般都焊上硬质合金作划线用，另一端制成
参与式教学法的授课方法
参与式教学法的授课方法 一、讲述法 1、定义 讲述式教学法就是以老师讲授给学生的教学方法。作为一个古老而传统的教学方法，讲授式教学法一直在课堂中普遍采用。新课程实施以来，对讲授法的口诛笔伐时有所闻。究其根源，无非是作为传统教学方法的讲授法早已被人们贴上了“灌输”的标签。在当前新课程积极提倡自主、合作、探究这三种学习方式的同时，讲授法已被许多人所唾弃。 2、优点 有利于大幅度提高课堂教学的效果和效率 讲授法有两个特殊的优点，即通俗化和直接性。教师的讲授能使深奥、抽象的课本知识变成具体形象、浅显通俗的东西，从而排除学生对知识的神秘感和畏难情绪，使学习真正成为可能和轻松的事情；讲授法采取定论的形式直接向学生传递知识，避免了认识过程中的许多不必要的曲折和困难，这比学生自己去摸索知识可少走不少弯路。所以，讲授法在传授知识方面具有无法取代的简捷和高效两大优点，这也就是讲授法长盛不衰的根本原因。 有利于帮助学生全面、深刻、准确地掌握教材 教材作为学生学习的学科知识体系的一个蓝本，不仅汇集着系统的学科知识，而且还蕴藏着许多其它有价值的内容，如学科的思想观点、思维方法以及情感因素。但是，由于教材的编写要受到书面形式等因素的限制，对学生来说，不仅知识本身不好读懂，其所潜藏的内涵更是不易发现。而教师由于闻道在先，术业有专攻，能够比较全面、准确地领会教材编写意图，吃透教材、挖掘教材的深邃内涵。所以，正是借助教师的系统讲授和透辟分析，学生才得以比较深刻准确地掌握教材，从而不仅学到学科的系统知识，而且还领会和掌握了蕴含在学科知识体系中的学科思想观点、思维方法和情感因素。这样，学生的学科能力也就得到了全面提高。 有利于充分发挥教师自身的主导作用 任何真正有效的讲授都必定是溶进了教师自身的学识、修养、情感、流露出教师内心的真、善、美。所以，讲授对教师来说，不仅是知识方法的输出，也是内心世界的展现。它潜移默化地影响、感染、熏陶着学生的心灵。可以说，
整个基因克隆实验流程(完整)
一、组织总RNA的提取 相关试剂：T rizol；氯仿；苯酚；异丙醇；75%乙醇；RNase-free水 相关仪器：制冰机；液氮&研钵/生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μl、100μl/50μl）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。 相关耗材：解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μl/300μl），一次性手套，实验手套。 实验步骤 1.取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液 氮迅速研磨，然后加入1ml 预冷TRIzol试剂，充分研磨至无颗粒物存在。 2.转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解； 3.按1ml Trizol加入200μl氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min； 4.4℃，,12000g 离心15min； 此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中； 5.小心吸取上清液，千万不要吸取中间界面，否则有DNA污染；转移至一个新的离心管， 加入等体积的异丙醇，轻轻混匀； 6.室温放置10min；4℃，,12000g 离心10min； 7.弃上清，加入1ml 75%乙醇洗涤；涡旋，悬浮沉淀；4℃，,12000g 离心5min； 8.弃上清；可以再次用75%乙醇洗涤沉淀； 9.弃上清；用移液器轻轻吸取管壁或管底的残余乙醇，注意不要吸取沉淀；室温放置5min 晾干沉淀；（RNA样品不要过于干燥，否则极难溶解） 10.沉淀中加入30μl RNase-free水，轻弹管壁，使RNA溶解。 RNA质量检测 相关试剂：溴酚蓝， TEB/TAE电泳缓冲液，溴乙锭（EB） 相关仪器：（超微量分光光度计，移液器（2.5μl 或2μl 规格，10μl规格），电子天平，电泳仪，电泳槽，凝胶成像仪，微波炉，制冰机） 相关耗材：（无菌无绒纸，吸头，离心管架，PCR管，PCR管架，锥形瓶，烧杯，一次性手套，实验手套，冰盒） （1）RNA纯度的检测：测定其OD260和OD280的值，根据其OD260/ OD280的比值，当其比值在1.9~2.1之间，说明提取的总RNA纯度比较高，没有蛋白质和基因组的污染。 （2）RNA完整性的检测：取2μlRNA，与2μl溴酚蓝混匀，用1%的琼脂糖进行凝胶电泳，20min后，在凝胶成像系统中观察效果。当28S与18S条带清晰，且亮度比大约是2:1时，5S条带若隐若现，而且没有其它条带时，说明完整性不错，可以用于下游逆转录实验。
K线图中的各种画线类型的方法及说明
K线图中的各种画线类型的方法及说明 一、【画线类型说明】1、直线类直线类画线有直线、射线、线段、箭头线段、水平线、垂直线、定点画线。直线、射线、线段、箭头线段：选择画线后，在窗口中确定两个点后完成画线。水平线、垂直线：在窗口中选择一个点确定画线位置。定点画线：点击左键设置定位点，点击右键结束点位点。2、趋势类平行线(原回归线)、通道线(原回归通道线)、线形回归线、线性回归带、标准差通道、上升通道、下降通道。其中，线形回归线、线形回归带、标准差通道、上升通道、下降通道的画线范围仅为K线。平行线、通道线：在窗口中先设置两个定位点，确定第一条线的位置，然后拖动鼠标，确定第二条线的位置。线形回归线、线性回归带、标准差通道、上升通道、下降通道：先在窗口中确定起点位置(从哪一跟K线开始)，然后拖动鼠标确定终点位置(结束的K线)，会根据选中的K线区间自动计算并画线。3、形态类八浪线、五浪线、三浪线、头肩线、M头W底4、水平分割类水平黄金分割线、黄金分割A、黄金分割B、调整百分比线、幅度尺、波浪尺、量度目标、解消点、水平平行线5、垂直分割类等周期线、斐波那契周期、自由费氏线、斐波那契时间、自由周期、时间尺、对称线、对称角度线、卢卡斯周期线、垂直黄金分割线6、时空类江恩角度线、江恩箱、速阻线、
上下甘氏线7、多通道类安德鲁音叉线、多通道线、栅形线8、多边形类矩形、时空矩形、箱体线、三角形、平行四边形9、圆弧类圆、椭圆、费氏圆、圆弧、多圆弧、抛物线、三点曲线、正弦线、黄金分割同心圆、螺旋线10、标注类文字注释、标注、上涨箭头、下跌箭头、价格签条五、画线属性说明画线属性分为两类，一类为颜色、粗细、线型、延伸(部分画线)、箭头、显示背景色；一类为显示、隐藏、锁定；颜色：画线的颜色，可以通过工具栏上的颜色按钮修改颜色，或者双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。全局修改在工具栏的设置中进行修改。粗细：画线的粗细，分为粗中细三个级别。可以双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。全局修改在工具栏的设置中进行修改。线型：分为实线、点划线、虚线。可以双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。全局修改在工具栏的设置中进行修改。延伸：直线、趋势线类画线附加属性，可以设置画线是否需要延长。设置方式为双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。箭头：直线类画线附加属性，可以设置画线的起点、终点处是否有箭头，作用为指向方向。设置方式为双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。显示背景色：对多边形、圆形类画线有效，效果为选中的区域中可以显示蓝色背景。设置方式为双击/右键单机画线，调用单根画线风格设置进行修改。显示：原始状
拟南芥基因克隆的策略与途径
拟南芥基因克隆的策略与途径 拟南芥（Arabidopsis thaliana）是一种模式植物，具有基因组小（125 Mbp）、生长周期短等特点，而且基因组测序 已经完成（The Arabidopsis Genomic Initiative, 2000）。同时，拟南芥属十字花科（Cruciferae），具有高等植物 的一般特点，拟南芥研究中所取得成果很容易用于其它高等植物包括农作物的研究，产生重大的经济效益，特别是十字 花科中还有许多重要的经济作物，与人类的生产生活密切相关，因此目前拟南芥的研究越来越多地受到国际植物学及各 国政府的重视。 基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功 能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的 几种常用方法介绍如下。 1、图位克隆 Map-based cloning, also known as positional cloning, first proposed by Alan Coulson of the University of Cambridge in 1986, Gene isolated by this method is based on functional genes in the genome has a relatively stable loci, in the use of genetic linkage analysis or chromosomal abnormalities of separate groups will queue into the chromosome of a specific location, By constructing high-density molecular linkage map, to find molecular markers tightly linked with the aimed gene, continued to narrow the candidate region and then clone the gene and to clarify its function and biochemical mechanisms. 图位克隆（map-based clonig）又称定位克隆（positoinal cloning），1986年首先由剑桥大学的Alan Coulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因，并阐明其功能和生化机制。 用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA序列，也无需预先知道其表达产物的有关信息。它是通过分析突变位点与已知分子标记的连锁关系来确定突变表型的遗传基础。近几年来随着拟南芥基因组测序工作的完成，各种分子标记的日趋丰富和各种数据库的完善，在拟南芥中克隆一个基因所需要的努力已经大大减少了（图1）。
定量分析方法 重点整理
1、公共管理：是一门研究公共组织尤其是政府组织的管理活动及其规律的学科。公共管理研究的内容：①公共组织的结构、功能、环境和运行机制；②行政管理体制改革、中央与地方的关系；③市场经济条件下政府的职能与作用、政府与市场、政府与企业、政府与社会的关系；④公共人力资源的开发与利用；⑤公共管理中的规划、计划与决策、监督与控制，公共项目评估，行政立法、司法和执法；⑥公共信息管理和咨询服务；⑦财政管理、教育管理、科技管理和文化管理。 2、定量分析方法的主要内容 系统模型与系统分析、线性回归预测分析、社会调查程序与方法、统计分析方法、线性回归预测分析、马尔可夫预测方法、投入产出分析方法、最优化方法（线性规划、运输问题、动态规划、资源分配问题）、评价分析方法、层次分析法、对策论、风险型决策与多目标决策、管理系统模拟、排队论、系统动力学方法、网络计划方法 3、为什么在系统分析中广泛使用系统模型而不是真实系统进行分析？人类认识和改造客观世界的研究方法，一般有实验法和模型法。实验法是通过对客观事物本身直接进行科学实验来进行研究的，因此局限性比较大。公共管理问题大多是难以通过实验法直接进行研究，广泛使用系统模型还基于以下五个方面的考虑：①系统开发的需要只能通过建造模型来对系统或体制的性能进行预测；②经济上的考虑对复杂的社会经济系统直接进行实验，成本十分昂贵；③安全性、稳定性上的考虑对有些问题通过直接实验进行分析，往往缺乏安全性和稳定性，甚至根本不允许；④时间上的考虑使用系统模型很快就可得到分析结果；⑤系统模型容易操作，分析结果易于理解 4、系统分析的要点和步骤 要点(1)任务的对象是什么?即要干什么(what)；(2)这个任务何以需要?即为什么这样干(why)；(3)它在什么时候和什么样的情况下使用?即何时干(when)；(4)使用的场所在哪里?即在何处干(where)；(5)是以谁为对象的系统?即谁来干(who)；(6)怎样才能解决问题?即如何干(how)。步骤(1)明确问题与确定目标。当一个有待研究分析的问题确定以后，首先要对问题进行系统的合乎逻辑的阐述，其目的在于确定目标，说明问题的重点与范围，以便进行分析研究。(2)搜集资料，探索可行方案。在问题明确以后，就要拟定解决问题的大纲和决定分析方法，然后依据已搜集的有关资料找出其中的相互关系，寻求解决问题的各种可行方案。(3)建立模型。为便于对各种可行方案进行分析，应建立各种模型，借助模型预测每一方案可能产生的结果，并根据其结果定性或定量分析各方案的优劣与价值。(4)综合评价。利用模型和其他资料所获得的结果，对各种方案进行定性与定量相结合的综合分析，显示出每一种方案的利弊得失和效益成本，同时考虑到各种有关因素，如政治、经济、军事、科技、环境等，以获得对所有可行方案的综合评价和结论。（5）检验与核实。 5、简述霍尔三维结构与切克兰德“调查学习”模式之间的区别。 1）霍尔三维结构将系统的整个管理过程分为前后紧密相连的六个阶段和七个步骤，并同时考虑到为完成这些阶段和步骤的工作所需的各种专业管理知识。三维结构由时间维、逻辑维、知识维组成。霍尔三维结构适用于良结构系统，即偏重工程、机理明显的物理型的硬系统。2）切克兰德“调查学习”模式的核心不是寻求“最优化”，而是“调查、比较”或者说是“学习”，从模型和现状比较中，学习改善现存系统的途径，其目的是求得可行的满意解。适用于不良结构系统，偏重社会、机理尚不清楚的生物型的软系统。3）处理对象不同：前者为技术系统、人造系统，后者为有人参与的系统；4）处理的问题不同：前者为明确、良结构，后者为不明确，不良结构；5）处理的方法不同：前者为定量模型，定量方法，后者采用概念模型，定性方法；6）价值观不同：前者为一元的，要求优化，有明确的好结果（系统）出现，后者为多元的，满意解，系统有好的变化或者从中学到了某些东西。 6、定性分析的方法：目标--手段分析法、因果分析法、KJ 分析法 7、社会调查的含义：是人们有意识、有目的地通过对社会现象的考察、了解和分析，来认识社会生活的本质机器发展规律的实践活动和认识活动。 基本原则①客观性原则，核心是实事求是，这是社会调查的立足点和出发点；②实证性原则，要求社会调查的结论以及与此相关的各种观点，都必须有真实、可靠的疏忽和资料做支持；③系统性原则，要求对社会现象要进行系统、综合的分析和研究。 8、预测分析的一般步骤①明确预测目标；②收集、整理资料和数据；③建立预测模型；④模型参数估计；⑤模型
常见的预测方法
常见的预测方法 一、外推法 这是利用过去的资料来预测未来状态的方法。它是基于这样的认识：承认事物发展的延续性，同时考虑到事物发展中随机因素的影响和干扰。其最大优点是简单易行，只要有有关过去情况的可靠资料就可对未来做出预测。其缺点是撇开了从因果关系上去分析过去与未来之间的联系，因而长期预测的可靠性不高。外推法在短期和近期预测中用的较多。其中常用的一种方法是时间序列法。 时间序列法是按时间将过去统计得到的数据排列起来，看它的发展趋势。时间序列最重要的特征是它的数据具有不规则性。为了尽可能减少偶然因素的影响，一般采用移动算术平均法和指数滑动平均法。 1．移动算术平均法。移动算术平均法是假设未来的状况与较近时期有关，而与更早的时期关系不大。一般情况下，如果考虑到过去几个月的数据，则取前几个月的平均值。 2．指数滑动平均法。指数滑动平均法只利用过去较近的一部分时间序列。当时间序列已表现出某种规律性趋势时，预测就必须考虑这些趋势的意义，因此要采用指数滑动平均法。指数滑动平均法是对整个时间序列进行加权平均，其中的指数为0～1之间的小数，一般取0.7～0.8左右。 二、因果法 因果法是研究变量之间因果关系的一种定量方法。变量之间的因果关系通常有两类：一类是确定性关系，也称函数关系；另一类是不确定性关系，也称相关关系。因果法就是要找到变量之间的因果关系，据此预测未来。 1．回归分析法。没有因果关系的预测只是形式上的一种预测，而找出因果关系的预测才是本质的预测。回归分析法就是从事物变化的因果关系出发来进行的一种预测方法，不仅剔除了不相关的因素，并且对相关的紧密程度加以综合考虑，因而其预测的可靠性较高。 回归分析的做法是：首先进行定性分析，确定有哪些可能的相关因素，然后收集这些因素的统计资料，应用最小二乘法求出各因素（各变量）之间的相关系数和回归方程。根据这个方程就可预测未来。在技术预测中，多元回归分析很有价值。
常用的几种画线方法 教你如何计算下跌中的支撑点 成功总结操盘.
常用的几种画线方法教你如何计算下跌中的支撑点成功总结操盘程序（一）结合均线的金叉点和死叉点画线以金叉点或者死叉点为基准画水平线。均线死叉点如果伴随较大的成交量，那么均线死叉点将成为重要压力位。今后股价第一次上升到此时会有阻力。此时应减仓观望。反之，均线金叉点如果伴随较大的成交量，那么均线金叉点将成为重要支撑位。今后股价第一次下跌到此时获得支撑的可能性较大，此时不宜再抛股票。股价向上突破均线死叉点，回落调整时，此均线死叉点位又转变成支撑位。可在死叉点和金叉点处画水平直线，以观察股价走势（二）黄金分割法一般软件画线工具中都有黄金分割画线工具，使用很简单，这里我不再多说。利用黄金分割画线的关键是找基准点，常用的是最高点和最低点。（三）股价高点低点连线（四）跳空缺口处水平线（五）前期支撑位连线及压力位连线 A 线是高点之间连线与地点之间连线的平行线。 B 线是点 1 的水平线（支撑线）股价跌破 B 线后反弹到点 2 处受阻回落 B 线转变成压力线，，在点 3 处突破（30 分钟 K 线回调确认）又变成支撑线。 C 线是下跳空缺口处的水平线。 D 线是前期高点之间的连线。 E 线（黄线）是点 6 的水平线（支撑线），股价跌破 E 线后反弹到点 8 处受阻回落 B 线转变成压力线。 F 线是 4，5，6 的连线（支撑线），股价跌破 F 线后反弹到点 8 处受阻回落 F 线转变成压力线。（六）关键K 线的黄金点处水平线 (2头肩顶形态头肩顶形态是有非常大杀伤力的头部形态之一。在实际操盘过程中宁可信其有不可信其无，股票卖了还能再买，套牢就只能做旁观者。研判头肩顶形态要和成交量结合起来。一般情况下，左肩量最大，头部量次之，右肩量最小。教你如何计算下跌中的支撑点最近大盘下跌，很多好友询问自己股票的支撑在哪里？其实很简单，依照黄金分割的原理，自己就可计算出支撑的位置。如何计算呢？下面就教给你计算方法如下，希望你能知道自己股票支撑的位置在哪里！新近的最高点—起涨点=A A*（乘以）0.382=B 新近的高点—B=第一个支撑点 A*0.5=C 新近的高点—C=第二个支撑点 A*0.618=D 新近的高点—D=第三个支撑点举例说明：以大盘这次下跌为例，最高点是 3186，起涨点是2319 3186—2319=867 867*0.382=331 3186—331=2855（第一个支撑点） 867*0.5=443.5 3186—443.5=2753（第二个支撑点） 867*0.618=535.8 3186—
列举常见的几种说明方法
列举常见的几种说明方法 举例子、分类别、打比方、列数字、作比较、下定义、作诠释、画图表、引资料（引用） 说明方法准判断 指出下列文字表述用了什么说明方法？ 1、永定河上的卢沟桥修建于公元1189年间。桥长265米，由11个半圆形的石拱组成，每个石拱长度不一，自16米到21.6米。（） [出现具体数据] 2、“生物入侵者”在给人类造成难以估量的经济损失的同时，也对被入侵地的其他物种以及物种的多样性构成极大威胁。二战期间，棕树蛇随一艘军用货船落户关岛，这种栖息在树上的爬行动物专门捕食鸟类，偷袭鸟巢，偷食鸟蛋。（） 3、“克隆绵羊”的问世也引起了许多人对“克隆人”的兴趣。例如，有人在考虑是否可用自己的细胞克隆成一个胚胎，在其形成前就冻结起来。（） [出现“例如”、“比如”、“以……为例”、“如”等字眼；或出现具体事迹的时间、地点、事物的名称，如“棕树蛇”。] 4、按屏的建造材料及其装饰的华丽程度，分为：金屏、银屏、锦屏、画屏、石屏、竹屏、木屏等。（） 5、人类有三种眼泪。第一种是在眨眼间产生的，即所谓“基础泪”；第二种眼泪，也具有纯生物作用，它是因为条件反射活动流出的泪水；第三种眼泪，即由于激动而流出的眼泪，也是只有人类才有的眼泪。（） [明显地出现“按……分为”“第一、第二、第三”“首先、其次、再次、最后”等字眼] 6、都是生物靠自身的一分为二或自身的一小部分来繁衍后代，这就是无性繁殖。（）[出现归纳概括性词语，如“这就是”“这就叫做”；或定义名词前面出现“所谓”的字眼。] 7、物候观测使用的是活生生的生物，它比气象仪器复杂得多，灵敏得多。( ) [出现“比””比起”“比较”“相对而言”等字眼。] 8、桥的设计完全合乎科学原理，施工技术更是巧妙绝伦。唐朝的张嘉贞说它“制造奇特，人不知其所以为”。（） [相当于引用别人的话或有关史例资料，出现“”标志。] 9、“四盲”像个巨大的吸水鬼，终于把塔里木河抽干了，使塔里木河的长度由六十年代的1321公里急剧萎缩到现在的1000公里。（） [打比方即适当的比喻，出现比喻词“好象”“像””“比如”“如同”等，在比喻的基础上作较详细具体的说明。] 说明方法作用细斟酌 （一）、最常见的几种说明方法的作用： 1、举例子：使说明内容更加具体、真切、通俗易懂。 2、列数字：使说明的内容更加准确、清楚、具体。 3、打比方：使说明内容更生动和形象。 4、作比较：增强说明事物的效果。