western 配方和操作步骤
Western blotting试剂的配制
①100mMPMSF：0.0174gPMSF 溶于1mL异丙醇中，-20°C保存。注：PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸和、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解缓冲液中。
② 1.5M Tris-base PH8.8：36.33gTris-base 溶于60mL双蒸水中，调PH为
8.8，再加入双蒸水定容至200mL。1.0M Tris-base PH6.8：24.22gTris-base 溶于60mL双蒸水中，调PH为6.8，再加入双蒸水定容至200mL。
③10%SDS：SDS 10g溶于60mL双蒸水中，68°C助溶，由于SDS溶解时会产生很多泡沫，定容时应先定容至95mL，等泡沫散去，再加入双蒸水定容至100mL。
④30%Acry/bis：29g丙烯酰胺，1g甲叉丙烯酰胺，双蒸水60mL，37°C助溶，然后定容至100mL，-4°C保存。注：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺时应戴手套和口罩，配制该溶液时应在通风橱中进行，操作过程中应穿好实验服，注意防护。
⑤5×SDS凝胶上样缓冲液：1.25mL1MTris-base PH6.8，2.5mL丙三醇，0.5g SDS，0.025g溴酚蓝，用双蒸水定容至5mL，1mL分装后，于室温保存，使用前每mL中加入50μLβ-巯基乙醇，加入β-巯基乙醇的上样缓冲液可在室温中保存一个月，使用时稀释为1×工作液。
⑥TBST缓冲液：2.42gTris-base，8.8gNacl，500μLTween-20，用双蒸水定容至1000mL，调PH为7.4。
⑦10%APS：0.1gAPS溶于1mL双蒸水中，4°C保存一星期有效，最好现配现用。
⑧10%浓缩胶（7.5mL/块胶）：3mL双蒸水，1.875mL 1.5MTris-base PH8.8，75μL10%SDS，2.475mL30%Acry/bis（毒），75μL10%APS，3μLTEMED（毒）,依次加入上述试剂后充分混匀。5%浓缩胶（5mL/块胶）：2mL双蒸水，0.5mL 1.0MTris-base PH6.8，40μL10%SDS，0.5mL30%Acry/bis（毒），30μL10%APS，4μLTEMED（毒）依次加入上述试剂后充分混匀，现配现用，为有毒试剂注意防护。
⑨电泳缓冲液：1.515gTris-base，9.4g甘氨酸，0.5gSDS，用双蒸水定容至500mL，由于SDS溶解过程中会产生泡沫，因此定容之后再加，现配现用。转移缓冲液：3.03gTris-base，14.4g甘氨酸，200mL甲醇，0.3gSDS，制胶完成后配制，用双蒸水定容至800mL，然后放入4°C冰箱预冷，使用时再加入200mL 甲醇。
⑩5%牛奶封闭液：1.5g伊利脱脂奶粉，30mLTBST，现配现用。
Western blot操作过程
①制胶：将制胶板固定好，按上述方法配好分离胶，充分混匀后倒入制胶板中，确保胶不漏，然后用双蒸水封闭，室温静置30min，凝固后倒出双蒸水，用滤纸吸干，配置好浓缩胶，倒入制胶板中，然后插入梳子，室温静置30min。
②电泳：组装好电泳仪，红对红黑对黑，从密封的中间区域倒入电泳缓冲液，至漫过下方的金属丝，然后拔出梳子，加入蛋白样品及蛋白Maker。插上电源，浓缩胶区域电压设为80V（约20min），分离胶区域电压设为120V（约100min）。
③转膜：将预冷后的转膜缓冲液中加入200mL甲醇混匀后倒置在托盘中，裁剪4张稍微小于转膜海绵的滤纸，于转膜液中浸泡15min，同时取出胶，切割目的胶片段，置于转膜液中，裁剪与之大小相同的PVDF膜于无水甲醇浸泡几秒。将转膜夹板置于托盘中，白色板在下，依次放置：白色夹板-海绵-4层滤纸-PVDF 膜-胶-4层滤纸-海绵-黑色夹板。将夹板固定好后放入转膜槽中黑对黑白对红，接通电源，250mA恒流转膜2h。注：转膜过程在冰里操作。
④封闭：将PVDF膜取出，在Maker端剪个小角，与胶接触面标记为上，然后置于20mL 5%牛奶封闭液中，室温振荡摇匀1h。
⑤一抗孵育：按1:1000比例配制一抗，4°C振荡摇匀过夜。
⑥洗膜：TBST洗膜三遍，每遍5min。
⑦二抗孵育：按1:3000比例配制二抗，室温振荡摇匀1h。
⑧洗膜：TBST洗膜三遍，每遍5min。
⑨ECL显色：取A液与B液各200μL即为ECL显色液（400μL），混匀备用。然后在显影仪中显影，最后用Image J软件分析。
处方审核调配核对操作规程范本
精品文档 通过制定实施处方审核、调配、核对操作规程，有效控制处方目的：审核、调配、核对环节，杜绝差错发生。适用于处方审核、调配、核对操作的全过程。适用范围：处方审核、调配、核对相关人员。任者：责 管理程序：处方审核1.人员要求：处方审核人员要具有药师或药师以上专业技术职称人1.1 员担任。收取处方：营业员在接待顾客时，遇到需要审核的处方，要及时1.2 将需要审核的处方交予处方审核人员。审核内容：处方审核人员接到处方后对处方进行审核，首先逐项1.3确认处方的合法性。完整，检查处方前记、正文、后记书写是否清晰、其次要审核处方用药与临床诊断的相符性；剂量、用法的正确性；选是否有潜在临床是否有重复给药现象；用剂型与给药途径的合理性；意义的药物相互作用和配伍禁忌；以及其它用药不适宜情况。处方审核人员对项目不齐或字迹辨认不清的处方拒收，处方拒收：1.4用法不准确或有配对用量、并告知顾客找开方医生补齐或书写清楚；对处方并告知顾客找开方医生更正或重新签名；伍禁忌的处方拒收，所列药品本店没有的处方拒收，并告知顾客找开方医生
更换其他品。. 精品文档 2.处方调配 2.1人员要求：调配人员应当具有高中以上文化程度，经过专业岗位培训，取得岗位合格证书后方可上岗。 2.2处方调配：处方审核合格的，处方审核人员在处方上签名，并将处方交调配人员进行调配；调配人员依照审核人员签名的处方内容逐项调配，调配过程中如有疑问，调配人员立即向处方审核人员咨询。调配处方时应认真、细致、准确，同时要做到“四查十对”即查处方，对科别、姓名、年龄；查药品，对药名、剂型、规格、数量；查配伍禁忌，对药品性状、用法用量；查用药合理性，对诊断证明。 3.处方核对 3.1人员要求：处方审核人员要具有药师或药师以上专业技术职称人员担任。 3.2调配人员调配完成后，在处方上签全名，将处方与药品交处方审核人员复核。处方审核人员按处方对照药品逐一进行复核。如有错发或数量不符，处方审核人员立即告知调配人员予以更正。复核无误的，在处方上签字并交还调配人员发药。 3.2发药：调配人员发药的同时，向顾客交待清楚药品的用法、用量、禁忌、注意事项等。并将处方留存，按月进行装订并记录。 .
westernblot详细图解
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。 经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以
检测电泳分离的特异性目的基因表 达的蛋白成分。该技术也广泛应用 于检测蛋白水平的表达。 实验材料蛋白质样品 试剂、试剂盒丙烯酰胺SDS Tris-HCl β-巯基乙醇 ddH2O 甘氨酸Tris 甲醇PBS NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 ddH2O 考马斯亮兰乙酸脱脂奶粉硫酸镍胺H2O2 DAB试剂盒 仪器、耗材 电泳仪电泳槽离心机离心管硝酸纤维素 膜匀浆器剪刀移液枪刮棒 实验步骤一、试剂准备 1. SDS-PAGE试剂：见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 2. 匀浆缓冲液：1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml；10%SDS 6.0 ml；β-巯基乙醇0.2 ml；ddH2O 2.8 ml。 3. 转膜缓冲液：甘氨酸2.9 g；Tris 5.8 g；SDS 0.37 g；甲醇200 ml；加ddH2O定容至1000 ml。
静脉用药调配使用操作规程完整
静脉用药调配使用操作规程 一、静脉用药调配中心（室）工作流程 临床医师开具静脉输液治疗处方或用药医嘱→用药医嘱信息传 递→药师审核→打印标签→贴签摆药→核对→混合调配→输液成品 核对→输液成品包装→分病区放置于密闭容器中、加锁或封条→由工人送至病区→病区药疗护士开锁(或开封)核对签收→给患者用药前 护士应当再次与病历用药医嘱核对→给患者静脉输注用药. 二、临床医师开具处方或用药医嘱 医师依据对患者得诊断或治疗需要，遵循安全、有效、经济得合理用药原则，开具处方或用药医嘱，其信息应当完整、清晰。 病区按规定时间将患者次日需要静脉输液得长期医嘱传送至静 脉用药调配中心（室）。临时静脉用药医嘱调配模式由各医疗机构按实际情况自行规定。 三、审核处方或用药医嘱操作规程 负责处方或用药医嘱审核得药师逐一审核患者静脉输液处方或 医嘱,确认其正确性、合理性与完整性。主要包括以下内容。 （一)形式审查：处方或用药医嘱内容应当符合《处方管理办法》、《病例书写基本规范》得有关规定，书写正确、完整、清晰,无遗漏信息. (二)分析鉴别临床诊断与所选用药品得相符性。 (三)确认遴选药品品种、规格、给药途径、用法、用量得正确性与适宜性，防止重复给药. （四)确认静脉药物配伍得适宜性，分析药物得相容性与稳定性。 (五)确认选用溶媒得适宜性. （六)确认静脉用药与包装材料得适宜性。 （七)确认药物皮试结果与药物严重或者特殊不良反应等重要信息。 （八）需与医师进一步核实得任何疑点或未确定得内容。 对处方或用药医嘱存在错误得,应当及时与处方医师沟通，请其调整并签名。因病情需要得超剂量等特殊用药，医师应当再次签名确认。对用药错误或者不能保证成品输液质量得处方或医嘱应当拒绝调配.
WB实验步骤
Western blotting实验步骤 1．蛋白质的样品制备： 取心肌组织50mg，待组织块自行溶解，用滤纸吸去其表面水分，将组织块放入玻璃匀浆器球状部位，用组织剪尽量将其剪碎，将剪碎的心肌组织放入玻璃匀浆器的杆状部，按1mlRIPA+10ulPMSF/100mg心肌组织的比例加入RIPA和PMSF（先加RIPA再加PMSF），将玻璃匀浆器插入冰中，匀浆约30分钟。 将心肌组织匀浆转移到离心管中，4℃12000g离心5分钟，收集上清（如有粘稠物进一步用超声处理），样品分装冻存于-20℃备用。 2 .测定蛋白浓度： 2.1 按50：1配置BCA工作液。 2.2 10ulC液（蛋白标准）+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。 2.3 分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中，在其他样品孔中加入10ul待测样品。 2.4 分别加PBS定容至20ul。 2.5 各孔中加入200ulBCA工作液，室温放置2小时。 2.6 用酶标仪测定蛋白浓度：测定A562，依标准曲线算出蛋白浓度。 3 SDS-PAGE电泳： 3.1 制胶: 按比例配制分离胶，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40min。同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，连续
平稳的注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，静制60min以上以保证完全聚合。 3.2 预电泳：将聚合好的凝胶安置于电泳槽中，小心拔去梳子，加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。（目的是清除凝胶内的杂质，疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通）。 3.3 样品准备：首先计算上样体积，然后按样品：上样buffer=4：1的比例加入上样bufer混匀，沸水煮10分钟，冰上5分钟。 3.4 加样：预电泳后依次加入标准品（Marker）和待分析样品。（加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。每个泳道加5ul。 3.5 电泳：加样完毕，选择80V恒压进行电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处（一般约20分钟），更换至100V恒压电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳（一般约为1小时20分钟）。 4．转膜： 4.1 切胶：将电泳完毕的胶完整的放在盛有电转液的玻璃皿中，将目的蛋白所在区域切下来，测量其长宽，并记录。 4.2 剪膜和滤纸：按胶的尺寸剪膜和滤纸（滤纸长宽较凝胶小0.5~1mm，PVDF 膜长宽较凝胶大0.5~1mm），滤纸浸入盛有电转液的玻璃皿中10秒钟，膜放入盛有10%甲醇的玻璃皿中10秒钟，然后将两者都放入盛有去离子水的玻璃皿中3分钟，进一步放入盛有电转液的玻璃皿中3分钟。 4.3 向电转槽中倒入部分电转液，将海绵浸入。按如下顺序制作“三明治”（注意避免两边滤纸相互接触，以免发生短路）。从正极到负极按如下顺序排列：
中药处方的调配流程
中药处方的调配流程 The document was finally revised on 2021
中药处方的调配流程 一按规定进行处方审核 1.首先查看患者姓名、性别、年龄、处方日期、医师签名／盖章等，项目不全则不予调配。 2.审阅处方药名、剂量、剂数、先煎、后下等书写是否规范，如有疑问立即与处方医师联系，更改之处需医师再次签名。 3.如有相反、相畏药物时不予调配，确属病情需要时经医师再次签名后方可调配。 4.当处方剂量超量时，特别是有毒剧药如制川乌、制草乌、制附子、麻黄、马钱子、细辛等超过用量，应与处方医师联系纠正或重签字后方可调配。 5.了解各种用药禁忌，如妊娠、哺乳、肝、肾功能不全、老年、体弱者等忌服的中药，必要时提示医生及患者。 二看划价 1.由于中药的别名较多，划价工作宜由中药专业人员完成。 2.经审方合格后才能划价。 3.计价方法是将每味药的剂量乘以单价得出每味药的价格，再将全方相加即得总价，以四舍五入的方法保留至分。 4.代煎药可加收煎药费。 三是调配
1.调配前再次审查相反、相畏、禁忌、毒性药剂量等，确认处方没有差错。 2.根据药物不同体积重量选用适当的戥子，一般用克戥，称取贵重或毒性药，克以下的要用毫克戥，保证剂量准确。称量前检查定盘星准。 3.一方多剂时用递减分戥法称量，每味药应逐剂回戥，特别是毒性药禁止凭主观估量，更不可随便抓配。 4.坚硬或大块的矿石、果实、种子、动物骨及胶类药，调配时应捣碎成小块或粗末入药。 5.不得将变质、发霉、虫蛀等药品调配入药。 6.为便于核对，按照处方药味顺序调配，顺序间隔摆放。 7.先煎、后下、包煎、烊化、另煎、冲服等特殊煎煮方法的药品必须单包并注明。 四是检查复核 1.复核药品与处方所开药味和剂数是否符合，有无多配、漏配、错配、掺混他药或异物等现象； 2.有无相反、相畏、妊娠禁忌和超剂量等； 3.有无变质、发霉、虫蛀、鼠咬、泛油、以生代制、未捣碎等； 4.是否将先煎、后下、包煎、烊化、另煎、冲服等特殊要求药品单包；. 5.抽查剂量准确程度，要求每剂重量差异不超过±5％，贵重药和毒性药不超过±1％。 五是发药
SGP中药饮片处方审核、调配、核对操作规程
文件名称中药饮片处方审核、调配、核对操作规程编号 起草部门质管部起草人审核人批准人 起草时间批准日期审核日期批准日期 修订部门修订日期 分发部门保管部门 变更原因根据2013年修订版GSP管理规范要求 根据《药品管理法》、《药品经营质量管理规范》及附录要求，并结合实际工作的需要，保证采购、验收、销售环节的药品质量，制定本规程。 目的：通过制定实施处方审核、调配、核对操作规程，有效控制处方审核、调配、核对环节，杜绝差错发生。 适用范围：适用于处方审核、调配、核对操作的全过程。责任者：处方审核、调配、核对相关人员。 管理程序： 1.处方审核 1.1人员要求：处方审核人员要具有药师或药师以上专业技术职称人员担任。 1.2收取处方：营业员在接待顾客时，遇到需要审核的处方，要及时将需要审核的处方交予处方审核人员。 1.3审核内容：处方审核人员接到处方后对处方进行审核，首先逐项检查处方前记、正文、后记书写是否清晰、完整，确认处方的合法性。其次要审核处方用药与临床诊断的
相符性；剂量、用法的正确性；选用剂型与给药途径的合理性；是否有重复给药现象；是否有潜在临床意义的药物相互作用和配伍禁忌；以及其它用药不适宜情况。 1.4处方拒收：处方审核人员对项目不齐或字迹辨认不清的处方拒收，并告知顾客找开方医生补齐或书写清楚；对用量、用法不准确或有配伍禁忌的处方拒收，并告知顾客找开方医生更正或重新签名；对处方所列药品本店没有的处方拒收，并告知顾客找开方医生更换其他药品。 2.处方调配 2.1人员要求：调配人员应当具有高中以上文化程度，经过专业岗位培训，取得岗位合格证书后方可上岗。 2.2处方调配：处方审核合格的，处方审核人员在处方上签名，并将处方交调配人员进行调配；调配人员依照审核人员签名的处方内容逐项调配，调配过程中如有疑问，调配人员立即向处方审核人员咨询。调配处方时应认真、细致、准确，同时要做到“四查十对”即查处方，对科别、姓名、年龄；查药品，对药名、剂型、规格、数量；查配伍禁忌，对药品性状、用法用量；查用药合理性，对诊断证明。 3.处方核对 3.1人员要求：处方审核人员要具有药师或药师以上专业技术职称人员担任。 3.2复核:调配人员调配完成后，在处方上签全名，
westernblot实验详细步骤(1)
Western Blot实验技术一、制胶 SDS-PAGE分离胶配方表 1、检查制胶器是否漏水，吸干玻璃中水分
2、配置分离胶，加入玻璃板中（注意：不能有气泡和杂物），距离玻璃上口1.5mL停止加胶。 3、再加ddH2O或异丁醇水封除去气泡，凝胶后倒掉水，吸干水到浓缩胶插梳。 二、上样 1、先在内槽加满电泳液才可以拔梳子。 2、拔梳子时垂直向上拔出，不可左右摇晃梳子。 3、拔完梳子后观察梳子孔，是否有缺口和歪，用针头拨正。 4、上样时从左到右依次上样。 5、若上样组不多时，左右第一孔不加样。 6、要预留Marker的上样孔。 三、电泳 四、转膜
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。 （转膜缓冲液：需4度预冷，现配现用，不能放太久。） 1、转印滤纸：全胶长8.5cm，宽5.5cm，需剪裁成7层滤纸，压平后约3mm。需在转膜缓冲液中平衡浸泡备用。 2、海绵垫：在转膜液中平衡浸泡备用。 3、PVDF膜：剪裁8.5cm*5.5cm ，需在甲醇中浸润2min（活化膜上正电基团），然后在转膜缓冲液中平衡浸泡备用。 4、凝胶：凝胶也需要在预冷的转膜转膜缓冲液中平衡浸泡3－5分钟。否则在转膜过程中会出现皱缩，导致出现转移的条带变形。 三明治夹心法：负极（黑）-海绵垫-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-海绵垫-正极（白） 转膜时间：通电恒流，60V，一个槽100mA左右，1h
（注意：在操作过程中用玻棒赶走气泡。 装置转膜仪时注意黑对黑（负对负），白对红（正对正）。 装置运行时需冰浴。） 五、封闭 在进行抗体杂交之前，需要先对转印膜进行封闭，以防止抗体对非转印蛋白区域的非特异性吸附。 封闭一般采用异源性蛋白质或去污剂，本实验室常用的有5%BSA，10%脱脂奶等，至于选择哪一类封闭液，首先应考虑与检测目的相适应（做l酪氨酸磷酸化时不推荐non-fat milk 封闭）。 1、将脱脂奶粉封闭液（1xTBST:脱脂奶粉=20mL：2g一块膜用量。牛血清蛋白、5%BSA 效果更好）倒好。 2、将PVDF膜取出放入封闭液中，盖子改好。 3、封膜一般常温1-2小时即可，也可4℃封闭过夜。 六、一抗 抗体反应主要采用间接法: 即先加入未标记特异性一抗与膜上抗原结合后，再加入标记的二抗进行杂交检测，标记二
处方审核调配核对操作规程
处方审核调配核对操作 规程 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】
（四）处方审核、调配、核对操作规程 一、为了规范处方药销售行为，保证用药安全，根据《药品管理法》《药品经营质量管理规范》（2012年修订）等有关法律法规，制定本操作规程. 二、本操作规程适用于处方审核、调配、核对的操作。 三、内容： 1、处方的审核： （1）执业药师接到处方后，对处方进行审查，包括处方的前记及医师签名是否完整，是否注明临床诊断，药名和规格是否书写正确，用药剂量是否合理，用药方法是否恰当，有无药物的相互作用及配伍禁忌。 （2）处方中是否有缺药等，如项目不齐或字迹辨认不清的，审核人员将处方交还患者，并告知患者找开方医生补齐或书写清楚。 （3）处方一般不超过7日用量，急诊处方不超过3日用量，某些慢性病、老年病或特殊情况，用药量需要延长的，医师是否注明理由。 （4）对处方所列药品不得擅自更改或者代用，对有配伍禁忌或者超剂量的处方，应当拒绝调配，但经处方医师更正或者重新签字确认的，可以调配； （5）处方审核合格的，执业药师在处方上签名或盖章，将处方交调配人员。 2、处方的调配 （1）调剂员按处方上药品的次序调配，每次只能接一人次的处方调配，以免发生差错。 （2）检查药品的质量，效期，核对药品名称、规格、剂型、数量。（3）在药品用药标签或药袋上写明姓名、用法、用量。 （4）处方调配完成后，先进行核查，内容包括处方内容、药品名称、规格、剂量、用法、用量是否一致，检查药品的外观是否合格。 （5）核查无误后在处方上签名，并交复核员核对 3、处方的核对： （1）接到处方和调配药品后，处方核对人员按处方对照药品逐一进行复核。如有错发或数量不符，处方审核人员立即告知调配人员予以更正。（2）核对员对处方内容、病人姓名、年龄、药品名称、剂量、剂型、服用方法、禁忌及发药员所写的药袋进行核对。
Westernblot基本操作步骤
W e s t e r n b l o t基本操作步骤 一、细胞蛋白的提取 弃去培养基，加入预冷的PBS洗一遍，加入的RIPA裂解液（含1mM PMSF(100×)，每10ml加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂各一片，六孔板每孔150-250μl，60mm×15mm 培养皿300-400μl，），于冰上裂解约5分钟，裂解总液12000rpm离心10 min。取上清，用BCA法测定蛋白浓度。用于western blot的蛋白样品取一定量加4×loading buffer，10×reducing，再用裂解液补齐到所需上样体积。离心，使蛋白沉底。将EP管于沸水中煮5min，变性，之后再离心后准备上样。 二、BCA法测蛋白浓度操作步骤 将蛋白标准配制溶液溶解蛋白标准（BSA），配制成5mg/ml的蛋白标准溶液，10μl 分装，-20℃冷冻保存。 完全溶解蛋白标准品，取10μl用PBS稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。 据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔中，加稀释标准品的溶液补足到20μl。 加适当体积样品到96孔板的样品孔中（可以通过预实验摸索稀释倍数），加PBS 到20μl。 各孔加入100μl BCA工作液，37℃放置30分钟。 测定580nm条件下吸光度。根据标准曲线计算出蛋白浓度。 三、Western blot基本操作步骤 1、溶液配制： ①Runnig Buffer(1×)：SDS Runnig Buffer（20×）50mL，加MiliQ水至1L； ②Transfer Buffer(1×): Transfer Buffer(10×)100mL,甲醇200mL（20%，v/v），加MiliQ水至1L； ③TBST缓冲液 1M Tris·HCl（pH7.6）：60.5g Tris-base，加入约30ml浓盐酸，调PH至7.6，加MiliQ 水至500ml。 TBS缓冲液（10×）：1M Tris·HCl 100ml+80g NaCl加MiliQ水1L TBST缓冲液（1×）：TBS缓冲液（10×）100ml+0.5ml Tween-20（0.05%，v/v），加MiliQ水至1L。 ④封闭液：5% BSA（5g/100ml，称取1g BSA至20ml TBST，充分混匀溶解） 2、样品准备与加样 ①用4×SDS loading buffer, 10×reducing与蛋白质样品混合，并将此EP 管放在水浴锅中沸水煮5min，使蛋白质变性。 ②将预制胶固定到电泳装置中，并在装置中加满Runnig Buffer(1×)，内槽加入0.5mL 抗氧化剂，小心拔下梳子； ③向上样孔中加入一定体积的蛋白样品（总蛋白量20μg以上）。向marker孔中加入2.5μl marker（按照实验要求设定marker量），向空白孔中加入一定体积的加样缓冲液(loading buffer)。注意采用相同（或相近）的上样体积，以保证蛋白的各带宽度相同。防止体积较大的上样孔中的蛋白质将向相邻的泳道扩散。 3、电泳
最详细的WesternBlot过程步骤详解
最详细的W e s t e r n B l o t 过程步骤详解
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Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答) Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL ECF iv.底物DAB呈色 三、主要试剂 四、主要步骤 五、实验常见的问题指南 1.参考书推荐 2.针对样品的常见问题 3.抗体 4.滤纸、胶和膜的问题 的相关疑问 6.染色的选择 7.参照的疑问
8.缓冲液配方的常见问题 9.条件的摸索 10.方法的介绍 11.结果分析 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 二、分类 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
处方调配的一般程序药学专业技术人员应按操作规程调剂处方药品
处方调配的一般程序药学专业技术人员应按操作规程调剂处方药品，一般包括以下过程：认真审核处方，准确调配药品，正确书写药袋或粘贴标签，包装；向患者交付处方药品时，应当对患者进行用药说明 与指导。 1．审核处方首先是开方医师的资质是否符合规定，不同的药品是否使用规定的处方笺书写，还包括以 下内容： (1)对规定必须做皮试的药物，处方医师是否注明过敏试验及结果的判定； (2)处方用量与临床诊断的相符性； (3)剂量、用法； (4)剂型与给药途径； (5)是否有重复给药现象； (6)是否有潜在临床意义的药物相互作用和配伍禁忌。 2．调配药品 (1)仔细阅读处方，按照药品顺序逐一调配； (2)对贵重药品及麻醉药品等分别登记账卡； (3)药品配齐后，与处方逐条核对药名、剂型、规格、数量和用法，准确规范地书写标签； (4)调配好一张处方的所有药品后再调配下一张处方，以免发生差错； (5)对需要特殊保存的药品加贴醒目的标签提示患者注意，如“置2～8℃保存”； (6)在每种药品外包装上分别贴上用法、用量、贮存条件等的标签； (7)核对后签名或盖名章； (8)法律、法规、医保、制度等有关规定的执行情况。 特殊调剂：根据患者个体化用药的需要，药师应在药房中进行特殊剂型或剂量的临时调配，如稀释液体、磨碎片剂并分包、分装胶囊、制备临时合剂、调制软膏等，应在清洁环境中操作，并作记录。 3．发药 (1)核对患者姓名，最好询问患者所就诊的科室以帮助确认患者身份； (2)逐一核对药品与处方相符性，检查规格、剂量、数量，并签字； (3)发现配方错误时，应将药品退回配方人，并及时更正；
(4)向患者说明每种药品的服用方法和特殊注意事项，同一药品有两盒以上时要特别说明； (5)发药时应注意尊重患者隐私； (6)尽量做好门诊用药咨询工作。 药品的摆放1．根据药品性质所要求的条件，对不同性质的药品应按规定放置冷藏、干燥处，常温以及避 光、冰冻等分别保存； 2．根据药品管理法要求，分别对麻醉药品、精神药品、毒性药品等分别专柜加锁保存； 3．从药品价格出发，对贵重药品单独保存； 4．对一些误用可引起严重反应的一般药品，如氯化钾注射液、氢化可的松注射液等宜单独放置； 5．对于名称相近、包装外形相似、同种药品不同规格等常引起混淆的药品应分开摆放并要有明显标记。 来源:考试大-初级药士、初级药师、主管药师考试 对差错的应对措施及处理原则 差错处理应遵守以下步骤： 1.建立本单位的差错处理预案。 2.当患者或护士反映药品差错时，须立即核对相关的处方和药品；如果是发错了药品或错发了患者， 药师应立即按照本单位的差错处理预案迅速处理并上报部门负责人。 3.根据差错后果的严重程度，分别采取救助措施，如请相关医师帮助救治、到病房或患者家中更换、 致歉、随访，取得谅解。 4.若遇到患者自己用药不当，请求帮助，应积极提供救助指导，并提供用药教育。 5.认真总结经验，对引起差错的环节进行改进，订出防止再次发生的措施。 责编
四处方审核调配核对操作规程
（四）处方审核、调配、核对操作规程 一、为了规范处方药销售行为，保证用药安全，根据《药品管理法》《药品经营质量管理规范》（2012年修订）等有关法律法规，制定本操作规程. 二、本操作规程适用于处方审核、调配、核对的操作。 三、内容： 1、处方的审核： （1）执业药师接到处方后，对处方进行审查，包括处方的前记及医师签名是否完整，是否注明临床诊断，药名和规格是否书写正确，用药剂量是否合理，用药方法是否恰当，有无药物的相互作用及配伍禁忌。 （2）处方中是否有缺药等，如项目不齐或字迹辨认不清的，审核人员将处方交还患者，并告知患者找开方医生补齐或书写清楚。 （3）处方一般不超过7日用量，急诊处方不超过3日用量，某些慢性病、老年病或特殊情况，用药量需要延长的，医师是否注明理由。（4）对处方所列药品不得擅自更改或者代用，对有配伍禁忌或者超剂量的处方，应当拒绝调配，但经处方医师更正或者重新签字确认的，可以调配； （5）处方审核合格的，执业药师在处方上签名或盖章，将处方交调配人员。 2、处方的调配 （1）调剂员按处方上药品的次序调配，每次只能接一人次的处方调配，以免发生差错。 （2）检查药品的质量，效期，核对药品名称、规格、剂型、数量。（3）在药品用药标签或药袋上写明姓名、用法、用量。 （4）处方调配完成后，先进行核查，内容包括处方内容、药品名称、规格、剂量、用法、用量是否一致，检查药品的外观是否合格。 （5）核查无误后在处方上签名，并交复核员核对 3、处方的核对： （1）接到处方和调配药品后，处方核对人员按处方对照药品逐一进行复核。如有错发或数量不符，处方审核人员立即告知调配人员予以更正。 （2）核对员对处方内容、病人姓名、年龄、药品名称、剂量、剂型、
WB操作步骤-自己整理
Western Blot 相关实验方法与试剂（湿转法） 人工肝实验室学习姚瑶 （一）目的蛋白提取： （1）单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1、倒掉细胞培养液，加入Hanks液洗涤一次后倒掉，根据所用细胞决定是否用胰酶消化，加入适量（约5ml）新鲜细胞培养液后，将贴壁细胞吹起，并转移至4支离心管内，配平后，1500转离心10min。 2、倒掉上清，用4度预冷PBS溶液洗涤沉淀，1500转离心10min。 共洗三次，每次十分钟。 3、倒掉上清，吸净，每管加入50ul 细胞裂解液RIPA，吹散，加入后由于DNA的释放可迅速变粘稠，故应尽快转移至1.5ml EP 管内，-20℃裂解30min。 4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解15s。（可不做） 5、4℃，12000转离心10min。 6、将上清转移至0.5ml EP管中，每管100ul，冰浴待用。 （2）组织中总蛋白的提取： 1、取约100mg肝组织于研磨器内，加入500ul 细胞裂解液RIPA，研磨后吸出于1.5ml EP管内，再加入500ul RIPA，研磨后吸出于上EP管内。冰上裂解30min。
2、配平后，4℃，14000转离心10min。 3、将上清分装于0.5ml EP管内，每管100ul，冰浴待用（二）蛋白含量的测定： 1、稀释标准品：10ul标准品C液+90ul PBS溶液，混匀。 2、按0、1、2、4、8、12、16、20ul将稀释后的标准品加入于96孔板内，并用PBS将各孔补足20ul。 3、将第2、3排96孔板分别加入样品1ul、0.5ul，（可采用倍比稀释法），并用PBS将各孔补足20ul。 4、配制工作液：按A液：B液=50：1配制适量工作液，每孔加入200ul。 5、37℃水浴30min。 6、酶标仪测定各孔OD值（A570，Mode1）。 7、绘制标准曲线，计算样品蛋白浓度。 （三）SDS-PAGE电泳： （1）清洗玻璃板 （2）灌胶与上样： 1、配胶：根据目的蛋白的大小，决定分离胶的浓度。
药房处方调配标准操作规程
药房处方调配标准操作规程 门诊药房是医院提供药物治疗服务的关键环节。处方调配工作质量，直接影响药物治疗效果。而错发药则会给患者带来心理、生理上不同程度的损害,并造成患者和医院的经济损失，也严重影响医院声誉。为进一步提高门诊药房服务水平，杜绝差错,特制定门诊药房《处方调配标准操作规程》如下： 一、基本配置 设发药窗口一个，配备收方调配和发药人员各一名，配读卡、记账用微机一台，备好足够的大小药袋、笔及其它调配发药工具。 另设用药咨询窗口一个，配备药品咨询服务人员一名。 二、人员、环境要求 1.药剂人员准时上岗开窗，佩带工号胸章，出示工号牌，仪表端正。岗上不看报、不大声喧哗、不与人闲谈、嘻戏、不干私活。 2.药剂人员应使用文明用语，语气、语调一律做到平顺、和蔼。不得态度冷漠，更不可与患者或其家属发生争吵，也不提倡微笑服务。 3.药剂人员应对每种药品的不同商品名、剂量、包装规格及一般用量用法有所掌握。 4.保持岗位环境卫生、整洁，药品严格按定位存放，不得任意堆放。发药桌面上不得留有与发药无关的物品。 5.药剂人员应经过专门上岗前培训，掌握国家药品管理的有关法律法规，以及各级行政部门关于药品使用的有关规定。 三、处方调配标准操作规程 1.收方调配 (1)收方调配人员向取药者索取处方和磁卡。辨别医保、自费相关单据是否符合要求。辨别是本人还是家属或他人代取药。 (2)审核处方完整性，包括科别、姓名、性别、年龄、日期及药名、剂型、剂量、数量和用法、合计是否清楚、正确。 (3)用电脑读卡机读取磁卡信息，对照处方姓名、药品名称、剂型、剂量、数量与电脑显示的处方信息是否一致，收费是否准确。 (4)检查所配药品之间是否存在配伍禁忌或不合理用药。对药名相近相似而
发药流程图完整
门药022：中药颗粒核对发药流程 主要依据： 1、《处方管理办法》卫生部令第53号，自2007年5月1日起施行。 关键点： “四查十对”：查处方，对科别、姓名、年龄；查药品，对药名、剂型、规格、数量；查配伍禁忌，对药品性状、用法用量；查用药合理性，对临床诊断。 “十八反十九畏”：甘草反甘遂、大戟、海藻、芫花;乌头反贝母、瓜蒌、半夏、白蔹、白芨;藜芦反人参、沙参、丹参、玄参、细辛、芍药。硫黄畏朴硝，水银畏砒霜，狼毒畏密陀僧，巴豆畏牵牛，丁香畏郁金，川乌、草乌畏犀角，牙硝畏三棱，官桂畏赤石脂，人参畏五灵脂。 “毒性”：05版药典共收载有毒中药72种。其中大毒中药10种，有毒中药38种，小毒中药24种。列入卫生部“毒性药品管理品种”范围，受《医疗用毒性药品管理办法》约束的有毒中药共28种，除此之外认定其为“有毒中药”都应慎重考虑。
门药211：住院部中药颗粒（长嘱临嘱）调剂流程 主要依据： 1、《处方管理办法》卫生部令第53号，自2007年5月1日起施行。 关键点： “四查十对”：查处方，对科别、姓名、年龄；查药品，对药名、剂型、规格、数量；查配伍禁忌，对药品性状、用法用量；查用药合理性，对临床诊断。 “十八反十九畏”：甘草反甘遂、大戟、海藻、芫花;乌头反贝母、瓜蒌、半夏、白蔹、白芨;藜芦反人参、沙参、丹参、玄参、细辛、芍药。硫黄畏朴硝，水银畏砒霜，狼毒畏密陀僧，巴豆畏牵牛，丁香畏郁金，川乌、草乌畏犀角，牙硝畏三棱，官桂畏赤石脂，人参畏五灵脂。 “毒性”：05版药典共收载有毒中药72种。其中大毒中药10种，有毒中药38种，小毒中药24种。列入卫生部“毒性药品管理品种”范围，受《医疗用毒性药品管理办法》约束的有毒中药共28种，除此之外认定其为“有毒中药”都应慎重考虑。
处方审核、调配、核对操作规程(新版)
The prerequisite for vigorously developing our productivity is that we must be responsible for the safety of our company and our own lives. （安全管理） 单位：___________________ 姓名：___________________ 日期：___________________ 处方审核、调配、核对操作规程 (新版)
处方审核、调配、核对操作规程(新版)导语：建立和健全我们的现代企业制度，是指引我们生产劳动的方向。而大力发展我们生产力的前提，是我们必须对我们企业和我们自己的生命安全负责。可用于实体印刷或电子存档（使用前请详细阅读条款）。 1.处方药必须凭医师开具的处方销售； 2.本规程中的处方药是国家食品药品监管部门公布的必须凭处方销售的处方药； 3.销售国家有专门管理要求的药品中的处方药还必须按照国家有专门管理要求的药品的管理制度和操作规程进行； 4.必须凭处方销售的处方药的审核，必须是执业药师．审核如下内容： 4.1.规定必须做皮试的药品，处方医师是否注明过敏试验及结果的判定； 4.2.处方用药与临床诊断的相符性； 4.3.剂量用法的正确性； 4.4.选用剂型与给药途径的合理性； 4.5.是否有重复给药的现象； 4.6.是否有潜在临床意义的药物相互作用和配伍禁忌；
4.7.其他用药不适宜情况。 5.处方审核、调配、核对人员必须在处方上签字或盖章，并保存处方或者复印件2年（按处方管理办法，只保存一年），但处方药销售记录应保存不少于5年． 6.处方药必须放置在闭架柜台中； 7.不是必须凭处方销售的药品，处方可由药师以上的其他药学专业技术人员审核 XX设计有限公司 Your Name Design Co., Ltd.
处方审核、调配、核对操作程序(标准版)
( 安全管理 ) 单位：_________________________ 姓名：_________________________ 日期：_________________________ 精品文档 / Word文档 / 文字可改 处方审核、调配、核对操作程序 (标准版) Safety management is an important part of production management. Safety and production are in the implementation process
处方审核、调配、核对操作程序(标准版) 1．目的：规范处方审核、调配、核对操作程序，保证药品质量。 2．范围：处方调配 3．责任人：处方审核人员、处方调配人员。 4．操作程序： 4．1接到处方后，由驻店执业药师审核或处方审核人员对处方进行远程审核，审核内容包括顾客的姓名、年龄、药品名称、剂型、剂量、用法、开方日期、配伍禁忌等。 4.1.1项目不齐或字迹辨认不清的，审核人员将处方交还顾客，并告知顾客找开方医生补齐或书写清楚。 4.1.2用量、用法不准确或有配伍禁忌的，审核人员将处方返还顾客，并告知顾客找开方医生更正或重新签名。 4.1.3处方所列药品本店没有的，审核人员将处方交还顾客，并告知顾客找开方医生更换其他药品。
4.1.4处方审核合格的，驻店执业药师在处方上签名，通过远程处方审核的留有处方审核人员姓名及指纹，方可将处方交调配人员。 4.2调配人员依照审核人员签名的处方核算药价。4.3顾客交款后，处方交调配人员调配。 4.4调配人员根据处方内容逐项调配。4.4.1调剂过程中如有疑问，调配人员立即向处方审核人员咨询。 4.4.2调剂完成后，调配人员在处方上签全名，将处方与药品交处方审核人员复核。 4.5处方审核人员按处方对照药品逐一进行复核。 4.5.1如有错发或数量不符，处方审核人员立即告知调配人员予以更正。 4.5.2复核无误的，交还调配人员发药。 4.6调配人员发药的同时，向顾客交待清楚药品的用法、用量、禁忌、注意事项等。 云博创意设计 MzYunBo Creative Design Co., Ltd.
WB实验步骤
蛋白电泳（制胶、SDS-PAGE电泳） 实验材料： SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、电泳缓冲液、提取的蛋白或全细胞裂解液、广谱彩虹预染中分子量蛋白Marker、SDS-PAGE Loading Buffer（还原，5×）、G250蛋白快速染色试剂、若干蒸馏水 实验仪器、耗材： 蛋白电泳仪、制胶仪、水平摇床、15ml离心管、5ml移液器、微量移液器、1.5ml离心管、塑料饭盒（可在微波炉里加热使用） 配制溶液： ●配制10%APS溶液：-20度保存 0.5g APS + 5ml蒸馏水、2.5g APS + 25ml蒸馏水 ●配制200 ml电泳缓冲液：CW0045 Tris-Glycine SDS（ph8.3,10×） 20 ml Tris-Glycine SDS + 180 ml 蒸馏水 ●配制1 ml loading buffer： 200 ul 5×loading buffer +800 ul蒸馏水 实验步骤： 一．制胶： 1.参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。 2.根据分离蛋白的大小配制分离胶和浓缩胶。 3.配制10%分离胶： 将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。 加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。 配制SDS-PAGE分离胶
4.待胶灌至距离玻璃板顶端1.5cm的时候停止灌胶，加入蒸馏水水封。静置40分钟 至1小时。 5.待分离胶凝固后（水层胶层中间出现折线），倒掉蒸馏水，用滤纸将水溶液吸干。 6.配制5%浓缩胶： 7.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。 注意：灌胶速度要快，防止凝胶。 8.将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。静置20分钟，等待浓缩胶聚合。 9.待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。赶走气泡。 二．SDS-PAGE电泳: 1. 在电泳槽的内外槽灌至电泳缓冲液。 2. 制备样品： 1）蛋白样品： 根据植物蛋白或动物组织蛋白定量结果，计算蛋白提取液加入量，制备上样溶液。 蛋白提取液+ 5×上样缓冲液+ 蒸馏水，上样量为40-60ug。 制备的样品，煮沸5分钟，12,000 rpm离心5分钟，取上清，上样。
处方审核调配核对操作规程
处方审核调配核对操作 规程 标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
（四）处方审核、调配、核对操作规程 一、为了规范处方药销售行为，保证用药安全，根据《药品管理法》《药品经营质量管理规范》（2012年修订）等有关法律法规，制定本操作规程. 二、本操作规程适用于处方审核、调配、核对的操作。 三、内容： 1、处方的审核： （1）执业药师接到处方后，对处方进行审查，包括处方的前记及医师签名是否完整，是否注明临床诊断，药名和规格是否书写正确，用药剂量是否合理，用药方法是否恰当，有无药物的相互作用及配伍禁忌。 （2）处方中是否有缺药等，如项目不齐或字迹辨认不清的，审核人员将处方交还患者，并告知患者找开方医生补齐或书写清楚。 （3）处方一般不超过7日用量，急诊处方不超过3日用量，某些慢性病、老年病或特殊情况，用药量需要延长的，医师是否注明理由。 （4）对处方所列药品不得擅自更改或者代用，对有配伍禁忌或者超剂量的处方，应当拒绝调配，但经处方医师更正或者重新签字确认的，可以调配； （5）处方审核合格的，执业药师在处方上签名或盖章，将处方交调配人员。 2、处方的调配 （1）调剂员按处方上药品的次序调配，每次只能接一人次的处方调配，以免发生差错。 （2）检查药品的质量，效期，核对药品名称、规格、剂型、数量。 （3）在药品用药标签或药袋上写明姓名、用法、用量。 （4）处方调配完成后，先进行核查，内容包括处方内容、药品名称、规格、剂量、用法、用量是否一致，检查药品的外观是否合格。 （5）核查无误后在处方上签名，并交复核员核对
3、处方的核对： （1）接到处方和调配药品后，处方核对人员按处方对照药品逐一进行复核。如有错发或数量不符，处方审核人员立即告知调配人员予以更正。 （2）核对员对处方内容、病人姓名、年龄、药品名称、剂量、剂型、服用方法、禁忌及发药员所写的药袋进行核对。 （3）认真执行四查十对，查处方，对科别、对姓名、年龄；查药品，对药名、规格、数量、标签；查配伍禁忌，对药品性状，用法用量；查用药合理性，对临床诊断。确认无误后，向取药人详细交代使用方法和注意事项； （4）核对无误的，核对人员在处方上签名或盖章，处方连同药品交发药人员。 4、发药： （1）发药时应认真核对患者姓名、注意区分姓名相同相似者。（2）发药的同时，向患者交待清楚药品的用法、用量、禁忌、注意事项等。如服药前后次序、服药时间、对某些药物服用后应作的检查及可能发生的情况等，对特殊病人如老年人、幼儿等的用药应作特殊交待。 5、填写《处方药销售记录表》，留存处方或者其复印件，《处方药销售记录》和处方至少保存5年。 四、责任人：执业药师、调剂员、核对员。
Western_Blot操作步骤
Western Blot操作步骤 一、 Western blot 实验步骤概述 1. 组织取材：组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA)，PMSF(每克组织30μl，10 mg/ml PMSF)，利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃ 4. 加入PMSF(每克组织30μl，10 mg/ml PMSF)，冰上孵育30分钟 5. 移入离心管4℃约20,000 g(约15,000转)15分钟 6. 上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存 7. 进行Bradford比色法测定蛋白质浓度 8. 取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度)，并加等体积的2×电泳加样缓冲液 9. 沸水浴中3分钟 10. 上样 11. 电泳(浓缩胶20mA，分离胶35mA) 12. 电转膜仪转膜(100mA 40分钟) 13. 膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色 14. Westernblot 试剂盒显色 15. 分析比较记录 二、 Western具体实验步骤 Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。Western可以参考如下步骤进行操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation):可以使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用北京博奥森生物技术公司生产的WIP细胞裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。 2.电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制:SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用博奥森生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。