中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求yuepu
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（荧光免疫层析法）
适用范围：本产品用于体外定量检测人全血/血清/血浆和尿液样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。
1.1规格
卡型：1人份/盒、10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒
卡盒型：20人份/卡盒
1.2组成
1人份/盒、10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒每盒含1/10/20/50人份检测卡、1份批号卡和1/10/20/50支稀释液（100μL/支），一份标曲信息卡，其中，每人份包装包括1份中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测卡和1包干燥剂。20人份/卡盒含1卡盒（附有标曲信息芯片）、1瓶稀释液（50mL/瓶），其中1个卡盒中包括20支检测卡和11片干燥剂。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测卡由荧光垫（喷涂有荧光微球标记的鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体）、样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体；C线包被羊抗鼠抗体）、吸水纸、塑料载板组成。
稀释液由0.1%的表面活性剂S9和0.1mol/L的Tris（pH7.0）溶液组成。
2.1物理性状
2.1.1外观
检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。样品缓冲液应清澈透明、无杂质、无絮状物。
2.1.2 膜条宽度
检测卡的膜条宽度≥2.5mm。
2.1.3液体移行速度
液体移行速度应不低于10mm/min。
2.1.4稀释液装量
卡型：稀释液体积应在标识体积的±5%以内。
卡盒型：稀释液体积不少于标示值。
2.2空白限
空白限应不高于50ng/mL。
2.3重复性
分别用高、中、低3个浓度的样本，各重复检测10次，CV(%)应不高于10.0% 2.4批间差
极差应不高于15.0%。
2.5线性
在[50，1500]ng/mL的范围内，线性相关系数应不低于0.990。
2.6准确度
样本回收率应在85%～115%范围内。
2.7稳定性
将测定试剂盒在4℃～30℃的环境中放置有效期18个月后，过有效期后3个月内，分别检测2.1、2.2、2.3、2.5、2.6项，结果应符合各项目的要求。
NGAL中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白
一种新的肾损伤标志物— 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的临床意义 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白( neutrophil gelatinaseassociated lipocalin，NGAL) ，又称人脂质运载蛋白2( lipocalin 2，Ln2) 或噬铁蛋白( siderocalin) ，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL 作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。 1、NGAL 的生物学特性 NGAL 是1993 年Kjeldsen 等［1］研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分，与明胶酶B 即基质金属蛋白酶9( matrixmetalloproteinase-9，MMP-9) 密切相关。人类NGAL 基因定位于第9 号染色体长臂( 9q34) ，全长5 869 bp，包括1 695bp 的5'端非转录区、178 bp 的3'端非转录区及由7 个外显子和6 个内含子构成的3 696 bp 的原初转录区; 其相对分子质量为25 000 bp。血小板活化因子( PAF) 、白三烯-B4( LT-B4)和N-甲酸基-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸( N-formyl-Met-Leu-Phe) 等是NGAL 的配体［2］。在生理状态下，中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮黏液细胞等分泌少量NGAL，而脑和周围神经、结肠、子宫和卵巢、胎盘、甲状腺等组织细胞中NGAL 的表达呈阴性。 NGAL 的生理功能尚不完全清楚，可能参与不同的生理、病理过程，涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。在胚胎期，NGAL 发挥类似生长因子的作用，参与各类组织发育、生长及分化，促进乳腺癌、食管癌等肿瘤细胞增殖。NGAL 与MMP-9 以二硫键形成12 500 bp 的复合物，延长MMP 的蛋白水解活性，促进MMP-9 对细胞基底膜的降解，从而浸润周围基质，介导癌细胞转移。过去研究认为，NGAL 促进细胞凋亡，但近年来研究发现NGAL 还是一类应激蛋白，在外界有害物质刺激下，细胞分泌NGAL 是一种机体自身防御机制，使组织细胞免于凋亡［3］。NGAL 还是一类新的急性期反应蛋白，作为介导铁离子向胞内运输的新型载体，通过竞争性夺取螯合物中的铁来阻止细菌对铁的吸收，从而抑制细菌生长。 2、NGAL 是急性肾损伤的标志物 2．1 早期诊断急性肾功能损伤( AKI) 时血、尿NGAL 浓度通常会迅速升高，2 h 最为明显( 比临界值升高几十至几百倍) ，血清肌酐( sCr) 、尿酶等传统指标往往要在24 ～72 h 才后明显升高，因而NGAL 可用于AKI 的早期诊断。Mishra等［4］在体外循环术并发AKI 患儿的队列研究中发现，2h 尿NGAL 诊断AKI 的AUCROC 为0．998，其临界值为50 μg /L( ELISA 法) 时，敏感性、特异性分别为100%、98%，而血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC 为0．906，其临界值为25 μg /L 时，敏感性、特异性为70%、94%; 多元回归分析显示，2 h 尿NGAL 水平是预测AKI 的强有力预测因子。也发现成年患者2 h 尿、血清NGAL 水平是诊断AKI 的可靠的早期诊断指标。meta 分析表明，NGAL 对AKI 的诊断效能受到标本类型、年龄、检测方法等因素影响，但NGAL 对儿童AKI 的诊断效能优于成年人，可能是成年人受到其他慢性疾病等因素影响。值得注意的是，脓毒血症等危重疾病患者，因受到炎症反应等因素影响，NGAL 可能并不适用于AKI 的早期诊断，诊断特异性欠佳。北美地区研究发现，143 名全身炎症反应综合征及脓毒性休克患儿入院后24 h 内，血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC为0．677，在临界值为139 ng /mL 时，敏感性为86%，特异性仅为39%。经多变量分析后发现，血NGAL 并不是发生AKI 事件的预测指标［5］。在成人患者研究中也得到类似结论。另有研究表明，危重患儿48 h 内尿液NGAL 水平可以准确预测AKI 的发生( AUCROC 为0．79) 。但当sCr 升高后，AUCROC降至0．63［6］。ICU 中的AKI 成人患者血浆NGAL水平在48 h 后与正常对照组亦无显著性差异［7］。但李萍珠等［8］发现尿NGAL 可作为脓毒血症后并发AKI 的早期诊断标志物，准确性达0．968，这可能与种族间水平差异有关。 2．2 监测病情进展NGAL 还可以反映肾功能损伤的严重程度。Kusaka 等［9］在接受
01 中性粒细胞功能测定
实验一、中性粒细胞吞噬功能测定Assay for Phagocytosis of Polymorphonuclear Leukocyte 【实验目的】 ?掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理； ?熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法；?通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
【实验原理】 血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞，具有吞噬细菌和异物颗粒的能力，在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒在一定条件下共同孵育后，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。计数吞噬率和吞噬指数，可反映中性粒细胞的吞噬功能。有助于对疑有吞噬细胞功能障碍的疾病作出诊断。
【材料和试剂】 1.待测样本新鲜抗凝静脉血 2.被吞噬物灭活白色葡萄球菌菌液（6×108/ml）。 3.试剂无菌生理盐水，甲醇，瑞氏－吉姆萨染液。 4.器材EP管，75%酒精棉球、载玻片，微量移液器、恒 温箱，显微镜（香柏油，二甲苯）等。
【操作步骤】 1.白色葡萄球菌液制备。（已制备好） 2.待测血标本制备：静脉采血5ml。 3.在EP管内加40微升血液，20微升菌液，混匀。 4.将EP管置37℃温育30min，每隔10min混匀一次。 5.取一小滴上述混合液，置于载玻片上，推成薄血片，晾干。 6.甲醇固定4-5min，滴加瑞氏-吉姆萨染液A液2-3滴，染色1- 2min，再B液2-3滴，染色5-10min，水洗，晾干。 7.油镜下计数中性粒细胞(＞100个)、吞噬的细菌总数。
【推血片方法】 取血混合液一小滴，放于载玻片的右端。将推片置于血滴前端，与载玻片接触，成30°～40°角向后拉动推片，使与血液接触?待血液扩散形成一条线之后，以均速轻轻向前推动推片，则血液均匀地被涂于载玻片上而形成一薄膜。取两张无油脂的洁净玻片，左手拇指及中指夹持载玻片，右手持推片。30° 血滴越大，速度越快、角度越大--血膜越厚
明胶酶谱法检测步骤
明胶酶谱法检测步骤 1、明胶酶谱溶液配制 1.1.1洗脱液（1×）： 1.1.2Triton X-100， 2.5%（v/v）in water 配法：量取Triton X-10025ml，加去离子水定容至1000ml即可。 1.1.2孵育液（1×）：50mM Tris-HCl，5mM CaCl2·2H2O，0.02%Brij-35，0.2M NaCl，pH7.6。 配法： 1)称取Tris碱6.06g，CaCl2·2H2O0.74g（或CaCl20.555g），Brij-350.2g，NaCl11.7g； 2)加水至800ml； 3)用浓HCl调pH至7.6； 4)定容至1000ml。 1.1.32×上样缓冲液（不含β巯基乙醇） 0.5M Tris-HCl，pH6.8 2.5ml 甘油 2.0ml 10%（w/v）SDS 4.0ml 0.1%溴酚蓝0.5ml dH2O1ml Total10ml 1.1.45×上样缓冲液（不含β巯基乙醇） 配法： 1)量取下列试剂，置于15ml塑料离心管中
a)1M Tris-HCl（pH6.8） 2.5ml b)SDS1g c)溴酚蓝0.05g d)甘油5ml 2)加dH2O定容至10ml，Vortax振荡混匀； 3)小份分装（1ml/管），-20℃保存。 1.1.50.5%（w/v）考马斯亮蓝R-250400ml 配法： 1)称取2g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中； 2)量取100ml异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解； 3)加入40ml冰醋酸，搅拌均匀； 4)加入260ml去离子水，搅拌溶解； 5)用滤纸过滤除去颗粒物质后，室温保存。 1.1.6考马斯亮蓝脱色液（400ml） 配法甲醇：乙酸：水=200：40：160=5：1：4。 1.1.7明胶储液（10mg/ml in water） 配法：称取明胶（Sigma，猪皮来源）0.1g，加去离子水10ml，溶解。配好后储存于4℃。若凝固成胶冻状可用55℃水浴解冻。 1.1.810%SDS-PAGE凝胶之分离胶（含1.0mg/ml明胶） 配法： dH2O3ml 30%丙烯酰胺溶液 3.3ml
人(Human)中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL） ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
明胶酶谱实验方法
明胶酶谱实验 72kD（MMP-2）和92kD（MMP-9） 抽提缓冲液： 10 mmol/L Tris-HCl pH 7.5, 150 mmol/L NaCl, 20 mmol/L CaCl2, 1μmol/L ZnSO4, 0.01% (v/v) Triton X-100, （0.5% PMSF）。 10mmol/LPMSF 溶液：取PMSF 粉末17.4mg, 加异丙醇溶解, 定容至100ml，置-20℃备用。 注意：PMSF在临提取组织时再加入，使终浓度为0.5%，配制时不加，不然易失效。 先用新鲜肾组织，蛋白量尽量加至最大。如果按这个还做不出来，那就是你的实验技术问题了 明胶酶是锌依赖的蛋白酶. EDTA是金属离子络合剂.加了就把明胶酶的锌离子络合了，完全抑制MMP的活性。你加了这个我保证你一辈子也做不出来。 蛋白浓度一般是先摸索一个量。就是分别上10,20,30,40,50,60,70,80,90,100ug 跑一下电泳，先看结果。条带看不见的，或者太透明的，都不能选。就是要半明半暗的那种。看是哪个道分解的，我们就选其中几个量上样。
(1)、5%浓缩胶(现配现用)： d3H2O 2.1ml 30%丙烯酰胺溶液0.5ml 1mol/L Tris-HCL( PH=6.8) 0.38ml 10% SDS 30μl 10%过硫酸铵(AP) 30μl TEMED 3μl 3ml (2)、10%分离胶(现配现用)： d3H2O 2.1ml 30%丙烯酰胺溶液 2.31ml 1.5mol/l Tris-HCL(PH=8.8) 1.75ml 10% SDS 70μl 10%过硫酸铵(AP) 70μl TEMED 5.6μl 1%明胶0.7ml 7ml (3)、4×上样缓冲液（4o C保存）： 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS 8ml 50%甘油 3.2 ml 溴酚蓝0.024g d3H2O 2.4ml 20ml
Transwell实验 超详细之欧阳歌谷创作
Transwell侵袭实验总结 欧阳歌谷（2021.02.01） 第一节概念 这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。 1.Transwell 关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。 更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。 但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一
样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。 下图是一个Transwell装置的纵切面 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择 3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室用的是0.4μm。
酶谱法检测金属蛋白酶活性
原理 酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。 复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（最好是放在摇床上摇，30min/次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的。）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs恢复了活性。 2试剂的配制 （1）配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml 明胶，配好后1周内使用，明胶含量低灵敏度高） A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大小确定配制胶的量） 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶10ml（包括） ddH2O 4.5ml 30%储备胶（0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺）2ml 1.5mol/l Tris（PH 8.8） 2.5ml 10% SDS 100ul 10%过硫酸铵（APS）100ul TEMED 8ul 1%明胶（1g明胶-->100ml，37°C水浴溶解）0.5ml B.浓缩胶的配制 浓缩胶6ml ddH2O 4.5ml 30%储备胶0.75ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.76ml 10% SDS 60ul 10%过硫酸铵60ul TEMED 6ul
【CN110133276A】一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910258412.8 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人 芜湖森爱驰生物科技有限公司 地址 241000 安徽省芜湖市芜湖县安徽新 芜经济开发区南次一路369号 (72)发明人 王晓波 朱雪姣 朱海峰 (74)专利代理机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 代理人 刘兵 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 检测试剂盒 (57)摘要 本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一 种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试 剂盒，所述中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 检测试剂盒，包括相互独立的试剂R1和试剂R2， 所述试剂R1由以下物质组成：磷酸盐缓冲液80～ 120mmol/L；谷胱甘肽0.5～1.5mmol/L；表面活性 剂0.02～1.5g/L；防腐剂0.05～2g/L；牛血清蛋 白15～30g/L；解离剂0.02～1g/L，且所述试剂R1 的pH值为6.5～7.5；所述试剂R2由以下物质组 成：磷酸盐缓冲液100～150mmol/L；促凝剂8～ 15g/L；阻断剂2～8mg/L；蔗糖5～15mg/L；中性粒 细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的纳米微球 20～50mg/L；防腐剂0.01～0.05g/L；其中，试剂 R2中组分浓度为组分在试剂中的终浓度，且所述 试剂R1的pH值为6.5～7.5。本发明提供的中性粒 细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，检测 灵敏度高。权利要求书2页 说明书7页CN 110133276 A 2019.08.16 C N 110133276 A
人体白细胞的种类和功能
人体白细胞的种类和功能 人体内白细胞为无色有核细胞，在血液中呈球形，它能以变形运动穿过毛细血管壁，进入结缔组织。正常5000—10000/mm3。 一、种类及特点 根据细胞质和细胞核的染色特点，可把白细胞分为两大类： 有颗粒白细胞：嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞 无颗粒白细胞：淋巴细胞，单核细胞 正常时各种白细胞数目保持一定比例，称为白细胞分类计数，正常情况下数目如下： 疾病状况下，白细胞总数和分类计数都可发生改变。 二、白细胞的功能 ①中性粒细胞白细胞 : 吞噬和消化侵入微生物和机体本身的各种坏死细 胞,包括衰老和受损红细胞.是机体防御功能重要组成部分。细胞内溶酶体丰富，并做变形运动。 中性粒细胞可通过变形运动渗出毛细血管壁进入组织液,在组织液内游走(趋化性)。如果白细胞的的溶酶体释放的酶量过多，不仅能杀死和溶解细菌，本身也将致死，死亡的白细胞连同细菌分解物一起成为浓液组成部分。 ②嗜酸性粒细胞：能限制嗜碱性粒细胞和肥大细胞中的活性物质的合成和释放；当机体患某些过敏性疾病时，嗜酸性粒细胞数量增多，有人认为她和机体的过敏性反应有关。 ③嗜碱性粒细胞：含有多种生物活性物质，与肥大细胞相似，细胞颗粒中能合成组织胺和过敏性慢作用物质。
组织胺：使小动脉和毛细血管扩张，并使毛细血管和微静脉通透性增加，与人过敏反应有关。 过敏性慢作用物质：可使血管通透性增加，并使平滑肌收缩，特别是使支气管和细支气管的平滑肌收缩，从而引起哮喘。总括起来嗜碱性粒细胞所释放的活性物质可引起哮喘，寻麻疹，食物过敏等各种反应，同时又引起嗜碱性粒细胞聚集这一局部。 ④淋巴细胞：具有免疫功能 T细胞：骨髓中生成的淋巴系干细胞在胸腺中发育成熟，参与细胞免疫。血液中 80-90% 淋巴细胞属于T淋巴细胞。 B细胞：造血干细胞在骨髓中分裂分化成B细胞，多集中在淋巴结等淋巴器官中。参与体液免疫—抗体免疫。 ⑤单核细胞：从血管进入组织后，便分化成巨噬细胞，吞噬细菌和病毒等 三、白细胞测定临床意义 （一）白细胞增加：外周血液中白细胞数超过10×109/L称为白细胞增多症。白细胞增多可以是中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞增多。临床常见为淋巴细胞增多症。 1、中性粒细胞增多症 生理性：如饭后和剧烈运动后；冷水浴后及极度恐惧和疼痛后等、妇女经期及妊娠等。 病理性： （1）急性感染：某些细菌（葡萄球菌、肺炎球菌等）病毒（水痘病毒、狂犬病毒）引起的感染； （2）非感染性炎症，如急性风湿热、少年型类风湿关节炎等 （3）组织坏死：严重外伤、手术创伤、烧伤等。 （4）急性失血及贫血 （5）急性中毒：如化学毒物及药物中毒、尿毒症等。 （6）粒细胞异常增生：急性粒细胞白血病，骨髓增生性疾病 （7）其他：如脾脏切除后。 2、嗜酸性粒细胞增多症 外周血中嗜酸性粒细胞绝对值超过0.45×109/L,称为嗜酸性粒细胞增多症. 嗜酸性粒细胞增多常与许多疾病有关，特别是寄生虫感染和过敏性疾病。 ３、白血病 是骨髓和其他造血组织中原始和幼稚细胞异常增生的一种恶性疾病。临床表 现贫血、出血、感染及白血病细胞侵润机体各组织、器官所产生的相应表现。 ⑴病因： 病毒：人类T细胞白血病，已肯定是由人T细胞病毒-Ⅰ引起的 放射性核素：其致白血病的作用是肯定的，其作用与照射剂量的大 小和部位有关 化学因素：（如烷化剂、细胞毒药物）及化学毒物（苯）可诱发 遗传因素：家族性白血病约占7%。 其他血液病：骨髓增生性疾病、淋巴瘤等最终可发展为急性白血病。 ⑵分类： 按病程缓急及白细胞分化程度可分为 急性白血病：起病急，自然病程约半年以内。骨髓中以原始和早期幼稚细 胞增生为主，正常造血受到抑制的恶性疾病。成人以急性粒细胞白血病多见，儿童以急性淋巴细胞较多见。临床表现主要为贫血、出血、继发感染发热及白血病细胞侵润
明胶酶谱分析法
明胶酶谱分析法 一。用品 1.细胞培养或者提取组织 2.试剂的配制 （1）配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml 明胶） A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大下确定配制胶的量）10% SDS聚丙烯酰胺凝胶5ml（包括） ddH2o 1.5ml 15ml 30%储备胶（0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺）1.65ml 4.95ml 1.5mol/l Tris（PH 8.8）1.25ml 3.75ml 10% SDS 50ul 150 ul 10%过硫酸铵50ul 150 ul TEMED 4ul 12 ul 1%明胶0.5ml 1.5 ml B.浓缩胶的配制 浓缩胶3ml ddH2o 2.1ml 6.3ml 30%储备胶0.5ml 1.5ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.38ml 1.14ml 10% SDS 30ul 90 ul 10%过硫酸铵30ul 90 ul TEMED 3ul 9 ul （3）5×Tris –甘氨酸电极缓冲液 0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3） （4）4 ×上样缓冲液 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS（PH7.2）8ml 16%甘油3.2 ml 溴酚蓝0.024g ddH2o 2.4ml (5) 洗脱液:2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris -HCl ，5mmol/L CaCl2，1μmol/L ZnCl2，pH7. 6 漂洗液；50mmol/L Tris -HCl，5mmol/L CaCl2，1μmol/L ZnCl2，pH7. 6 （7）孵育液：50mmol/L Tris - HCl , 5mmol/ CaCl2 , 1μmol/L ZnCl2, 0. 02% Brij-35 ,pH7.6 （8）染色液：0.05% Coomassic 亮蓝R-250，30%甲醇，10%乙酸
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白参考值范围确定资料
转铁蛋白（TRF）测定试剂盒（免疫比浊法） 参考值范围确定资料 深圳市锦瑞电子有限公司
转铁蛋白（TRF）测定试剂盒（免疫比浊法） 参考值范围确定资料 转铁蛋白(Transferrin，TRF，TF，又称为铁传递蛋白、血清运铁蛋白、运铁蛋白、嗜铁蛋白、铁糖蛋白)是一种重要的β-球蛋白，是脊椎动物体内铁的运输者。转铁蛋白是体液中不可缺少的成分，不仅参与铁的运输与代谢，参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节，还能调节铁离子平衡和能量平衡，更具有抗菌杀菌的保护功能，因而转铁蛋白具有较全面的蛋白质生理功能。转铁蛋白的主要生理功能是把铁离子从吸收和储存的地方运输到红细胞供合成血红蛋白用，或输送到机体的其他需铁部位。 转铁蛋白(transferring，TRF)作为一种特殊的蛋白, 已被广泛应用于临床。血清TRF测定可用于贫血的诊断及治疗的监测。血清TRF升高的最常见原因是缺铁性贫血，研究发现血清铁降低，TRF升高可产生在贫血发生之前。目前，血清TRF测定已普遍应用于贫血的诊断和对治疗的监测。血清TRF测定还有助于肝、肾疾病的病情观察和预后判断。近年研究表明，TRF主要在肝脏内合成，反过来又可促进肝细胞的再生，故肝脏发生病变，血清TRF含量降低，且与病情的严重程度一致。 1. 材料和方法 1.1 对象 2011年9－12月到深圳市蛇口人民医院的体检人员，涉及人群有干部、工人、学生、公司职员和医院职工等，对肝肾功能、血脂、血尿常规各项检测指标正常，血压、B超、心电图、X光透视心肺正常的人员。按性别分为两组，每组各120个参考值数据。 1.2 仪器与试剂 采用锦瑞电子有限公司的全自动生化分析仪GS400，试剂为本公司生产的液体双试剂，转铁蛋白（TRF）采用免疫比浊法。校准品和两水平值的质控品均为RANDOX生产，校准品为CAL2350复合定标液，批号为685UN；质控为HN1530和HN1532，批号分别为621UN、434UN。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求北京赛诺浦
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：用于体外定量测定人体血浆和尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。 1.1 试剂盒包装规格 试剂1：1×20mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×60mL，试剂2：2×15mL； 试剂1：3×40mL，试剂2：3×10mL；试剂1：4×60mL，试剂2：4×15mL； 试剂1：2×400mL，试剂2：1×200mL；试剂1：2×40mL，试剂2：2×10mL。 校准品（选配）：6×0.5mL（六水平）；6×1mL（六水平）；6×3mL （六水平）。 质控品（选配）：1×0.5mL；1×1mL；1×3mL。 1.2 试剂盒主要组成成分 注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。
2.1 外观 试剂1：无色至淡黄色澄清液体；试剂2：乳白色液体。 校准品：无色至淡黄色澄清液体。 质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 在37℃、546 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度范围应在(0.3，2.0)之间。 2.4 分析灵敏度 测定浓度在150ng/mL附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.005。 2.5 线性 在（50，2500）ng/mL范围内：线性相关系数r不小于0.990；在[500，2500）ng/mL范围内，线性相对偏差应不大于±15%；（50，500）ng/mL范围内，线性绝对偏差应不大于±75ng/mL。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于10%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于15%。 2.8 准确度 与已上市产品进行比对试验，在（50，2500）ng/mL范围内，线性相关系数r不小于0.975。在（50，500]ng/mL区间内线性绝对偏差不大于± 75ng/mL；在（500，2500)ng/mL区间内线性相对偏差不大于±15%。 2.9 质控品赋值有效性 测定结果在靶值范围内。 2.10 校准品溯源性
明胶酶谱法操作
明胶酶谱法操作 明胶酶谱法 原理： 酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含 0.1％明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品 中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶， 最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带， 条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。 复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（最好是放在摇床上摇，30min／次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的。）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs恢复了活性。 试剂的配制 （1）配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml 明胶，配好后1周内使用，明胶含量低灵敏度高） A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大小确定配制胶的量） 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶10ml（包括） ddH2O 4.5ml 30%储备胶（0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺）2ml 1.5mol/l Tris（PH 8.8） 2.5ml 10% SDS 100ul 10%过硫酸铵（APS）100ul TEMED 8ul 1%明胶（1g明胶-->100ml，37°C水浴溶解）0.5ml
B.浓缩胶的配制 浓缩胶6ml ddH2O 4.5ml 30%储备胶0.75ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.76ml 10% SDS 60ul 10%过硫酸铵60ul TEMED 6ul （3）5×Tris –甘氨酸电极缓冲液 0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3） （4）4 ×上样缓冲液 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS（PH7.2）8ml 16%甘油3.2 ml 溴酚蓝0.024g ddH2O 2.4ml (5)洗脱液:2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris-HCl<6.057g/L> ，5mmol/L CaCl2<0.5549g/L>，pH7. 6 （40分钟两次，中间换液） （6）漂洗液：50mmol/L Tris-HCl，5mmol/L CaCl2，pH7. 6 （20分钟2次） （7）孵育液：50mmol/LTris,pH7.5,150mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,0.02%NaN3（孵育42小时） （8）染色液：0.05% Coomassic 亮蓝R-250，30%甲醇，10%乙酸（染色3小时） （9）脱色液A、B、C：甲醇浓度分别为30%、20%、10 % ,乙酸浓度分别为10 %、10 %、5% （分别30min、1h、2h脱色）
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求普迈德
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（胶体金免疫层析法） 适用范围：本测定试剂盒用于体外定量测定人血清、血浆、全血或尿液样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。 1.1 包装规格 10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。 1.2 主要组成组分 每盒含10/20/50人份试纸条、样品缓冲液（0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液，pH 值7.0）和标曲信息卡（二维码）。每人份试纸条配套1份检测卡、1套取样滴管（选配）和1包干燥剂。检测卡由样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体；C线包被羊抗鼠多克隆抗体）、金标垫（包被胶体金标记的鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体）、吸水纸、塑料载板组成。 2.1 物理性状 2.1.1 外观 测定试剂应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。 2.1.2 膜条宽度 测定试剂的膜条宽度≥2.5mm。 2.1.3 液体移行速度 液体移行速度应不低于10mm/min。 2.2 空白限 空白限应不高于50ng/mL。
2.3 精密度 2.3.1 批内精密度 批内精密度CV(%）应不高于12.0%。 2.3.2 批间精密度 批间精密度R(%）应不高于15.0%。 2.4 线性 在[50，1500]ng/mL的范围内，线性相关系数应不低于0.990。 2.5 准确度 回收率应在85%～115%之间。 2.6 分析特异性 含浓度不低于35mg/mL白蛋白的零浓度中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白样本，检测结果不高于50ng/mL。 2.7 稳定性 将测定试剂在4℃～30℃的环境中放置18个月后，取样分别检测2.1、2.2、2.3.1、2.4、2.5、2.6项，结果应符合各项目的要求。 2.8 校准品溯源性 按照GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定建立溯源性，提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至公司内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。
凝胶电泳
凝胶电泳
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论文题目：凝胶电泳 专业：化学 年级：10级 学号：10101550203 姓名：马慧 摘要 凝胶电泳（Gel electrophoresis）或称胶体电泳，也可称为扁平式电泳法，是一大类技术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如大小、形状、等电点等）的分子。它是以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法。凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法，如质谱、聚合酶链式反应、克隆、DNA测序或者 免疫印迹检测之前，进行部分提纯分子。通过学习，了 解凝胶电泳的类别、原理、特点及其应用范围。 关键词：制备，类别，定义，原理，特点，应用范围 正文 一、凝胶制备 1、设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris?HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris?HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/L EDTA）。 2、凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5μg/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋(NGAL)
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 一、临床适应症背景情况 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。早期急性肾损伤、慢性肾病、心肾综合症等疾病血清和尿液中NGAL会显著升高，且其水平监测对病情轻重、疗效及预后判断具有较好的诊断价值。临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等。胶乳增强免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。 肾脏损伤约占所有泌尿生殖道损伤的65%左右。急性肾损伤是一组临床综合征，是指突发(1-7d 内)和持续(>24h)的肾功能突然下降，定义为血清肌酐至少上升0.5mg/dl 1，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡以及全身各系统症状，可伴有少尿（<400ml/24h或17ml/h）或无尿（<100ml/24h）。肾病的发病迁延难愈，时间超过三个月，病人尿液和相关的血液指标出现异常，肾脏病理学、影像学发现异常，或肾脏的肾小球有效滤过率低于60%，都可统称为“慢性肾病”。慢性肾病如未能及时有效救治，导致病情恶化进展，则随病程迁延，慢性肾病患者将发展成为慢性肾功能不全、肾衰竭，最终形成尿毒症。心肾综合征（cardio-renalsyndrome，CRS)即心脏或肾脏对另一器官的损害不能代偿时，互为因果,形成恶性循环，最终加速心脏和肾脏功能的共同损害和衰竭。其发病率、死亡率高，给社会和患者带来沉重的负担。目前对心肾综合征的认识有限，缺乏有效的治疗措施，是临床处理的难题。 早期诊断急性肾功能损伤时血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2h最为明显( 比临界值升十至几百倍)，血清肌酐、尿酶等传统指标往往要在24～72h才后明显升高，因而NGAL可用于急性肾功能损伤的早期诊断。监测病情进展NGAL还可以反映肾功能损伤的严重程度。评估预NGAL可作为急性肾功能损伤的预后指标之一。研究发现，慢性肾病患者的血清、尿NGAL水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率呈密切负相关，而血清肌酐与肾小球滤过率的关联程度不及NGAL。因此，慢性肾病患者NGAL水平不仅是优于血清肌酐反映肾小球滤过率下降的指标，更是评价慢性肾病患者肾脏损伤程度的标志物。心肾综合征是一种心脏和肾脏的病理生理紊乱，即由一个器官的功能不全导致的另一个器官的功能不全，死亡率高，共分为5 个类型。研究发现血NGAL诊断1型心肾综合征时，敏感性和特异性分别为100%、86.7%。因此，作为肾损伤的早期诊断指标，密切监测NGAL水平，有利于临床医生正确评价心肾综合征中的肾功能损伤程度，并及时采取干预治疗，减少并发症的发生。 3.相关的临床或试验室诊断方法 目前临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等. 乳胶增强免疫比浊法具有操作简单，可在几分钟内快速、准确地检测血清蛋白含量，真实反映病情进展和评估治疗效果，对于疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义；不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和重复性都很好；能利用普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用等优点。 二、描述 1.技术原理 采用兔抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体致敏的胶乳颗粒，与待测样本中中性粒细
中性粒细胞)
2．吞噬和杀菌功能测定 1）原理中性粒细胞可吞噬颗粒性物质（如金黄色葡萄球菌），根据吞噬率(phagocytic rate) 和吞噬指数(phagocytic index)可判断该细胞的吞噬功能，根据被吞噬的细菌是否着色测定杀菌率。 2）技术要点 （1）显微镜检查法将白细胞与葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合、温育后，涂片用碱性美兰液染色。在油镜下计数吞噬细菌和未吞噬细菌的白细胞数。对有吞噬作用的白细胞，应同时记录所吞噬的细菌数。按下式计算吞噬率和吞噬指数。还可根据被吞噬的细菌是否着色测定杀菌率(%)。 吞噬百分率（%）= 吞噬指数= 杀菌率（%）= （2）溶菌法将白细胞悬液与经新鲜人血清调理过的细菌（大肠杆菌或金黄色葡萄球菌）按一定比例混合后，置37℃。每隔一定时间取定量培养物，稀释后接种固体平板培养基。37℃培养18h后，计数生长菌落数，以了解中性粒细胞的杀菌能力。 杀菌率（%）= 3.硝基蓝四氮唑还原能力测定 1）原理 中性粒细胞在杀菌过程中，能量消耗剧增，耗氧量也随之增相应增加，磷酸己糖旁路的代谢活性增强，6-磷酸葡萄糖脱氢酶使葡萄糖的中间代谢产物6-磷酸葡萄糖氧化脱氢转变为戊糖。如加入硝基蓝四氮唑(nitroblue tetrazolium，NBT)，可被吞噬或渗透到中性粒细胞胞浆中，接受所脱的氢，使原来呈淡黄色的NBT还原成点状或块状的蓝黑色甲月替颗粒，沉积于中性粒细胞胞浆中，称NBT阳性细胞。NBT阳性细胞百分率可反映中性粒细胞杀菌功能2）技术要点 将肝素抗凝血加入等量的NBT应用液，孵育。取1滴推片，染色，计数NBT阳性细胞，计算NBT阳性细胞百分率。 3）方法评价此法主要用于检测02的产生能力。正常值为40%～50%，一般以阳性细胞数超过10% 判定为NBT试验阳性。 4．化学发光测定法 中性粒细胞在吞噬经调理的葡萄球菌过程中，出现呼吸爆发，产生的活性氧化代谢产物（如O2-、OH-、H2O2等）可激活化学发光剂鲁米诺(luminol)类物质，并使之产生化学发光(chemiluminescence)，发光量与中性粒细胞的杀菌能力相关。 化学发光测定法样品用量少、操作简便快速，是氧化爆发检测中最为敏感，并可直接定量的方法。
Gel Zymography 明胶酶谱法
明胶酶谱法原理：酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺 （SDS-PAGE，含0.1％明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2（基质金属蛋白酶-2）和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。 复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（最好是放在摇床上摇，30min／次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs 恢复了活性。 试剂的配制 (1)配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml明胶，配好后1周内使用，明胶含量低灵敏度高） A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大小确定配制胶的量）10% SDS聚丙烯酰胺凝胶 10ml（包括） ddH2O 4.5ml 30%储备胶（0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺）2ml 1.5mol/l Tris（PH 8.8） 2.5ml 10% SDS100ul 10%过硫酸铵（APS）100ul TEMED8ul 1%明胶（1g明胶-->100ml，37°C水浴溶解）0.5ml B.浓缩胶的配制 浓缩胶6ml ddH2O 4.5ml 30%储备胶0.75ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8)0.76ml 10% SDS60ul 10%过硫酸铵60ul TEMED6ul (2)5×Tris –甘氨酸电极缓冲液 0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3） (3)4 ×上样缓冲液 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS（PH7.2）8ml 16%甘油 3.2 ml