双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究
双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究
发表时间：2016-04-12T11:49:43.363Z 来源：《系统医学》2016年第2期作者：汤婷苏望宁王婷郭迅依范朝彪曾灿[导读] 长沙医学院双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。
长沙医学院湖南长沙 410219
【摘要】目的：探讨不同剂量双酚A(bisphend A，BPA)对雄性小鼠的生殖毒性的影响。方法：选取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后颈椎脱臼处死，观察精子形态，精子畸形率，精子活度，睾丸切片。结果：双酚A实验组，其中附睾脏器系数，精子畸形率，精子活度指标随着剂量的升高而呈正相关，具有一定的对比性。HE染色得出结果显示双酚A实验组小鼠附睾有损伤，生精小管出现坏死。结论：一定剂量的双酚A对雄性小鼠精子有生殖毒性。
【关键词】BPA；生殖毒性；雄性小鼠
【中图分类号】R114【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-067-02
双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。日常生活中人们可以通过饮食摄入、灰尘吸入和皮肤接触BPA[1-2]。在人的血液、尿液、胎盘、乳汁、羊水及其他体液等组织中能检测到BPA[3]。BPA是一种环境内分泌干扰物[4]，能够模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合，干扰体内天然激素的正常活动，即使是极低剂量也能对生物体的生殖、神经、免疫等功能产生影响[5-6]。本实验旨在通过研究BPA对雄性小鼠的生殖毒性，试分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效关系，探讨BPA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用机制。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
BPA，分析纯，中国上海化工试剂公司，生产编号B108652；
玉米油，药用级，中国上海化工试剂公司，生产编号C116025；
显微镜(Unican)HV2818，生产编号30108453；
电子分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）。
1.2 实验动物
选用湖南省疾控实验动物中心提供的普通级封闭群，KM群雄性小鼠，体重18g到22g，随机分成对照组，BPA低剂量组、BPA高剂量组。分别记为C组，B低剂量组、B高剂量组，每组3只动物，对照组采用玉米油做空白对照，BAF低组染毒剂量为50mg/kg BW, BAF高组剂量为200mg/kg BW。
1.3 实验方法
1.3.1形态学观察计算精子活动率、精子畸形率。
精子活动率：采用伊红染色法，将0.5g伊红Y染料溶于100mL等渗盐水中配成染色液。计数100条精子，计数的精子所占比例即为精子活动率。
精子活动率=活精子数/100
精子畸形率：取一侧附睾置于5 mL生理盐水中，剪碎，37 ℃孵育 15-20 min 后，制得精子悬液。每只动物检查1000 只精子，计算精子畸形率。
畸形率=畸形精子数/1000
1.3.2脏器系数迅速取出实验小鼠睾丸和附睾, 去除周围的脂肪组织和结缔组织，准确称量小鼠双侧睾丸和附睾的重量。脏器系数(%)=脏器体重(g)/小鼠体重(g)×100%
1.3.3形态学观察常规 HE 染色，石蜡切片，光学显微镜观察。
以上睾丸病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。
1.4 统计方法
所有实验数据均应用SPSS18.0统计软件录入分析，实验组和对照组数据采用方差分析和LSD法进行比较。
2 结果
2.1 一般情况
染毒后，低剂量小组实验小鼠体重有上升，高剂量组小鼠出现活动量减少，精神萎靡，进食量也有不同程度减少，停止染毒后逐渐好转；整个实验过程中高剂量组小鼠死亡 1 只。
2.2 BPA染毒对成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影响
BPA染毒各组小鼠的精子活动率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，精子畸形率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，附睾的脏器系数与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，结果见下表。
表BAF染毒对精子活动率, 精子畸形率,睾丸附睾脏器系数的影响(±s)
砷的生殖毒性研究现状综述
砷的生殖毒性研究现状综述 作者：刘化一来源：中国知网维普网学号：2012515146 【摘要】：本文综述了砷对生殖发育功能的影响, 其中包括砷对生殖细胞的影响、砷对胚胎发育的影响。总结了砷的胚胎毒性作用机制，以及对砷中毒拮抗作用的物质的总述。 【关键词】：砷生殖毒性拮抗 【引言】：砷是一种环境毒物, 其对人畜的健康是有损害的，对生殖毒性也是不可忽视的。最近几年学者们对砷的生殖毒性研究进行了广泛而深入的研究。对砷的胚胎毒性作用有了一定了解。最近几年更多关注的是对砷的拮抗物质的研究，本文对这种拮抗作用也做一定综述。 1、砷对生殖细胞的影响及机制 环境雌激素（ESS）广泛存在于自然界中其种类繁多，其种类繁多，表现出拟天然激素或抗天然激素的作用，，ESS对人类生殖健康的威胁备受关注，有研究认为砷化物是一类潜在的环境雌激素物质。[1] 1.1砷对雄性生殖细胞的影响及机制 早期，砷的生殖发育毒性大多关注于雌性。近年来，砷暴露引起雄性生殖毒性也引起了广泛关注.越来越多的研究表明，许多生产生活中接触到的化学物质(包括砷在内)均可以损害男性生殖健康.环境内分泌十扰物对雌激素、皇丸酮、甲状腺激素等有显著影响，可导致代谢紊乱、生殖障碍，婴儿出生缺陷和发育异常以及某些恶性肿瘤的发生。[2] 普通环境条件下,砷暴露和男性精子质量存在一定的相关性. 结果显示血液中总砷含量与精子运动能力呈显著负相关.[3]聂继盛等人调查了饮水型砷暴露对男性精液质量的影响.结果表明,接触组(暴露剂量0.05~0.20 mg/L)人群血砷和精液砷含量 增高,且二者具有很强的相关性,说明砷可通过血睾屏障对男性生殖细胞产生损害. 精液质量参数表明,接触组人群精子活率、A 级精子百分率及顶体完整率显著低于对照组,精子畸形率高于对照组;且精液中砷含量与以上参数均具有显著相关性.[4]砷对精子活率、活力及正常形态都有损害，但对精子密度未见影响。砷是一种细胞
玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用_董双_何剑斌_张燚_龙淼
董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29 Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用 董双，何剑斌*，张燚，龙淼* （沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866） 摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。 关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质 中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05 Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice DONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi （College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China） Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function． Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone 玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还 收稿日期：2015－06－30 基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152） 作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@https://www.360docs.net/doc/fc6794735.html,；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@https://www.360docs.net/doc/fc6794735.html, 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。 ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质
人类生殖
人类生殖 课堂讨论 一、A型题（1～20） 1. 精子和卵子的形成过程称为( C ) A.无性生殖 B.有性生殖 C.配子发生 D.受精 E.成熟分裂 2. 在人卵子发生中，直到性成熟排卵前，初级卵母细胞停留在( D ) A.第一次减数分裂前期中的细线期 B.第一次减数分裂前期中的偶线期 C.第一次减数分裂前期中的粗线期 D.第一次减数分裂前期中的双线期 E.第一次减数分裂前期中的终变期 3. 配子发生过程中，DNA复制发生在减数分裂的(E ) A.偶线期 B.双线期 C.粗线期 D.前期II E.都不是 注:间期 4. 性成熟后，每月有一个卵泡发育成熟并排出一个( B ) A.初级卵母细胞 B.次级卵母细胞 C.卵原细胞 D.卵细胞 E.都不是 5. 直到受精前，次级卵母细胞处于( D ) A.第一次减数分裂中期 B.第一次减数分裂后期 C.第一次减数分裂末期 D.第二次减数分裂中期 E.第二次减数分裂后期 6. 在人卵子发生中，第二次减数分裂完成是在( C ) A.精卵受精前 B.精卵受精的一瞬间 C.精卵受精后，暴露出第二极体时 D.雌雄原核形成时 E.第一次卵裂时 7. 一个初级卵母细胞经过两次减数分裂形成( D ) A. 4个卵细胞 B. 3个卵细胞和1个极体 C. 2个卵细胞和2个极体 D. 1个卵细胞和3个极体 E. 4个极体 8. 精子是在( B )中发育成熟的 A.睾丸 B.附睾 C.精囊 D.输精管 E.射精管 9. 正常情况下，精子与卵子受精发生在( B ) A.卵巢 B.输卵管壶腹部 C.输卵管峡部 D.子宫 E.阴道穹窿 10.精浆中含有某些抗受精因子，系精囊腺产生的某些低分子量多肽和高分子量糖蛋白，它们称为( B ) A.顶体素 B.去能因子 C.获能因子 D.过渡性蛋白质（transitional proteins） E.顶体蛋白酶 11.减数分裂是配子发生( C )中进行的两次连续的分裂 A.增殖期 B.生长期 C.成熟期 D.变形期 E.都不是 12.交叉是在( B )形成的 A.二价体的姐妹染色单体之间 B.二价体的非姐妹染色单体之间 C.二分体的姐妹染色单体之间 D.四分体的姐妹染色单体之间 E.其他染色体之间 13.精子靠近或与卵的外围屏障接触时，覆盖在顶体表面的细胞膜与顶体外膜多处发生融合并释放出多种酶系，这一过程称为( B )
海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用
海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮 抗作用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：覃淑云，秦小云，张树球，方晓燕 【摘要】目的探讨海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用。方法取健康昆明雄性小白鼠，随机分为对照组、染铅组、治疗组3个实验组，进行醋酸铅染毒亚慢性毒性实验，治疗组用海尔福进行治疗。结果醋酸铅染毒组雄性小鼠的生殖腺有不同程度的病理学改变，精子计数、直线运动精子数、活精子率下降，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率升高；海尔福治疗组小鼠的生殖腺病理学改变有不同程度的改善，精子计数、直线运动精子数、活精子率有所升高，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率有所降低。结论海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性有拮抗作用。 【关键词】海尔福；铅中毒；生殖毒性；诱变力试验；小鼠Abstract: Objective To explore Haierfu syrup in protection against lead poisoning on genital gland in male mice. Methods
Kunming male mice were randomly divided into control group, lead poisoning group and therapeutic group. Sub-chronic toxicity test was performed with lead acetate poisoning. The therapeutic group was given Haierfu syrup. Results In lead poisoning group, the pathological changes in genital glands of mice were obtained; sperm count, linear movement sperm and live sperm rate decreased; the elevated motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate were found. In Haierfu group, the pathological changes in genital glands of mice ameliated to different degree, sperm count, linear movement sperm and live sperm rate elevated, and motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate decreased. Conclusion Haierfu syrup can prevent genital glands of male mice from lead poisoning. Key words: Haierfu syrup; lead poisoning; genital toxicity; mutagenicity tests; mice 铅是一种对人体有害的重金属元素，普遍存在于自然界中。环境中的生活性铅污染也很严重，铅对健康的影响已成为相当突出的社会问题。铅对健康的影响是多方面的，铅对雄性睾丸和附睾的毒性也得到了公认，人们对铅损害生殖腺的研究较多，但对用于干预铅损害生殖腺的研究报道较少，笔者通过观察海尔福对铅致小鼠性腺毒性的
PUF蛋白在小鼠雄性生殖细胞及人肿瘤细胞增殖中的功能研究
PUF蛋白在小鼠雄性生殖细胞及人肿瘤细胞增殖中的功能研究最近研究发现,RNA结合蛋白可能在动物发育过程和细胞增殖分化过程中发挥了重要的作用,但是多数RNA结合蛋白的作用尚有待发现。 PUF(Pumilio-Fem3-binding factor)蛋白家族是真核生物RNA结合蛋白家族中高度保守的一类,它们在低等动物中主要对基因表达起负性调控的作用。PUF蛋白可以通过Pumilio的同源结构域去结合目标mRNA的3’UTR(3’Untranslated Region)上高度特异性序列,最终导致mRNA降解和翻译水平的降低。 PUF家族蛋白广泛分布于真核生物,从酵母、线虫、果蝇到小鼠和人均存在同源基因。在果蝇和线虫中它们被发现在生殖细胞发育过程起重要作用,比如原始生殖细胞的增殖和迁移,生殖干细胞的自我更新等等。人和其他哺乳动物主要存在两种PUM蛋白,即PUMILIO1(PUMI)和PUMILI02(PUM2),它们在人和其他哺乳动物中的功能还不清楚。 尤其是它们是否像在果蝇、线虫中一样参与生殖细胞的发育和干细胞的维持还尚无报道。有研究表明,Puml或者Pum2基因敲除小鼠仍然存在生育能力;但是我们课题组前期发现两个基因同时缺失会导致胚胎致死,这对研究它们在哺乳动物精子发生过程中的作用造成了极大的困难。我们实验室前期通过生殖细胞特异性Cre(Vasa-cre和Stra8-cre)工具鼠构建了 Pum基因条件性敲除小鼠,可以使其分别在特定时间点将睾丸生殖细胞中的Pum蛋白敲除。 通过对这两种条件性敲除小鼠的表型进行分析发现,它们的睾丸显著小于对照组睾丸,并且不育。与此同时,在出生后6天时,这种睾丸的重量差异就已经变得非常显著了,这说明PUM很有可能在早期生殖细胞的发育过程中起着重要的作用。为了解释Pum基因条件性双敲小鼠的不育原因,我们首先对其进行了组织学
生殖细胞表观遗传研究获新进展
生殖细胞表观遗传研究获新进展 发表时间：2015-08-13T09:15:06.927Z 来源：《医药前沿》2015年第19期供稿作者：[导读] 人类原始生殖细胞是发育为成熟的精子和卵细胞的前体细胞。 国际权威学术期刊《细胞》以封面文章的形式，发表了北京大学乔杰、汤富酬研究团队的研究成果——人类原始生殖细胞的转录组和DNA 甲基化组景观图。该项成果为探究人类生殖细胞表观遗传重编程、DNA甲基化隔代遗传及干细胞向精卵定向分化等问题提供了理论基础，对开展辅助生殖技术安全性评估、疾病对后代影响评价等研究具有重要意义。 据介绍，DNA甲基化是重要的表观遗传修饰方式，它不改变基因序列和功能，但能够通过改变染色质结构、DNA构象、DNA稳定性等，控制基因表达，影响胚胎发育、干细胞分化甚至癌症的发生。换句话说，我们从祖先那里获得的DNA只是遗传的基础，而基因如何表达，例如我们的眼睛和头发颜色更像爸爸还是妈妈，则有赖于DNA甲基化的调控。 人类原始生殖细胞是发育为成熟的精子和卵细胞的前体细胞。人类胚胎在发育过程中有两轮大规模的DNA甲基化组重编程发生：第一轮发生在受精后的植入前胚胎中，第二轮发生在植入后的生殖细胞中。2014年，该课题组首先报告了人类植入前胚胎DNA甲基化特征，相关成果发表在《自然》杂志上。 此次，研究团队对人类胚胎中第二轮DNA甲基化组重编程过程及其对基因表达网络的调控关系进行了分析。该研究主要取得5个重要进展。 首先，在基因表达特征方面，处于发育早期阶段的人类原始生殖细胞与小鼠原始生殖细胞类似，印证了用小鼠作为模式动物研究原始生殖细胞发育过程的重要性。与小鼠不同的是，人类原始生殖细胞并不表达关键的转录因子基因SOX2，而表达SOX家族另两个基因SOX15和SOX17。其次，关于X染色体重新激活，在人类植入后的雌性胚胎中，每个细胞两条X染色体中的1条会随机失活，以保持两性的X染色体剂量相同。研究团队发现，在发育到第4周的人类雌性胚胎的生殖细胞中，失活的X染色体已经完成了重新激活，明显早于小鼠。三是人类原始生殖细胞会经历大规模的DNA甲基化擦除，并且在发育到第10周～11周时，DNA甲基化水平会从植入后早期胚胎中的92%降低到7%左右，达到最低点。四是包括微卫星序列ALR在内的一些重复序列元件，其DNA甲基化不会被完全擦除，为人类隔代遗传现象的表观遗传学分析提供了有用线索。五是在如此大规模的DNA甲基化组重编程过程中，转录组水平的基因表达网络保持了高度稳定，提示表观遗传调控的其他关键组分特别是组蛋白的各种共价修饰，在这一过程可能起了关键作用。
PIWI-piRNA“机器”与雄性生殖细胞发育
收稿日期：2014-07-14 *通信作者：E-mail: mfliu@https://www.360docs.net/doc/fc6794735.html, PIWI/piRNA “机器”与雄性生殖细胞发育 戴 鹏，苟兰涛，刘默芳* (中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室， 上海市分子男科学重点实验室，上海 200031) 摘要：PIWI (P-element-induced wimpy testis )蛋白在动物生殖系细胞中特异性表达，为动物生殖细胞发育分化所必需。piRNA (PIWI-interacting RNAs )是最近在动物生殖系细胞中发现的一类非编码小分子RNA ，这类小RNA 特异性地与PIWI 家族蛋白相互作用。 PIWI/piRNA “机器”通过沉默转座元件和调控编码mRNA 等方式在动物生殖细胞发育分化过程中发挥重要作用。本文围绕PIWI/piRNA “机器”的生物学功能及分子机制，对近期取得的相关研究进展进行了系统性总结。关键词：PIWI ；piRNA ；转座元件；精子发生 PIWI/piRNA machinery in spermatogenesis DAI Peng, GOU Lantao, LIU Mofang * (State Key Laboratory of Molecular Biology, Shanghai Key Laboratory of Molecular Andrology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China) Abstract: PIWI proteins are specifically expressed in animal germ cells, and have been well demonstrated to be essential for germline development and gametogenesis. Recently, PIWI-interacting RNAs (piRNAs), a novel class of germ-cell-specific small noncoding RNAs, have been found associated with PIWI proteins. PIWI/piRNA machinery silence transposable elements and regulate the expression levels of mRNAs during 刘默芳，女，博士，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所研究员，博士生导师。2000年在中科院上海生化所获博士学位。2000年至2006年分别在美国国家健康研究院国立癌症研究所(NIH/NCI )、约翰霍浦金斯医学院从事博士后研究、研究助理工作。2006年起在中科院生化与细胞所工作。获得2013年度国家杰出青年科学基金和2006年度上海市“浦江人才计划”等支持。 刘默芳研究组从事非编码RNA 功能机制研究，主要围绕piRNA 与哺乳动物精子发生、microRNA 与人类癌症等开展较系统的探索。近期工作先后发现 小鼠piRNA 及其结合蛋白MIWI 在后期精子细胞中协同降解的调控机制(Dev Cell 2013)、小鼠粗线期piRNA 指导父本mRNA 在精子形成后期大规模降解 (Cell Res 2014)；同时还发现microRNA 在炎症相关肿瘤发生中具有极其重要的调控作用，是联系炎症-癌症的新介质因子(Cancer Res 2014；Cell Res 2014；EMBO J 2012；Cell Res 2012；Cancer Res 2010)。这些原创性研究成果揭示了小分子非编码RNA 的生理和病理功能机制, 可为男性不育症及肿瘤等疾病的诊治研究提供理论依据和相关基础。
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析
干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析 发表时间：2017-08-18T16:33:09.853Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：裴斯彪王丹李林彭贤东[导读] 综上所述，干姜人参半夏汤在治疗脾胃虚寒型妊娠恶阻时，可采用小剂量进行治疗，不会产生妊娠毒性。 （南充市中心医院<川北医学院第二临床学院> 四川南充 637000）【摘要】目的：分析干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的实验结果。方法：选取100只妊娠小鼠，将其随机分为4组，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，所有小鼠均是在孕后第6～17天进行灌胃，第18天处死，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况及胎仔外观。结果：低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照 组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05）；四组活胎率、死胎率及吸收胎率进行两两组间对比，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察胎仔发现高剂量组出现头盖骨变大腹部裂开等情况。结论：小剂量的干姜人参半夏汤不会对妊娠小鼠产生妊娠毒性，随着剂量增加，逐渐增加胚胎畸形的发生率。【关键词】干姜人参半夏汤；妊娠小鼠；生殖毒性【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0187-02 干姜人参半夏汤是由干姜、人参、半夏组成，其中半夏有“堕胎”的说法，现代药理证实，半夏有胚胎毒性，因此在治疗妊娠患者需慎用半夏[1]。但干姜人参半夏汤在发挥降逆功效时半夏发挥了重要作用。现笔者就干姜人参半夏汤对妊娠小鼠的生殖毒性进行实验研究，以便为孕期的安全用药提供理论依据。 1.资料与方法 1.1 实验材料 小鼠：选取性成熟清洁级小鼠150只，雌性小鼠100只，雄性小鼠50只，体质量平均（24.9±2.6）g，饲料为标准饲料。干姜人参半夏汤：依据金匮要略进行配置，干姜、生哂参各14g，生姜汁10滴，半夏28g，煎煮浓缩后保存于4℃的冰箱中备用。 1.2 实验方法 饲养条件：室温25℃，湿度40～70%，饲养标准鼠料，环境干燥清洁。确定妊娠：将2只雌性小鼠和1只雄性小鼠放置于一笼中，于每日9时检查雌性小鼠阴道口，如阴道口有阴栓，则将其取出，记录为受孕“0”天，分组饲养。 给药：随机将100只妊娠小鼠分为4组，空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，均于孕后第6天（胚胎器官形成期）开始灌胃给药，至第17天（器官形成），空白对照组采用等体积蒸馏水进行灌胃，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给药量为原方剂量、3倍原方剂量、6倍原方剂量。 1.3 观察指标 所有小鼠均于妊娠第18天处死，剪开腹壁，取出子宫，称重子宫及胎，切开子宫，取出胎仔，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况（死胎、活胎及吸收胎率）及胎仔外观。妊娠小鼠体质量增加=解剖体质量-受孕第“0”天体质量-子宫及胎质量。胎仔外观检查：检查头部是否器官完整、眼睛大小、是否有突眼等异常，是否露骨或脑膜膨出等；检查四肢是否多、并、少、无趾，有无足内外翻等畸形；检查躯干有无腹裂、脊髓膨出或裂开等；检查尾部是否短、卷、无尾或尾分叉等。 1.4 统计学分析 数据录入统计学软件SPSS 18.0，将计量资料（妊娠小鼠体质量及胎鼠体质量）、计数资料（死胎、活胎及吸收胎率）分别采用（x-±s）、（%）表示，并予以t检验、χ2检验，P≤0.05，差异有统计学意义。 2.结果 2.1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量 低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05），如表1所示。表1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量（x-±s）
常艳-生殖毒性试验中应该注意的问题
生殖发育毒性试验设计和实施中应注意的问题 国家上海新药安全评价研究中心 常艳 2009年11月成都
汇报提纲 1 生育力和早期胚胎发育毒性试验 2 胚胎-胎仔发育毒性试验 3 围产期毒性试验 4 疫苗的生殖毒性评价 15 SD需要注意的共性问题
参考指导原则 -[ZH]GPT1-1：药物生殖毒性研究技术指导原则 [ZH]GPT11药物生殖毒性研究技术指导原则 -OECD414. Prenatal development toxicity study -OECD415.One generation reproduction toxicity study OECD 415. One generation reproduction toxicity study -OECD416. Two generation reproduction toxicity study -OECD421. Reproduction-developmental toxicity screening test -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_a_ Guidelines for Reproduction Studies -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_b_ Guidelines for FDA CFSAN OPA Redbook2000IV C9b Guidelines for Developmental Toxicity Studies -ICH S5A Reproduction toxicology __p gy -ICH_S5B_Male fertility
第三章 人类的生殖和发育
第三章人类的生殖和发育 第一节婴儿的诞生教学案 (两课时） 主备人时间 【教学目标】 1.阐述男、女生殖系统的主要结构及其功能。 2.知道生殖细胞的特点及受精作用。 3.说出胚胎发育的大体过程及其营养的获得途径。 【教学重难点】 重点：阐述男、女生殖系统的主要结构及其功能。 难点：说出胚胎发育的大体过程及其营养的获得途径。 【教学过程】 【预习案】 探点一生殖系统的结构 一、自主学习 1.观察课本，男、女生殖系统的侧剖面，填写正剖面图。
男性生殖系统正剖图女性生殖系统正剖图 2.朗读课本，回答： （1）男性的主要性器官是，作用。 （2）女性的主要性器官是，作用。 （3）男、女生殖系统的其他部分各有什么作用？ （4）男性与女性生殖器官的差异称为。 二、合作互助 根据生殖系统的结构及作用，小组成员讨论回答： 1.男性产生并排出精子的路径是怎样的？ 2.女性产生并排出卵细胞的路径是怎样的？ 三、习题追踪 “太监”是古代宫廷中的一类特殊人群，他们由于被阉割了部分生殖器官，失去了生殖能力，声音也变得尖细，成为不男不女的阴阳人。请你推断一下，太监声音尖细主要是由于被割除了 ( ) A.阴茎 B.睾丸 C.附睾 D.前列腺 探点二受精作用 一、自主学习 朗读课本，第一、二自然段，回答： 1.受精作用是如何完成的？ 2.精子和卵细胞结合成受精卵的场所是在哪里？ 3.如果卵细胞没有受精，又会发生什么现象呢？ 探点三胚胎发育 一、自主学习 朗读课本，回答下列问题：
1.新生命诞生的标志是什么？ 2.受精卵开始进行细胞分裂的场所是哪里？ 3.什么是着床？ 4.胚胎发育到第几个周末，开始出现人形？ 5.人的一生大致要经过哪几个时期？ 三、习题追踪 下列哪项是胎儿从母体获得氧气和养料的正确途径 ( ) A．脐带→母体→胎盘→胎儿 B．母体→胎盘→脐带→胎儿 C．胎盘→母体→脐带→胎儿 D．母体→脐带→胎盘→胎儿 【检测案】 1.产生精子和卵细胞的器官分别是 ( ) A．输精管和输卵管B．睾丸和卵巢 C．前列腺和卵巢D．子宫和附睾 2.男性生殖系统中，主要的性器官是 ( ) A.阴茎 B.睾丸 C.输精管 D.附睾 3.人的受精作用一般发生在（）里： A.子宫 B.卵巢 C.阴道 D.输卵管 4.胎儿发育的场所是 ( ) A.子宫 B.卵巢 C.输卵管 D.阴道 5.胎儿与母体进行物质交换的结构是 ( ) A. 脐带 B. 胎盘 C. 胚盘 D. 输卵管 6.人类的新生命开始于 ( ) A．卵细胞的形成B．受精卵的形成 C．胚胎的形成D．婴儿的出生 7.男性输精管两侧被接扎后，生理表现为 ( ) A．不产生精子、外部形态特征改变 B．产生精子、不能将精子排出体外 C．不产生精子，能排出精液 D．产生精子，能将精子排出体外 8.既属于生殖系统，又属于内分泌系统的器官是 ( ) A．睾丸和卵巢 B．输卵管和输精管 C．子宫 D．睾丸 【教学反思】
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2 （1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871） 【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。 【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2 (1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China) 【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully. 【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检 [作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@https://www.360docs.net/doc/fc6794735.html, [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@https://www.360docs.net/doc/fc6794735.html,
第1章生殖细胞发生
第一章生殖细胞发生 一、本章重点 1．精子发生 2．卵子发生 二、本章难点 1．卵子发生 三、教学内容： 第一节生殖细胞发生 生殖细胞分化配子雄配子成体 受精合子 雌配子生殖细胞 在行有性生殖的动物中，配子发生是个体发育的前奏。配子发生包括雄性生殖细胞（精子）和雌性生殖细胞（卵子）的发生，是由原始生殖细胞分化而来的。原始生殖细胞在雄性动物中分化为精原细胞，在雌性动物中分化为卵原细胞，然后分别经过精子发生和卵子发生形成成熟的精子和卵子。 一生殖质与生殖细胞分化 1.生殖质(germ plasm) ①定义:在卵子中有一类特化的细胞质决定因子,他们定位于卵质的特殊区域,并决定原始生殖细胞(PGC)的形成和发育.这类特化的卵质决定因子称生殖质,其是新一代生殖细胞的发源处，维系着种系的延续。 ②组成:生殖质是具有一定形态结构的特殊物质,由蛋白质和RNA构成 2.生殖质影响生殖细胞分化 线虫 ●线虫的生殖质叫做p颗粒 ●未受精前p颗粒随机分布于卵子中 ●受精后p颗粒向卵子后端集聚 ●经一次卵裂后， p颗粒全部分布在P1细胞中，然后再经3次卵裂，由P1、P2、P3传 递到P4细胞 ●所有的生殖细胞均源于P4细胞
爪蟾 爪蟾的生殖质位于植物极附近. 卵裂期间，生殖质通过卵黄胞质向上运动，由于分裂过程中卵质的非对称性分布，生殖质仅保留在最靠近植物极的子细胞中 在原肠形成期，这些含有生殖质的细胞定位在囊胚腔底层的内胚层 到原肠后期，他们被决定为原始生殖细胞，并从内胚层迁出，进入生殖嵴，在那里与生殖嵴一起形成性腺。 二.原生殖细胞的迁移 1.为什么要迁移? ?原始生殖细胞是生殖细胞的前身,多数动物原始生殖细胞的起源与其性腺的起源不同,并在位置上有一定的距离,一般是获得生殖质形成原生殖细胞后.才被迁移到生殖腺.然后才在性腺分化为卵子或精子
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义 1.概述 生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。 生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示： 图1. 动物生命周期划分 A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。 各段试验研究阶段如下： 生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B 胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D 围产期毒性试验（III段）：C-F 1一般试验设计简介 1.1受试物 生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。 1.2实验动物 首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。 1.3给药 1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
生殖毒性及其评定
第二节生殖毒性及其评定 一、生殖毒性表现 外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。 二、生殖毒性作用的评定 外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。 （一）试验方法原则 生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。 最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。 剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。